苦参碱缓释片的制备及释放度研究

苦参碱缓释片的制备及释放度研究

杜娟 08312069 08药学（2）班

摘要: 苦参碱具有抗心律失常，抗肿瘤等临床作用。但该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。因此制成缓释片对不易口服的患者具有重要意义。本文主要通过对缓释骨架材料的筛选，由不同黏度不同量的HPMC与EC测出对释放度的影响制出苦参碱最优质处方。再通过在一定色谱条件下的苦参碱缓释片的含量、稳定性、释放度、回收率及释药特性的研究，得出缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,并与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标。关键词：苦参碱；缓释剂；HPLC；释放度

前言：苦参碱(Matrine)是从豆科槐属植物苦豆子苦参根中分离得到的生物碱，为白色针状结晶或结晶性粉末。本品在乙醇、氧仿、甲苯、苯中极易溶解，在丙酮中易溶，在水中溶解，在石油醚、热水中略溶[1]，mP为75.5~76.5℃。本品的氛仿溶液在420nm的波长处有最大吸收。

苦参碱具有抗心律失常、抗炎、抗柯萨基B组病毒、升白等作用，并能抑制某些因子(肿瘤坏死因子TNF、白细胞介素一6IL一6)的产生，或对某些细胞(人红白血病细胞株K562、人肝癌细胞系SMMC一7721)具有诱导分化的作用，临床用于急慢性肝炎[2]及恶性肿瘤的治疗。目前用于治疗的剂型中，仅有注射剂、栓剂等，尚无片剂及缓释制剂问世。由于该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。本品的主要副作用有头晕、恶心、呕吐、便秘等，因此有必要将其制成缓释制剂，以期达到方便患者用药的目的[3] 。 材料：

1.试剂：苦参碱(宁夏博尔泰力药业股份有限公司,纯度98. 5% ) ,羟丙基甲基纤维素(HPMC) (四川泸州化工厂) ,乙基纤维素(EC) (四川泸州化工厂) 。乙腈(色谱纯) ,磷酸二氢钾(KH2 PO4 ) 。

2.仪器:Agilent 1100 高效液相色谱仪, Agilent 8453 紫外分光光度计, D2800L 智能药物溶出仪(天津大学无线电厂) , 78X22型片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂) ,单冲压片机(上海第一制药机械厂) ,JD20023电子天平(沈阳龙腾电子有限公司) 。苦参碱(内蒙古启源药业有限责任公司);苦参碱对照品(批号110805-200306,中国药品生物制品检定所);羟丙基甲基纤维素

(HPMC,K4M,Colorcon公司);乳糖(新西兰乳糖有限公司);乙基纤维素(EC,上海峰鹤化工有限公司);RCZ鄄6C 型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器有限公司);TDP鄄1郾5 型单冲压片机(中南制药机械厂);HP1100 高效液相色谱仪:紫外检测器、自动进样器(安捷伦公司)。

实验：

2. 1 处方筛选

为了制备优质的产品,我们对大量的缓释骨架料进行了筛选,文献报道[ 4～6 ] , HPMC利EC联合应用,能产生比较理想的效果,故而缓释骨架材料选择亲水凝胶HPMC为主,辅以疏水性辅料为阻滞剂,以调节释药速度。

2. 1. 1 HPMC与EC黏度对释放度的影响

取苦参碱: HPMC (3∶2)的比例,采用的HPMC黏度分别为4 000 mpa·s ( K4M) 、15 000 mpa·s ( K15M)和100 000 mpa· s ( K100M) ,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图1。另取苦参碱: EC(10∶1)的比例,采用的EC黏度分别为30 mpa·s、60 mpa·s、100 mpa·s和150 mpa·s,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图2。结果显示不同黏度的HPMC利EC对释放曲线影响不大。根据制备工艺操作的可行性需要选择HPMC和EC的黏度分别为4 000 mpa·s和60 mpa·s。

1. 4000 mpa·s 2. 15000 mpa·s 3. 100000 mpa·s

2.

图1 不同黏度HPMC对释放度的影响( n = 3)

1. 30 mpa·s 2. 60 mpa·s 3. 100 mpa·s 4. 150 mpa·s

2.

图2 不同黏度EC对释放度的影响( n = 3)

2. 1. 2 HPMC与EC用量对释放速率的影响

取HPMC (4 000 mpa·s)按表1处方制备片剂,分别测定释放度,测定结果见图3,根据2005版中国药典对缓释制剂释放度的要求,即在0. 5～2. 0 h、6 h、12h的溶出量分别为20% ～45%、45% ～75%和大于75% ,选择HPMC用量为200 mg。取EC (60 mpa·s)按表2处方制备片剂,分别测定释放度,结果见图4,可看出, EC用量对释放度的影不大,但随着用量的增加,释放速率也略有减慢,根据制剂要求,释药在规定的时间内尽量缓慢释放,因此在综合考虑后选择EC用量为12 mg。 表1 HPMC不同用量组成的缓释片处方 原辅料名处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 称 苦参碱/mg 300 300 300 300 300 HPMC /mg 100 200 300 400 500 其他辅料 适量 适量 适量 适量 适量 表2 EC不同用量对选用HPMC制成的缓释片处方 原辅料名称 处方1 处方2 处方3 处方4 苦参碱/mg 300 300 300 300 HPMC /mg EC /mg 其他辅料

200 6 适量 200 9 适量 200 12 适量 200 15 适量

图3 不同用量HPMC对释放度的影响( n = 3)

图4 不同用量EC对选定HPMC所制成缓释片的影响( n = 3)

2. 1. 3 压力对释放度的影响取选定处方,制备颗粒,压制不同硬度的苦参碱缓释片,测定硬度,并分别测定释放度,结果见图5,结果表明:在相同处方下,不同压力对释药速率略有影响。在硬度小于6 kg时,释药速率偏快且片剂外观粗糙,不美观。随着硬度的增加,释药减慢。当达到一定的硬度后,压力对缓释片的释放度影响减小,综合考虑,选择6. 5 kg～7. 5 kg作为本制剂硬度的控制范围。

图5 压片压力对释放度的影响( n = 3)

2. 2 苦参碱缓释片的制备 按处方取苦参碱、PVP (聚乙烯吡咯烷酮)混合均匀,加入处方量10%的EC乙醇溶液(先用95%乙醇溶胀为10%的溶液) 溶解,再加入处方量的HPMC混合均匀,加入适量的85%乙醇,混合均匀,湿法制粒,低温干燥,整粒,加入硬脂酸镁适量,混合均匀,压制成片,控制压力硬度在6. 5～7. 5 kg,每片含苦参碱300 mg,包薄膜衣,即得[4]。 验证

2. 3 缓释片含量测定方法

[2]

2. 3. 1 色谱条件

摇十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0. 02 mol/ L 磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH 值至3. 5)鄄甲醇(体积比90 颐10)为流动相;检测波长为210 nm。

2. 3. 2 测定方法

取样品10 片,用研钵研细,精密称取适量(约相当于苦参碱50 mg),置100 mL 量瓶中,加甲醇80 mL,超声振荡使苦参碱溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液适量,加流动相制成每1 mL 中约含苦参碱100 滋g 的溶液,作为供试品溶液。另取苦参碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1 mL 中约含100 滋g 的溶液,作为对照品溶液。照高效液相色谱法《中国药典2005 年版》二部(附录V D)测定。精密量取供试品溶液与对照溶液各20 滋L 分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算[5]。 2. 4 缓释片释放度测定方法建立

2. 4. 1 色谱条件 色谱柱: SD2C18柱( 250 mm ×44. 6 mm, 5μm) 。流动相:磷酸二氢钾(0. 025 mol/L) 2乙腈( 30 ∶70) ,检测波长: 205 nm,柱温:室温,流速: 1 mL /min,进样量: 10μL。

2. 4. 2 标准曲线制备

精密称取苦参碱对照品20. 05 mg,置50 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1 mL 含0. 401 mg溶液,作为对照品储备液。分别精密吸取苦参碱对照品溶液0.5、1. 5、2. 5、5. 0、7. 5、10 mL,置于10 mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀。分别进样10μL,测定峰面积积分值,以峰面积积分值A为纵坐标、对照品浓度C为横坐标, 绘制标准曲线。得回归方程: A = 43.159C + 108. 24, r = 0. 999 1。表明,苦参碱在20 ～400μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2. 4. 3 稳定性

分别于0、4、6、12、24 h,精密吸取“2. 4. 2”所制备的200μg/mL对照品溶液10μL进样,测得在不同时间的色谱峰峰面积A值,其均值3583. 98, RSD = 1. 2%,表明苦参碱水溶液比较稳定,放置24 h其吸收峰面积基本不变。

2. 4. 4 回收率

按处方量的80%, 100% , 120%分别精密称取苦参碱原料药适量于150 mL 的具塞三角瓶中,加入处方量比例的其他辅料,用流动相80mL超声提取30 min,过滤,滤液转移至100 mL量并中并定容,摇匀。分别精密吸取5 mL,用流动相稀释至100 mL,微孔滤膜( 0. 45 μm)滤过,取续滤液各10μL直接进样,测定其色谱峰峰面积,计算回收率,平均回收率为98. 63% , RSD = 0. 70% ,结果显示,本方法回收率良好。

2. 5 释放度的测定

取060416, 060417, 060418 3批苦参碱缓释片,照中华人民共和国药典2005版(二部)释放度测定法(第一法) ,采用溶出度测定法中的转篮法,以自制的人工胃液为溶出介质,在温度( 37 ±0. 5) ℃,转速为100 r /min的条件下依法操作。分别在2、6、12、16、24 h取样5. 0 mL,用0. 45 μm的微孔滤膜滤,取续滤液直接进样, 并及时在操作液中补充37℃的人工胃液5. 0 mL,结果见图6。结果表明,释放度重现性较好,达到规定的要求。

