生物制药考试重点

生物技术制药期末考

1、 生物技术：P1 课本上的：是以生命科学为基础，利用生物体（或生物组织、细胞及其组分）的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系，并与工程相结合，利用这样的新物种（或品系）进行加工生产，为社会提供商品和服务的一个综合性技术体系。它所含的主要技术范畴有：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程及生化工程。基因工程是生物技术的核心。

(PPT上的：生物技术是应用自然科学及工程学的原理，依靠生物作用剂（biological agents)的作用将物料进行加工以提供产品或社会服务的技术。） 2、生物技术制药：P5 一般来说，采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物，称为生物技术药物。（百度上的：采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需要的医药品） 3、生物技术药物：一般来说，采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物，称为生物技术药物。（生物技术药物是重组产品概念在医药领域的扩大应用，并与天然生化药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为生物药物.）

4、生物技术制药的特征：1、高技术 2、高投入 3、长周期 4、高风险 5、高收益

5、生物制品： 生物制品是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防治疗和诊断。（人用生物制品包括：细菌类疫苗（含类毒素），病毒类疫苗、抗毒素及抗血清、血液制品、细胞因子、生长因子、酶、诊断制品，及其他生物活性制剂，如毒素、抗原、单克隆抗体、抗原抗体复合物，免疫调节剂及微生态制剂等。）

6、药品：指用于预防、治疗、诊断人的疾病，有目的地调节人的生理机能并规定有适应症或者功能主治、用法和用量的物质（包括中药材、中药饮片、中成药、化学原料药及其制剂、抗生素、生化药品、放射性药品、血清、疫苗、血液制品和诊断药品等。）

7、药品制造（新型药物研制）：新药的概念： 新药系指我国未生产过的药品。已生产的药品，凡增加新的适应症、改变给药途径和改变剂型的亦属新药范围。新型生物药物是指利用生物体或生物过程产生的结构新颖的药物。结构新颖，是

指与以前药物有着不同的化学结构,是一种新的化学实体 (New chemical entity,简称NCE)，这类新型生物药物国家认定为一类新药.。新型生物药物的来源：一类新药来源可分为两类:一类是利用重组DNA技术获得。另一类是利用微生物,动植物或酶生产的药品,通过筛选可获得。这类药物种类繁多,包括传统的利用发酵工程生产的药物和直接从动植物中提取的天然药品等. 8、简述生物技术药物的特性

1、分子结构复杂2、具有种属特异性3、治疗针对性强、疗效高4、稳定性差 5、基因稳定性不易保持6、具有免疫原性7、体内半衰期短8、受体效应 9、多效性和网络效应10、检验的特殊性

9、细胞工程制药：P10细胞工程是在细胞水平上的生物工程。细胞工程是在对细胞结构的深入认识和细胞遗传学的发展基础上建立起来的。主要包括：单克隆抗体技术 动物细胞培养技术 植物细胞培养生产次生代谢产物

10、酶工程制药：P10 是一项利用酶、含酶细胞器或细胞作为生物催化剂来完成重要化学反应，并将相应底物转化成为有用物质的应用型生物高新技术。 11、新药研究和开发的主要过程及内容

（1）确定研究计划 .要综合考虑医疗、市场、化学的评估结果，文献状况、专利的检索，结构的选择、合成的前景等因素。

（2）准备化合物.研究文献，合成或分离化合物、结构鉴定、标准化、专利申请、对研究目标的复核等。 （3）药理筛选

药理学：研究药物的治疗作用，合理用药，减少毒副反应，注意药物相互作用，提高疗效的科学称学药理学。

药效学：研究药物对机体的有益的治疗效应。 毒理学：研究药物对机体的有害的不良效应。 （4）化学试验.活性成分分析.

