食品中合成着色剂的测定

G B 5009.35 2016

1 食品安全国家标准

食品中合成着色剂的测定

1 范围

本标准规定了饮料二配制酒二硬糖二蜜饯二淀粉软糖二巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂(不含铝色锭)的测定方法三

本标准适用于饮料二配制酒二硬糖二蜜饯二淀粉软糖二巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂(不含铝色锭)的测定三

2 原理

食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量三

3 试剂和材料

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B /T6682规定的一级水三

3.1 试剂

3.1.1 甲醇(C H 3O H ):色谱纯三3.1.2 正己烷(C 6H 14)三3.1.3 盐酸(H C l )三3.1.4 冰醋酸(C H 3C O OH )三3.1.5 甲酸(H C O O H )

三3.1.6 乙酸铵(C H 3C O O N H 4)三3.1.7 柠檬酸(C 6H 8O 7四H 2O )三3.1.8 硫酸钠(N a 2S O 4)三3.1.9 正丁醇(C 4H 10O )三3.1.10 三正辛胺(C 24H 51N )三3.1.11 无水乙醇(C H 3C H 2O H )三3.1.12 氨水(N H 3四H 2O ):含量20%~25%三3.1.13 聚酰胺粉(尼龙6):过200μm (

目)筛三3.2 试剂配制

3.2.1 乙酸铵溶液(0.02m o l /L ):称取1.54g 乙酸铵,加水至1000m L ,溶解,经0.45μm 微孔滤膜

过滤三

3.2.2 氨水溶液:量取氨水2m L ,加水至100m L ,混匀三3.2.3 甲醇-甲酸溶液(6+4,体积比):量取甲醇60m L ,甲酸40m L ,混匀三

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2 3.2.4 柠檬酸溶液:称取20g 柠檬酸,加水至100m L ,溶解混匀三3.2.5 无水乙醇-氨水-水溶液(7+2+1,体积比):量取无水乙醇70m L 二氨水溶液(3.2.2)20m L 二水10m L ,混匀三3.2.6 三正辛胺-正丁醇溶液(5%):量取三正辛胺5m L ,加正丁醇至100m L ,混匀三3.2.7 饱和硫酸钠溶液三

3.2.8 p H6的水:水加柠檬酸溶液调p H 到6三3.2.9 p H4的水:水加柠檬酸溶液调p H 到4三

3.3 标准品

3.3.1 柠檬黄(C A S :1934-21-0)三3.3.2 新红(C A S :220658-76-4)三3.3.3 苋菜红(C A S :915-67-3)三3.3.4 胭脂红(C A S :2611-82-7)三3.3.5 日落黄(C A S :2783-94-0)三3.3.6 亮蓝(C A S :3844-45-9)三3.3.7 赤藓红(C A S :16423-68-0

)三3.4 标准溶液配制

3.4.1 合成着色剂标准贮备液(1m g /m L ):准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄二日落黄二苋菜红二胭脂红二新红二赤藓红二亮蓝各0.1g (精确至0.0001g ),置100m L 容量瓶中,加p H6的水到刻

度三配成水溶液(1.00m g /m L )三3.4.2 合成着色剂标准使用液(50μg /m L ):临用时将标准贮备液加水稀释20倍,经0.45μm 微孔滤膜过滤三配成每毫升相当50.0μg 的合成着色剂三

4 仪器和设备

4.1 高效液相色谱仪,

带二极管阵列或紫外检测器三4.2 天平:感量为0.001g 和0.0001g 三4.3 恒温水浴锅三

4.4 G 3垂融漏斗三

5 分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 果汁饮料及果汁二果味碳酸饮料等:称取20g ~40g (精确至0.001g ),放入100m L 烧杯中三含

二氧化碳样品加热或超声驱除二氧化碳三5.1.2 配制酒类:称取20g ~40g (精确至0.001g ),放入100m L 烧杯中,

加小碎瓷片数片,加热驱除乙醇三

5.1.3 硬糖二蜜饯类二淀粉软糖等:称取5g ~10g (精确至0.001g )粉碎样品,放入100m L 小烧杯中,

加水30m L ,温热溶解,若样品溶液p H 较高,用柠檬酸溶液调p H 到6左右三

5.1.4 巧克力豆及着色糖衣制品:称取5g ~10g (精确至0.001g ),放入100m L 小烧杯中,用水反复

洗涤色素,到巧克力豆无色素为止,合并色素漂洗液为样品溶液三

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3

5.2 色素提取

5.2.1 聚酰胺吸附法:样品溶液加柠檬酸溶液调p H 到6,加热至60?,

将1g 聚酰胺粉加少许水调成粥状,倒入样品溶液中,搅拌片刻,以G 3垂融漏斗抽滤,用60?p H 为4的水洗涤3次~5次,然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次~5次(含赤藓红的样品用5.2.2法处理),再用水洗至中性,用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次~5次,直至色素完全解吸,收集解吸液,加乙酸中和,蒸发至近干,加水溶解,定容

至5m L 三经0.45μm 微孔滤膜过滤,

进高效液相色谱仪分析三5.2.2 液-液分配法(适用于含赤藓红的样品):将制备好的样品溶液放入分液漏斗中,加2m L 盐酸二三正辛胺-正丁醇溶液(5%)10m L~20m L ,振摇提取,分取有机相,重复提取,直至有机相无色,合并有机相,用饱和硫酸钠溶液洗2次,每次10m L ,分取有机相,放蒸发皿中,水浴加热浓缩至10m L ,转移至分液漏斗中,加10m L 正己烷,混匀,加氨水溶液提取2次~3次,每次5m L ,合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素),用正己烷洗2次,氨水层加乙酸调成中性,水浴加热蒸发至近干,加水定容至5m L 三经0.45μm 微孔滤膜过滤,进高效液相色谱仪分析三5.3 仪器参考条件

5.3.1 色谱柱:C 18柱,4.6mm?250mm ,5μm 三5.3.2 进样量:10μL 三5.3.3 柱温:35?三

5.3.4 二极管阵列检测器波长范围:400n m~800n m ,或紫外检测器检测波长:254n m 三

5.3.5 梯度洗脱表见表1三

表1 梯度洗脱表

时间m i n 流速m L /m i n 0.02m o l /L 乙酸铵溶液

%甲醇%01.095531.0653571.00100101.0010010.11.095521

1.0

95

5

5.4 测定

将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据保留时间定性,外标峰面积法定量三

6 分析结果的表述

试样中着色剂含量按式(1

)计算:X =

c ?V ?1000

m ?1000?1000

(1)

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4 式中:

X 试样中着色剂的含量,单位为克每千克(g /k g );c

进样液中着色剂的浓度,单位为微克每毫升(μg /m L );V

试样稀释总体积,单位为毫升(m L );m 试样质量,单位为克(g );1000 换算系数三计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留两位有效数字三7 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%三8 其他

方法检出限:柠檬黄二新红二苋菜红二胭脂红二日落黄均为0.5m g /k g ,亮蓝二赤藓红均为0.2m g /k g (检测波长254n m 时亮蓝检出限为1.0m g /k g ,赤藓红检出限为0.5m g /k g

)三

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