图6 3批缓释片释放度

2. 6 释药特性研究

2. 6. 1 缓释片与普通片的释放度比较

以拟定的处方制粒压片100片作为普通片。与缓释同时进行释放度试验。释放曲线见图7、8。

图7 普通片释放曲线

图8 缓释片释放曲线

2. 6. 2 释药动力学模型

常用药物释放动力模型有零级方程:Mt /M∞ = kt;一方程: ln (1 - Mt /M∞ ) =- kt; Higuchi方程:Mt /M∞ = kt1 /2。式中Mt 为t时间的累积释放量;M∞为∞时间的累积释放量;Mt /M∞为t 时累积释放百分率(用Q 表示) 。将

060416、060417、060418 3批样品的释放速率均值进数学拟合,结果见表3、4。 表3 苦参碱缓释片的释放度平均值( n = 3) 时间/h 2 6 12 16 24 060416 33.67 56.83 75.09 87.35 96.78 060417 35.91 60.15 76.33 86.11 98.91 060418 34.94 57.62 77.03 83.25 100.86 平均释放量/% 34.84 58.20 76.15 85.57 98.85 表4 苦参碱缓释片的释药动力学特征 释药方程类型 拟合方程式 相关系数 零级方程Q = 3. 697 4 t + 21. 961 r = 0. 854 7 一级方程ln (1 - Q) = - 0. 168 5 t + 4. 767 3 r = 0. 924 0 Higuchi方程Q = 18. 339x + 11. 206 r = 0. 993 0 结果表明:释药动力模型拟合表明,苦参碱缓释片的零级方程线性较差,一级方程线性差, Higuchi方程的线性关系良好,说明本制剂符合骨架型缓释片的释药机制。

结论：该缓释片的主要影响因素是骨架材料,本试验采用单因素法, 筛选出苦参碱缓释片骨架材料HPMCK4M和EC以及其用量。在此基础上通过释放度的测定,确定

了处方的组成。在处方中加入适量的PVP作为致孔剂,调节药物的释放,使药物更加平稳的释放。

在制备苦参碱缓释片的过程中发现湿法制粒比干法制粒压片物料的流动性好,片剂外观美观,但在干燥过程中温度大于50℃时,物料略变黄,不仅影响外观还可能影响产品质量;而干法制粒易松片。综合考虑后,为了制备质量稳定的缓释片,采用湿法制粒,干燥温度控制在50℃以下。多次实验表明,该处方只有易制粒、可压性好、工艺稳定的特点,适合于工业化生产。

缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。为了更能体现体内和体外释药的一致性,采用了人工胃液作为释放介质,使药物的释放更接近于体内。体外释放度研究表明,该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,由图7、图8可见,与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标[4]。

参考文献：

[1].孙少平，梁娜，隋军，崔福德.苦参碱制剂的研究进展[J].黑龙江中医药，2008,3:44-46.

[2].林潮双，崇雨田，林炳亮.苦参碱注射液治疗乙型肝炎150例疗效观察[J].新医学，2004，35（1）：22-23.

[3].李晏.苦参碱缓释片的研究.第二军医大学学位论文.2001

[4].韩宪忠，刘新，聂进，付晓泰，金蜀蓉，余维明.苦参碱缓释片的制备及释放度研究[J].中成药，2008,30（3）：365-368.

[5].祝志贤,梁秋文.苦参碱缓释片的制备及其释放度研究[J].2008.12,24（6）：569-571.

组员： 杜娟 王慧 王琳 吴茜 张婷 程龙鑫

苦参碱缓释片的制备及释放度研究

王慧 08312093 08药学（2）班

摘要: 苦参碱具有抗心律失常，抗肿瘤等临床作用。但该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。因此制成缓释片对不易口服的患者具有重要意义。本文主要通过对缓释骨架材料的筛选，由不同黏度不同量的HPMC与EC测出对释放度的影响制出苦参碱最优质处方。再通过在一定色谱条件下的苦参碱缓释片的含量、稳定性、释放度、回收率及释药特性的研究，得出缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,并与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标。关键词：苦参碱；缓释剂；HPLC；释放度

前言：苦参碱(Matrine)是从豆科槐属植物苦豆子苦参根中分离得到的生物碱，为白色针状结晶或结晶性粉末。本品在乙醇、氧仿、甲苯、苯中极易溶解，在丙酮中易溶，在水中溶解，在石油醚、热水中略溶[1]，mP为75.5~76.5℃。本品的氛仿溶液在420nm的波长处有最大吸收。

苦参碱具有抗心律失常、抗炎、抗柯萨基B组病毒、升白等作用，并能抑制某些因子(肿瘤坏死因子TNF、白细胞介素一6IL一6)的产生，或对某些细胞(人红白血病细胞株K562、人肝癌细胞系SMMC一7721)具有诱导分化的作用，临床用于急慢性肝炎[2]及恶性肿瘤的治疗。目前用于治疗的剂型中，仅有注射剂、栓剂等，尚无片剂及缓释制剂问世。由于该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。本品的主要副作用有头晕、恶心、呕吐、便秘等，因此有必要将其制成缓释制剂，以期达到方便患者用药的目的[3] 。 材料：

1.试剂：苦参碱(宁夏博尔泰力药业股份有限公司,纯度98. 5% ) ,羟丙基甲基纤维素(HPMC) (四川泸州化工厂) ,乙基纤维素(EC) (四川泸州化工厂) 。乙腈(色谱纯) ,磷酸二氢钾(KH2 PO4 ) 。

2.仪器:Agilent 1100 高效液相色谱仪, Agilent 8453 紫外分光光度计, D2800L 智能药物溶出仪(天津大学无线电厂) , 78X22型片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂) ,单冲压片机(上海第一制药机械厂) ,JD20023电子天平(沈阳龙腾电子有限公司) 。苦参碱(内蒙古启源药业有限责任公司);苦参碱对照品(批号110805-200306,中国药品生物制品检定所);羟丙基甲基纤维素

(HPMC,K4M,Colorcon公司);乳糖(新西兰乳糖有限公司);乙基纤维素(EC,上海峰鹤化工有限公司);RCZ鄄6C 型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器有限公司);TDP鄄1郾5 型单冲压片机(中南制药机械厂);HP1100 高效液相色谱仪:紫外检测器、自动进样器(安捷伦公司)。

实验：

2. 1 处方筛选

为了制备优质的产品,我们对大量的缓释骨架料进行了筛选,文献报道[ 4～6 ] , HPMC利EC联合应用,能产生比较理想的效果,故而缓释骨架材料选择亲水凝胶

HPMC为主,辅以疏水性辅料为阻滞剂,以调节释药速度。

2. 1. 1 HPMC与EC黏度对释放度的影响 取苦参碱: HPMC (3∶2)的比例,采用的HPMC黏度分别为4 000 mpa·s ( K4M) 、15 000 mpa·s ( K15M)和100 000 mpa· s ( K100M) ,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图1。另取苦参碱: EC(10∶1)的比例,采用的EC黏度分别为30 mpa·s、60 mpa·s、100 mpa·s和150 mpa·s,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图2。结果显示不同黏度的HPMC利EC对释放曲线影响不大。根据制备工艺操作的可行性需要选择HPMC和EC的黏度分别为4 000 mpa·s和60 mpa·s。

3. 4000 mpa·s 2. 15000 mpa·s 3. 100000 mpa·s

4.

图1 不同黏度HPMC对释放度的影响( n = 3)

3. 30 mpa·s 2. 60 mpa·s 3. 100 mpa·s 4. 150 mpa·s

4.

图2 不同黏度EC对释放度的影响( n = 3)

2. 1. 2 HPMC与EC用量对释放速率的影响

取HPMC (4 000 mpa·s)按表1处方制备片剂,分别测定释放度,测定结果见图3,根据2005版中国药典对缓释制剂释放度的要求,即在0. 5～2. 0 h、6 h、12h的溶出量分别为20% ～45%、45% ～75%和大于75% ,选择HPMC用量为200 mg。取EC (60 mpa·s)按表2处方制备片剂,分别测定释放度,结果见图4,可看出, EC用量对释放度的影不大,但随着用量的增加,释放速率也略有减慢,根据制剂要求,释药在规定的时间内尽量缓慢释放,因此在综合考虑后选择EC用量为12 mg。 表1 HPMC不同用量组成的缓释片处方 原辅料名处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 称 苦参碱/mg 300 300 300 300 300 HPMC /mg 100 200 300 400 500 其他辅料 适量 适量 适量 适量 适量 表2 EC不同用量对选用HPMC制成的缓释片处方 原辅料名称 处方1 处方2 处方3 处方4 苦参碱/mg 300 300 300 300 HPMC /mg EC /mg 其他辅料

200 6 适量 200 9 适量 200 12 适量 200 15 适量

图3 不同用量HPMC对释放度的影响( n = 3)

图4 不同用量EC对选定HPMC所制成缓释片的影响( n = 3)

2. 1. 3 压力对释放度的影响取选定处方,制备颗粒,压制不同硬度的苦参碱缓释片,测定硬度,并分别测定释放度,结果见图5,结果表明:在相同处方下,不同压力对释药速率略有影响。在硬度小于6 kg时,释药速率偏快且片剂外观粗糙,不美观。随着硬度的增加,释药减慢。当达到一定的硬度后,压力对缓释片的释放度影响减小,综合考虑,选择6. 5 kg～7. 5 kg作为本制剂硬度的控制范围。

图5 压片压力对释放度的影响( n = 3)

2. 2 苦参碱缓释片的制备 按处方取苦参碱、PVP (聚乙烯吡咯烷酮)混合均匀,加入处方量10%的EC乙醇溶液(先用95%乙醇溶胀为10%的溶液) 溶解,再加入处方量的HPMC混合均匀,加入适量的85%乙醇,混合均匀,湿法制粒,低温干燥,整粒,加入硬脂酸镁适量,混合均匀,压制成片,控制压力硬度在6. 5～7. 5 kg,每片含苦参碱300 mg,包薄膜衣,即得[4]。 验证

2. 3 缓释片含量测定方法

[2]

