细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响 - 图文

苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属非涉密论文口在——年一月解密后适用本规定。论文作者签名：日期．＂７／ｏｔ２二吩ｆ导师签名：细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响中文摘要中文摘要被动免疫治疗又称为过继免疫治疗，是将对疾病有免疫力的供者的免疫应答产物转移给其他个体，或者自体细胞体外经过处理后回输自身以发挥治疗疾病作用的治疗方式。细胞因子诱导的杀伤细胞（ＣＩＫ细胞）是一群异质性细胞，其主要效应细胞为ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞。将人外周血单个核细胞在Ｔ－ＩＦＮ、ａｎｔｉ。ＣＤ３ＭｃＡｂ、ＩＬ．２和ＩＬ．１等因子的先后诱导下可获得大量高细胞毒活性的ＣＩＫ细胞，这些细胞具有高效广谱的杀瘤特性。通过诱导后ＣＩＫ细胞的数目及细胞毒活性在１４天至２１天间达到最高峰。本研究采用生物技术体外诱导自体ＣＩＫ细胞进行胃癌患者的临床应用，比较单用化疗与联合ＣＩＫ细胞治疗胃癌患者以无瘤生存为结局的相关因素，以此来评价化疗与ＣＩＫ治疗对胃癌疗效。本研究结果显示：（１）、两组比较评价时，对影响胃癌预后的重要因素，如性别、年龄、胃癌部位、肿瘤大小、组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、病理分级等进行统计学分析，需确定两组间差异无统计学意义；（２）、与单纯化疗组相比，化疗联合ＣＩＫ细胞治疗组（ＣＩＫ治疗组）胃癌病人的无瘤中位生存时间明显高于化疗组（３９．ｏ比１７．ｏ月），差别有统计学意义俨＜０．０５）；（３）、单纯化疗组、ＣＩＫ治疗ｌ一１０次组和ＣＩＫ治疗大于１０次组相比，三组生存率曲线差别有统计学意义（尸＜０．０５）。由此可见，随着ＣＩＫ治疗次数的增加，胃癌患者死亡风险明显降低。综上所述，本项研究通过对胃癌患者临床资料的采集和后期回访，全面掌握了胃癌患者的治疗信息，比较了单纯化疗和化疗联合ＣＩＫ细胞治疗胃癌的生存率，探讨了ＣＩＫ细胞治疗胃癌以无瘤生存为结局的相关因素。ＣＩＫ细胞治疗可以使胃癌病人自身免疫反应增强，提高近期疗效和生活质量，可以显著延长胃癌患者的中位生存时间。ＣＩＫ细胞治疗作为过继免疫治疗方法，具有广阔的临床应用前景，有可能成为肿瘤免疫治疗的新策略。关键词：胃癌，细胞因子诱导的杀伤细胞，生存时间硕士研究生：石旦指导老师：蒋敬庭教授Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ０ｆｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｎｌ‘ｄｉｓｅａｓｅ－ｌｒｅｅｐ●●ＳＵｒＶＩＶａｌ０ｔ“‘一ｇａｓｔｒｉｃＣａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓＡｂｓｔｒａｃｔＰａｓｓｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，ａｌｓｏｋｎｏｗｎａｓａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，ｉｓａｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇｔｈｅｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｔｈｅｄｏｎｏｒｗｈｏｈａｓｉｍｍｕｎｉｔｙａｇａｉｎｓｔｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｔｏｏｔｈｅｒｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ，ｏｒｒｅｉｎｆｕｓｉｏｎｏｆａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｃｅｌｌｓｈａｎｄｉｎｇｉｎｖｉｔｒｏｔｏｐｌａｙｔｈｅｒｏｌｅｏｆｄｉｓｅａｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒ（ＣＩＫ）ｃｅｌｌｓｉｓａｇｒｏｕｐｏｆｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｃｅｌｌｓ．ＩｔｓｍａｉｎｅｆｆｅｃｔｏｒｃｅｌｌｉｓＣＤ３十ＣＤ５６＋ｃｅｌｌｓ．Ｈｕｍａｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆ７一ＩＦＮ，ａｎｔｉ－ＣＤ３ＭｃＡｂ，ＩＬ－２ａｎｄＩＬ一１ｆａｃｔｏｒｓｍａｙｇａｉｎｐｌｅｎｔｙｏｆｈｉｇｈｃｙｔｏｔｏｘｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣＩＫｃｅｌｌｓｗｈｉｃｈｈａｖｅｈｉ曲ｌｙｅｆｆｉｃｉｅｎｔａｎｄｂｒｏａｄ—ｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｔｉ—ｆｅａｔｕｒｅｓ．Ｂｙｉｎｄｕｃｉｎｇ，ｔｈｅｎｕｍｂｅｒａｎｄｃｙｔｏｔｏｘｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣＩＫｃｅｌｌｓｒｅａｃｈｅｄａｐｅａｋｉｎ１４—２１ｄａｙｓ．Ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏｂｙｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ、丽ｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ（ＣＩＫｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ）ｏｎｔｈｅｄｉｓｅａｓｅ－ｆｒｅｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙａｌｏｎｅ（ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｇｒｏｕｐ）ｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｔｈｉｓｔｅｓｔ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔ：（１）ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅＷａｓｎｏｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｓｅｘ，ａｇｅ，ｔｕｍｏｒｓｉｔｅ，ｔｕｍｏｒｓｉｚｅ，ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｔｙｐｅ，ｉｎｖａｓｉｏｎｄｅｐｔｈ，ｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｒｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｇｒａｄｅ；（２）Ｔｈｅｄｉｓｅａｓｅ－ｆｒｅｅｍｅｄｉａｎｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｎｇｅｒｉｎｔｈｅＣＩＫｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｔｈａｎｉｎｔｈｅｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｇｒｏｕｐ（３９ＹＳ１７ｍｏｎｔｈｓ）．ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅＷａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）；（３）Ｃｏｍｐａｒｅｄｔｈｅｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ１－１０ｔｉｍｅｓｏｆＣＩＫｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐａｎｄＣＩＫｔｒｅａｔｍｅｎｔｍｏｒｅｔｈａｎ１０ｔｉｍｅｓｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｓｅｔｓｏｆｓｕｒｖｉｖａｌｃｕｒｖｅｓｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅＷａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ俨＜０．０５）．ＷｅＣａｎｆｉｎｄｔｈａｔｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｔｉｍｅｓｏｆＣＩＫｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅｒｉｓｋｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｄｉｅｄｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄ．Ｉｎｓｕｍｍａｒｙ，ｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｄａｔａｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｌａｔｅｒｅｔｕｒｎｖｉｓｉｔｓ，ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ，ＩＩ细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响英文摘要ＣｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｓｏｆｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙａｌｏｎｅａｎｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｐｌｕｓＣＩＫｃｅｌｌｓｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ，ｅｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｏｆＣＩＫｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｔｈｅｄｉｓｅａｓｅ－ｆｒｅｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ，ｗｅｃｏｎｃｌｕｄｅｄｔｈａｔＣＩＫｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙｍａｋｅａｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔ’Ｓｏｗｎｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ，ｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙａｎｄｑｕａｌｉｔｙｏｆｌｉｆｅａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｒｏｌｏｎｇｔｈｅｍｅｄｉａｎｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒａｐａｔｉｅｎｔｓ．ＣＩＫｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙａｓａｍｅｔｈｏｄｏｆａｄｏｐｔｉｖｅａｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｈａｓｂｒｏａｄｐｒｏｓｐｅｃｔｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｍａｙｂｅｃｏｍｅｎｅｗｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．ＫｅｙＷｏｒｄｓ：Ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ；Ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ；ＳｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅＷｒｉｔｔｅｎｂｙ：ＤａｎＳｈｉＳｕｐｅｒｖｉｓｅｄｂｙ：ＪｉｎｇｔｉｎｇＪｉａｎｇＩＩＩ

目录一、研究背景……………………………………………………………………………ｌ二、引言…………………………………………………………………………………９三、材料与方法………………………………………………………………………?１０四、结果………………………………………………………………………………?１３五、讨论………………………………………………………………………………?１９六、小结与展望………………………………………………………………………?２１七、参考文献…………………………………………………………………………?２２八、综述：细胞因子诱导的杀伤细胞在肿瘤治疗中的研究进展…………………?２４九、攻读硕士学位期间发表和完成的文章…………………………………………?３８十、本研究所获的基金资助…………………………………………………………．３９十一、缩写词表………………………………………………………………………。４０十二、致谢……………………………………………………………………………。４２细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响研究背景研究背景一、癌症及其治疗现状与前景胃癌为消化系统恶性肿瘤中常见疾病，主要分布在亚洲、拉丁美洲和中欧【ｌ】等地，也是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一，占我国主要恶性肿瘤死亡之第三位。胃癌患者一般早期无或有轻微症状，随病情的发展可增多。症状的轻重程度与病灶的部位、大小、有无溃疡、狭窄、转移及出血等有关。腹痛是胃癌最多见的症状，约占１／３以上。其次有腹胀、纳差、消瘦、乏力、呕吐、呕血、黑便、贫血等，约４．６％的病人无主诉。隆起型病变中多无主诉，凹陷型病变者常较早出现腹痛。进展期胃癌４０．１％可有贫血【２Ｊ，２４％可扪及腹部包块。胃癌好发于胃体下、胃窦及幽门部，发生在以上部位者约占４０＂～７０％。临床所见早期胃癌不足１５％，规范治疗后的５年生存率可达８０％，而大多数为进展期胃癌，此时癌组织浸润达肌层或浆膜层，５年生存率仅为２０％左右。胃癌的治疗目前以外科手术为主要手段之一。早期胃癌根治术后可达治愈，姑息性切除可减轻肿瘤负荷【３’４１，有利于后续放化疗和免疫治疗等的实施，提高疗效以达到延长生存期的目的。晚期胃癌手术可解除穿孔出血、梗阻等并发症，对改善生活质量、延长生存期有重要作用。以往认为胃腺癌转移较早，对放射性不敏感且正常粘膜难以耐受放疗，近年由于放射源的发展和放疗技术的进步，特别是直线加速器的临床应用，可采用术前、术中和术后放疗提高手术疗效，与化疗配合缓解症状、延长生存期【５】。胃癌的化疗适应症包括【６】：①早期胃癌病理类型高度恶性，有淋巴结转移；②进展期胃癌；③根治术后复发；④姑息切除术或无法手术的晚期患者。制定化疗方案时应综合考虑病理类型、临床分期、一般状况评分、主要脏器（肝、肾、心、肺、骨髓）功能指标等方面，尽量选用疗效高且毒副反应小的方案。胃癌对化疗相对敏感，单药有效率一般大于１５％，为提高疗效应结合患者身体状况和治疗方式拟定个体化治疗方案。近年胃癌生物反应调节剂治疗的研究取得了一定的进展。非特异性免疫增强剂如卡介苗、短小棒状杆菌、香菇多糖等与化疗联合应用可提高疗效【７】；淋巴因子类如干扰素、白介素．２、肿瘤坏死因子、免疫核糖核酸、单克隆抗体治疗。目前免疫治疗主要适应于①早期胃癌根治术后适合免疫刺激剂；②不能切除或姑息切除研究背景细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响的患者在瘤体内注射；③晚期患者伴腹腔积液者腹腔注射；④放化疗后老年患者免疫力的恢复。随着诊断技术的提高，胃癌早期诊断、早期治疗提高了患者的生存率，但目前临床仍以进展期胃癌多见，且伴有不同程度的淋巴结转移，根治术很难完全根治。所以，应根据患者体质状态、病理类型、临床分期等状况选择化疗、放疗、免疫治疗或中药疗法进行综合治疗，这对提高胃癌患者生存率极为重要。９０％以上未行手术的胃癌患者在１年内死亡（平均生存期１３个月），姑息切除术患者平均生存期１５月，早期胃癌根治术后５年生存率在８０％以上，进展期胃癌根治术后５年生存率大约２０％．３０％。影响胃癌预后的主要因素有肿瘤浸润深度和淋巴结转移、综合治疗措施、手术类型及淋巴结清除范围、病理类型、肿瘤的生物学特性，患者的年龄、性别和一般状况对预后也有影响。胃癌预后的改观关键在于提高早期胃癌的检出率、研究新的特异性和敏感性强的分子与基因诊断方法、合理选择现有综合治疗方法以及不断研究探索新治疗方法。近年来，随着胃癌基础研究的不断深入，许多胃癌高危分子生物学指标不断被发现，特别是有些胃癌高危分子生物学指标已经或即将成为新的肿瘤标记物而应用于肿瘤流行病学和胃癌高危人群的预防、肿瘤临床诊断和治疗以及肿瘤的基础研究，因为这些分子生物学指标在患者血清中的含量往往和肿瘤组织的生长消退或转移有直接的关系。如ＥＧＦ、ｏｔＴＧＦ和ＥＧＦ受体过度表达提示胃癌患者预后较差１８１；ＶＥＧＦ的表达与淋巴结转移和肝转移有关，并且肿瘤ＶＥＧＦ表达阳性的患者比表达阴性的患者预后差。随着对胃癌细胞生物学和分子生物学的深入研究，特别是发现许多共刺激分子在肿瘤免疫应答中存在正反两方面调节作用，不断发现新的胃癌细胞生物行为与肿瘤免疫相关的分子和基因，研发新型抗肿瘤或提高患者免疫功能的药物，多药耐药逆转剂，对胃癌患者进行个体化治疗已成为胃癌研究的热点领域。２１世纪是肿瘤生物治疗世纪，肿瘤生物治疗研究目前已成为全球科研活动投入最多、最活跃、发展最快的医学研究领域。而肿瘤生物治疗在肿瘤治疗中的作用逐年提高，某些高度恶性的癌症如恶性黑色素瘤己可以通过生物治疗得到治愈。生物治疗在防止肿瘤复发、治疗晚期癌症及其并发症等方面具有诸多优势。随着现代生物技术的发展，短短十几年期间，人们在肿瘤的病因、发生发展、诊断、治疗方面获得了前所未有的巨大成就，但肿瘤的发生是由多因素造成的，关键是生物因素。细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响研究背景二、ＣＩＫ细胞与肿瘤免疫治疗细胞因子诱导的杀伤细胞（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｉｎｄｕｃｅｄＫｉｌｌｅｒＣｅｌｌｓ），即ＣＩＫ细胞是将外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）在体外经过多种细胞因子共同诱导而获得的一群异质细胞，具有广谱杀瘤的优点。（一）肿瘤免疫治疗概述机体的免疫系统是一个复杂、平衡、有机的统一整体，在正常情况下，机体能发挥自身的免疫调节作用，抵抗外来微生物的感染，消灭机体发生癌变的细胞，并能及时消除自身反应性淋巴细胞而防止自身免疫性疾病的发生。如果机体的免疫功能低下或者免疫功能亢进，则会导致免疫缺陷、肿瘤或自身免疫性疾病的发生。针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地增强或抑制机体的免疫功能以达到治疗疾病的治疗方法称免疫治疗（ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）。免疫治疗分为主动免疫治疗（ａｃｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）和被动免疫治疗（ａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）。主动免疫治疗是指给免疫应答健全的机体输入具有抗原性的疫苗或免疫佐剂，激活或增强机体的免疫应答，使机体自身产生抵抗疾病的能力如瘤苗、卡介苗和短小棒状杆菌等的应用。被动免疫治疗又称为过继免疫治疗，是将对疾病有免疫力的供者的免疫应答产物转移给其他个体，或者自体细胞体外经过处理后回输自身以发挥治疗疾病的作用。被动免疫治疗包括免疫效应细胞、抗体、小分子免疫肽、转移因子和胸腺肽等的应用。细胞过继免疫治疗肿瘤起始于八十年代中期。Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ用ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞过继免疫治疗肿瘤，在肿瘤研究领域引起了轰动。１９８５年他首次报道了应用ＬＡＫ和ＩＬ．２联合静脉输注治疗２５例常规疗法治疗无效的晚期肿瘤病人，ｌｌ例治疗有效肿瘤明显缩小，其中一例黑色素瘤完全缓解。１９８６年又开创了ＴＩＬ过继免疫治疗。但是，其代价昂贵，同时ＬＡＫ、ＴＩＬ治疗剂量高达１ｘ１０１０１ｘ１０１１细胞，ＩＬ．２每日输入高达１×１０７国际单位。ＣＩＫ细胞最早在１９９１年由美国斯坦福大学医学中心的Ｓｃｈｍｉｄｔ．Ｗｏｌｆ等命名，他们在ＳＣＩＤ小鼠．人淋巴瘤模型的研究中发现人外周血单个核细胞在？－ＩＦＮ、ａｎｔｉ．ＣＤ３ＭｃＡｂ、ＩＬ．２和ＩＬ．１等因子的先后诱导下，获得了大量的高细胞毒活性的ＣＩＫ细胞，而且ＣＩＫ能高效杀伤人Ｂ淋巴瘤细胞株ＳＵ．