PAS染色法

PAS染色法-概况、原理

PAS染色法概况

PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。

PAS染色法原理

PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。 原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。

PAS染色法-应用、制作

PAS染色法-应用

随着医学实验技术的发展 ，近年来 ，糖原染色应用的范围更加广泛，如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ，心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ，糖原累积病诊断和研究 ，糖尿病的诊断和研究 ，用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外 ，还可以观察肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供 了重要的依据。

PAS染色法-制作

1. 固定液:用Carnoy液或75%酒精 Carnoy固定液: 纯酒精60 ml 冰醋酸10ml氯仿 30ml

2. 染色液

1) 过碘酸酒清夜配法: 过碘酸(HIO .2H O) 0.4g 95%酒精 35ml M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml) 5ml蒸馏水10ml。保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.

2)Schiff氏液: 0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤,加入10毫升1N盐酸.冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存.

3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml 1N HCI 0.5ml 纯酒精 23ml

4) 亚硫酸水 1%偏重亚硫酸钠10ml 1N HCI 10ml 蒸馏水 180ml的树胶溶解。

PAS染色法-实验效果

准备

1、10g/L过碘酸液

2、Schiff染液： 碱性品红 0.5g ，DH2O 100ml煮沸后，待片刻，加入碱性品红，振荡数分钟使品红溶解，冷至50℃加入1M的盐酸20ml，混匀。待冷却至25℃加入偏重亚硫酸钠0.5g，混合，置于带塞的棕色瓶中，放于暗处24小时，染液为无色，如为微红则加

活性炭1－2g，混合过滤，如过滤液仍有红色，应再加少许活性炭，时红色完全被吸收为止。制成后置于棕色 瓶内保存在冰箱备用，如变为红色，则不能使用。 4、苏木素液： 苏木素 0.9g ，95%乙醇 10ml 铵（钾）明矾 20g DH2O 200ml 将苏木素溶于95%的乙醇，钾明矾溶于水（可加热），然后将苏木素液加入明矾液中混合，用强火煮沸后加氧化汞0.5g，迅速搅拌，成深紫色，迅速移入冷水中，次日过滤，临用时取此液95ml加冰醋酸5ml，可使细胞着色清楚。

方法：

1、将新鲜血片或骨髓片用95%乙醇固定10分钟。 2、10g/L过碘酸液作用20分钟 3、DH2O洗涤几次，晾干 4、Schiff染液，60分钟 5、用自来水洗涤15分钟（细水长流冲洗） 6、苏木素染液10分钟。 7、自来水冲洗15分钟，待干。

结果：

阳性反应，胞浆呈红色，阴性反应，胞浆呈无色； 在正常血片中RBC不染色； PLT染成深红色； 中性粒细胞胞浆染成红色或深红色，有些细胞有阳性颗粒； 单核细胞的胞浆染成淡红色，可含有细小或粗大阳性颗粒； 少数淋巴细胞的胞浆内含有少许小的淡红色或红色颗粒； 正常骨髓的幼稚细胞和有核RBC都不染色； 巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。 巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。

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