2. 3. 1 色谱条件

摇十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0. 02 mol/ L 磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH 值至3. 5)鄄甲醇(体积比90 颐10)为流动相;检测波长为210 nm。

2. 3. 2 测定方法

取样品10 片,用研钵研细,精密称取适量(约相当于苦参碱50 mg),置100 mL 量瓶中,加甲醇80 mL,超声振荡使苦参碱溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液适量,加流动相制成每1 mL 中约含苦参碱100 滋g 的溶液,作为供试品溶液。另取苦参碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1 mL 中约含100 滋g 的溶液,作为对照品溶液。照高效液相色谱法《中国药典2005 年版》二部(附录V D)测定。精密量取供试品溶液与对照溶液各20 滋L 分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算[5]。 2. 4 缓释片释放度测定方法建立

2. 4. 1 色谱条件 色谱柱: SD2C18柱( 250 mm ×44. 6 mm, 5μm) 。流动相:磷酸二氢钾(0. 025 mol/L) 2乙腈( 30 ∶70) ,检测波长: 205 nm,柱温:室温,流速: 1 mL /min,进样量: 10μL。

2. 4. 2 标准曲线制备

精密称取苦参碱对照品20. 05 mg,置50 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1 mL 含0. 401 mg溶液,作为对照品储备液。分别精密吸取苦参碱对照品溶液0.5、1. 5、2. 5、5. 0、7. 5、10 mL,置于10 mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀。分别进样10μL,测定峰面积积分值,以峰面积积分值A为纵坐标、对照品浓度C为横坐标, 绘制标准曲线。得回归方程: A = 43.159C + 108. 24, r = 0. 999 1。表明,苦参碱在20 ～400μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2. 4. 3 稳定性

分别于0、4、6、12、24 h,精密吸取“2. 4. 2”所制备的200μg/mL对照品溶液10μL进样,测得在不同时间的色谱峰峰面积A值,其均值3583. 98, RSD = 1. 2%,表明苦参碱水溶液比较稳定,放置24 h其吸收峰面积基本不变。

2. 4. 4 回收率

按处方量的80%, 100% , 120%分别精密称取苦参碱原料药适量于150 mL 的具塞三角瓶中,加入处方量比例的其他辅料,用流动相80mL超声提取30 min,过滤,滤液转移至100 mL量并中并定容,摇匀。分别精密吸取5 mL,用流动相稀释至100 mL,微孔滤膜( 0. 45 μm)滤过,取续滤液各10μL直接进样,测定其色谱峰峰面积,计算回收率,平均回收率为98. 63% , RSD = 0. 70% ,结果显示,本方法回收率良好。

2. 5 释放度的测定

取060416, 060417, 060418 3批苦参碱缓释片,照中华人民共和国药典2005版(二部)释放度测定法(第一法) ,采用溶出度测定法中的转篮法,以自制的人工胃液为溶出介质,在温度( 37 ±0. 5) ℃,转速为100 r /min的条件下依法操作。分别在2、6、12、16、24 h取样5. 0 mL,用0. 45 μm的微孔滤膜滤,取续滤液直接进样, 并及时在操作液中补充37℃的人工胃液5. 0 mL,结果见图6。结果表明,释放度重现性较好,达到规定的要求。

图6 3批缓释片释放度

2. 6 释药特性研究

2. 6. 1 缓释片与普通片的释放度比较

以拟定的处方制粒压片100片作为普通片。与缓释同时进行释放度试验。释放曲线见图7、8。

图7 普通片释放曲线

图8 缓释片释放曲线

2. 6. 2 释药动力学模型

常用药物释放动力模型有零级方程:Mt /M∞ = kt;一方程: ln (1 - Mt /M∞ ) =- kt; Higuchi方程:Mt /M∞ = kt1 /2。式中Mt 为t时间的累积释放量;M∞为∞时间的累积释放量;Mt /M∞为t 时累积释放百分率(用Q 表示) 。将

060416、060417、060418 3批样品的释放速率均值进数学拟合,结果见表3、4。 表3 苦参碱缓释片的释放度平均值( n = 3) 时间/h 2 6 12 16 24 060416 33.67 56.83 75.09 87.35 96.78 060417 35.91 60.15 76.33 86.11 98.91 060418 34.94 57.62 77.03 83.25 100.86 平均释放量/% 34.84 58.20 76.15 85.57 98.85 表4 苦参碱缓释片的释药动力学特征 释药方程类型 拟合方程式 相关系数 零级方程Q = 3. 697 4 t + 21. 961 r = 0. 854 7 一级方程ln (1 - Q) = - 0. 168 5 t + 4. 767 3 r = 0. 924 0 Higuchi方程Q = 18. 339x + 11. 206 r = 0. 993 0 结果表明:释药动力模型拟合表明,苦参碱缓释片的零级方程线性较差,一级方程线性差, Higuchi方程的线性关系良好,说明本制剂符合骨架型缓释片的释药机制。

结论：该缓释片的主要影响因素是骨架材料,本试验采用单因素法, 筛选出苦参碱缓释片骨架材料HPMCK4M和EC以及其用量。在此基础上通过释放度的测定,确定

了处方的组成。在处方中加入适量的PVP作为致孔剂,调节药物的释放,使药物更加平稳的释放。

在制备苦参碱缓释片的过程中发现湿法制粒比干法制粒压片物料的流动性好,片剂外观美观,但在干燥过程中温度大于50℃时,物料略变黄,不仅影响外观还可能影响产品质量;而干法制粒易松片。综合考虑后,为了制备质量稳定的缓释片,采用湿法制粒,干燥温度控制在50℃以下。多次实验表明,该处方只有易制粒、可压性好、工艺稳定的特点,适合于工业化生产。

缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。为了更能体现体内和体外释药的一致性,采用了人工胃液作为释放介质,使药物的释放更接近于体内。体外释放度研究表明,该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,由图7、图8可见,与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标[4]。

参考文献：

[1].孙少平，梁娜，隋军，崔福德.苦参碱制剂的研究进展[J].黑龙江中医药，2008,3:44-46.

[2].林潮双，崇雨田，林炳亮.苦参碱注射液治疗乙型肝炎150例疗效观察[J].新医学，2004，35（1）：22-23.

[3].李晏.苦参碱缓释片的研究.第二军医大学学位论文.2001

[4].韩宪忠，刘新，聂进，付晓泰，金蜀蓉，余维明.苦参碱缓释片的制备及释放度研究[J].中成药，2008,30（3）：365-368.

[5].祝志贤,梁秋文.苦参碱缓释片的制备及其释放度研究[J].2008.12,24（6）：569-571.

组员： 杜娟 王慧 王琳 吴茜 张婷 程龙鑫

苦参碱缓释片的制备及释放度研究

王琳 08312094 08药学（2）班

摘要: 苦参碱具有抗心律失常，抗肿瘤等临床作用。但该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。因此制成缓释片对不易口服的患者具有重要意义。本文主要通过对缓释骨架材料的筛选，由不同黏度不同量的HPMC与EC测出对释放度的影响制出苦参碱最优质处方。再通过在一定色谱条件下的苦参碱缓释片的含量、稳定性、释放度、回收率及释药特性的研究，得出缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,并与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标。关键词：苦参碱；缓释剂；HPLC；释放度

前言：苦参碱(Matrine)是从豆科槐属植物苦豆子苦参根中分离得到的生物碱，为白色针状结晶或结晶性粉末。本品在乙醇、氧仿、甲苯、苯中极易溶解，在丙酮中易溶，在水中溶解，在石油醚、热水中略溶[1]，mP为75.5~76.5℃。本品的氛仿溶液在420nm的波长处有最大吸收。

苦参碱具有抗心律失常、抗炎、抗柯萨基B组病毒、升白等作用，并能抑制某些因子(肿瘤坏死因子TNF、白细胞介素一6IL一6)的产生，或对某些细胞(人红白血病细胞株K562、人肝癌细胞系SMMC一7721)具有诱导分化的作用，临床用于急慢性肝炎[2]及恶性肿瘤的治疗。目前用于治疗的剂型中，仅有注射剂、栓剂等，尚无片剂及缓释制剂问世。由于该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。本品的主要副作用有头晕、恶心、呕吐、便秘等，因此有必要将其制成缓释制剂，以期达到方便患者用药的目的[3] 。 材料：

1.试剂：苦参碱(宁夏博尔泰力药业股份有限公司,纯度98. 5% ) ,羟丙基甲基纤维素(HPMC) (四川泸州化工厂) ,乙基纤维素(EC) (四川泸州化工厂) 。乙腈(色谱纯) ,磷酸二氢钾(KH2 PO4 ) 。

2.仪器:Agilent 1100 高效液相色谱仪, Agilent 8453 紫外分光光度计, D2800L 智能药物溶出仪(天津大学无线电厂) , 78X22型片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂) ,单冲压片机(上海第一制药机械厂) ,JD20023电子天平(沈阳龙腾电子有限公司) 。苦参碱(内蒙古启源药业有限责任公司);苦参碱对照品(批号110805-200306,中国药品生物制品检定所);羟丙基甲基纤维素

(HPMC,K4M,Colorcon公司);乳糖(新西兰乳糖有限公司);乙基纤维素(EC,上海峰鹤化工有限公司);RCZ鄄6C 型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器有限公司);TDP鄄1郾5 型单冲压片机(中南制药机械厂);HP1100 高效液相色谱仪:紫外检测器、自动进样器(安捷伦公司)。

实验：

2. 1 处方筛选

为了制备优质的产品,我们对大量的缓释骨架料进行了筛选,文献报道[ 4～6 ] , HPMC利EC联合应用,能产生比较理想的效果,故而缓释骨架材料选择亲水凝胶

HPMC为主,辅以疏水性辅料为阻滞剂,以调节释药速度。

2. 1. 1 HPMC与EC黏度对释放度的影响 取苦参碱: HPMC (3∶2)的比例,采用的HPMC黏度分别为4 000 mpa·s ( K4M) 、15 000 mpa·s ( K15M)和100 000 mpa· s ( K100M) ,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图1。另取苦参碱: EC(10∶1)的比例,采用的EC黏度分别为30 mpa·s、60 mpa·s、100 mpa·s和150 mpa·s,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图2。结果显示不同黏度的HPMC利EC对释放曲线影响不大。根据制备工艺操作的可行性需要选择HPMC和EC的黏度分别为4 000 mpa·s和60 mpa·s。

5. 4000 mpa·s 2. 15000 mpa·s 3. 100000 mpa·s

6.