ＤＨＬ４和ＯＣＩ．Ｌｙ８ｔ９１，这也开创了体细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的新方法。（－二）ＣＩＫ细胞的肿瘤免疫治疗ＣＩＫ细胞是一群异质性细胞，其主要效应细胞为ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞，而这种双阳研究背景细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响性细胞来源于ＣＤ３＋ＣＤ５６－的Ｔ淋巴细胞，而非ＣＤ３一ＣＤ５６＋的ＮＫ细胞，但拥有ＮＫ细胞的广谱杀瘤的优点，ＣＩＫ细胞在识别肿瘤细胞过程中ＣＤ４、ＣＤ８并非必不可少，其细胞毒活性可被抗淋巴细胞功能相关抗原。Ｉ（ＬＦＡ．１）或抗细胞间粘附分子．Ｉ（ＩＣＡＭ．１）Ｎ单克隆抗体所阻止，表明细胞表面粘附分子在ＣＩＫ细胞识别肿瘤过程中起～定作用［１０，１１】，也可被抗ＮＫＧ２Ｄ受体的抗体阻止，表明ＣＩＫ细胞表面存在ＮＫＧ２Ｄ受体【１２】，有些研究表明ＣⅨ细胞介导的细胞毒机制和ＮＫＧ２Ｄ有关［１３】，这些研究也间接地证明了ＣＩＫ杀伤肿瘤细胞效应是非ＭＨＣ限制性的。ＣＩＫ细胞对多种肿瘤细胞具有杀伤力、对多重耐药肿瘤细胞也同样具有敏感性，而对化疗敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞杀伤活性无显著差异，免疫抑Ｓｔ］齐ＵＣｓＡ和ＦＫ５０６虽然可以抑制抗ＣＤ３单抗介导的ＣＩＫ细胞脱颗粒过程，却不影响靶细胞诱导的ＣＩＫ细胞脱颗粒，并且ＣＩＫ细胞对靶细胞的杀伤活性不会由此降低【１４，１５】。ＣＩＫ细胞以其较强的广谱的细胞毒性和扩增性能而成为临床应用的一种理想效应细胞【ｌ引。近年来，ＣＩＫ研究的重点是增加细胞增殖率与细胞毒活性，阐明ＣＩＫ细胞的作用机理并由实验研究应用于临床治疗。Ｊｏｓｅｐｈ等从２５例淋巴瘤、白血病和多发性骨髓瘤患者的外周血单个核细胞诱导出ＣＩＫ细胞，ＣＤ３＋ＣＤ５６＋的Ｔ淋巴细胞平均扩增４０多倍，其中两例病人的ＣＩＫ细胞在４０：１的效／靶比时对自身的肿瘤细胞有较强的杀伤作用，这为自体造血细胞移植后的ＣＩＫ过继免疫治疗提供了理论依据【ｌ¨。Ｌｉｎｎ等［１８１利用急性白血病患者的单个核细胞扩增出ＣＩＫ细胞，培养后ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞百分率为７．６％＇－－６５％（平均３５．３％），这些细胞可以杀死人类ＮＫ细胞的靶细胞Ｋ５６２细胞。该ＣＩＫ效应细胞能够溶解自体急性单核细胞性白血病（ＡＭＬ）靶细胞，并且能够产生抗异体白血病原始细胞的细胞毒作用。该研究提示，ＣＩＫ细胞在ＡＭＬ的细胞免疫治疗、ＡＭＬ的残留病灶、异基因移植后供体淋巴细胞输注和化疗复发的患者具有广泛的应用价值。Ｌｅｅｍｈｕｉｓ等【１９】以７例何杰金氏病和２例非何杰金氏病例为研究对象，所有病人均为自体移植失败与进展期病人。此研究建立了大容量的体外ＣⅨ细胞扩增技术，将经血浆分离置换后未纯化的血细胞在Ｙ—ＩＦＮ、ＯＫＴ３和ＩＬ．２共同培养，每３．４天补加新鲜的培养液和ＩＬ－２，培养２１天后ＣＤ３＋ＣＤ５６＋双阳性细胞可显著增加。体外细胞毒试验表明，在效靶细胞比为４０：１条件下，ＣＩＫ细胞可杀死３２％（２％．６９％）ＯＣＩ．Ｌｙ８细胞。培养的ＣＩＫ以１ｘ１０９－１ｘ１０１０输注给患者，输注后发现副作用很小，有两例进４

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响研究背景展期的病例，其病情稳定，且有一例患者生存期超过１８个月。Ｋｏｍａｃｋｅｒ等幽ｊ用Ｆ（ａｂ’）２Ｈｅｒ２／ｎｅｕ×ＣＤ３双功能抗体，连接ＣＩＫ细胞和ＢＴ．４７４矛Ｉ］ＳＫ．ＯＶ．３乳腺细胞株。ＨＥＲ２／ｎｅｕ是原癌基因编码Ｉ型酪氨酸激酶受体，多种人类腺癌存在ＨＥＲ２／ｎｅｕ扩增及过度表达，能增强ＣＩＫ细胞增殖和对肿瘤细胞的杀伤效果。Ｃｈａｎ等制备健康供血者和卵巢癌患者来源的ＣＩＫ细胞，将健康供血者来源的ＣＩＫ细胞分成ＣＩＫ细胞组、ＣＩＫ细胞＋ＢＳＡｂｘＣＡｌ２５双功能抗体组、ＣＩＫ细胞＋ＢＳＡｂｘＨｅｒ２双功能抗体组分别和人卵巢癌细胞株ＣＡ—ＯＶ３、ＯＶＣＡＲ．３、ＳＫ－ＯＶ３作淋巴细胞毒杀伤试验。将卵巢癌患者来源的ＣＩＫ细胞分成ＣＩＫ细胞组、ＣＩＫ细胞＋ＢＳＡｂｘＣＡｌ２５双功能抗体组、ＣＩＫ细胞＋ＢＳＡｂｘＨｅｒ２双功能抗体组分别和自源性的卵巢癌细胞作淋巴细胞毒杀伤试验。研究证明双功能抗体能增强ＣＩＫ细胞增殖和细胞毒活性，并在卵巢癌细胞种植的ＳＣＩＤｄｘ鼠模型中通过肿瘤组织免疫荧光染色技术、萤光素酶报告基因标记技术和Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存分析方法得到直观的验证，研究结果还表明ＢＳＡｂｘＨｅｒ２双功能抗体组效果最好【２１Ｊ。Ｚｈａｎｇ［２２Ｊ用原发性肝细胞癌病人外周血来源的ＣＩＫ细胞对多耐药细胞株Ｂｅｌ．７４０２／Ｒ进行细胞毒试验。实验证实ＣＩＫ细胞对肝癌细胞有强烈的细胞毒活性，对一例手术一年后肺转移的肝癌病人进行自体ＣＩＫ细胞输注治疗，病人症状好转，腹水减少，三个月后病情稳定，行转移灶切除术，病理表明肿瘤组织中ＣＤ３、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６８１Ｉｆｊ性的免疫活性细胞明显增多。Ｗｏｎｇｋａｊｏｍｓｉｌｐ［２３】从骨肉瘤细胞中抽提出总ＲＮＡ脉冲树突状细胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ，ＤＣ）和ＣＩＫ细胞共培养后对骨肉瘤细胞株作细胞毒试验。并证实由ＲＮＡ脉冲的ＤＣ细胞能增强ＣＩＫ细胞的细胞毒活性，且在达到一定效／靶比后，ＣＩＫ细胞杀伤效果没有明显的浓度依赖关系。Ｓｈｉ掣２４】对１１例原发性肝细胞癌病人进行自体ＣＩＫ细胞输注治疗。大多数病人症状明显改善，包括睡眠质量提高和体重增加等，而肿瘤生长趋缓，且有３例病人肿瘤负荷减轻。但在输注ＣＩＫ细胞治疗６～８小时内，有部分病人有一过性发热症状（３７－－一４０。Ｃ），无需处理能自行缓解。Ｔｈｏｍｅ等［２５恫系基因型（大鼠乳腺癌细胞株４Ｔ１移植的有免疫能力的ＢＡＬＢ／ｃｄｘ鼠）和异种移植物型（人卵巢癌细胞株ＵＣＩ．１０１移植的ｎｕ／ｎｕ无免疫能力小鼠）小鼠模型研究发现：具有抗癌前景的牛痘病毒能转染ＣＩＫ细胞而不影响其表面受体和活性，并且能有效逃避机体的免疫降解，牛痘病毒转染ＣＩＫ细胞后，能利用ＣＩＫ细胞对肿瘤细胞的特异性识别能力，迁移到小鼠的肿瘤部位，使肿瘤周围的牛痘病毒浓集，在ＣＩＫ细胞杀伤肿瘤细胞时释放出来，并协同杀伤肿瘤细胞。研究背景细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响总之，ＣＩＫ细胞治疗恶性肿瘤具有广阔的前景，是未来治疗恶性肿瘤的重要手段之一。肿瘤生物治疗是应用各种生物制剂和手段来收发启动调节增强机体的免疫和抗癌能力，维护机体生理平衡，抗御肿瘤，有变被动抗癌为主动抗癌的特点，有着巨大的治疗潜力和生命力；从生物治疗发展的过去和现代生物疗法的未来和取得的疗效看，ＣＩＫ细胞治疗恶性肿瘤具有决定性的长期疗效。但是，如何获得足够数量并具有高细胞毒活性的效应细胞成为生物治疗研究的重点与难点。参考文献［１】Ｐａｌｓｅｒｏｅｓｏｐｈａｇｏ－ｇａｓｔｒｉｃＴＲ，ＣｒｏｍｗｅｌｌｃａｎｃｅｒｃａｒｅＤＡ，ＨａｒｄｗｉｃｋＲＨ，ｅｔａ１．Ｒｅ－ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎｏｆｉｎＥｎｇｌａｎｄ：ｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｒｅｍａｉｎｉｎｇｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ．ＢＭＣＨｅａｌｔｈＳｅｒｖＲｅｓ，２００９，９：２０４．【２】ＰｏｗｅｒＤＧＫｅｌｓｅｎＤＰ，ＳｈａｈＭＡ．Ａｄｖａｎｃｅｄｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ－一ｓｌｏｗｂｕｔｓｔｅａｄｙｐｒｏｇｒｅｓｓ．ＣａｎｃｅｒＴｒｅａｔＲｅｖ，２０１０，３６（５）：３８４－３９２．［３］张贵年，黄顺荣，冯泽荣等腹腔镜胃癌根治术２４例报告．中国微创外科杂志，２０１０，１０（７）：５９７—５９９．［４】许爱国．胃癌忽｝生穿孔的外科治疗探讨（附１７例报告）．腹部外科，２００１，１４（５）：２７４－２７５．［５］孙杨，田春阳，陈娅蓉．胃癌的化学疗法．医学综述，２０１１，１７（２３）：５０—５３．【６】程朝晖．进展期胃癌化疗４２例临床分析．航空航天医药，２０１０，２１（１２）：２１８８．［７】蔡俊，马德，杨武等．香菇多糖联合化疗治疗晚期胃癌临床观察．基层医学论坛，２０１０，１４（４）：１３２－１３３．［８】魏学明，顾国利，任力争胃癌组织中ＥＧＦＲ、Ｃ．ｅｒｂＢ．２、ＶＥＧＦ及ＣＯＸ．２的表达及意义．中国普外基础与临床杂志，２００９，１６（１１）：９００．９０５．【９］９Ｓｃｈｍｉｄｔ－Ｗｏｌｆｌｙｍｐｈｏｍａｍｏｄｅｌａｃｔｉｖｉｔｙ．ＪＥｘｐＩＧ，ＮｅｇｒｉｎＲＳ，ＫｉｅｍＨＰ，ｅｔａ１．ＵｓｅｏｆａＳＣＩＤｍｏｕｓｅ／ｈｕｍａｎａｎｔｉｔｕｍｏｒｃｅｌｌｔｏｅｖａｌｕａｔｅｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｗｉｔｈｐｏｔｅｎｔＭｅｄ，１９９１，１７４（１）：１３９—１４９．ＧＤ，Ｎｅｇｒｉｎ［１０］Ｓｃｈｍｉｄｔ－ＷｏｌｆＲＳ，Ｓｃｈｍｉｄｔ－Ｗｏｌｆ１（２ＡｃｔｉｖａｔｅｄＴｃｅｌｌｓａｎｄｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄＣＤ３＋ＣＤ５６＋ｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ．ＡｎｎＨｅｍａｔｏｌ，１９９７，７４（２）：５１－５６．ＢＡ，ｅｔａ１．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ【１１】Ｓｃｈｍｉｄｔ－ＷｏｌｆＩＧ，ＬｅｆｆｅｒｏｖａＰ，Ｍｅｈｔａ６细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响研究背景ａｎｄ１ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｆｆｅｃｔｏｒｃｅｌｌｓｌｎｖｏｌｖｅｄ１Ｄｔｕｍｏｒｅｅｌｌｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ．ＥｘｐＨｅｍａｔｏｌ，１９９３，２１（１３）：１６７３—１６７９．［１２】ＧｒｏｈＶＷｕＪ，ＹｅｅＣ，ｅｔａ１．Ｔｕｍｏｕｒ－ｄｅｒｉｖｅｄｓｏｌｕｂｌｅＭＩＣｌｉｇａｎｄｓｉｍｐａｉｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＫＧ２ＤａｎｄＴ－ｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ，２００２，４１９（６９０８）：７３４—７３８．