（5）临床前I期(Preclinical I ).进一步药理研究包括毒性(2种动物)及活性成分的稳定性研究。

（6）临床前II期(Preclinical II).在前研究基础上，进一步药理研究包括急性、亚急性、慢性毒性研究(2种动物), 畸胎学研究,药物动力学(动物体内的吸收和排泄),剂型的研究与开发，包装与保存期的研究。

（7）I 期临床试验 ：I期为新药在人体内初试，内容为药物耐受性试验与药代动力学研究。其目的是在健康志愿者中研究人体对药物的耐受程度并通过药代动力学研究，了解药物在人体内的吸收、分布、消除的规律，为新药Ⅱ期临床试验提供安全有效的合理试验方案。

（8） Ⅱ期临床试验：进一步的动物药理试验，包括计划并开始慢性毒性实验，致癌性和对生殖与后代的影响，药物动力学研究（不同种动物），确定试验药品是否安全有效；通过试验确定适应症；找出最佳的治疗方案；对本品有何不良反应及危险性作出评价并提供防治方法。

（9）III期临床(Clinical III 期) . 为新药上市后的临床试验，即在新药上市后，临床广泛使用的最初一段时间内，对新药的药效、适应症、不良反应、合理治疗方案等作进一步扩大临床试验，以期对新药的临床应用价值作出进一步的评价，并根据进一步了解的疗效、适应症与不良反应情况，指导临床合理用药。 （10）大约3-5年后，注册申请上市 12、GMP的内容和特点有哪些?

GMP的总体内容包括机构与人员、厂房和设施、设备、卫生管理、文件管理、物料控制、生产控制、质量控制、贮存和销售管理等方面内容 从专业化管理角度，GMP可以分为质量控制和质量保证系统 从硬件和软件系统的角度，GMP可分为硬件和软件系统

GMP的特点：（1）原则性（2）时效性（3）基础性（4）多样性（5）层次性 13、我国药品生产企业实施GMP的重点是什么?

1）要全面、正确地理解和认识GMP；2）建立合适的厂房设施，引进先进而实用的工艺 设备；3）逐步完善软件管理；4）实施价值工程是实施GMP的关键

（制药企业实施GMP的三要素：（1）良好的厂房设备、完善的设施是基础条件 （2）具有实用性、可行性的软件是产品质量的保证（3）具有高素质的人员是关键）

14、原核生物 ：原核生物即广义的细菌，指一大类细胞核无核膜包裹，只存在称作核区（nuclear region）的裸露DNA的原始单个细胞生物，包括真细菌（eubacteria）和古生菌（archaea）两大类群。原核细胞有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌P21

15、真核生物：凡是细胞核具有核膜、能进行有丝分裂、细胞质中存在线粒体或同时存在叶绿体等细胞器的微小生物，都称为真核生物。真核细胞有酵母、丝状真菌、动物细胞和昆虫细胞、利用动植物体生产重组蛋白。

16、基因 :基因（遗传因子）是遗传变异的主要物质。基因支持着生命的基本构造和性能。储存着生命的种族、血型、孕育、生长、凋亡过程的全部信息。 基因是具有遗传效应的DNA片段

17、克隆 P284指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。通常是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因的个体或种群。

18、质粒 : 质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。大部分的质粒虽然都是环状构形，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的线粒体等胞器中。

19、载体： (定义：指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。）

主要有质粒载体和噬菌体载体。几乎所有cDNA的克隆都采用质粒载体进行。目前广泛采用的质粒载体多数都是由pBR322质粒发展而来。

pBR322质粒载体的优点：1具有较小的分子量(﹤5kb)。2具有两种抗生素抗性基因，可用作转化子的选择记号，对24种限制性内切酶有单一的识别位点。3具有较高的拷贝数（一般为15个拷贝，加氯霉素后，细胞中可累积1000-3000个质粒拷贝）。

噬菌体载体是在λ噬菌体的基础上构建的克隆载体。

20、cDNA文库：在细菌中增殖来自某一生物染色体基因组DNA或来自某一组织所有不同的m-RNA的每一种cDNA分子，所形成的全部DNA片段克隆的集合体。（以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中，在特定发育阶段

表达的蛋白质的编码基因，因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。）

21、PCR：是指由一对引物介导的基因或克隆的特定DNA序列的酶促扩增的反应过程，即在一对人工合成的特异性引物介导下，以目的DNA为模板，使用耐热DNA聚合酶，经变性、退火及延伸三个步骤的多次循环，扩增特定DNA片段的过程（其本质是DNA复制）

（或PCR即多聚酶链式反应。是DNA的一种体外扩增技术。用于放大扩增特定的DNA片段。具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。） 22、叙述反转录法（酶促合成法）制取目的基因的主要过程。