图1 不同黏度HPMC对释放度的影响( n = 3)

5. 30 mpa·s 2. 60 mpa·s 3. 100 mpa·s 4. 150 mpa·s

6.

图2 不同黏度EC对释放度的影响( n = 3)

2. 1. 2 HPMC与EC用量对释放速率的影响

取HPMC (4 000 mpa·s)按表1处方制备片剂,分别测定释放度,测定结果见图3,根据2005版中国药典对缓释制剂释放度的要求,即在0. 5～2. 0 h、6 h、12h的溶出量分别为20% ～45%、45% ～75%和大于75% ,选择HPMC用量为200 mg。取EC (60 mpa·s)按表2处方制备片剂,分别测定释放度,结果见图4,可看出, EC用量对释放度的影不大,但随着用量的增加,释放速率也略有减慢,根据制剂要求,释药在规定的时间内尽量缓慢释放,因此在综合考虑后选择EC用量为12 mg。 表1 HPMC不同用量组成的缓释片处方 原辅料名处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 称 苦参碱/mg 300 300 300 300 300 HPMC /mg 100 200 300 400 500 其他辅料 适量 适量 适量 适量 适量 表2 EC不同用量对选用HPMC制成的缓释片处方 原辅料名称 处方1 处方2 处方3 处方4 苦参碱/mg 300 300 300 300 HPMC /mg EC /mg 其他辅料

200 6 适量 200 9 适量 200 12 适量 200 15 适量

图3 不同用量HPMC对释放度的影响( n = 3)

图4 不同用量EC对选定HPMC所制成缓释片的影响( n = 3)

2. 1. 3 压力对释放度的影响取选定处方,制备颗粒,压制不同硬度的苦参碱缓释片,测定硬度,并分别测定释放度,结果见图5,结果表明:在相同处方下,不同压力对释药速率略有影响。在硬度小于6 kg时,释药速率偏快且片剂外观粗糙,不美观。随着硬度的增加,释药减慢。当达到一定的硬度后,压力对缓释片的释放度影响减小,综合考虑,选择6. 5 kg～7. 5 kg作为本制剂硬度的控制范围。

图5 压片压力对释放度的影响( n = 3)

2. 2 苦参碱缓释片的制备 按处方取苦参碱、PVP (聚乙烯吡咯烷酮)混合均匀,加入处方量10%的EC乙醇溶液(先用95%乙醇溶胀为10%的溶液) 溶解,再加入处方量的HPMC混合均匀,加入适量的85%乙醇,混合均匀,湿法制粒,低温干燥,整粒,加入硬脂酸镁适量,混合均匀,压制成片,控制压力硬度在6. 5～7. 5 kg,每片含苦参碱300 mg,包薄膜衣,即得[4]。 验证

2. 3 缓释片含量测定方法

[2]

2. 3. 1 色谱条件

摇十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0. 02 mol/ L 磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH 值至3. 5)鄄甲醇(体积比90 颐10)为流动相;检测波长为210 nm。

2. 3. 2 测定方法

取样品10 片,用研钵研细,精密称取适量(约相当于苦参碱50 mg),置100 mL 量瓶中,加甲醇80 mL,超声振荡使苦参碱溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液适量,加流动相制成每1 mL 中约含苦参碱100 滋g 的溶液,作为供试品溶液。另取苦参碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1 mL 中约含100 滋g 的溶液,作为对照品溶液。照高效液相色谱法《中国药典2005 年版》二部(附录V D)测定。精密量取供试品溶液与对照溶液各20 滋L 分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算[5]。 2. 4 缓释片释放度测定方法建立

2. 4. 1 色谱条件 色谱柱: SD2C18柱( 250 mm ×44. 6 mm, 5μm) 。流动相:磷酸二氢钾(0. 025 mol/L) 2乙腈( 30 ∶70) ,检测波长: 205 nm,柱温:室温,流速: 1 mL /min,进样量: 10μL。

2. 4. 2 标准曲线制备

精密称取苦参碱对照品20. 05 mg,置50 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1 mL 含0. 401 mg溶液,作为对照品储备液。分别精密吸取苦参碱对照品溶液0.5、1. 5、2. 5、5. 0、7. 5、10 mL,置于10 mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀。分别进样10μL,测定峰面积积分值,以峰面积积分值A为纵坐标、对照品浓度C为横坐标, 绘制标准曲线。得回归方程: A = 43.159C + 108. 24, r = 0. 999 1。表明,苦参碱在20 ～400μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2. 4. 3 稳定性

分别于0、4、6、12、24 h,精密吸取“2. 4. 2”所制备的200μg/mL对照品溶液10μL进样,测得在不同时间的色谱峰峰面积A值,其均值3583. 98, RSD = 1. 2%,表明苦参碱水溶液比较稳定,放置24 h其吸收峰面积基本不变。

2. 4. 4 回收率

按处方量的80%, 100% , 120%分别精密称取苦参碱原料药适量于150 mL 的具塞三角瓶中,加入处方量比例的其他辅料,用流动相80mL超声提取30 min,过滤,滤液转移至100 mL量并中并定容,摇匀。分别精密吸取5 mL,用流动相稀释至100 mL,微孔滤膜( 0. 45 μm)滤过,取续滤液各10μL直接进样,测定其色谱峰峰面积,计算回收率,平均回收率为98. 63% , RSD = 0. 70% ,结果显示,本方法回收率良好。

2. 5 释放度的测定

取060416, 060417, 060418 3批苦参碱缓释片,照中华人民共和国药典2005版(二部)释放度测定法(第一法) ,采用溶出度测定法中的转篮法,以自制的人工胃液为溶出介质,在温度( 37 ±0. 5) ℃,转速为100 r /min的条件下依法操作。分别在2、6、12、16、24 h取样5. 0 mL,用0. 45 μm的微孔滤膜滤,取续滤液直接进样, 并及时在操作液中补充37℃的人工胃液5. 0 mL,结果见图6。结果表明,释放度重现性较好,达到规定的要求。

图6 3批缓释片释放度

2. 6 释药特性研究

2. 6. 1 缓释片与普通片的释放度比较

以拟定的处方制粒压片100片作为普通片。与缓释同时进行释放度试验。释放曲线见图7、8。

图7 普通片释放曲线

图8 缓释片释放曲线

2. 6. 2 释药动力学模型

常用药物释放动力模型有零级方程:Mt /M∞ = kt;一方程: ln (1 - Mt /M∞ ) =- kt; Higuchi方程:Mt /M∞ = kt1 /2。式中Mt 为t时间的累积释放量;M∞为∞时间的累积释放量;Mt /M∞为t 时累积释放百分率(用Q 表示) 。将

060416、060417、060418 3批样品的释放速率均值进数学拟合,结果见表3、4。 表3 苦参碱缓释片的释放度平均值( n = 3) 时间/h 2 6 12 16 24 060416 33.67 56.83 75.09 87.35 96.78 060417 35.91 60.15 76.33 86.11 98.91 060418 34.94 57.62 77.03 83.25 100.86 平均释放量/% 34.84 58.20 76.15 85.57 98.85 表4 苦参碱缓释片的释药动力学特征 释药方程类型 拟合方程式 相关系数 零级方程Q = 3. 697 4 t + 21. 961 r = 0. 854 7 一级方程ln (1 - Q) = - 0. 168 5 t + 4. 767 3 r = 0. 924 0 Higuchi方程Q = 18. 339x + 11. 206 r = 0. 993 0 结果表明:释药动力模型拟合表明,苦参碱缓释片的零级方程线性较差,一级方程线性差, Higuchi方程的线性关系良好,说明本制剂符合骨架型缓释片的释药机制。

结论：该缓释片的主要影响因素是骨架材料,本试验采用单因素法, 筛选出苦参碱缓释片骨架材料HPMCK4M和EC以及其用量。在此基础上通过释放度的测定,确定

了处方的组成。在处方中加入适量的PVP作为致孔剂,调节药物的释放,使药物更加平稳的释放。

在制备苦参碱缓释片的过程中发现湿法制粒比干法制粒压片物料的流动性好,片剂外观美观,但在干燥过程中温度大于50℃时,物料略变黄,不仅影响外观还可能影响产品质量;而干法制粒易松片。综合考虑后,为了制备质量稳定的缓释片,采用湿法制粒,干燥温度控制在50℃以下。多次实验表明,该处方只有易制粒、可压性好、工艺稳定的特点,适合于工业化生产。

缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。为了更能体现体内和体外释药的一致性,采用了人工胃液作为释放介质,使药物的释放更接近于体内。体外释放度研究表明,该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,由图7、图8可见,与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标[4]。

参考文献：

[1].孙少平，梁娜，隋军，崔福德.苦参碱制剂的研究进展[J].黑龙江中医药，2008,3:44-46.

[2].林潮双，崇雨田，林炳亮.苦参碱注射液治疗乙型肝炎150例疗效观察[J].新医学，2004，35（1）：22-23.

[3].李晏.苦参碱缓释片的研究.第二军医大学学位论文.2001

[4].韩宪忠，刘新，聂进，付晓泰，金蜀蓉，余维明.苦参碱缓释片的制备及释放度研究[J].中成药，2008,30（3）：365-368.

[5].祝志贤,梁秋文.苦参碱缓释片的制备及其释放度研究[J].2008.12,24（6）：569-571.