［１３］ＶｅｍｅｒｉｓＭＲ，ＫａｒａｍｉＭ，ＢａｋｅｒＪ，ｅｔａ１．ＲｏｌｅｏｆＮＫＧ２ＤｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｔｈｅｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆａｃｔｉｖａｔｅｄａｎｄｅｘｐａｎｄｅｄＣＤ８＋Ｔｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０３（８）：３０６５—３０７２．【１４］ＭｅｈｔａＢＡ，Ｓｃｈｍｉｄｔ－ＷｏｌｆＩＧ‘ＷｅｉｓｓｍａｎＩＬｅｔａ１．Ｔｗｏｐａｔｈｗａｙｓｏｆｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓｏｆｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｇｒａｎｕｌｅｃｏｎｔｅｎｔｓａｎｄｔａｒｇｅｔｃｅｌｌｋｉｌｌｉｎｇｂｙｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄＣＤ３＋ＣＤ５６＋ｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ，１９９５，８６（９）：３４９３－３４９９．［１５】Ｓｃｈｍｉｄｔ－ＷｏｌｆＩＧ，ＬｅＲｅｒｏｖａＥＪｏｈｎｓｔｏｎＶＪｅｔａ１．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｍｕｌｔｉｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｍｏｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓｔｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃｅｆｆｅｃｔｏｒｃｅｌｌｓ．ＣｅｌｌＩｍｍｕｎｏｌ，１９９６，１６９（１）：８５—９０．［１６］ＰｅｔｖｉｓｅｓＳ，ＰａｋａｋａｓａｍａＳ，ＷｏｎｇｋａｊｏｍｓｉｌｐＡ，ｅｔａ１．Ｅｘｖｉｖｏｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ（ＣＤ３＋ＣＤ５６＋）ｆｒｏｍｐｏｓｔ—ｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔｐｅｄｉａｔｒｉｃｐａｔｉｅｎｔｓａｇａｉｎｓｔａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ—Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｅｓ－ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄｃｅｌｌｌｉｎｅｓ．ＰｅｄｉａｔｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，２００７，１１（５）：５１１－５１７．［１７】ＡｌｖａｍａｓＪＣ，ＬｉｎｎＹＣ，ＨｏｐｅＥＧ，ｅｔａＬＥｘｐａｎｓｉｏｎｏｆｃｙｔｏｔｏｘｉｃＣＤ３＋ＣＤ５６＋ｃｅｌｌｓｆｒｏｍｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｉｌｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．ＢｉｏｌＢｌｏｏｄＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，２００１，７（４）：２１６－２２２．［１８］ＬｉｎｎＹＣ，ＬａｕＬＣ，ＨｕｉＫＭ．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｆｒｏｍｌｅｕｋａｅｍｉｃｓａｍｐｌｅｓｗｉｔｈｉｎｖｉｔｒｏｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙａｇａｉｎｓｔａｕｔｏｌｏｇｏｕｓａｎｄａｌｌｏｇｅｎｅｉｃｌｅｕｋａｅｍｉｃｂｌａｓｔｓ．ＢｒＪＨａｅｍａｔｏｌ，２００２，１１６（１）：７８—８６．［１９】ＬｅｅｍｈｕｉｓＴ，ＷｅｌｌｓＳ，ＳｃｈｅｆｆｏｌｄＣｅｔａ１．ＡｐｈａｓｅＩｔｒｉａｌｏｆａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｒｅｌａｐｓｅｄＨｏｄｇｋｉｎｄｉｓｅａｓｅａｎｄｎｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎｌｙｍｐｈｏｍａ．ＢｉｏｌＢｌｏｏｄＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，２００５，１１（３）：１８１—１８７．［２０】ＫｏｍａｃｋｅｒＭ，ＶｅｍｅｒｉｓＭ，ＫｏｒｎａｃｋｅｒＢ，ｅｔａ１．Ｔｈｅａｐｏｐｔｏｆｉｃａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｆａｔｅｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎｔｏｔＵｌＴＩＯｒｃｅｌｌｓ、航订１ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃＡｂ．Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ，２００６，８（１）：１３—２３．［２１］ＣｈａｎＪＫ，ＨａｍｉｌｔｏｎＣＡ，ＣｈｅｕｎｇＭＫ，ｅｔａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｄｋｉｌｌｉｎｇｏｆｐｒｉｍａｒｙｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒｂｙｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｗｉｔｈｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ７研究背景细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｙ．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００６，１２（６）：１８５９．１８６７．【２２】ＺｈａｎｇＹＳ，ＹｕａｎＦＪ，ＪｉａＧＦ，ｅｔａＬＣＩＫｃｅｌｌｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｍｓｗｉｔｈＨＣＣｐｏｓｓｅｓｓｓｔｒｏｎｇｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｔｏｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｌｉｎｅＢｅｌ．７４０２／Ｒ．ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００５，１１（２２）：３３３９—３３４５．［２３】ＷｏｎｇｋａｊｏｍｓｉｌｐＡ，ＳａｎｇｓｕｒｉｙｏｎｇＳ，ＨｏｎｇｅｎｇＳ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｃｙｔｏｌｙｓｉｓｕｓｉｎｇｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｐｒｅ－ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｕｍｏｒＲＮＡ－ｐｕｌｓｅｄｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ．ＪＯｒｔｈｏｐＲｅｓ，２００５，２３（６）：１４６０—１４６６．［２４】ＳｈｉＭ，ＺｈａｎｇＢ，ＴａｎｇＺＲ，ｅｔａ１．Ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｐｈａｓｅＩｉｓｓａｆｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ．ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００４，１０（８）：１１４６—１１５１．【２５］ＴｈｏｍｅＳＨ，ＮｅｇｒｉｎＲＳ，ＣｏｎｔａｇＣＨ．Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌ－ｖｉｒａｌｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，３１１（５７６８）：１７８０—１７８４．８细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响引言引言在世界范围内，癌症是一个主要死亡原因。中国、日本及东欧的一些国家是胃癌的高发区，全世界４２％的胃癌发生在中国。ＷＨＯ统计数据显示，胃癌所致死亡率在我国位居恶性肿瘤第三位。２００８年的一项研究显示，我国胃癌患者就诊时Ｉ期的比例仅为１５．２４％【１】，由此说明我国胃癌早期诊断率低，诊断时多数患者已为中晚期胃癌。因此，探索有效的胃癌治疗方法是十分紧迫的科学命题。近年来，尽管胃癌ｆ临床治疗技术取得较大的发展【２，３】，但由于其恶性程度高、发展迅速，往往术后复发率高（５０％．７０％），治疗效果并不理想，因此胃癌综合治疗的作用越来越得到临床的重视。传统放化疗对术后胃癌患者疗效不理想，而取得疗效的同时也往往给患者带来较大的毒副作用。肿瘤的消长与机体抗肿瘤免疫功能的改变密切相关，合理应用辅助化疗与生物治疗等综合治疗是提高五年生存率的重要途径。细胞因子诱导的杀伤细胞（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ，ＣＩＫ）是将外周血单个核细胞在体外经过多种细胞因子共同诱导而获得的一群异质细胞。研究发现ＣＩＫ细胞表面同时表达ＣＤ３和ＣＤ５６两种膜蛋白分子因而兼具Ｔ淋巴细胞强大的抗瘤活性和ＮＫ细胞的非ＭＨＣ限制性杀瘤特点【４，５】。体内输注免疫活性细胞可以在不损伤机体免疫系统结构和功能的前提下直接杀伤肿瘤细胞，是一类新型抗肿瘤效应细胞，并可调节和增强胃癌患者的免疫功能，开创了体细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的新方法［６１。本研究前期研究的是采用ＣＩＫ细胞回输治疗可控制和干预Ｂ７．Ｈ４的表达并延长胃癌患者的中位生存时间［７】。最新发现共刺激分子Ｂ７．Ｈ４是Ｂ７家族的新成员，在体外通过抑制Ｔ细胞增殖和细胞因子产生。Ｂ７．Ｈ４在肿瘤微环境中选择性表达，借此抑制肿瘤特异性Ｔ细胞免疫，不平衡的免疫调节严重影响肿瘤微环境中特异性Ｔ细胞的免疫功能，并可改变肿瘤的进展、转移和影响肿瘤患者的免疫治疗。研究通过对１８１例胃癌患者的临床资料的收集，比较了单用化疗与联合ＣＩＫ细胞治疗胃癌患者以无瘤生存为结局的相关因素，以此来评价化疗与ＣＩＫ治疗对胃癌疗效。９

