2种弧菌的实时荧光PCR快速检测

目的为快速、特异、灵敏的检测致病性弧菌,建立致病性弧菌的实时荧光PCR方法。方法针对霍乱弧菌的种特异性基因ompW、毒力基因tcpA、ctxA和副溶血性弧菌的种特异性基因tl、毒力基因tdh设计引物和Taqman荧光探针,建立实时荧光PCR检测方法。结果该方法能够特异性地检出副溶血性弧菌或霍乱弧菌,并进一步确定其是否携带tdh、tcpA或ctxA毒力基因,检测的灵敏度可达到10CFU/ml或0.1716μg

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实验技术与方法

2种弧菌的实时荧光 P R快速检测 C冯家望王小玉李丹琳唐食明游淑珠 (海出入境检验检疫局，珠广东珠海 5 9 1 ) 10 5

摘要： 为快速、、的检测致病性弧菌，目的特异灵敏建立致病性弧菌的实时荧光 PR方法。方法针对霍乱弧 C茵的种特异性基因 o p、力基因卸 A、tA和副溶血性弧茵的种特异性基因 t毒力基因 f设计引物和 mW毒 c x l、 Tq a am n荧光探针，立实时荧光 P R检测方法结果该方法能够特异性地检出副溶血性弧茵或霍乱弧茵，进建 C并一

步确定其是否携带 t t A或 c A毒力基因，测的灵敏度可达到 1 I/ l、7 6t/ lp/ D A模板浓 d c h、p t x检 0C’ m或0 11 g (g F U ￣m ) N

度。结论该方法特异性强、灵敏度高，用于食品中致病性弧菌的快速检验适

关键词：聚合酶链反应；弧菌属；弧菌，霍乱；弧菌，副溶血性；毒力；基因； 食品S ud n Ra i tci n o i d f V b i p .i o y Re lTi u r s e c t y o p d De e to f2 k n s o i ro sp n Fo d b a— me Flo ec n e PCR

F NG Ja w n,WAN io y E i— a g G X a— u,L n l,T N h— i g YO h—h IDa— n A G S ir n, U S u z u i u

( hhi nr E iIsetnadQ a ni ueuo teP Z u a E t . x pc o n ur t eB ra fh .R.C undn h hi 10 5 h a y tn i a n ,G agogZ ua 59 1,C i ) n

Ab ta t be t e T e e p ar l i ef o se c P R a a e c V r h l a a d V r aa am h u n sr c:O jci od vl e— m u r c ne C s yt dt t i i co r n i i p rh e o i s i v o at l e s o e bo

e bo cfo o d.M eh Th iue c e e f tpA . cxA n d we e s lce s tr e e u nc s o tod e vr ln e g n s o c t ad th r ee td a ag ts q e e, mpW e e wa ee td a g n ss lce s a

本研究发现 Fta i t携式肺功能测试仪和 m e便D ul . a ae法对 R R的比对测定后经统计学 og s l n aH d M

后的比对试验中要加强对以上因素的控制。

分析两种仪器的测定值差别无统计学意义且相关性良好。但在试验过程中也发现了一些影响试验测定的因素，主要体现在以下几方面：一，第一同一人一段时间内 R MR值在两种仪器测定过程中不可能保持完全相同，不同于其它类仪器的比对研究能使用这

参考文献: 1葛可佑，主编 .国营养科学全书[ .北京 .民卫生出版 中 M]人社， 04 20

: D FII D WS NB PN IG O ,ea. cuay n 2 U FE R, A O , INN T NHC t A cr d D 1 ca

rlb i f om dK b r b a nl iss m[] Si d ei ito C se 42I t l gs a s t J . c Me a ly a m ae a ysyesH 2 0,7 1: 1 2 fn, 0 4 ( ) 1 - 】 2

标准品；二，试过程中受试者对两种仪器的反应第测不同，受试者普遍反应对 D ul— a a e的测定 og s i n法 aH d方式 (鼻塞夹住鼻子，只用嘴呼吸 )不太适应，不符合正常呼吸的情况。而对 Fta i t应要好些，认为 m c反

1] ES N A NJC,B IK 3 IE M N RS O N,S A RC H D IK D,e a.Cm aa￣ t1 o pri tea a s t h om dQ a 2 ad K b a nls s m ei n l i o t C s e ur b n 4 2g s a i s t s r g ys e k a y sy e d n

sb xn l xri[: So s e hs ies20,4( ) 10 umai e s J pi dP y Ft s,03 3 2:5- m e ce lM nl 5. 5

4陈炳卿，主编营养与食品卫生学[ .京 .民卫生

出版社， j M]北人2 01 0 .

该仪器测试时对正常呼吸影响不大，是由于使用但的面罩都是一个规格，些受试者在测试过程中有有漏气现象发生，气会使测定的 R漏 MR值骤减。该仪器可提示面罩漏气，生这类现象时需要将漏气发

5 WE R. N w e o s fr c l l i m t oi rt w t p c l] I e m t d o a u t g e b l a i sei h can a c e h a

r e net p tnme blm[] hs l 99 o(-) 1 . e r c r e t oi J .Pyi,14,19 12:- fe oo i a s o 96 NE N D C,A S I ] IMA U TN M D,B N Z A L ta.V iao f E E R ,e 1 l i adtnoc s d s it t i me u n o y e c n u p in n d si t g o me’ f mae n￣ f g x g n o s m t a e t i o ma i n

时间段的 R MR删除，不计算在最终 R MR值内，如果漏气严重需要重新测定 R R;三， og s M第 D ul— a

r t gm tbl a ] eerhi Sm t Me i n, 0 6 4 1 e i e o crt J .R sac I r dc e 2 0,1:— sn a i e n s i8.

H l n法中对 D u a袋中气体成分的分析和气体 a ae d og s l流量的测定都存在系统误差和随机误差。因此在今

[收稿日期：07 8 2 20—0—0]

中图分类号： 1; 3 36 R 5 R 3 .

文献标识码： B

文章编号：04—85 ( 07 0—0 1 0 10 4 6 2O )6 52— 3

基金项目：海出入境检验检疫局科研项目( H 0 3 )珠 Z 20—7作者简介：家望男工程师冯

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