组员： 杜娟 王慧 王琳 吴茜 张婷 程龙鑫

苦参碱缓释片的制备及释放度研究

吴茜 08312096 08药学（2）班

摘要: 苦参碱具有抗心律失常，抗肿瘤等临床作用。但该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。因此制成缓释片对不易口服的患者具有重要意义。本文主要通过对缓释骨架材料的筛选，由不同黏度不同量的HPMC与EC测出对释放度的影响制出苦参碱最优质处方。再通过在一定色谱条件下的苦参碱缓释片的含量、稳定性、释放度、回收率及释药特性的研究，得出缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,并与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标。关键词：苦参碱；缓释剂；HPLC；释放度

前言：苦参碱(Matrine)是从豆科槐属植物苦豆子苦参根中分离得到的生物碱，为白色针状结晶或结晶性粉末。本品在乙醇、氧仿、甲苯、苯中极易溶解，在丙酮中易溶，在水中溶解，在石油醚、热水中略溶[1]，mP为75.5~76.5℃。本品的氛仿溶液在420nm的波长处有最大吸收。

苦参碱具有抗心律失常、抗炎、抗柯萨基B组病毒、升白等作用，并能抑制某些因子(肿瘤坏死因子TNF、白细胞介素一6IL一6)的产生，或对某些细胞(人红白血病细胞株K562、人肝癌细胞系SMMC一7721)具有诱导分化的作用，临床用于急慢性肝炎[2]及恶性肿瘤的治疗。目前用于治疗的剂型中，仅有注射剂、栓剂等，尚无片剂及缓释制剂问世。由于该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。本品的主要副作用有头晕、恶心、呕吐、便秘等，因此有必要将其制成缓释制剂，以期达到方便患者用药的目的[3] 。 材料：

1.试剂：苦参碱(宁夏博尔泰力药业股份有限公司,纯度98. 5% ) ,羟丙基甲基纤维素(HPMC) (四川泸州化工厂) ,乙基纤维素(EC) (四川泸州化工厂) 。乙腈(色谱纯) ,磷酸二氢钾(KH2 PO4 ) 。

2.仪器:Agilent 1100 高效液相色谱仪, Agilent 8453 紫外分光光度计, D2800L 智能药物溶出仪(天津大学无线电厂) , 78X22型片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂) ,单冲压片机(上海第一制药机械厂) ,JD20023电子天平(沈阳龙腾电子有限公司) 。苦参碱(内蒙古启源药业有限责任公司);苦参碱对照品(批号110805-200306,中国药品生物制品检定所);羟丙基甲基纤维素

(HPMC,K4M,Colorcon公司);乳糖(新西兰乳糖有限公司);乙基纤维素(EC,上海峰鹤化工有限公司);RCZ鄄6C 型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器有限公司);TDP鄄1郾5 型单冲压片机(中南制药机械厂);HP1100 高效液相色谱仪:紫外检测器、自动进样器(安捷伦公司)。

实验：

2. 1 处方筛选

为了制备优质的产品,我们对大量的缓释骨架料进行了筛选,文献报道[ 4～6 ] , HPMC利EC联合应用,能产生比较理想的效果,故而缓释骨架材料选择亲水凝胶HPMC为主,辅以疏水性辅料为阻滞剂,以调节释药速度。

2. 1. 1 HPMC与EC黏度对释放度的影响 取苦参碱: HPMC (3∶2)的比例,采用的HPMC黏度分别为4 000 mpa·s ( K4M) 、15 000 mpa·s ( K15M)和100 000 mpa· s ( K100M) ,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图1。另取苦参碱: EC(10∶1)的比例,采用的EC黏度分别为30 mpa·s、60 mpa·s、100 mpa·s和150 mpa·s,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图2。结果显示不同黏度的HPMC利EC对释放曲线影响不大。根据制备工艺操作的可行性需要选择HPMC和EC的黏度分别为4 000 mpa·s和60 mpa·s。

7. 4000 mpa·s 2. 15000 mpa·s 3. 100000 mpa·s

8.

图1 不同黏度HPMC对释放度的影响( n = 3)

7. 30 mpa·s 2. 60 mpa·s 3. 100 mpa·s 4. 150 mpa·s

8.

图2 不同黏度EC对释放度的影响( n = 3)

2. 1. 2 HPMC与EC用量对释放速率的影响

取HPMC (4 000 mpa·s)按表1处方制备片剂,分别测定释放度,测定结果见图3,根据2005版中国药典对缓释制剂释放度的要求,即在0. 5～2. 0 h、6 h、12h的溶出量分别为20% ～45%、45% ～75%和大于75% ,选择HPMC用量为200 mg。取EC (60 mpa·s)按表2处方制备片剂,分别测定释放度,结果见图4,可看出, EC用量对释放度的影不大,但随着用量的增加,释放速率也略有减慢,根据制剂要求,释药在规定的时间内尽量缓慢释放,因此在综合考虑后选择EC用量为12 mg。 表1 HPMC不同用量组成的缓释片处方 原辅料名处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 称 苦参碱/mg 300 300 300 300 300 HPMC /mg 100 200 300 400 500 其他辅料 适量 适量 适量 适量 适量 表2 EC不同用量对选用HPMC制成的缓释片处方 原辅料名称 处方1 处方2 处方3 处方4 苦参碱/mg 300 300 300 300 HPMC /mg EC /mg 其他辅料

200 6 适量 200 9 适量 200 12 适量 200 15 适量

图3 不同用量HPMC对释放度的影响( n = 3)

图4 不同用量EC对选定HPMC所制成缓释片的影响( n = 3)

2. 1. 3 压力对释放度的影响取选定处方,制备颗粒,压制不同硬度的苦参碱缓释片,测定硬度,并分别测定释放度,结果见图5,结果表明:在相同处方下,不同压力对释药速率略有影响。在硬度小于6 kg时,释药速率偏快且片剂外观粗糙,不美观。随着硬度的增加,释药减慢。当达到一定的硬度后,压力对缓释片的释放度影响减小,综合考虑,选择6. 5 kg～7. 5 kg作为本制剂硬度的控制范围。

图5 压片压力对释放度的影响( n = 3)

2. 2 苦参碱缓释片的制备 按处方取苦参碱、PVP (聚乙烯吡咯烷酮)混合均匀,加入处方量10%的EC乙醇溶液(先用95%乙醇溶胀为10%的溶液) 溶解,再加入处方量的HPMC混合均匀,加入适量的85%乙醇,混合均匀,湿法制粒,低温干燥,整粒,加入硬脂酸镁适量,混合均匀,压制成片,控制压力硬度在6. 5～7. 5 kg,每片含苦参碱300 mg,包薄膜衣,即得[4]。 验证

2. 3 缓释片含量测定方法

[2]

2. 3. 1 色谱条件

摇十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0. 02 mol/ L 磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH 值至3. 5)鄄甲醇(体积比90 颐10)为流动相;检测波长为210 nm。

2. 3. 2 测定方法

取样品10 片,用研钵研细,精密称取适量(约相当于苦参碱50 mg),置100 mL 量瓶中,加甲醇80 mL,超声振荡使苦参碱溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液适量,加流动相制成每1 mL 中约含苦参碱100 滋g 的溶液,作为供试品溶液。另取苦参碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1 mL 中约含100 滋g 的溶液,作为对照品溶液。照高效液相色谱法《中国药典2005 年版》二部(附录V D)测定。精密量取供试品溶液与对照溶液各20 滋L 分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算[5]。 2. 4 缓释片释放度测定方法建立

2. 4. 1 色谱条件 色谱柱: SD2C18柱( 250 mm ×44. 6 mm, 5μm) 。流动相:磷酸二氢钾(0. 025 mol/L) 2乙腈( 30 ∶70) ,检测波长: 205 nm,柱温:室温,流速: 1 mL /min,进样量: 10μL。

2. 4. 2 标准曲线制备

精密称取苦参碱对照品20. 05 mg,置50 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1 mL 含0. 401 mg溶液,作为对照品储备液。分别精密吸取苦参碱对照品溶液0.5、1. 5、2. 5、5. 0、7. 5、10 mL,置于10 mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀。分别进样10μL,测定峰面积积分值,以峰面积积分值A为纵坐标、对照品浓度C为横坐标, 绘制标准曲线。得回归方程: A = 43.159C + 108. 24, r = 0. 999 1。表明,苦参碱在20 ～400μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2. 4. 3 稳定性

分别于0、4、6、12、24 h,精密吸取“2. 4. 2”所制备的200μg/mL对照品溶液10μL进样,测得在不同时间的色谱峰峰面积A值,其均值3583. 98, RSD = 1. 2%,表明苦参碱水溶液比较稳定,放置24 h其吸收峰面积基本不变。

2. 4. 4 回收率

按处方量的80%, 100% , 120%分别精密称取苦参碱原料药适量于150 mL 的具塞三角瓶中,加入处方量比例的其他辅料,用流动相80mL超声提取30 min,过滤,滤液转移至100 mL量并中并定容,摇匀。分别精密吸取5 mL,用流动相稀释至100 mL,微孔滤膜( 0. 45 μm)滤过,取续滤液各10μL直接进样,测定其色谱峰峰面积,计算回收率,平均回收率为98. 63% , RSD = 0. 70% ,结果显示,本方法回收率良好。

2. 5 释放度的测定

取060416, 060417, 060418 3批苦参碱缓释片,照中华人民共和国药典2005版(二部)释放度测定法(第一法) ,采用溶出度测定法中的转篮法,以自制的人工胃液为溶出介质,在温度( 37 ±0. 5) ℃,转速为100 r /min的条件下依法操作。分别在2、6、12、16、24 h取样5. 0 mL,用0. 45 μm的微孔滤膜滤,取续滤液直接进样, 并及时在操作液中补充37℃的人工胃液5. 0 mL,结果见图6。结果表明,释放度重现性较好,达到规定的要求。

图6 3批缓释片释放度

2. 6 释药特性研究

2. 6. 1 缓释片与普通片的释放度比较

以拟定的处方制粒压片100片作为普通片。与缓释同时进行释放度试验。释放曲线见图7、8。

图7 普通片释放曲线

图8 缓释片释放曲线

2. 6. 2 释药动力学模型

常用药物释放动力模型有零级方程:Mt /M∞ = kt;一方程: ln (1 - Mt /M∞ ) =- kt; Higuchi方程:Mt /M∞ = kt1 /2。式中Mt 为t时间的累积释放量;M∞为∞时间的累积释放量;Mt /M∞为t 时累积释放百分率(用Q 表示) 。将