材料与方法细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响材料与方法１病例来源采用回顾性定群研究的方法，纳入１９９８年１月ｌ同．２００９年１２月３１日在苏州大学附属三院手术治疗并经病理诊断的胃癌１８１例。设计标准的调查表，调查每位胃癌患者的人口学特征资料、手术时间、肿瘤大小、部位、病理分型、分期、是否转移、化疗或ＣＩＫ治疗信息。同时随访每位胃癌患者的复发时间和死亡时间，研究终止时间为２０１０年１２月３１日。病例分为两组，其中化疗组：男６２例，年龄（５９．９士１０．５）岁，中位年龄６０．５岁；女１９例，年龄（５７．９－ａ：１２．３）岁，中位年龄５６．０岁。化疗联合ＣＩＫ细胞治疗组（下称ＣＩＫ治疗组）：男６０例，年龄（６２．４士１０．８）岁，中位年龄６０．５岁；女１５例，年龄（５１．０－Ｍ０．７）岁，中位年龄５０．０岁。２主要试剂和仪器设备２．１试剂肝素：国产淋巴细胞分离液：上海风舜精细化工公司ＲＰＭｎ６４０培养基：Ｇｉｂｃｏ公司重组人白细胞介素ｌａ（ｒｈｌＬ一１叻：Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ公司重组人白细胞介素２（ｒｈｌＬ．２）：山东泉港药业公司注射用重组人干扰素ｒ（ＩＦＮ－ｒ）：上海克隆生物高技术公司注射用抗人Ｔ细胞ＣＤ３ＭｃＡｂ：武汉生物制品研究所流式细胞分析试剂（ＣＤ４．ＦＩＴＣ／ＣＤ８．ＰＥ／ＣＤ３－ＰＥ．Ｃｙ５、ＩｇＧｌ．ＦＩＴＣ／ＩｇＧｌ－ＰＥ组ｇＧｌ一ＰＥ—Ｃｙ５、ＣＤ３一ＦＩＴＣ／ＣＤ５６一ＰＥ、同型对照同型对照ＩｇＧｌ．ＦＩＴＣｆｉｇＧｌ－ＰＥ、ＣＤ２５一ＰＣ５、同型对照ＩｇＧ２ａ－ＰＣ５，ＨＬＡ－ＤＲ－ＦＩＴＣ、同型对照ＩｇＧ２ｂ—ＦＩＴＣ、溶血素ＯｐｔｉＬｙｓｅＣ）：ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ公司噻唑蓝（ＭＴＴ）：上海生工公司二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）：Ｓｉｇｍａ公司２．２仪器设备１０细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响材料与方法超净工作台：上海净化设备厂Ｃ０２细胞培养箱：ＵＳＡ公司电子天平：国产．８０℃低温冰箱：Ｓａｎｙｏ公司Ｚ５１３Ｋ型低温高速离心机：ＨｅｍｌｅＬａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ公司ＣｏｂｅＳｐｅｃｔｒａ型血细胞分离机：ＧａｍｂｒｏＢＣ公司光学显微镜：Ｏｌｙｍｐｕｓ公司ＩＸ７０倒置显微镜：Ｏｌｙｍｐｕｓ公司流式细胞仪：ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ公司ＭｕｌｔｉＳ＆Ⅲ型酶联仪：ＴｈｅｎｎｏＥｌｅｃｔｒｏｎ公司２．３实验细胞Ｋ５６２细胞株：中国科学院上海生命科学研究院，由本实验室传代保存。３实验方法３．１ＣＩＫ细胞的制备３．１．１外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的采集在ＣｏｂｅＳｐｅｃｔｒａ型血细胞分离机上用淋巴细胞采集程序单采成份血，经１．００７９／ｍｌ淋巴细胞分离液（ＦｉｃｏＵ）２５００ｒｐｍ３０ｍｉｎ密度离心分离，９．０９／Ｌ洗涤３次获得ＰＢＭＣ。３．１．２ＣＩＫ细胞的诱导培养培养液采用本实验室专利技术‘８１。将获得的ＰＢＭＣ用含５％自体抗凝血浆、２５ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酰胺的ＲＰＭＩ１６４０调至起始密度２ｘ１０６／ｍＬ。于第０天加入１０００Ｕ／ｍｌＩＦＮ吖，置于３７。Ｃ、５％Ｃ０２培养箱培养，２４ｈ后加入ｒｈｌＬ．１ａｌＯＯＵ／ｍｌ，ＣＤ３ＭｃＡｂ５０ｎｇ／ｍｌ和ｒＭＬ．２１０００Ｕ／ｍｌ继续培养。用倒置显微镜观察细胞生长情况，视培养情况添加含ｒｈｌＬ．１ａｌＯＯＵ／ｍｌ，ＣＤ３ＭｃＡｂ５０ｎｇ／ｍｌ，ｒｈｌＬ一２１０００Ｕ／ｍｌ的ＲＰＭＩ１６４０完全培养液，调整细胞密度为２ｘ１０６／ｍｌ，并进行ＣⅨ细胞免疫表型和细胞毒活性的测定。３．１．３ＣＩＫ细胞免疫表型检测采集外周血，加入同型对照，ＯｐｔｉＬｙｓｅＣ溶血，用流式细胞仪测定，作颜色补偿，修正参数确定方案。分别取培养第１、３、５、７、１４、２１、２８和３５天的ＣＩＫ细胞悬液１００ｕｌ，调整细胞浓度５ｘ１０６／ｍｌ，用含有１％牛血清白蛋ｆ刍（ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ材料与方法细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响ａｌｂｕｍｉｎ，ＢＳＡ）的ＰＢＳ洗一遍，悬浮于１００Ｉ＿ｄＰＢＳ／Ｉ％ＢＳＡ，分别加入抗ＣＤ３．ＰＣ５／ＣＤ４．ＦＩＴＣ／ＣＤ８．ＰＥ三标抗体和抗ＣＤ３．ＦＩＴＣ／ＣＤ５６．ＰＥ双标抗体各２０１ｄ混匀，４。Ｃ室温避光孵育２０．３０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗去未结合抗体，并加入Ｏ．５ｍｌ鞘液混匀，用流式细胞仪进行检测，每个测定样本都要做同型对照作为阴性对照。３．１．４ＣＩＫ细胞的细胞毒活性检测ＣＩＫ细胞的细胞毒活性通过同时培养ＣＩＫ细胞与Ｋ５６２细胞来确定【９１。在不同时间用培养液将ＣＩＫ细胞调整细胞浓度为１．２ｘ１０８／ｍＬ作为效应细胞，同时取对数期生长的Ｋ５６２细胞用新鲜培养液调整细胞数为６．０×１０６／ｍＬ作为靶细胞。效靶比均取２０：１。９６孔反应板加入效应细胞和靶细胞各ｌＯＯ｝ｄ／ＴＬ，同时设靶细胞和效应细胞对照孔，每组设６个复孔，计数时取均值。靶细胞对照组为单纯的靶细胞（Ｋ５６２）１００Ｉ－ｄ＋ＲＰＭＩ１６４０培养液ｌＯＯｇｌ；效应细胞组为单纯效应细胞（ＣＩＫ）１００斗１＋ＲＰＭＩ１６４０培养液１００１Ａ。在３７。Ｃ、５％Ｃ０２条件下，作用４小时，５０１ＪＸＭＴＴ（５ｍｇ／ｍＬ）２０ｐｌ／孔，继续作用４ｈ，离心后弃去孔内培养液，再加入二甲基亚砜ＤＭＳＯ１５０１ｘｌ／孔，以溶解形成的色素颗粒，用ＭｕｌｔｉＳＫＡＮ型酶联仪在５７０ｎｍ波长下比色，测定吸光值（Ａ）。实验组Ａ值．效应细胞对照组Ａ值结果计算公式ＣＩＫ细胞毒活性＝（１－－靶细腮对照组Ａ僵３．２化疗组治疗方案胃癌单纯化疗组采用草酸铂方案，奥沙利铂（Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）１２０ｍｇ／ｍ２静脉滴注Ｄ１，５．氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）４００ｍｇ／ｍ２静脉滴注ＣＩＶ２４ｈＤ１．５，羟基脲合四氢叶酸（ＣＦ）２００ｍｇ／ｍ２静脉滴注Ｄ１—５，根据不同病人的毒副反应调整化疗药物的剂量。３．３ＣＩＫ细胞治疗组治疗方案胃癌ＣＩＫ细胞治疗组，在病人化疗六周期结束以后，将达到一定数量（＞１．０ｘ１０９）和杀伤活性（三６５％）的ＣＩＫ细胞回输给受试病人。回输前，将ＣＩＫ细胞１５００ｆｆｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，用９９／Ｌ生理盐水洗涤两遍，再加入１００９／Ｌ人血清清蛋白（上海菜士血液制品公司）、１００万单位ｒｈｌＬ．２的１００ｍＬ生理盐水中输注。每次回输细胞数达１０１０个，隔天一次，－ｄ，时内输完，每次治疗结束评价疗效。３．４统计学分析实验数据采用ＳＡＳ９．１２统计软件包分析，计量资料以均数士标准差ＣＸ士ｓ）表示，采用两样本均数ｆ检验，率的比较采用＃检验。生存资料分析采用Ｋａｐｌａｎ．Ｍｅｉｅｒ法及ｌｏｇ．ｒａｎｋ检验。１２细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响结果结１果ＣＩＫ细胞生长情况ＣＩＫ的生长情况第０天ＰＢＭＣ悬液加入ＩＦＮ吖后，细胞开始活化，残存的中性粒细胞、一部分衰老的单个核细胞等开始凋亡，可见大小不等的凋亡小体。第１天加入ｒｌｌＩＬ—ｌａ、ＣＤ３ＭｃＡｂ、ｒｈｌＬ．２后细胞继续活化，体积逐渐变大，部分细胞贴壁，形成少量细胞集落。第４天细胞开始扩增，凋亡小体被慢慢吞噬。第１４天细胞进入对数生长期，悬浮生长的细胞成圆形或椭圆形，形似典型中小淋巴细胞，集落较多。第２１天细胞进入平稳生长期，细胞均一，外形规则。随培养时间增长，细胞扩增减缓，细胞外形变得不规则，细胞碎片增多，凋亡细胞增加。具体见图１。培养第１天培养第４天，培养第７天培养第１４天培养第２１天培养第３５天图１ＣＩＫ细胞培养生长情况２ＣＩＫ细胞免疫表型的变化与分析应用流式细胞术分析ＣＩＫ细胞表型，共１６组。０＂－－－２１天，培养细胞中苎星塑堕里王重量箜墨笪塑些塑芝旦堡整垂堕兰壹！！！！旦ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞的百分含量大幅度上升，由起初的（Ｏ．７０＿－Ｋ）．４）％上升到１４ｄ的（３１．６＿－－５．５）％与２１ｄ雕ｊ（３５．８±９．７）％，平均扩增倍数为约７００倍以上，然后逐渐降低，具体见图２。此外，总ＣＤ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋、ＣＤ３＋ＣＤ８＋细胞比例均较培养前显著升高（尸＜Ｏ．０５），其中ＣＤ３＋ＣＤ８＋细胞增加更为明显，具体见表１。压第１７弋ＣＤ３＋ＣＤ５６＋ｏ．１５％第７天ｃＤ３＋ＣＤ５６＋１２．５％第１４；走ＣＤ３＋ＣＤ５６＋３１．５％臼第２１天ＣＤ３＋ＣＤ５６＋３５．５％第２８天ＣＤ３＋ＣＤ５６＋２５．５％第３５天ＣＤ３＋ＣＤ５６＋２０．５％图２流式细胞仪ＣＩＫ免疫表型分析表１ＣＩＫ细胞在不同时间的细胞免疫表型（又邯，％，ｎ＝１６）表面抗原ＣＤ３＋ｌｄ６４３＋１２２３ｄ５ｄ７８．１＿＋１４．６６２．３＋１１．３１８．５土７．８６１．８＿＋１０．５１５７±２．９１．９８－＋０．９０．３６－＋０１２．３３－＋０．９７ｄ８３．７＋１５．６６７．５＋１２．１３７．８＋３．５６７．Ｏ－ｚ－＿１２．０１６．２±３．０１．４１＋０．５１２．３－＋２．３１５．７９＋＿２．６１４ｄ８９．６＋１６．３７４．７＋１３．７４６．３＿＋１０５７３．４±１２．６１９．５±３．７３．４５＋１．１３１．６±５．５３４４８＋＿７．４２１ｄ８４９±１５．７６８８＋１１．９５６．８＋１１．５７４．０＋１３．０２４．９±４．４３．６２－＋８．３３５．８－＋９．７７３０：ｔ＝１３．ｏ２８ｄ７２．５－＋１３．５５３．６＋１１．２４８．５＋１１．６４１．１－＋９４２０．５＋３．４４．１３＋９．７２５．７±４．５６７．１＋－１２．６３５４６５８±１１－９４２．２＋８．９３７．２＋９．４３９．６＋８．９１７．６＋２．５２９．１±５．６２２．１±３．９５０５±１０２５１．４＿＋１０．１３７．７＋９．８２０．６±３．９３７．５－＋９．３１２．７±２．７７．４９＋－．２２０．４９＋０．２８．０５＋１．８ＣＤ４＋４５．２＋１０．０ＣＤ８＋２７６＋４．６ＣＤ３＋ＣＤ４＋４５．１＋ｌＯ．１ＣＤ３＂ＣＤ８＋ＣＤ３‘ＣＤ５６＋１８．８＋３１２０．７－＋３．５ＣＤ３＋ＣＤ５６＋０．７０ｃＯ．４ｃＤ５６．３２１．心．１３ＣＩＫ细胞毒活性测定用ＭＴＴ法测定ＣＩＫ细胞毒活性，结果显示第１４／吲Ｊ（７６．６５＋１６．７８）％，达４

