高效液相色谱法测定牛组织中雷复尼特的残留量

第３８卷第ｌ期２００８年２月

精细化工中间体

ＦＩＮＥＣＨＥＭＩＣＡＬＩＮＴＥＲＭＥＤｌＡＴＥＳ

Ｖ０１．３８Ｎｏ．１Ｆｅｂ２００８

高效液相色谱法测定牛组织中雷复尼特的残留量

杨芬１．李谊１．宋宏锐’．王玉玲１．姚家彪２

（１．沈阳药科大学制药工程学院，辽宁沈阳１１００１６；２．沈阳市出入境检验检疫局，辽宁沈阳１１００１６）摘要：采用高效液相色谱法测定牛组织中雷复尼特的残留量。牛组织样品经乙腈提取。中性氧化铝柱净化后采

用ＫＩＤｍ鹬ｉｌＣ惦柱，以移（乙腈）：移（ｐＨ２．５的水）＝８３：１７为流动相，紫外检测波长２８２ｎｍ处检测雷复尼特。在

Ｏ．０５—加川舢内线性关系良好，检测低限为ｏ．０１峨。高、中、低３个水平添加时肌肉组织中样品的平均回收率

分男ｑ为７＆３％，８５墨％争９５．１％；肝组织中样品的平均回收率分另ｌｌ为７３３％，８３９％争９１．９％；肾组织中样品的平均回

收率分别为７４３％、８１厮和９２．８％。测试方法快速、简便、准确、灵敏，可用于牛组织中雷复尼特残留量的测定。

关键词：雷复尼特；组织；ＨＰＬＣ中图分类号：０６２１．３

文献标识码：Ａ

文章编号：１００９－９２１２（２００８）０ｌ—００７咖３

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仪器：美国Ａ西ｌｅｍ公司高效液相色谱仪、二极

管阵列检测器、ＨＰ—Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ色谱工作站。

１前言

雷复尼特（Ｒａｆ呔锄ｉｄｅ）是一种卤化水杨酰苯胺类杀吸虫药，它主要是通过阻断肝片吸虫的氧化磷酸化过程，而使虫体麻痹、死亡，达到杀虫的目的。广泛用于牛羊的肝片吸虫和血矛线虫病的治疗．疗效显著【ｌ’２】。目前．国内外对其测定主要有Ｇｃ法【３】、ＨＰＩＣ法及ＨＰＬＣ—ＭＳ法［．】。笔者根据日本及欧盟对

试剂：乙腈（色谱纯）、水（新制二次蒸馏水）、雷复尼特（纯度含量≥９８．５％）、磷酸和正丙醇

（ＡＲ）。

２．２色谱分析条件

色谱柱：ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８柱＋（２５０×４．６ｍｍ，５斗ｍ），流

动相：移（乙腈）：ｔ，（ｐＨ２．５的水，磷酸调节）＝８３：１７；流

牛组织中雷复尼特最低残留限量的要求（Ｏ．０ｌ“以）

研究并建立了一种简便、灵敏的ＨＰＬｃ法。用于测定牛组织中雷复尼特的残留量。以满足日常检测工作的需要。

２实验部分

速：１５ｍ【／，ｍｉｎ；柱温：３０℃；检测波长：２８２啪。

２．３标样溶液的配制

称取雷复尼特标样Ｏ．００５ｇ（精确至Ｏ．０００ｌｇ）子

１０ｍＬ容量瓶中，加适量丙酮溶解，再用乙腈定容，配制成储备溶液。将储备溶液用流动相稀释成所需浓度的标样溶液。备用。

２．１仪器与试剂

作者简介：杨芬（１９８ｌ一），女，辽宁营口人，硕士，研究方向：组织中药物的含量分析。（Ｅ－ｍａｉｌ：时１１２７０＠１６３．Ⅻ）

联系人：宋宏锐（１９５６．），男，辽宁恒仁人，教授，博士生导师，主要从事药物化学与有机化学的研究。（ＢⅧａｉｌ：ｈ仰ｇｎＩｉ啪ｇ＠１６３肋ｍ）

收稿日期：２∞８—ｏｌ—２ｌ

第１期

杨芬。等：高效液相色谱法测定牛组织中雷复尼特的残留量

７ｌ

２．４样品处理

称取牛组织样品（肌肉、肝、肾）各１０９，加入

乙腈２０ｍＬ，在１００００ｒ／ｍｉｎ下均质１ＩＩｌｉｎ制备匀浆。匀浆在４０００ｒ／越ｎ下离心５ｍｉｎ，沉淀物再加入１０

ｍＬ乙腈提取一次，合并提取液。通过乙腈预淋的层析柱（层析柱为１００×ｌＯｍｍ具塞玻璃柱，由下至上依次为：少许玻璃棉＋３ｃｍ中性氧化铝柱）。再用５ｍＬ乙腈淋洗柱子，滤液收集于磨口烧瓶中。加入正