060416、060417、060418 3批样品的释放速率均值进数学拟合,结果见表3、4。 表3 苦参碱缓释片的释放度平均值( n = 3) 时间/h 2 6 12 16 24 060416 33.67 56.83 75.09 87.35 96.78 060417 35.91 60.15 76.33 86.11 98.91 060418 34.94 57.62 77.03 83.25 100.86 平均释放量/% 34.84 58.20 76.15 85.57 98.85 表4 苦参碱缓释片的释药动力学特征 释药方程类型 拟合方程式 相关系数 零级方程Q = 3. 697 4 t + 21. 961 r = 0. 854 7 一级方程ln (1 - Q) = - 0. 168 5 t + 4. 767 3 r = 0. 924 0 Higuchi方程Q = 18. 339x + 11. 206 r = 0. 993 0 结果表明:释药动力模型拟合表明,苦参碱缓释片的零级方程线性较差,一级方程线性差, Higuchi方程的线性关系良好,说明本制剂符合骨架型缓释片的释药机制。

结论：该缓释片的主要影响因素是骨架材料,本试验采用单因素法, 筛选出苦参碱缓释片骨架材料HPMCK4M和EC以及其用量。在此基础上通过释放度的测定,确定

了处方的组成。在处方中加入适量的PVP作为致孔剂,调节药物的释放,使药物更加平稳的释放。

在制备苦参碱缓释片的过程中发现湿法制粒比干法制粒压片物料的流动性好,片剂外观美观,但在干燥过程中温度大于50℃时,物料略变黄,不仅影响外观还可能影响产品质量;而干法制粒易松片。综合考虑后,为了制备质量稳定的缓释片,采用湿法制粒,干燥温度控制在50℃以下。多次实验表明,该处方只有易制粒、可压性好、工艺稳定的特点,适合于工业化生产。

缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。为了更能体现体内和体外释药的一致性,采用了人工胃液作为释放介质,使药物的释放更接近于体内。体外释放度研究表明,该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,由图7、图8可见,与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标[4]。

参考文献：

[1].孙少平，梁娜，隋军，崔福德.苦参碱制剂的研究进展[J].黑龙江中医药，2008,3:44-46.

[2].林潮双，崇雨田，林炳亮.苦参碱注射液治疗乙型肝炎150例疗效观察[J].新医学，2004，35（1）：22-23.

[3].李晏.苦参碱缓释片的研究.第二军医大学学位论文.2001

[4].韩宪忠，刘新，聂进，付晓泰，金蜀蓉，余维明.苦参碱缓释片的制备及释放度研究[J].中成药，2008,30（3）：365-368.

[5].祝志贤,梁秋文.苦参碱缓释片的制备及其释放度研究[J].2008.12,24（6）：569-571.

组员： 杜娟 王慧 王琳 吴茜 张婷 程龙鑫

苦参碱缓释片的制备及释放度研究

张婷 08312112 08药学（2）班

摘要: 苦参碱具有抗心律失常，抗肿瘤等临床作用。但该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。因此制成缓释片对不易口服的患者具有重要意义。本文主要通过对缓释骨架材料的筛选，由不同黏度不同量的HPMC与EC测出对释放度的影响制出苦参碱最优质处方。再通过在一定色谱条件下的苦参碱缓释片的含量、稳定性、释放度、回收率及释药特性的研究，得出缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,并与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标。关键词：苦参碱；缓释剂；HPLC；释放度

前言：苦参碱(Matrine)是从豆科槐属植物苦豆子苦参根中分离得到的生物碱，为白色针状结晶或结晶性粉末。本品在乙醇、氧仿、甲苯、苯中极易溶解，在丙酮中易溶，在水中溶解，在石油醚、热水中略溶[1]，mP为75.5~76.5℃。本品的氛仿溶液在420nm的波长处有最大吸收。

苦参碱具有抗心律失常、抗炎、抗柯萨基B组病毒、升白等作用，并能抑制某些因子(肿瘤坏死因子TNF、白细胞介素一6IL一6)的产生，或对某些细胞(人红白血病细胞株K562、人肝癌细胞系SMMC一7721)具有诱导分化的作用，临床用于急慢性肝炎[2]及恶性肿瘤的治疗。目前用于治疗的剂型中，仅有注射剂、栓剂等，尚无片剂及缓释制剂问世。由于该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。本品的主要副作用有头晕、恶心、呕吐、便秘等，因此有必要将其制成缓释制剂，以期达到方便患者用药的目的[3] 。 材料：

1.试剂：苦参碱(宁夏博尔泰力药业股份有限公司,纯度98. 5% ) ,羟丙基甲基纤维素(HPMC) (四川泸州化工厂) ,乙基纤维素(EC) (四川泸州化工厂) 。乙腈(色谱纯) ,磷酸二氢钾(KH2 PO4 ) 。

2.仪器:Agilent 1100 高效液相色谱仪, Agilent 8453 紫外分光光度计, D2800L 智能药物溶出仪(天津大学无线电厂) , 78X22型片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂) ,单冲压片机(上海第一制药机械厂) ,JD20023电子天平(沈阳龙腾电子有限公司) 。苦参碱(内蒙古启源药业有限责任公司);苦参碱对照品(批号110805-200306,中国药品生物制品检定所);羟丙基甲基纤维素

(HPMC,K4M,Colorcon公司);乳糖(新西兰乳糖有限公司);乙基纤维素(EC,上海峰鹤化工有限公司);RCZ鄄6C 型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器有限公司);TDP鄄1郾5 型单冲压片机(中南制药机械厂);HP1100 高效液相色谱仪:紫外检测器、自动进样器(安捷伦公司)。

实验：

2. 1 处方筛选

为了制备优质的产品,我们对大量的缓释骨架料进行了筛选,文献报道[ 4～6 ] , HPMC利EC联合应用,能产生比较理想的效果,故而缓释骨架材料选择亲水凝胶HPMC为主,辅以疏水性辅料为阻滞剂,以调节释药速度。

2. 1. 1 HPMC与EC黏度对释放度的影响

取苦参碱: HPMC (3∶2)的比例,采用的HPMC黏度分别为4 000 mpa·s ( K4M) 、15 000 mpa·s ( K15M)和100 000 mpa· s ( K100M) ,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图1。另取苦参碱: EC(10∶1)的比例,采用的EC黏度分别为30 mpa·s、60 mpa·s、100 mpa·s和150 mpa·s,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图2。结果显示不同黏度的HPMC利EC对释放曲线影响不大。根据制备工艺操作的可行性需要选择HPMC和EC的黏度分别为4 000 mpa·s和60 mpa·s。

9. 4000 mpa·s 2. 15000 mpa·s 3. 100000 mpa·s

10.

图1 不同黏度HPMC对释放度的影响( n = 3)

9. 30 mpa·s 2. 60 mpa·s 3. 100 mpa·s 4. 150 mpa·s

10.

图2 不同黏度EC对释放度的影响( n = 3)

2. 1. 2 HPMC与EC用量对释放速率的影响

取HPMC (4 000 mpa·s)按表1处方制备片剂,分别测定释放度,测定结果见图3,根据2005版中国药典对缓释制剂释放度的要求,即在0. 5～2. 0 h、6 h、12h的溶出量分别为20% ～45%、45% ～75%和大于75% ,选择HPMC用量为200 mg。取EC (60 mpa·s)按表2处方制备片剂,分别测定释放度,结果见图4,可看出, EC用量对释放度的影不大,但随着用量的增加,释放速率也略有减慢,根据制剂要求,释药在规定的时间内尽量缓慢释放,因此在综合考虑后选择EC用量为12 mg。 表1 HPMC不同用量组成的缓释片处方 原辅料名处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 称 苦参碱/mg 300 300 300 300 300 HPMC /mg 100 200 300 400 500 其他辅料 适量 适量 适量 适量 适量 表2 EC不同用量对选用HPMC制成的缓释片处方 原辅料名称 处方1 处方2 处方3 处方4 苦参碱/mg 300 300 300 300 HPMC /mg EC /mg 其他辅料

200 6 适量 200 9 适量 200 12 适量 200 15 适量

图3 不同用量HPMC对释放度的影响( n = 3)

图4 不同用量EC对选定HPMC所制成缓释片的影响( n = 3)

2. 1. 3 压力对释放度的影响取选定处方,制备颗粒,压制不同硬度的苦参碱缓释片,测定硬度,并分别测定释放度,结果见图5,结果表明:在相同处方下,不同压力对释药速率略有影响。在硬度小于6 kg时,释药速率偏快且片剂外观粗糙,不美观。随着硬度的增加,释药减慢。当达到一定的硬度后,压力对缓释片的释放度影响减小,综合考虑,选择6. 5 kg～7. 5 kg作为本制剂硬度的控制范围。

图5 压片压力对释放度的影响( n = 3)

2. 2 苦参碱缓释片的制备 按处方取苦参碱、PVP (聚乙烯吡咯烷酮)混合均匀,加入处方量10%的EC乙醇溶液(先用95%乙醇溶胀为10%的溶液) 溶解,再加入处方量的HPMC混合均匀,加入适量的85%乙醇,混合均匀,湿法制粒,低温干燥,整粒,加入硬脂酸镁适量,混合均匀,压制成片,控制压力硬度在6. 5～7. 5 kg,每片含苦参碱300 mg,包薄膜衣,即得[4]。 验证

2. 3 缓释片含量测定方法

[2]

2. 3. 1 色谱条件

摇十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0. 02 mol/ L 磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH 值至3. 5)鄄甲醇(体积比90 颐10)为流动相;检测波长为210 nm。