进一步的验证和鉴定

23、在大肠杆菌表达目的基因，对载体有哪些要求？P22

表达载体必须具备下列条件：（1）有位于启动子序列后的灵活的克隆位点和方便的筛选标记，克隆位点位于启动子序列后；（2）有很强的启动子能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别，如lac,trp或tac启动子及Ｔ7,SP6噬菌体启动子等；（3）有阻遏子，使启动子受控，可以人为选择启动子起始转录m-RNA的时机；（4）有很强的终止子，产生m-RNA较稳定；（5）具有翻译的起始信号，即起始密码AUG和SD序列（6）能独立地复制；

24、有哪些因素影响目的基因在大肠杆菌中的表达？

1）外源基因的数量：高拷贝的表达质粒会导致外源基因拷贝数的增加，对提高外源基因的总体表达水平非常有利。2）外源基因的表达效率：启动子的强弱 ，必须把真核基因编码区置于大肠杆菌RNA聚合酶能识别的强启动子控制下；核糖体结合位点的有效性 ，消除在结合位点及其附近的潜在二级结构；SD序列和ATG之间的距离是表达非融合蛋白的关键；密码子的组成，应选择使用大肠杆菌偏爱的密码子。3）表达产物的稳定性：组建融合基因产生融合蛋白；利用大肠杆菌的信号肽或某些真核多肽中自身的信号肽，把真核基因产物搬动到胞浆周质的空隙中。不易被细菌酶类所降解；采用位点特异性突变的方法，改变真核蛋白质中二硫键的位置，从而增加蛋白质的稳定性；选用蛋白酶缺陷型菌株，减少表达产物的降解；4）细胞的代谢负荷；5）工程菌的培养条件 25、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析的工作原理和基本操作？

1） 离子交换层析的基本原理P51(课本为准）：（PPT上的：以离子交换剂为固定

相，依据流动相中组分离子与交换剂上平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。）（课本上的：当溶液中存在着A、B两种或两种以上的离子，并通过离子交换层析柱时，原来吸附在离子交换介质上的离子与溶液中高浓度的A、B离子发生交换作用，脱离离子交换介质，游离在流动相中，并随流动相流出来。由于A、B两种离子在同一溶液中的解离度不同，它们所带的净电荷有差异，因此两者在层析柱内的迁移速度不同。从上样起始点至A、B两离子的层析峰间的距离在加大，最终完全分离。基本操作：（1）离子交换剂的选择：阴阳离子交换剂的选择、 强弱离子交换剂的选择、 不同离子型交换剂的选择、 不同基质离子交换剂的选择(2)离子交换剂的预处理、再生和保存(3)层析柱(4)平衡缓冲液的选择(5)上样(6)洗脱(7)样品的浓缩与脱盐）

亲和层析的基本原理P56

利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除。 亲和层析的基本操作P58

（1）上样，选择适当的条件，包括上样流速、缓冲液种类、pH、离子强度及温度等，以使待分离物质能够充分结合在亲和吸附剂上。

（2）洗脱，选用某种能削弱专一性吸附作用的条件（包括：pH值、温度、离子强度、替代物。适量的氢键破坏剂如脲、盐酸胍等），将目的物洗脱下来。洗脱方法可分为：特异性洗脱和非特异性洗脱。特异性洗脱（亲和洗脱），利用洗脱液中的物质与待分离物质或与配体的特异亲和性而将待分离物质从亲和吸附剂上洗脱下来。非特异性洗脱，通过改变洗脱液pH值、温度、离子强度等条件，降低待分离物质与配体的亲和力而将待分离物质洗脱下来。

（3）亲和吸附剂的再生和保存， 一般可用大量洗脱液或较高浓度的盐溶液洗涤，再用平衡液重新平衡。 凝胶过滤层析的基本原理P59

以多孔的凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相层析方法。

凝胶层析的基本操作

（1）凝胶的选择（2）凝胶的处理和保存（3）层析柱的选择 （4）加样（5）洗脱速度

26、对由基因重组技术所获得的蛋白质药物产品进行鉴定时常做哪些项目分析？

物理性状、鉴别试验、水分测定、无菌试验、热原试验、干扰素效价测定、安全试验。

27、细胞株: 原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长就会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40--50代，这种传代细胞叫做细胞株。

（通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的稳定的具有特殊性质或标志的培养物。细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。） 28、细胞库 P91 29、批