丙醇５ｍＬ，于４０℃水浴上旋转蒸发至于．以流动相

ｌ

ｍＬ溶解。备用。３结果与讨论

３．１色谱条件的选择

参照相关文献，采用乙腈＿ｐＨ２．５的水（８３：１７，

ｔ，：秽）为流动相，流速为１．５ｍＩ．／ｍｉｎｃ５＇６】，在实验条件

下。雷复尼特可与组织中内源性物质较好的分离且保留时间适当，雷复尼特保留时间为１２．８０ｍｉｎ（如图

ｌ，２）。对流出的峰进行紫外扫描。发现雷复尼特的

紫外最大吸收峰在２８２姗处．为此应用二极管阵列检测器，选择２８２姗处检测雷复尼特，提高了检测

灵敏度。

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３．２净化条件的选择

在样品净化处理条件的选择中．分别采用了液液萃取法、Ｃ螗柱法、氟罗里硅土柱法及中性氧化铝柱法，结果发现，经中性氧化铝柱净化处理后的样品回收率高且杂质少，因此采用中性氧化铝柱法。

３．３方法的线性相关性

将储备溶液用流动相稀释成浓度分别为Ｏ．０５、０．２、０．５、１．０、２．０、４．ｏ灿ｇ／ｈＩＬ的标准溶液，进样体积２０斗Ｌ，以峰面积为纵坐标，样品浓度为横坐标，计算回归方程，得Ｙ＝１０．８ｌｌＸ＋０．１０２

ｌ。ｒ＝０．９９９９，

可见，在０．０５￣４．Ｏ斗咖Ｌ范围内，线性关系良好。

３．４方法的提取回收率

向牛空白组织（肌肉、肝、肾）中添加雷复尼特标样溶液，配制成组织浓度分别为０．０ｌ、０．１、０．４

斗ｇ／ｇ３个浓度的样品，按“样品处理”项下处理后进

样。与直接将对应浓度的标准品进样所得的峰面积相比，计算样品的提取回收率。每一浓度进行７样本分析．结果３个浓度下肌肉组织中样品的提取回收率分

别平均为７８．３％，８５．８％和９５．１％；肝组织中样品的

提取回收率分别平均为７３．３％，８３．９％和９１．９％；肾组织中样品的提取回收率分别平均为７４．３％。８１．９％

和９２．８％。

３．５方法的准确度及精密度

向牛空白组织（肌肉、肝、肾）中添加雷复尼特

标样溶液，配制成组织浓度分别为０．０ｌ、０．１、０．４ｐｇ／ｇ

的３个浓度的样品．按“样品处理”项下处理。连续

测定３ｄ。根据标准曲线，计算样品的测得浓度，与配

制浓度对照。求得组织样品测定方法的准确度与精密度，结果见表ｌ。试验数据表明，生物样本的分析方法符合有关规范要求。

裹１■复尼特测定方法准确度与精密度

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４结论

关于雷复尼特在组织中残留量的测定。国内文献

报道较少，笔者采用乙腈一ｐＨ２．５的水（８３：１７，移：ｔ，）

为流动相．使雷复尼特与组织中内源性杂质得到很好的分离，保留时间合适。峰形较佳。样品净化处理采用中性氧化铝柱法．样品回收率高且杂质少。该方法快速、简便、准确、灵敏．可用于牛组织中雷复尼特

７２

精细化工中间体第３８卷

残留量的测定。参考文献：

何宏轩，张西臣，程远国，等．碘醚柳胺的研究现状［Ｊ】．中国兽医杂志，１９９９，２５（６）：５３一“．［２】

孙涛，李西汉．高效液相色谱法测定碘醚柳胺的含量［Ｊ］．中国兽药杂志．１∞８，３２（３）：２．［３】

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ＣｌｌｌＩ姗曲嚼ｃａｐｈｙＡ，１９９９，８４６：３８３—３８６．

（上接第４９页）

由上图可知．催化剂用量对双酚芴的收率也有较大影响，收率随着催化剂用量的增加而增加，当催化

剂用量为１８ｇ时，双酚芴收率较高，之后再增加催

２）后处理采用洗涤除酸，真空脱酚，后采用复

合溶剂溶解，重结晶，真空干燥的方法，用于双酚芴的精制，效果较好。

参考文献：

Ｈ

１Ｊ

化剂，收率反而下降，因此，催化剂用量过大不利于反应进行，催化剂巯基丙磺酸的优惠用量为１８

３．５稳定性实验

ｇ。

高庆平，王军，李占双．双酚芴的合成及应用进展研究．化工科技［Ｊ】．２００５，１４（１）：５８—６１．

在前面确定的优惠合成工艺条件下。对其进行重复性实验。结果显示：固定芴酮的量为０．５ｍｏｌ时，，ｌ（苯酚）：ｎ（芴酮）＝５：ｌ、巯基丙磺酸用量为１８ｇ、反应

温度为８０℃，反应时间５ｈ，该工艺有较好的稳定性，

口

刘传玉，苏东妹．芴酮在合成功能高分子方面的应用［Ｊ］．化学与黏合，２００３，４０（３）：１３４＿１３６．

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平均收率为９３．４％。

４结论

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１）通过实验，得到巯基丙磺酸催化合成双酚芴的优惠工艺条件：固定芴酮的量为Ｏ．５—ｎｏｌ时，ｎ（苯酚）：ｎ（芴酮）＝５：ｌ，催化剂巯基丙磺酸用量１８ｇ，在

８０℃反应５ｈ，双酚芴的收率为９３．４％，纯度为９９．３％以上。

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１ｊ

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/kpsm.html