2. 3. 2 测定方法

取样品10 片,用研钵研细,精密称取适量(约相当于苦参碱50 mg),置100 mL 量瓶中,加甲醇80 mL,超声振荡使苦参碱溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液适量,加流动相制成每1 mL 中约含苦参碱100 滋g 的溶液,作为供试品溶液。另取苦参碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1 mL 中约含100 滋g 的溶液,作为对照品溶液。照高效液相色谱法《中国药典2005 年版》二部(附录V D)测定。精密量取供试品溶液与对照溶液各20 滋L 分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算[5]。 2. 4 缓释片释放度测定方法建立

2. 4. 1 色谱条件 色谱柱: SD2C18柱( 250 mm ×44. 6 mm, 5μm) 。流动相:磷酸二氢钾(0. 025 mol/L) 2乙腈( 30 ∶70) ,检测波长: 205 nm,柱温:室温,流速: 1 mL /min,进样量: 10μL。

2. 4. 2 标准曲线制备

精密称取苦参碱对照品20. 05 mg,置50 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1 mL 含0. 401 mg溶液,作为对照品储备液。分别精密吸取苦参碱对照品溶液0.5、1. 5、2. 5、5. 0、7. 5、10 mL,置于10 mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀。分别进样10μL,测定峰面积积分值,以峰面积积分值A为纵坐标、对照品浓度C为横坐标, 绘制标准曲线。得回归方程: A = 43.159C + 108. 24, r = 0. 999 1。表明,苦参碱在20 ～400μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2. 4. 3 稳定性

分别于0、4、6、12、24 h,精密吸取“2. 4. 2”所制备的200μg/mL对照品溶液10μL进样,测得在不同时间的色谱峰峰面积A值,其均值3583. 98, RSD = 1. 2%,表明苦参碱水溶液比较稳定,放置24 h其吸收峰面积基本不变。

2. 4. 4 回收率

按处方量的80%, 100% , 120%分别精密称取苦参碱原料药适量于150 mL 的具塞三角瓶中,加入处方量比例的其他辅料,用流动相80mL超声提取30 min,过滤,滤液转移至100 mL量并中并定容,摇匀。分别精密吸取5 mL,用流动相稀释至100 mL,微孔滤膜( 0. 45 μm)滤过,取续滤液各10μL直接进样,测定其色谱峰峰面积,计算回收率,平均回收率为98. 63% , RSD = 0. 70% ,结果显示,本方法回收率良好。

2. 5 释放度的测定

取060416, 060417, 060418 3批苦参碱缓释片,照中华人民共和国药典2005版(二部)释放度测定法(第一法) ,采用溶出度测定法中的转篮法,以自制的人工胃液为溶出介质,在温度( 37 ±0. 5) ℃,转速为100 r /min的条件下依法操作。分别在2、6、12、16、24 h取样5. 0 mL,用0. 45 μm的微孔滤膜滤,取续滤液直接进样, 并及时在操作液中补充37℃的人工胃液5. 0 mL,结果见图6。结果表明,释放度重现性较好,达到规定的要求。

图6 3批缓释片释放度

2. 6 释药特性研究

2. 6. 1 缓释片与普通片的释放度比较

以拟定的处方制粒压片100片作为普通片。与缓释同时进行释放度试验。释放曲线见图7、8。

图7 普通片释放曲线

图8 缓释片释放曲线

2. 6. 2 释药动力学模型

常用药物释放动力模型有零级方程:Mt /M∞ = kt;一方程: ln (1 - Mt /M∞ ) =- kt; Higuchi方程:Mt /M∞ = kt1 /2。式中Mt 为t时间的累积释放量;M∞为∞时间的累积释放量;Mt /M∞为t 时累积释放百分率(用Q 表示) 。将

060416、060417、060418 3批样品的释放速率均值进数学拟合,结果见表3、4。 表3 苦参碱缓释片的释放度平均值( n = 3) 时间/h 2 6 12 16 24 060416 33.67 56.83 75.09 87.35 96.78 060417 35.91 60.15 76.33 86.11 98.91 060418 34.94 57.62 77.03 83.25 100.86 平均释放量/% 34.84 58.20 76.15 85.57 98.85 表4 苦参碱缓释片的释药动力学特征 释药方程类型 拟合方程式 相关系数 零级方程Q = 3. 697 4 t + 21. 961 r = 0. 854 7 一级方程ln (1 - Q) = - 0. 168 5 t + 4. 767 3 r = 0. 924 0 Higuchi方程Q = 18. 339x + 11. 206 r = 0. 993 0 结果表明:释药动力模型拟合表明,苦参碱缓释片的零级方程线性较差,一级方程线性差, Higuchi方程的线性关系良好,说明本制剂符合骨架型缓释片的释药机制。

结论：该缓释片的主要影响因素是骨架材料,本试验采用单因素法, 筛选出苦参碱缓释片骨架材料HPMCK4M和EC以及其用量。在此基础上通过释放度的测定,确定

了处方的组成。在处方中加入适量的PVP作为致孔剂,调节药物的释放,使药物更加平稳的释放。

在制备苦参碱缓释片的过程中发现湿法制粒比干法制粒压片物料的流动性好,片剂外观美观,但在干燥过程中温度大于50℃时,物料略变黄,不仅影响外观还可能影响产品质量;而干法制粒易松片。综合考虑后,为了制备质量稳定的缓释片,采用湿法制粒,干燥温度控制在50℃以下。多次实验表明,该处方只有易制粒、可压性好、工艺稳定的特点,适合于工业化生产。

缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。为了更能体现体内和体外释药的一致性,采用了人工胃液作为释放介质,使药物的释放更接近于体内。体外释放度研究表明,该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,由图7、图8可见,与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标[4]。

参考文献：

[1].孙少平，梁娜，隋军，崔福德.苦参碱制剂的研究进展[J].黑龙江中医药，2008,3:44-46.

[2].林潮双，崇雨田，林炳亮.苦参碱注射液治疗乙型肝炎150例疗效观察[J].新医学，2004，35（1）：22-23.

[3].李晏.苦参碱缓释片的研究.第二军医大学学位论文.2001

[4].韩宪忠，刘新，聂进，付晓泰，金蜀蓉，余维明.苦参碱缓释片的制备及释放度研究[J].中成药，2008,30（3）：365-368.

[5].祝志贤,梁秋文.苦参碱缓释片的制备及其释放度研究[J].2008.12,24（6）：569-571.

组员： 杜娟 王慧 王琳 吴茜 张婷 程龙鑫

苦参碱缓释片的制备及释放度研究

程龙鑫 08312066 08药学（2）班

摘要: 苦参碱具有抗心律失常，抗肿瘤等临床作用。但该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。因此制成缓释片对不易口服的患者具有重要意义。本文主要通过对缓释骨架材料的筛选，由不同黏度不同量的HPMC与EC测出对释放度的影响制出苦参碱最优质处方。再通过在一定色谱条件下的苦参碱缓释片的含量、稳定性、释放度、回收率及释药特性的研究，得出缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,并与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标。关键词：苦参碱；缓释剂；HPLC；释放度

前言：苦参碱(Matrine)是从豆科槐属植物苦豆子苦参根中分离得到的生物碱，为白色针状结晶或结晶性粉末。本品在乙醇、氧仿、甲苯、苯中极易溶解，在丙酮中易溶，在水中溶解，在石油醚、热水中略溶[1]，mP为75.5~76.5℃。本品的氛仿溶液在420nm的波长处有最大吸收。

苦参碱具有抗心律失常、抗炎、抗柯萨基B组病毒、升白等作用，并能抑制某些因子(肿瘤坏死因子TNF、白细胞介素一6IL一6)的产生，或对某些细胞(人红白血病细胞株K562、人肝癌细胞系SMMC一7721)具有诱导分化的作用，临床用于急慢性肝炎[2]及恶性肿瘤的治疗。目前用于治疗的剂型中，仅有注射剂、栓剂等，尚无片剂及缓释制剂问世。由于该药消除半衰期较短，若制成一般的口服制剂，常需每日口服3~4次，给药次数较为频繁。本品的主要副作用有头晕、恶心、呕吐、便秘等，因此有必要将其制成缓释制剂，以期达到方便患者用药的目的[3] 。 材料：

1.试剂：苦参碱(宁夏博尔泰力药业股份有限公司,纯度98. 5% ) ,羟丙基甲基纤维素(HPMC) (四川泸州化工厂) ,乙基纤维素(EC) (四川泸州化工厂) 。乙腈(色谱纯) ,磷酸二氢钾(KH2 PO4 ) 。

2.仪器:Agilent 1100 高效液相色谱仪, Agilent 8453 紫外分光光度计, D2800L 智能药物溶出仪(天津大学无线电厂) , 78X22型片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂) ,单冲压片机(上海第一制药机械厂) ,JD20023电子天平(沈阳龙腾电子有限公司) 。苦参碱(内蒙古启源药业有限责任公司);苦参碱对照品(批号110805-200306,中国药品生物制品检定所);羟丙基甲基纤维素

(HPMC,K4M,Colorcon公司);乳糖(新西兰乳糖有限公司);乙基纤维素(EC,上海峰鹤化工有限公司);RCZ鄄6C 型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器有限公司);TDP鄄1郾5 型单冲压片机(中南制药机械厂);HP1100 高效液相色谱仪:紫外检测器、自动进样器(安捷伦公司)。

实验：

2. 1 处方筛选

为了制备优质的产品,我们对大量的缓释骨架料进行了筛选,文献报道[ 4～6 ] , HPMC利EC联合应用,能产生比较理想的效果,故而缓释骨架材料选择亲水凝胶HPMC为主,辅以疏水性辅料为阻滞剂,以调节释药速度。

2. 1. 1 HPMC与EC黏度对释放度的影响

取苦参碱: HPMC (3∶2)的比例,采用的HPMC黏度分别为4 000 mpa·s ( K4M) 、15 000 mpa·s ( K15M)和100 000 mpa· s ( K100M) ,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图1。另取苦参碱: EC(10∶1)的比例,采用的EC黏度分别为30 mpa·s、60 mpa·s、100 mpa·s和150 mpa·s,其他辅料适量,制备片剂,分别测定释放度,结果见图2。结果显示不同黏度的HPMC利EC对释放曲线影响不大。根据制备工艺操作的可行性需要选择HPMC和EC的黏度分别为4 000 mpa·s和60 mpa·s。

11.4000 mpa·s 2. 15000 mpa·s 3. 100000 mpa·s

12.