30、有效期：标识于原料药的包装或标签上，表明在规定的储存条件下，在该日期内，原料药的标准应符合规定的要求，并且超过这个日期就不能再使用” 31、失效期：原料药包装容器/标签上注明的日期，表示原料药在规定条件下贮存时预计可保存的时间，超过这一期限原料药不应当被使用。 32、生产用动物细胞有哪些种类？它们各具有什么特点？P86

（1）生产用的动物细胞的种类：原代细胞系、二倍体细胞系、转化细胞系、融合细胞系、重组工程细胞系 （2）它们各自的特点： （A）二倍体细胞系的特点： ①染色体组型仍然是2n的核型 ②具有明显的贴壁依赖和接触抑制的特性 ③只有有限的增值能力，一般可连续传代培养50代 ④物致瘤性 （B）转化细胞系的特点： ①具有无限生命力 ②倍增时间较短 ③对培养条件和生长因子等要求较低 （C）融合细胞系的特点： ①可使不同的动物和动物细胞

融合 ②可是动物和植物细胞融合 33、类淋巴细胞干扰素制造

生产过程：异倍体细胞 →活化→逐级培养→丁酸钠起动→病毒诱生→→收集培养液→离心分离→纯化→沉析→超滤浓缩→凝胶过滤→亲和层析→抗体纯化→原液→成品。

34、组织纤溶酶原激活剂（t-PA)制造

工

艺

流

程

：

35、促红细胞生成素（EPO）制造P129

36、乙肝疫苗的制备：基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原（HbsAg）亚单位疫苗，它系采用现代生物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进行质粒构建，克隆进入啤酒酵母菌或CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）中，通过培养这种重组酵母菌或CHO细胞来表达乙肝表面抗原亚单位。发酵后经过细胞破碎和一系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等工序，再经过疏水层析，可使产品抗原蛋白纯度达99%以上。

37、免疫：机体的一种生理功能，机体依靠这一功能识别“自已”和“非已”成分，从而破坏与排斥进入机体的抗原物质或机体产生的异构物质 。

38、抗原 ：凡能激发机体产生体液免疫或（和）细胞免疫，并能与免疫应答的产物（抗体和致敏淋巴细胞）相结合的物质。对人有重要性的抗原包括微生物、

寄生虫、异物血清、异型红细胞、异体组织等。

39、抗原性：指抗原分子能与相应免疫应答的产物 ( 抗体或致敏淋巴细胞 ) ，在体内或体外发生特异性结合的性能。 又称为免疫原性。

40、免疫原性：指某一制品接种人体后诱导产生免疫应答的能力。

41、抗体：指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。它是机体免疫系统受抗原物质刺激后，B淋巴细胞被活化、增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。

42、单克隆抗体 ：将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系，此细胞系能产生结构和特异性完全相同的高纯度抗体。由于这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又是由单一的 B 淋巴细胞克隆产生的，所以称为单克隆抗体。 43、简述单克隆抗体及其制备技术P145 制备技术：动物体内诱生法，体外培养法 44、简述HAT选择系统的原理。P146-147

HAT培养基：含一定浓度次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的一种选择性培养基。

原理：一个亲本细胞株为次黄嘌呤—鸟嘌呤—磷酸核糖转移酶缺陷型（HGPRT－），另一个亲本细胞株为胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK－），在含有次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）、胸腺嘧啶核苷（T）的HAT选择培养液中，上述亲本细胞都无法生存，只有融合以后的杂种细胞才能生长，因此可有效地选择出杂种细胞。

45、基因工程抗体研究的主要目的有哪些？什么是Fab抗体和scFv抗体？P153-P154

目的：（1）降低单克隆抗体的鼠源性（2）降低抗体分子相对分子量，增加组织透过性

（3）双（多）价及双特异性抗体的构建（4）抗体融合蛋白的构建

Fab抗体；由重链Fd段和完整的轻链组成，两者通过一个链间二硫键连接，形

成异二聚体，是完整抗体分子的三分之一，仅有一个抗原结合位点。

scFv抗体：scFv是由一条连接肽将VH和VL连在一起所形成的两个可变区首尾相接的单一肽链，通过正确折叠，两个可变区由非共价键形成具有抗原结合功能的Fv段，此单一肽链的结构既有利于在大肠杆菌的表达和进行基因重组操作，也增加了Fv的稳定性。是目前报道最多的基因工程抗体。 46、免疫酶抗体诊断试剂工作原理

