食用菌论文实验设计方案

竹笋壳提取物对平菇菌丝生长的影响

一、 实验目的

采用平板培养法，探究竹笋提取物对平菇菌丝生长的影响。

二、 实验流程

制作培养基：制作PDA培养基，趁热将培养基分装到两只试管上为试管培养基，剩

余培养基装入500ml三角瓶备用；高压灭菌：培养基及实验用到所有工具置于灭菌高压锅灭菌25min，灭菌后将试管培养基斜放培养24h；菌种活化：将保存的菌种接入到试管培养基斜面上置于25℃恒温箱中培养，使菌种活化;制备平板菌种：将已灭菌的培养基制成平板培养基，待冷却后，取已活化的菌种一小块接入到平板培养基中部，置于恒温箱中培养十天左右，待平面布满菌丝，获得平板菌种；制备供试培养基：根据配方，制备五组不同成分的供试培养基，待冷却后，用无菌打孔器在平板菌种上取相同菌种接到供试培养基中部，置于25℃恒温箱中培养。每三天观察一次，将菌丝生长情况记录到观察表上，得出实验结论。

注：所有接种工作都要在无菌环境（超净工作台）下操作，所有菌种都要在无光照环境下培养。

三、 实验内容与方法

(一) 制备PDA培养基

1. PDA培养基材料

马铃薯100g、葡萄糖10g、琼脂粉8g、水500ml；

2. 实验仪器及用具

试管、三角瓶、烧杯、量杯、漏斗、纱布、棉塞、电炉、天平、高压蒸汽灭菌锅、漏斗架等。

3. 制备营养液 先将马铃薯洗净去皮，称取100g, 然后将马铃薯切成玉米粒大小的颗粒。用量杯量取500ml水于锅内煮马铃薯，待水沸后计时20min～30min，再用双层纱布过滤，取其滤液定容至500ml于烧杯中，加入葡萄糖和琼脂，加热融化。

4. 分装 制备好的培养基，热分装到2支试管中。将培养基加入漏斗中，左右手握住试管，右手持漏斗下面的的玻璃管入试管口内，然后放开止水夹，让培养基流入试管内，约10～20ml，注意避免将培养基沾到试管口内外，塞好棉塞，贴上标签。剩余培养基准入三角瓶，准备灭菌。

（二）培养基及用具的灭菌

1. 首先将高压灭菌锅的内层锅取出，加入适量的水，是水面与三角搁架相平为宜，放回内层锅。

2. 把本实验所有用具如培养皿、接种铲、镊子、打孔器用报纸包成2层（包

完一层后再包一层），一同和培养基放入锅内。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽的流通影响灭菌效果。

3. 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，对称扭紧螺栓。打开加热开关，调节温度、时间，为121℃、25min。打开排气阀，待锅内冷空气排完再关上排气阀。

4. 时间到高压锅会发出警鸣声，关闭电源，待压力表降至零时，打开排气阀，打开盖子取出物品。趁热将试管培养基斜放，培养基以试管长度的2／3为宜。自然冷却置于恒温箱24h后，无污染便可接种。

（三）菌种活化（母种转管）

1. 材料与仪器用具

保存的母种，试管培养基，酒精棉球，75%酒精，超净工作台，接种铲，酒精灯，打火机，记号笔等。

2. 转管方法 （共接种2支试管） 清洗超净工作台里外，把需要的材料与工具放入超净工作台并用酒精灭菌。双手也酒精擦拭后，点燃酒精灯，灼烧接种工具。用左手托住两只试管，用右手小拇指和无名指夹住棉塞取下，置试管口与酒精灯焰附近，试管口过火焰灭菌。接种铲在火焰上灼烧片刻，再横过火焰2～3次，然后再放入母种内，在管壁上停留片刻待其冷却。切成绿豆粒大小的菌种，取出接入试管培养基上，试管口和棉塞再次火焰灭菌，塞好棉塞，写上菌种名称及日期。烧死接种工具上的残余菌。 3. 菌丝培养

将接种好的试管置于25℃恒温培养箱中无光照培养10d左右，当菌丝布满斜面，无污染即可用于接种平板培养基。

（四）制备平板菌种

1. 材料与仪器用具

试管菌种，已高压灭菌的培养基、培养皿，酒精棉球，75%酒精，超净工作台，接种铲，酒精灯，打火机，记号笔等。 2. 接种方法 （1）制备平板培养基 用酒精清洗工作台里外，把需要的材料与工具放入超净工作台并用酒精灭菌。双手也酒精擦拭后，点燃酒精灯，火焰灼烧接种铲、镊子，培养皿边缘接口处过火焰数次。置于与酒精灯焰附近，右手持三角瓶培养基，右手食指和中指夹住棉塞，瓶口过火焰灭菌。左手托住培养皿，食指和大拇指轻轻打开培养皿盖，三角瓶瓶口不要接触到培养皿，慢慢倒入培养基，约15ml。注意收尾时，培养基不要滴到培养皿边缘，以防污染。迅速盖上培养皿，培养皿边缘接口处再次过火焰数次，放置在超净工作台上，待其自然冷却，共倒三个平板培养基。倒完后，瓶口和棉塞再次火焰灭菌，塞好棉塞。 （2）获取平板菌种 平板培养基冷却后，便可接种。先左手拿试管，右手小拇指和无名指夹住棉塞取下，置试管口于酒精灯焰附近，试管口过火焰灭菌。接种铲在火焰上灼烧片刻，再横过火焰2～3次。放入试管内，在管壁上停留片刻待其冷却，切出绿豆粒大小的菌种，迅速拿出接种铲，试管口和棉塞再次过火焰灭菌，塞好棉塞后放下试管。然后左手拿起平板培养基，食指和拇指打开培养皿盖，将菌种快速接到培养基中央并盖好，培养皿边缘接口处再次过火