图1 不同黏度HPMC对释放度的影响( n = 3)

11.30 mpa·s 2. 60 mpa·s 3. 100 mpa·s 4. 150 mpa·s

12.

图2 不同黏度EC对释放度的影响( n = 3)

2. 1. 2 HPMC与EC用量对释放速率的影响

取HPMC (4 000 mpa·s)按表1处方制备片剂,分别测定释放度,测定结果见图3,根据2005版中国药典对缓释制剂释放度的要求,即在0. 5～2. 0 h、6 h、12h的溶出量分别为20% ～45%、45% ～75%和大于75% ,选择HPMC用量为200 mg。取EC (60 mpa·s)按表2处方制备片剂,分别测定释放度,结果见图4,可看出, EC用量对释放度的影不大,但随着用量的增加,释放速率也略有减慢,根据制剂要求,释药在规定的时间内尽量缓慢释放,因此在综合考虑后选择EC用量为12 mg。 表1 HPMC不同用量组成的缓释片处方 原辅料名处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 称 苦参碱/mg 300 300 300 300 300 HPMC /mg 100 200 300 400 500 其他辅料 适量 适量 适量 适量 适量 表2 EC不同用量对选用HPMC制成的缓释片处方 原辅料名称 处方1 处方2 处方3 处方4 苦参碱/mg 300 300 300 300 HPMC /mg EC /mg 其他辅料

200 6 适量 200 9 适量 200 12 适量 200 15 适量

图3 不同用量HPMC对释放度的影响( n = 3)

图4 不同用量EC对选定HPMC所制成缓释片的影响( n = 3)

2. 1. 3 压力对释放度的影响取选定处方,制备颗粒,压制不同硬度的苦参碱缓释片,测定硬度,并分别测定释放度,结果见图5,结果表明:在相同处方下,不同压力对释药速率略有影响。在硬度小于6 kg时,释药速率偏快且片剂外观粗糙,不美观。随着硬度的增加,释药减慢。当达到一定的硬度后,压力对缓释片的释放度影响减小,综合考虑,选择6. 5 kg～7. 5 kg作为本制剂硬度的控制范围。

图5 压片压力对释放度的影响( n = 3)

2. 2 苦参碱缓释片的制备 按处方取苦参碱、PVP (聚乙烯吡咯烷酮)混合均匀,加入处方量10%的EC乙醇溶液(先用95%乙醇溶胀为10%的溶液) 溶解,再加入处方量的HPMC混合均匀,加入适量的85%乙醇,混合均匀,湿法制粒,低温干燥,整粒,加入硬脂酸镁适量,混合均匀,压制成片,控制压力硬度在6. 5～7. 5 kg,每片含苦参碱300 mg,包薄膜衣,即得[4]。 验证

2. 3 缓释片含量测定方法

[2]

2. 3. 1 色谱条件

摇十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0. 02 mol/ L 磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH 值至3. 5)鄄甲醇(体积比90 颐10)为流动相;检测波长为210 nm。

2. 3. 2 测定方法

取样品10 片,用研钵研细,精密称取适量(约相当于苦参碱50 mg),置100 mL 量瓶中,加甲醇80 mL,超声振荡使苦参碱溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液适量,加流动相制成每1 mL 中约含苦参碱100 滋g 的溶液,作为供试品溶液。另取苦参碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1 mL 中约含100 滋g 的溶液,作为对照品溶液。照高效液相色谱法《中国药典2005 年版》二部(附录V D)测定。精密量取供试品溶液与对照溶液各20 滋L 分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算[5]。 2. 4 缓释片释放度测定方法建立

2. 4. 1 色谱条件 色谱柱: SD2C18柱( 250 mm ×44. 6 mm, 5μm) 。流动相:磷酸二氢钾(0. 025 mol/L) 2乙腈( 30 ∶70) ,检测波长: 205 nm,柱温:室温,流速: 1 mL /min,进样量: 10μL。

2. 4. 2 标准曲线制备

精密称取苦参碱对照品20. 05 mg,置50 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1 mL 含0. 401 mg溶液,作为对照品储备液。分别精密吸取苦参碱对照品溶液0.5、1. 5、2. 5、5. 0、7. 5、10 mL,置于10 mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀。分别进样10μL,测定峰面积积分值,以峰面积积分值A为纵坐标、对照品浓度C为横坐标, 绘制标准曲线。得回归方程: A = 43.159C + 108. 24, r = 0. 999 1。表明,苦参碱在20 ～400μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2. 4. 3 稳定性

分别于0、4、6、12、24 h,精密吸取“2. 4. 2”所制备的200μg/mL对照品溶液10μL进样,测得在不同时间的色谱峰峰面积A值,其均值3583. 98, RSD = 1. 2%,表明苦参碱水溶液比较稳定,放置24 h其吸收峰面积基本不变。

2. 4. 4 回收率

按处方量的80%, 100% , 120%分别精密称取苦参碱原料药适量于150 mL 的具塞三角瓶中,加入处方量比例的其他辅料,用流动相80mL超声提取30 min,过滤,滤液转移至100 mL量并中并定容,摇匀。分别精密吸取5 mL,用流动相稀释至100 mL,微孔滤膜( 0. 45 μm)滤过,取续滤液各10μL直接进样,测定其色谱峰峰面积,计算回收率,平均回收率为98. 63% , RSD = 0. 70% ,结果显示,本方法回收率良好。

2. 5 释放度的测定

取060416, 060417, 060418 3批苦参碱缓释片,照中华人民共和国药典2005版(二部)释放度测定法(第一法) ,采用溶出度测定法中的转篮法,以自制的人工胃液为溶出介质,在温度( 37 ±0. 5) ℃,转速为100 r /min的条件下依法操作。分别在2、6、12、16、24 h取样5. 0 mL,用0. 45 μm的微孔滤膜滤,取续滤液直接进样, 并及时在操作液中补充37℃的人工胃液5. 0 mL,结果见图6。结果表明,释放度重现性较好,达到规定的要求。

图6 3批缓释片释放度

2. 6 释药特性研究

2. 6. 1 缓释片与普通片的释放度比较

以拟定的处方制粒压片100片作为普通片。与缓释同时进行释放度试验。释放曲线见图7、8。

图7 普通片释放曲线

图8 缓释片释放曲线

2. 6. 2 释药动力学模型

常用药物释放动力模型有零级方程:Mt /M∞ = kt;一方程: ln (1 - Mt /M∞ ) =- kt; Higuchi方程:Mt /M∞ = kt1 /2。式中Mt 为t时间的累积释放量;M∞为∞时间的累积释放量;Mt /M∞为t 时累积释放百分率(用Q 表示) 。将

060416、060417、060418 3批样品的释放速率均值进数学拟合,结果见表3、4。 表3 苦参碱缓释片的释放度平均值( n = 3) 时间/h 2 6 12 16 24 060416 33.67 56.83 75.09 87.35 96.78 060417 35.91 60.15 76.33 86.11 98.91 060418 34.94 57.62 77.03 83.25 100.86 平均释放量/% 34.84 58.20 76.15 85.57 98.85 表4 苦参碱缓释片的释药动力学特征 释药方程类型 拟合方程式 相关系数 零级方程Q = 3. 697 4 t + 21. 961 r = 0. 854 7 一级方程ln (1 - Q) = - 0. 168 5 t + 4. 767 3 r = 0. 924 0 Higuchi方程Q = 18. 339x + 11. 206 r = 0. 993 0 结果表明:释药动力模型拟合表明,苦参碱缓释片的零级方程线性较差,一级方程线性差, Higuchi方程的线性关系良好,说明本制剂符合骨架型缓释片的释药机制。

结论：该缓释片的主要影响因素是骨架材料,本试验采用单因素法, 筛选出苦参碱缓释片骨架材料HPMCK4M和EC以及其用量。在此基础上通过释放度的测定,确定

了处方的组成。在处方中加入适量的PVP作为致孔剂,调节药物的释放,使药物更加平稳的释放。

在制备苦参碱缓释片的过程中发现湿法制粒比干法制粒压片物料的流动性好,片剂外观美观,但在干燥过程中温度大于50℃时,物料略变黄,不仅影响外观还可能影响产品质量;而干法制粒易松片。综合考虑后,为了制备质量稳定的缓释片,采用湿法制粒,干燥温度控制在50℃以下。多次实验表明,该处方只有易制粒、可压性好、工艺稳定的特点,适合于工业化生产。

缓释制剂作为一种给药系统,其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。为了更能体现体内和体外释药的一致性,采用了人工胃液作为释放介质,使药物的释放更接近于体内。体外释放度研究表明,该缓释片的释药符合Higuchi方程。12 h释放度> 75% , 16 h释放度> 85% ,由图7、图8可见,与普通片相比,具显著的缓释效应,达到了预期目标[4]。

参考文献：

[1].孙少平，梁娜，隋军，崔福德.苦参碱制剂的研究进展[J].黑龙江中医药，2008,3:44-46.

[2].林潮双，崇雨田，林炳亮.苦参碱注射液治疗乙型肝炎150例疗效观察[J].新医学，2004，35（1）：22-23.

[3].李晏.苦参碱缓释片的研究.第二军医大学学位论文.2001

[4].韩宪忠，刘新，聂进，付晓泰，金蜀蓉，余维明.苦参碱缓释片的制备及释放度研究[J].中成药，2008,30（3）：365-368.

[5].祝志贤,梁秋文.苦参碱缓释片的制备及其释放度研究[J].2008.12,24（6）：569-571.

组员： 杜娟 王慧 王琳 吴茜 张婷 程龙鑫

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/l5mx.html