酶标抗体与抗原发生特异结合，当加入酶的底物时，底物在酶的催化作用下，发生组化反应，产生有色物质。在光学显微镜下就可以观察。常用的酶是辣根过氧化物酶（HRP），底物为二氨基联苯胺（DAB） 47、抗体导向酶-前药疗法的工作原理

前药是一类本身无活性或活性很低，但在体内可转化为活性物质的药物。 单抗与前药专一性活化酶交联并将其选择性地结合于肿瘤部位，使前药可以区域特异性地在肿瘤组织内转化为活性细胞毒分子，有效解决了药物在肿瘤组织内浓度过低和对正常组织损伤问题。

48、植物细胞工程制药：以植物细胞为基本单位，应用细胞生物学、分子生物学等理论和技术，在离体条件下进行培养、繁殖或人为的精细操作，使细胞的某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而改良品种、制造新品种、加速繁育植物个体或获得有用物质的一门科学或技术称为植物细胞工程。 49、外植体P178

50、微生物和植物的原生质体P180-181

植物的原生质体:指将植物细胞壁去掉后得到的裸露的球形细胞。 51、继代培养:P178

52、各种植物细胞培养的生物反应器的特点是什么？P201

（1）机械搅拌式生物反应器：有较大的操作范围，混合程度高，适应性广，剪切 力大，容易损伤细胞。（2）鼓泡式生物反应器：优于机械搅拌式反应器。但由于鼓泡式反应器对氧的利 用率较低，如果用较大通气量，则产生的剪切力会损伤细胞。 （3）气升式生物反应器：广泛应用于植物细胞培养的研究和生产，最高细胞浓度 和最短倍增时间可从气升罐中得到。（4）转鼓式生物反应器：生长速率高，其氧的传递及剪切力对细胞的伤害水平方 面均优于气升式反应器。（5）固定化细胞反应器：可保护细胞免受剪切，可长时间重复使用，易于实现 细 胞的高密度培养，细胞接触良好，易于分化，有利于次级代谢产物的合成，减少细胞的遗传不稳定 性，易于实现连续化操作。 53、模拟酶 P235

54、抗体酶：P252又称催化性抗体,是一类具有生物催化功能的抗体分子。抗体酶是集抗体多样性和酶分子高速催化效能两特点为一体，设计出的蛋白质新产品，也是生物学和化学相互渗透、密切合成的产物。

55、固定化酶：限制或固定于特定空间位置的酶，即经物理化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。 56、酶的化学修饰：P242通过主链的切割、剪接和侧链基团的化学修饰对酶蛋白进行分子改造，以改变其理化性质及生物活性。称为酶分子化学修饰。 57、有机相中生物催化反应的特点

（1）可进行水解反应的逆反应，如酯、肽合成，转酯反应（2）热稳定性比水中高

（3）在非水系统内酶不溶于有机相，容易回收和反复使用（4）改变底物的专

一性

（5）能提高非极性底物的溶解度（6）有利于产物的分离纯化（7）抑制依赖于水的某些不利反应和副产物产生（8）没有微生物污染（9）固定化酶在非水系统中不易脱落

58、举例说明酶在疾病诊断及疾病治疗方面的应用P218 疾病诊断中的应用：（1）根据体液内酶的活力的变化诊断疾病

（2）用酶测定体液中某些物质量的变化诊断疾病 如利用葡萄糖氧化酶检测葡萄糖含量，诊断糖尿病 利用葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶联合作用，检测血液或尿液中葡萄糖的含量，诊断糖尿病 利用尿素酶测定血液中尿素的含量，诊断肝、肾病变 利用胆固醇氧化酶测定血液中胆固醇含量，诊断高血酯症等 利用谷氨酰胺酶测定脑髓液中谷氨酰胺含量，诊断肝硬化、肝昏迷 利用DNA聚合酶进行基因诊断、检测癌基因 利用酶标免疫测定技术测定抗原或抗体。 疾病治疗方面的应用

59、发酵工程：P259发酵工程又称微生物工程，是利用微生物制造工业原料与工业产品并提供服务的技术。

60、微生物优良菌种选育的主要方法有哪些？在诱变育种中常用的诱变剂有哪些？它们的诱变机制是什么？P261-P263 61、发酵的基本过程P267

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/k7cp.html