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响结果到峰值，表明经过１４天的诱导，ＣＩＫ细胞毒活性显著增强。具体见表２。表２ＣＩＫ细胞对Ｋ５６２细胞在不同时间的细胞毒活?ｔ生（ｎ＝１２，％）组别ＣＩＫ毒活性７ｄ５９．１１±１０．４４１４ｄ７６．６５±１６．７８２１ｄ２８ｄ３５ｄ６７．１１±１１．８１７０．５３±１５．１２６９．６６±１２．３４４胃癌患者相关临床信息的分布在化疗组和ＣＩＫ治疗组之间，对影响预后的其它因素如年龄、性别、肿瘤大小、部位、是否转移等信息等进行统计分析，两组间差异无统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），具体见表３。表３两组胃癌患者一般资料（ｎ＝１８１）治疗分组临床特征例数化疗（％）性别男女年龄（岁）１４１４０ｆＣＩＫ（％）Ｐ值８０（７６．２）２５（２３．８）６１（８０．３、０．４２５０．５１５１５（１９．７、９５—６０＞６０１７８５７９ｌＯ（９．５）７（９．２）３５（４６．０）０．０６３３４（４４．８）０．９６９５０（４７．６）４５（４２．９）胃癌部位８贲门部是否胃体部是否胃窦部是否４８１３３７８１０３６９１１２３７（３５．２、６８（６４．８）３２（４２．１）０．８８１０．３４８４４（５７．９、４６（４３。８）５９（５６．２、３２（４２．１）０．０５２０．８１９４４（５７．９）２９（２７．６）７６（６２．４）１５１９（２５．０）０．１５５５７（７５．０）０．６９４一————————————————————————————————————————————————一结果一塑堕里兰重量塑墨堡塑塑塑堑里塑型茎垂塑生查箜墅堕肿瘤大小ｂ＜５ｃｍ８０４７（５１．Ｏ、３３（４５．９、０．３９４０．５３０＞＿５ｃｍ７７４９（４９．０、２８（５３．１）组织学类型“分化型６３３８（３６．９）２５（３６．８）０．００００．９８６低分化型１０８６５（６３．１）４３（６３．２）浸润深度６未侵及深肌层２５１８（１８。８）７（１０。８）１．８８２０．１７０侵及深肌层１３６７８（７１．２）５８（８９．２、淋巴结转移６阴性４０２１（２１．９）１９（２９。２）１．１２３０．２８９阳性１２１７５（７８．１）４６（７０．８）复发有１０５６５（６１．９）４０（５２．６）１．５５７０．２１２无７６４０（３８．１）３６（４７．４）病理分级２１（１．Ｏ、１（１．３、２８１９（１８．１）９（１１．８）５．０６５０．１６７９７４９（４６．７）４８（６３．２）５４３６（３４．２）１８（２３．７、ａ：部分病例的部位有重复；ｂ：有缺失５ＣＩＫ治疗组与化疗组胃癌患者无瘤中位生存时间的比较化疗组中位无瘤生存时间１７．０ｆ１］（１０．０～２４．４），ＣＩＫ治疗组中位无瘤生存时间３９．０（２４．８～５３．２）。ＣＩＫ治疗组胃癌病人的无瘤中位生存时间明显高于化疗组（３９．０比１７．０月），差异有统计学意义（Ｚ＝９．７２２，Ｐ＝０．００２），具体见表４。两组生存率曲线比较见图３。１６细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响结果０?ｓ累ｊ！｝；｛１３，６生存牢０．４６０００Ｓ０００１００００１：０．００１４０，００时阀（日）图３化疗组与ＣＩＫ治疗组比较的无瘤生存曲线图表４化疗组与ＣＩＫ治疗组治疗胃癌无瘤生存时间的比较化疗组１７．０００．０－２４．４）９．７２２０．００２ＣＩＫ治疗组３９．０（２４．８－５３．２）６ＣＩＫ细胞治疗组治疗次数与化疗组无瘤生存率曲线的比较化疗组中位无瘤生存时间２０．Ｏ月（１０．５～２５．５），ＣＩＫ治疗组治疗１—１０次中位无瘤生存时间２６．０月（１４．９～３７．１），ＣＩＫ治疗组治疗１０次以上中位无瘤生存时间５９．０月（４７．３．７７．７）。与单纯化疗组比较，随着ＣＩＫ治疗次数的增加，胃癌病人无瘤生存率曲线下面积明显增加，三组生存率曲线差异有统计学意义（妒＝１４．７６９，Ｐ＝０．ｏ００１），具体见表５。三组生存率曲线比较见图４。结果细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响０Ｓ累良０６牛存事０Ｊ０叩２０００∞００６８００Ｓ０００１００００１２０６０ｌ加叩忤｝问ｆ门Ｉ图４不同的ＣＩＫ细胞治疗次数与无瘤生存期曲线的比较表５不同的ＣＩＫ细胞治疗次数治疗胃癌无瘤生存时问的比较竺翌！竺翌竺竺竺竺竺芝鲎竺！竺化疗组２０．０（１０．５－２５．５）ＣＩＫ治疗组１４．７６９０．０００１１．１０次２６．０（１４．９－３７．１）＞１０次５９．Ｏ（４７．３－７７．７）１细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响讨论讨论多项研究表明，胃癌术后的辅助放化疗可提高无疾病进展生存时间与总生存期，但总的生存时间没有显著提高【１０，１１】。胃癌的复发与转移是其治疗失败的主要原因之一，化疗后残存肿瘤细胞的清除依赖于机体的免疫系统，清除化疗后残存的肿瘤细胞依赖于机体的免疫系统，然而多周期的化疗会使患者在一定程度上处于机体免疫功能低下的状态，这可能是术后经化疗复发率仍然比较高的重要原因。术后辅助化疗后，体内对化疗敏感的残存肿瘤细胞大部分得到清除，是免疫治疗较好的时机，ＣＩＫ细胞的杀伤肿瘤细胞活性更强于以往报道的一些抗肿瘤效应细胞，其体外扩增快，杀瘤活性高且杀瘤谱广，对正常骨髓造血前体无细胞毒性，并能分泌多种细胞因子，进一步提高免疫效应细胞的细胞毒作用等特性，被认为是新一代抗肿瘤过继免疫治疗的首选方案。以往有报道Ｓｈｉ等【１２Ｊ进行动物试验发现，ＣＩＫ细胞联合化疗药物对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用大于单独应用ＣＩＫ细胞或化疗药物。细胞免疫治疗与化疗对ＭＤＲ肿瘤的协同治疗，在近年来的临床应用中已有相关报道。对于多数手术后的内源性耐药肿瘤（如肾癌）患者以及接受放化疗甚至骨髓移植等缓解后的肿瘤患者而言，免疫效应细胞联合化疗对消除其体内表达耐药蛋白的残余肿瘤细胞可能会有更好的效果。而对于放化疗等无效的中晚期耐药肿瘤患者，亦有希望成为发展前景良好的综合治疗方案。我们前期研究采用Ｙ染色体特异性ＤＮＡ探针可以确定了ＣＩＫ细胞在患者体内的生存时间ｕ引，且ＣＩＫ细胞对Ｋ５６２细胞的细胞毒活性在１４～２１ｄ时达峰值。ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞由起初的（０．７＋０．４）％上升到１４ｄ的（３１．６土５．５）％与２１ｄ的（３５．８＋９．７）％。经ＣＩＫ细胞治疗后病人的肿瘤标志物水平下降，而ＮＫ与Ｔ细胞亚群水平明显升高，且ＣＩＫ升高尤为显著，同时提高了患者的生活质量，总缓解率６１．８％。用ＣＩＫ细胞回输治疗晚期胃癌病人可提高患者的细胞免疫功能，并改善其临床体征，无明显毒副作用。肿瘤生物治疗是应用各种生物制剂和手段来启动调节增强机体的免疫和抗癌能力，且维护机体生理平衡。免疫活性细胞对化疗不敏感的Ｇ。期肿瘤细胞具有杀伤性，可降低肿瘤复发，提高５年生存率。本研究结果显示，与化疗组相比，ＣＩＫ治疗组胃癌病人的无瘤中位生存时间明显高于化疗组（３９．０比１７．０月），差别有统计学意义（妒＝９．７２２，Ｐ＝０．００２）。与单纯１９

讨论细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响化疗组相比，随着ＣＩＫ治疗次数的增加，三组生存率曲线差别有统计学意义（Ｚ２＝１４．７６９，Ｐ＝０．０００１），ＣＩＫ治疗组死亡风险明显降低。自体ＣＩＫ细胞治疗能清除不能用手术切除的极微小癌灶或在体内散存的癌细胞，起到延缓或阻止肿瘤的转移与复发，疗效确切，它在降低胃癌的复发率，提高胃癌患者生存质量与延长其生存时间起到了重要作用。因此，对于胃癌术后化疗以后进行ＣＩＫ细胞输注治疗十分必要。综上所述，ＣＩＫ细胞治疗可以显著延长胃癌患者的中位生存时间，具有广阔的临床应用前景，有可能成为胃癌免疫治疗的新策略，但ＣＩＫ诱导胃癌细胞凋亡的机制有待于进一步研究。２０细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响小结与展望小结与展望１小－结在我国胃癌的５年存活率仍较低。多项研究表明，肿瘤之所以能够在体内增殖、转移，主要原因是肿瘤缺少非主要组织相容性抗原（ＭＨＣ）等能激活Ｔ细胞的分子，不能被Ｔ细胞识别，而无法激活Ｔ细胞介导的主动免疫。而恶性肿瘤的过继性免疫治疗已成为肿瘤常规治疗的重要辅助手段。在临床上，淋巴因子激活的杀伤细胞已成功用于某些肿瘤的治疗，取得一定的疗效。大量的具有抗肿瘤活性细胞输人体内可以通过直接的靶向肿瘤细胞进行杀伤或导致其凋亡，也可通过分泌的细胞因子来增强机体已减退的免疫功能。本研究得出结论：（１）化疗后的胃癌病人再予以ＣＩＫ细胞免疫治疗，较单用化疗更加有效；（２）随着ＣＩＫ细胞治疗次数增加，胃癌患者死亡风险降低。通过诱导后ＣＩＫ细胞的数目及细胞毒活性在１４天至２ｌ天间达到最高峰。所以我们认为第１４天为ＣＩＫ输注的最佳时机。通过联合应用化疗和ＣＩＫ细胞治疗的病人，其血清肿瘤标志物的水平明显下降，且自身的免疫反应明显上升。近期疗效和生活质量也得到了提高。２展望ＣＩＫ细胞凭借其增殖速度快、杀瘤活性高的优势，逐步应用于临床，并已经取代了ＬＡＫ细胞成为新一代肿瘤过继免疫治疗的新手段。尽管有着非常广阔的应用前景，但还是存在许多有待解决的问题，需要更加深入的探索和多方面研究。在临床治疗上，体内外环境对ＣＩＫ细胞影响的差异及同步注射ＩＬ。２等细胞因子对其疗效是否有提高等问题尚存争议；对于不同临床阶段的肿瘤患者，白体ＣＩＫ细胞的体外增殖、杀瘤特点及体内治疗作用尚需进一步研究。此外，建立ＣＩＫ细胞过继免疫治疗的统一方案、ＣＩＫ细胞的最佳培养途径、ＣＩＫ细胞的应用剂量及回输途径等方面均尚待继续深入探讨。所以，继续扩大ＣＩＫ细胞的基础和临床应用研究将成为今后的主要发展方向。２ｌ查考文献细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响参考文献【１】吴瑾，刘丹，吴华星等．血清ＭＧ７．Ａｇ与ＰＧ联合检测对胃癌早期诊断的临床应用价值．现代肿瘤医学，２００８，１６（３）：３９０．３９３．【２】郭丽云，马彬，杨克虎等．放疗联合手术治疗胃癌的Ｍｅｔａ分析．肿瘤，２０１０，３０（４）：３０３－３０９．［３】欧阳一鸣，王昆华，龚昆梅等．胃癌手术治疗与预后的相关因素分析．中国医药导报，２００９，６（２）：２８．２９．［４】ＪｉａｎｇＪ，ＸｕＮ，ＷｕＣｅｔａ１．