焰数次。写上菌种名称及日期，灼烧接种铲，杀死残余菌。 3. 菌丝培养

将接种好的平板培养基置于25℃恒温培养箱中无光照培养10d左右，当菌丝布满平面，无污染即可用于接种供试平板培养基。

（五）制备供试平板菌种

1. 制备供试培养基 （1）供试培养基材料

马铃薯、葡萄糖、琼脂粉、水、干竹笋壳；

（2）实验仪器及用具

三角瓶、烧杯、量杯、纱布、棉塞、电炉、天平、平板培养皿、高压蒸汽灭菌锅等。

（3）供试培养基配方

供试配方为五种：其中配方A为CK，详见表一： A B C D E

马铃薯 100g 竹笋壳 0 葡萄糖 10g 琼脂 水

8g 500ml

100g 10g 10g 8g 500ml

100g 20g 10g 8g 500ml

100g 30g 10g 8g 500ml

100g 40g 10g 8g 500ml

表一

按表一配方，共五组供试培养基，以配方B组为例：马铃薯去皮去芽切碎称取100g，竹笋壳剪碎称取10g用水浸湿，沥水备用。用量杯量取500ml水置于锅内煮马铃薯与竹笋壳，待水沸后煮25min，再用双层纱布进行过滤，取其滤液定容至500ml于烧杯中，趁热加入10g葡萄糖和8g琼脂，待其完全溶解，再分装到三角瓶中，注意避免将培养基沾到瓶口内外，盖上棉塞，用牛皮纸绑住瓶口并写上标签，准备灭菌。 2. 培养基及用具的灭菌

将本实验用到得接种工具（镊子及打孔器）用报纸包装2层（先包装一层

在包装第二层）后和培养皿（培养皿的反面用记号笔以培养皿的直径画上“十”字，交叉点为菌种的接入点）、培养基一同放入高压蒸汽锅灭菌25min。灭菌后将培养基置于25℃恒温培养箱培养24h，无污染即可用于接种。 3. 制备供试培养基及接种 （1）材料与仪器用具

培养好的平板菌种，已灭菌的镊子、打孔器、培养皿、供试培养基，酒精灯，超净工作台、75%酒精及棉球，记号笔，电炉等 （2）制备供试培养基

先将培养基加热溶解备用。用酒精清洗工作台里外，把所有需要的材料与工具放入超净工作台并用酒精灭菌。双手也酒精擦拭后，点燃酒精灯，培养皿边缘接口处过火焰数次。置于与酒精灯焰附近，右手持三角瓶培养基，取下棉塞，右手中指和食指夹下棉塞，瓶口过火焰灭菌。左手托住培养皿，用食指和大拇指轻轻打开培养皿盖，三角瓶瓶口不要接触到培养皿，慢慢倒入培养基，约15ml。注意收尾时，培养基不要滴到培养皿边缘，以防污染。迅速盖上培养皿，瓶口和棉塞再次火焰灭菌，塞好棉塞。培养皿边缘接口处再次过火焰数次，放置在超净工作台上，做好标记。共五组，每组共倒5个平板培养基，待其自然冷却后，便可接种。

（3）接种方法

将之前培养好的平板菌种表面消毒后放入超净工作台，灼烧镊子及打孔

器，待打孔器冷却后，在平板菌种上打孔，共打25个。再用镊子小心将打好的菌种连同培养基迅速夹入供试培养基的正中央（划线交叉点上）。注意做好标记，待接种完毕再用记号笔写上标签。

4. 菌丝培养及结果观察

（1）接种好的平板培养基置于25℃恒温培养箱中无光照培养。 （2）菌丝布满平面供试培养基中的任何一个培养基时，便观察各个培养基菌

丝生长情况，并将观察结果记录到观察表（表二）。

表二 （3） 观察指标

菌丝体色泽 用“+”表示菌丝体洁白程度：灰白+、白++、洁白+++; 菌丝体密度 用“+”表示菌丝体生长密度：悉疏+、较密++、浓密+++; 菌落边缘整齐度 用“+”表示菌丝体菌落边缘整齐度的程度：不规则+、

较整齐++、整齐+++；

菌落圆整 圆整、较圆整、不生长; （六）得出实验结果

根据观察表，得出实验结论。

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