非那西丁在大鼠体内的药代动力学

Pharmacokinetic of intravenous phenacetin in rats导师： 答辩：

1关于非那西丁

2方法设计

3样品处理

4HPLC操作

5数据处理

目录 / CONTENTS

第一部分

药物性质

药物性质分子式：C10H13NO2 分子量：179.2158 类别:原料药、解热镇痛类原料药。 性状：本品为白色，有闪光的鳞片状结晶或白色 结晶性粉末，无嗅，味微苦。本品在乙醇或氯仿 中溶解，在沸水中略溶，在水中极微溶解。

体内过程内服易吸收，服后20-30分钟始现药效。持续 5-6小时，吸收后非那西丁大部分在肝脏迅速 去乙基生成对乙酰氨基酚(扑热息痛)而呈 现解热、镇痛作用。其后主要以结合形式从 尿中排除；小部分经去乙酰基生成对氨苯乙 醚，后者使血红蛋白变为高铁血红蛋白，因 而表现为非那西丁的发绀毒性反应。

药动学亚氨基醌能使血红蛋白变成高铁血红蛋白而失去携氧能 力，造成组织缺氧、红细胞溶解而致溶血、黄疸，肝脏 损害等。正常情况下，毒性中间代谢物迅速与谷光甘肽 结合或转化成无毒的硫醚氨酸(meracpturic acid),从 尿中排出。只有当剂量过大或动物缺乏葡萄糖醛酸结合 代谢方式时，才出现中毒反应。

第二部分

方法设计

国内相关研究综述

仪器与试剂

实验动物

操作

参数

1.灌胃： 2.尾静脉注射: 称取标准品非那西丁 丙三醇注射剂 1250mg-乙醇定容至 非那西丁5mg/ml大鼠灌胃 100ml 40ml 125mg/1000g (或者尾静脉注射 250g大鼠灌胃2.5ml 250g大鼠注射1ml 20mg/1000g) (125mg/1000g) (20mg/1000g) 眼眶静脉丛取血时间 每次300μ l,0.5h- 5 10 15 30 45 60 90 眼眶静脉丛取血 1h-1.5h-2h-2.5h- 120 min 于眼底静脉 血浆处理 3h-3.5h-4h-6h-8h丛取血0. 5 ml 亦有用茶碱做内标 HPLC检测 12h-24h-48h 数据处理 13次-3900μ l 主要参考文献：反相高效液相色谱法检测非那西丁血药浓度—刘军 清洁级健康 Wistar 大鼠32只， 雌雄各半 体重 (250 ±10) g 禁食16小时 自由饮水 由实验室动物房提供 配标准液

Waters高效液相色谱仪 (包括 泵、 检测器) ; 色谱工作站 非那西丁标准品 硫酸阿托品标准品 乙腈为色谱纯 水为重蒸水 其余试剂均为分析纯

第三部分

样品处理

血浆处理

解冻1.精密吸取血浆1 mL,加氨水100μ L,轻摇,再加氯仿5 mL,涡旋3 min,超 声40min,静置过夜。收集下层氯仿,于60℃水浴上用氮气吹干,再用甲 醇溶解残渣,并定容至200μ L,加入内标硫酸阿托品， 浓度为 15 mg L - 1。12 000 r·min-1离心6 min,取上清液20μ L进样分析。 2. 200μ l 血浆中加入100μ l 10%高氯酸( 含内标硫酸阿托品， 浓度 为 15 mg L - 1) , 漩涡振荡 1 min,15 000 r min - 1离心10 min, 取上清供 HPLC 分析 3.精密吸取血浆样品0·2 mL,精密加入冷藏的10%三氯乙酸40 μ L (

含内标硫酸阿托品， 浓度为 15 mg L - 1),涡旋3 min,12 000 r/min离心10 min,吸取上清液约120μ L置于尖底进样瓶中,HPLC自动 进样

取血眼眶静脉丛取血13次，每次300μ l 置肝素化离心管中,4 000 r/min离 心10 min,移取上层血浆,密封 -20℃冰冻待用

检测RP-HPLC

第四部分

HPLC操作

HPLC色谱柱C18 流动相：乙腈-水(25:75)三乙胺0.1% 磷酸调节pH至3.0 灵敏度0.02AUFS 流速1ml/min 波长210nm 柱温30℃ 硫酸阿托品16ng为最低检测限 非那西丁0.08μ g(SN=3:1)为最低检测限

色谱条件

系统组成HPLC 系统一般由输液泵、进样器、 色谱柱、检测器、数据记录及处理 装置等组成。其中输液泵、色谱柱、 检测器是关键部件。

1

2 4自动进样序列表及数据文件的设置 样品测定与数据报告 关机 每次分析样品之前必须用已知含量 的参照样对仪器进行校验 , 当实测与 标值的相对偏差<0.3% 注意事项及维护

SOP

3

SOP

流动相的准备： 将去离子水和有机溶剂分别用0.45um微孔滤膜过滤，除去颗 粒性杂质，倒入贮液瓶，超声波脱气15分钟后，将之放置在 仪器的试剂架上。 开启稳压电源方法编辑和参数设定

第五部分

数据处理

数据处理汇总全班同学的数据 参数计算AUC 药-时 标准曲线

方法学验证 质量控制 (新的标准曲线，双 质控样品) 专属性

回收率精密度

关键技术 实践难点

讨论

关键技术 与实践难点

研究方案可行性—给药途径

灌胃？(乙醇)

72% 28%

静注？(尾静脉or股静脉)

研究方案可行性—取血途径

眼眶静脉丛取血？

72% 28%

断尾取血？ 尾静脉取血？

采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠 或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套),应 防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻 压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右 手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3~ 4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.51.0mm),使采血器与鼠面成45℃的夹角， 由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再 转180度使斜面对着眼眶后界。刺入约4~ 5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时， 将针退出约0.1-0.5mm,边退边抽。若穿刺 适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的 血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采 血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟 练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。 左右两眼轮换更好。 /v_show/id_XNjUyNzk

实践难点

眼眶静脉丛采血体重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml; 体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml, 可适用于某些生物化学项目的检验。

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