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆａｄｖａｎｃｅｄｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｂｙｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ．ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓ，２００６，２６（３Ｂ）：２２３７—２２４２．［５】蒋敬庭，吴昌平，沈月平等．细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌次数与患者死亡风险的相关性研究．中华消化杂志，２００９，２９：５５７．５５８．【６】６ＪｉａｎｇＪＹ，ＳｈｅｎＹＰ，ＷｕｃＰ，ｅｔａ１．ＩｎｃｒｅａｓｉｎｇｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆＣＩＫｃｅｌｌｓａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｍａｙｄｅｃｒｅａｓｅｒｉｓｋｏｆｄｅａｔｈｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ．ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１０，１６（４８）：６１５５－６１６２．［７】蒋敬庭，吴昌平，沈月平等．协同刺激分子Ｂ７．Ｈ４影响细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌预后的多因素ＣＯＸ模型分析．中华实验外科杂志，２０１０，２７：６５６．６６０．［８】蒋敬庭．ＣＩＫ细胞培养液及培养ＣＩＫ细胞的方法．国家知识产权局，２０１０，国家发明专利：专利号：ＺＬ２００７１００７９５６２．Ｘ．［９】ＷｕＣ，ＪｉａｎｇＪ，ＳｈｉＬ，ｅｔａ１．Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｌｕｎｇｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｓｕｆｆｅｒｉｎｇｆｒｏｍａｄｖａｎｃｅｄｎｏｎ．ｓｍａｌｌｃｅｌｌｃａｎｃｅｒ．ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓ，２００８，２８（６Ｂ）：３９９７－４００２．【１０】马建勋，叶兰萍，马晓俊等．１２Ｃ与ｘ射线辐照人胃癌细胞ＢＧＣ．８２３后细胞周期及Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因表达的研究．中华实验外科杂志，２０１１，２８（５）：８１６［１ｌ】宋从旺，朱剑敏，刘德林．进展期胃癌５０例术中化疗效果分析．中华实验外科杂志，２００７，２４（７）：８６３．［１２】ＳｈｉＭ，ＹａｏＬ，ＷａｎｇＦＳ，ｅｔａ１．Ｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响参考文献ｃａｒｃｉｎｏｍａｘｅｎｏｇｒａｆｔｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅｂｙｃｏｍｂｉｎｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｈｕｍａｎｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．ＺｈｏｎｇｈｕａＺｈｏｎｇＬｉｕＺａＺｈｉ，２００４，２６（８）：４６５—４６８．［１３】邓海峰，陆明洋，徐斌等特异性ＤＮＡ探针检测细胞因子诱导的杀伤细胞在患者体内的生存时间．中华实验外科杂志，２０１１，２８（１１）：１６８—１７０．综述细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响综述－刁弓】尘细胞因子诱导的杀伤细胞在肿瘤治疗中的研究进展石旦综述蒋敬庭审校摘要：ＣＩＫ细胞是将外周血单个核细胞在体外经过多种细胞因子共同诱导而获得的一群异质细胞，其主要效应细胞为ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞，对肿瘤具有强大和广谱的杀伤活性。传统手术、放疗和化疗的方法治疗肿瘤都有一定的局限性，ＣＩＫ细胞治疗作为过继免疫治疗恶性肿瘤的新方法，具有其独特的优势，在肿瘤的综合治疗中发挥着日益重要的作用，有广阔的应用前景。关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞；肿瘤；过继免疫治疗恶性肿瘤已成为威胁人类健康的主要疾病，其发病机理和治疗方法也成为人们所关注的热点。肿瘤是在异常复杂和漫长的过程中形成【ｌ，２ｊ，在这一过程中存在宿主机体免疫系统一肿瘤细胞一细胞因子一肿瘤基质微环境等相互影响、相互作用的复杂调控网络，以致病理类型和临床分期相同的肿瘤，尽管治疗相同，在不同的个体可产生截然不同的结果。传统的化疗和放疗由于缺乏特异性，取得疗效的同时也往往给患者带来较大的毒副作用。近年来，生物治疗作为继手术、放疗、化疗三大传统疗法之后的第四种治疗手段，在肿瘤的综合治疗中发挥着日益重要的作用。肿瘤的消长与机体抗肿瘤免疫功能的改变密切相关，这提示对肿瘤患者个体免疫功能的正确评价在肿瘤综合治疗、免疫治疗中的重要性和必要性。生物化疗（Ｂｉｏｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ），作为一种肿瘤综合治疗手段，是生物治疗和化学治疗联合应用于肿瘤防治的全新综合治疗模式【３】。生物治疗手段有着良好抗肿瘤效果，而且副作用小。因此，临床上也越来越多地将其与传统的化学治疗相结合用于肿瘤治疗。细胞因子诱导的杀伤细胞（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ，ＣＩＫ）是将外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）在体外经过多种细胞因子共同诱导而获得的一群异质细胞，其主要效应细胞为ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞。研究证明ＣＩＫ杀伤肿瘤细胞效应是非ＭＨＣ限制性的，它对多种肿瘤细胞具有杀伤力、对多重耐药肿瘤细胞也同样具有敏感性，而对化疗敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞杀伤活性无显著差异。在体内输注ＣＩＫ活性细胞可以在不损伤机体免疫系统结构和功能的前提下直接杀伤肿瘤细胞，是一类新型抗肿瘤效应细胞，并可调节和增强胃癌患者的免疫功能，开创了体细胞

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响综述过继免疫治疗恶性肿瘤的新方法。１ＣＩＫ细胞的基础性研究１．１ＣＩＫ细胞的诱导产生１９９１年美国斯坦福大学ＳｃｈｍｉｄｔＷ＿０ｌｆ等【４】首先报道了一种在多种细胞因子共同作用下培养出的具有细胞毒活性的杀伤细胞，即ＣＩＫ细胞，它是将人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）在体外经过多种细胞因子（ＩＦＮ卟ｆｌＬ一２、ａｎｔｉ．ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ－１∞共同诱导而获得的一群异质细胞。它比以往研究的ＬＡＫ细胞具有更强大的肿瘤杀伤活性，且较ＬＡＫ及ＴＩＬ具有更强的增殖能力，有明确的杀瘤细胞作用，容易在体外培养，而且需要的ＩＬ一２量较少，患者应用时的毒副反应小。在ＣＩＫ细胞的诱导中，多种细胞因子和抗体的协同作用可能最终通过促进Ｔ淋巴细胞高表达ＩＬ－２受体，产生较多的内源性ＩＬ．２使Ｔ细胞活化来实现的。其中ＣＤ３单抗的作用可能是通过其与ＣＤ３一ＴＣＲ复合体偶联激活Ｔ细胞，使之大量增殖，而７－ＩＦＮ只有在ＩＬ．２加入２４ｈ前加入才能提高ＣＩＫ细胞毒活性，ＩＬ．１也能提高ＣＩＫ细胞的杀瘤活性。１．２ＣＩＫ细胞的表型ＣＩＫ细胞表面同时表达ＣＤ３和ＣＤ５６两种膜蛋白分子【５】因而兼具有Ｔ淋巴细胞强大的抗瘤活性和ＮＫ细胞的非ＭＨＣ限制性杀瘤特点。ＣＩＫ细胞中的效应细胞ＣＤ３＋ＣＤ５６十细胞在正常人外周血中极为罕见，仅１％～５％，经过１０＂－＇１２ｄ的体外多种因子诱导培养后ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞迅速增多。实验证明，扩增出的ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞来源于ＣＤ３＋ＣＤ５６。细胞，而非ＣＤ３’ＣＤ５６＋ＮＫ细胞【６，７】。同时发现在ＣＤ３＋ＣＤ５６‘的Ｔ细胞中，除ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ细胞外，其余三种Ｔ细胞亚群（ＣＤ４’ＣＤ８＋、ＣＤ４‘ＣＤ８。、ＣＤ４＋ＣＤ８＋）均可通过体外多因子培养而获得ＣＤ５６分子的表达，而由于ＣＤ４。ＣＤ８＋细胞和ＣＤ４。ＣＤ８‘细胞在正常人外周血中含量极低而间接提示此ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞绝大多数来源于外周血中ＣＤ４。ＣＤ８＋Ｔ细胞【８Ｊ。１．３ＣＩＫ细胞与ＬＡＫ细胞、ＴＩＬ细胞的表型区别ＬＡＫ细胞主要来源于ＣＤ３＋ＣＤ５６。ＮＫ细胞【９】，对靶细胞的杀伤性无ＭＨＣ限制性，但由于ＬＡＫ细胞体外扩增能力较低和体内杀肿瘤细胞活性不高，故临床推广受到限制。ＴＩＬ细胞是ＲＤｓｅｎｂｅｒｇ等［１０】１９８６年从肿瘤组织中分离出来的具有杀肿瘤细胞特性的淋巴细胞，为ＣＤ３＋ＣＤ５６‘ＣＤ８＋的免疫表型，对肿瘤细胞的杀伤有ＭＨＣ限制性，杀伤活性较ＬＡＫ细胞强。但从组织中分离的ＴＩＬ细胞功能可能发生改变并且难以获得适量的细胞数。综述细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响１．４ＣＩＫ细胞的生物学活性１．４．１增殖速度快研究表明，ＣＩＫ细胞在加入ＩＦＮ吖、ｒＩＬ．２、抗ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ．１ａ等因子培养后，细胞增殖速度迅速加快，远超过ＬＡＫ细胞。在培养第１５ｄ，ＬＡＫ细胞增殖１９倍，而ＣＩＫ细胞增殖７８倍，细胞增殖与其表面高表达ＩＬ．２Ｒ和分泌内源性ＩＬ．２有关。在培养２２ｄ时，ＣＩＫ细胞增殖曲线达顶峰，可以增ｉＪｌｌ１００倍。１．４．２杀瘤活性高ＣＩＫ细胞是以ＣＤ３＋ＣＤ５６＋Ｔ细胞为主的异质细胞群，较以ＮＫ细胞为主的ＬＡＫ细胞具有更强大的杀瘤活性【１１】。肿瘤克隆抑制实验显示，ＣＩＫ细胞的瘤细胞抑制ｌｏｇ指数为２．５＂－＇３．５，较ＬＡＫ细胞的瘤细胞抑制指数高２个ｌｏｇ［４１。体内实验中，对于重症联合免疫缺陷鼠（ＳＣＩＤ）Ｐ人淋巴瘤模型、ｓ１８０（克洛肉瘤）荷瘤鼠模型、Ｈ．２２（肝癌腹水瘤）动物模型、ＯＣＵＭ一２ＭＤ３胃癌腹膜种植转移模型及肝癌（ＢＥＬ．７４０２细胞系）动物模型的研究均表明，ＣＩＫ细胞在清除肿瘤病灶与抑制其转移，并延长生存期方面明显优于ＴＩＬ、ＬＡＫ或ＣＤ３ＡＫ细胞。ＷｏｌｆＳ［１２１研究发现ＣＩＫ细胞对多重耐药肿瘤细胞同样敏感，对化疗敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞杀伤活性无显著差异。Ｍｅｈｔａ等【１３１观察至ＩＪＣＩＫ细胞杀瘤活性不受免疫抑制剂ＣｓＡ和ＦＫ５０６等的影响。１．４．３杀瘤谱广ＣＩＫ细胞又称为ＮＫ细胞样Ｔ淋巴细胞，既具有Ｔ淋巴细胞强大杀伤活性，也具有ＮＫ细胞杀伤时的非ＭＨＣ限制性。对于多种肿瘤细胞系（包括ＮＫ敏感的Ｋ５６２和ＮＫ不敏感的Ｈｅｌａ、ＨＬ一６０，人Ｂ淋巴瘤细胞系ＯＣＩ．ＬＹ８，人胃癌腹膜转移细胞株ＯＣＵＭ．２ＭＤ３，肝癌细胞系ＢＥＬ．７４０２）均表现出强大的杀伤活性。１．４．４抵抗效应细胞凋亡有研究表ｎ凋ＣＩＫ细胞在培养中表达ＦａｓＬ［１４】，能抵抗ＦａｓＬ＋肿瘤细胞引发的效应细胞Ｆａｓ—ＦａｓＬ凋亡，又可诱导Ｆａｓ＋肿瘤细胞凋亡。１．４．５对正常骨髓造血前体无细胞毒性Ｓｃｈｍｉｄｔ．Ｗｏｌｆ掣４】的研究认为ＣＩＫ细胞对正常骨髓细胞毒性较小，可以保存７５％以上的ＣＦＵ—ＧＭ集落。ＣＩＫ细胞对正常骨髓的抑制可能与ＣＩＫ细胞产生的肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、干扰素（ＩＦＮ）和淋巴细胞毒素等细胞因子有关。１．５ＣＩＫ细胞生物学活性的影响因素１．５．１外源性细胞因子２６细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响综述ＣＩＫ细胞的体外扩增及生物学活性依赖于外源性细胞因子，实验比较了外源性ＩＬ．２、ＩＬ．７、ＩＬ．１２对ＣＩＫ细胞的影响，发现ＩＬ．２、ＩＬ．７ｔ１５１、ＩＬ．１２对ＣＩＫ细胞毒活性没有影响，但细胞增殖率、抗原表达及坏死细胞比例有较大差异。存在ＩＬ－２和ＩＬ－７条件下，ＣＩＫ细胞增殖率较高，ＣＩＫ细胞表面相应受体表达量降低；与ＩＬ－２相比，ＩＬ．７可提高ＣＤ２８分子表达，明显增力Ｉ］ＣＤ４＋细胞的比例；ＩＬ．１２会降低ＣＩＫ细胞表面ＩＣＡＭ２１表达，提高ＣＤ５６的表达，可增加ＣＩＫ细胞中坏死细胞的比例。１．５．２生物活性物质研究发现银杏叶提取物‘１６】及茶多酚【１７】在一定浓度时均能明显提高ＣＩＫ细胞对肿瘤细胞杀伤活性。银杏叶提取物浓度为５００ｍｇ／Ｌ，茶多酚含量在４００ｍｇ／Ｌ，诱导时间为４ｈ，增高最为显著。在有效浓度内，对人ＣＩＫ细胞无细胞毒性。１．５．３ＣＩＫ细胞的来源自体ＣＩＫ细胞可避免由于交叉感染引发的其它疾病，具有很强细胞毒作用，对耐药肿瘤同样有效，而且对正常细胞无损伤。实验结果表明，其有效成分和生物学活性不会受肿瘤患者的病情轻重，转移与否的影响，可为不同临床阶段尤其是晚期重症患者开辟一条可行的治疗途径。脐血ＣＩＫ细胞来源广泛，输注脐血ＣＩＫ细胞不易引起严重移植物排斥反应。有研究证实脐．血ＣＩＫ细胞可诱导Ｋ５６２细胞凋亡【１８】。虽尚未有实验对成人外周血与脐血ＣＩＫ细胞活性比较，大量体外实验已为进一步临床应用奠定基础。骨髓来源的ＣＩＫ细胞增殖能力较外周血来源的ＣＩＫ细胞稍差，这可能与骨髓和外周血单个核细胞中免疫细胞的分化程度不同及二者的细胞因子调节网络不同有关。但骨髓来源的ＣＩＫ细胞仍具有相当高的增殖能力，且在细胞毒方面与外周血ＣＩＫ细胞相比，无显著性差异。２ＣＩＫ细胞的作用机制２．１对肿瘤细胞的直接杀伤Ｍｅｈｔａ等研究认为，ＣＩＫ细胞释放胞浆颗粒入细胞外间隔，通过颗粒内含物发挥对靶细胞直接杀伤作用ｌｌ引。释放颗粒途径有两条：＠ＣＩＫ识别结构刺激其表面配体ＬＦＡ．１导致颗粒依赖性细胞溶解，该途径对细胞ｃＡＭＰ水平敏感，而对免疫抑制药物ＣｓＡ和ＦＫ５０６有抵抗作用。②ＯＫ表面的ＣＤ３或类似ＣＤ３受体被激活导致颗粒介导的杀伤作用，该途径对细胞Ｉ为ｃＡＭＰ水平和免疫抑制药物ＣｓＡ和ＦＫ５０６都很敏感。ＬＦＡ２１矛Ｉ］细胞间黏附分子（ＩＣＡＭ２１）在介导ＣＩＫ细胞杀伤靶细胞时起着非常重２７综述细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响要的作用，ＬＦＡ２１抗体和ＩＣ州２１抗体均可使ＣＫ细胞对靶细胞的杀伤活性明显降低。２．２活化后产生的大量炎性细胞因子的抑瘤杀瘤作用大量实验证明，培养的ＣＩＫ细胞可以分泌多种细胞因子，如ＴＮＦ一０【、ＩＬ．２、ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－ｙ等，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，还可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤肿瘤细胞。２．３诱导肿瘤细胞凋亡Ｖｅｍｅｒｉｓ等【１４】的实验提示，ＣＩＫ细胞在培养过程中表达ＦａｓＬ，能抵抗ＦａｓＬ＋肿瘤细胞引发的效应细胞Ｆａｓ－ＦａｓＬ凋亡，又可诱导Ｆａｓ＋肿瘤细胞凋亡，发挥对肿瘤细胞慢性杀伤作用，保证抗瘤活性的长期持久。岑溪南等【１９１通过实验证实，ＣＩＫ细胞可诱导ｂｃｒ．ａｂｌ阳性的Ｋ５６２细胞凋亡。２．４促进Ｔ细胞增殖活化ＣＩＫ细胞体内抗瘤作用可能与促进宿主体内Ｔ细胞增殖活化有关。原始的ＣＤ３＋ＣＤ５６＋Ｔ细胞随ＣＩＫ输注体内后，在宿主机体状态或肿瘤抗原刺激下转变成具有杀瘤活性的细胞毒性Ｔ细胞，而发挥抗瘤作用【２０１。细胞毒活性与肿瘤的发生、发展及转移呈负相关，是判断机体抗肿瘤水平的重要标志之一。而癌性胸水中的淋巴细胞是一种特殊形式的ＴＩＬ细胞，主要源于Ｔ淋巴细胞，能识别肿瘤细胞后再杀伤肿瘤细胞。ＣＩＫ细胞是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养后获得的一群异质细胞，由于它同时表达ＣＤ３和ＣＤ５６两种膜蛋白分子，故又被称为ＮＫ细胞样Ｔ淋巴细胞，兼具有Ｔ淋巴细胞强大的抗瘤活性和ＮＫ细胞非ＭＨＣ限制性杀瘤特点。ＣＩＫ细胞是继ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞之后的又一更为有效的杀瘤细胞。３ＣＩＫ细胞与共刺激分子Ｂ７．Ｈ４３．１Ｂ７．Ｈ４概述共刺激分子Ｂ７．Ｈ４是Ｂ７家族的新成员，在正常的人体细胞组织基本上不表达，在体外通过抑制Ｔ细胞增殖和细胞因子产生【２１，２２】。在机体免疫应答过程中，Ｂ７．Ｈ４共刺激分子为诱导性表达，与ＭＨＣ分子的复合物产生的信号主要是通过抑制ＣＤ４＋Ｔ细胞的活化、增殖和克隆扩增，从而抑制Ｔ细胞的增殖，Ｂ７．Ｈ４是免疫系统的一种抑制因子。３．２Ｂ７．Ｈ４的表达与肿瘤的关系Ｂ７．Ｈ４在肿瘤微环境中选择性表达，借此抑制肿瘤特异性Ｔ细胞免疫１２３１，不２８细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响综述平衡的免疫调节严重影响肿瘤微环境中特异性Ｔ细胞的免疫功能，并可改变肿瘤的进展、转移和影响肿瘤患者的免疫治疗。Ｂ７．Ｈ４分子的表达与肿瘤患者的生存期密切相关。Ｂ７．Ｈ４的体外实验发现，Ｂ７反义肽封闭的ＤＣ可以抑制Ｔ细胞增殖【２４】，也能够抑制细胞因子分泌和ＣＴＬ的诱导，其机制是通过抑制细胞周期中的Ｇ０／Ｇ１期和细胞分裂，在相对早期阶段抑制Ｔ细胞反应。Ｐｒａｓａｄ等瞄Ｊ认为Ｂ７－Ｈ４介导的抑制Ｔ细胞反应能够被抗．Ｂ７．Ｈ４的封闭抗体逆转，引起更强的增殖和ＩＬ．２的产生，显示了Ｂ７．Ｈ４在Ｔ细胞反应负性调节中的重要地位【２６】。肿瘤微环境则包括肿瘤细胞分泌的可溶性抑制因子，能够直接诱导的细胞间的抑制信号【２７｜，同时Ｂ７一Ｈ４可使细胞连接抑制作用加强【２８】。肿瘤组织中Ｂ７．Ｈ４的过度表达可能有助于肿瘤细胞逃避免疫攻击，导致了肿瘤患者的免疫功能降低，使其生存期缩短。３．３ＣＩＫ细胞治疗与肿瘤Ｂ７．Ｈ４的表达肿瘤细胞表达协同刺激分子Ｂ７．Ｈ４能加速肿瘤的发展和进程，Ｂ７．Ｈ４可能是影响肿瘤进展和预后的重要肿瘤标志物之一。已有临床证据显示：Ｂ７．Ｈ４高表达肾癌患者的死亡风险是Ｂ７．Ｈ４低表达患者的３倍，Ｂ７．Ｈ４阳性率与卵巢癌的分期、分级呈正相关幽Ｊ。ＣＩＫ细胞己成为临床应用的一种理想效应细胞。用ＣＩＫ细胞回输治疗胃癌患者可提高患者的细胞免疫功能，增加了胃癌患者的两年生存率【３０】。肿瘤患者经手术与化疗后机体细胞免疫功能正处于低下状态，而ＣＩＫ细胞可通过多种途径杀伤、溶解胃癌肿瘤细胞的同时，其免疫学指标得到显著的改善。在化疗联合ＣＩＫ细胞的肿瘤治疗中，化疗药物可诱导肿瘤细胞ＭＨＣＩ类分子的表达，介导更为有效的ＣＩＫ细胞杀伤肿瘤细胞的能力【３ｌ】。化疗药物也可以上调肿瘤细胞表面协同刺激分子Ｂ７．１／Ｂ７．２的表达，下调肿瘤细胞表面协同刺激分子Ｂ７．Ｈ４的表达，进而促进Ｔ细胞对肿瘤细胞的杀伤【３２ｌ，更加有利于ＣＩＫ细胞杀灭和清除残余的肿瘤细胞。同时，肿瘤的复发与转移是治疗失败的主要原因之一，清除化学治疗后残存的肿瘤细胞依赖于机体的免疫系统，在机体免疫应答过程中，协同刺激分子Ｂ７．Ｈ４为诱导性表达，与ＭＨＣ分子的复合物产生的信号主要是通过抑制ＣＤ４＋Ｔ细胞的活化、增殖和克隆扩增，从而抑制Ｔ细胞的增殖，ＣＩＫ细胞的细胞毒活性可被抗淋巴细胞功能相关抗原．Ｉ（ＬＦＡ．１）或抗细胞间粘附分子．Ｉ（ＩＣＡＭ．１）的单克隆抗体所阻滞，提示细胞表面粘附分子在ＣＩＫ细胞识别肿瘤过程中起关键作用。ＣＩＫ细胞的治疗能够有效地控制和干预Ｂ７．Ｈ４的表达并延长肿瘤患者的生存时间。同时，ＣＩＫ细胞活化后产生大量的炎性细胞因子，如ＩＬ．２、２９

综述细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响ＩＦＮ卟ＴＮＦ．０【等，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，还可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤肿瘤细胞【３３１。在ＣＩＫ细胞诱导的过程中，由于ＩＦＮ．ｖ等细胞因子的作用或／和活化诱导的细胞死亡（ＡＩＣＤ）机制导致对Ｆａｓ敏感的或已被活化的Ｔ细胞逐渐被选择性清除，最后诱导获得的ＣＩＫ细胞对Ｆａｓ耐受。此外，由于细胞型Ｆａｓ相关死亡区域蛋白样白介素．１Ｄ转换酶抑制蛋（ｊ（ｅＦＬＩＰ）的存在及Ｆａｓ死亡区结合蛋白（ＦＡＤＤ）水平很低，影响了包括Ｂ７．Ｈ４负性信号的传导，ＣＩＫ细胞高水平表达Ｂｃｌ．２、Ｂｅｌ－ｘＬ、ＤＡＤＩ、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ等抗凋亡基因，由此共同导致了ＣＩＫ细胞可以耐受表达ＦａｓＬ的肿瘤细胞诱导的凋亡，从而对肿瘤细胞进行有效的杀伤。４ＣＩＫ细胞治疗肿瘤的临床应用４．１传统的三大肿瘤治疗方式４．１．１手术方法治疗肿瘤手术治疗是最古老也是最常用，并且在某些情况下最有效的治疗恶性肿瘤的方法，但由于肿瘤病程和分期的不同，使得部分患者难以通过手术治疗，这是手术治疗的局限性［３４１。而且恶性肿瘤的生物学特性决定了肿瘤手术不同于一般外科手术，任何检查或操作的不当都可以造成肿瘤的扩散。手术治疗是针对实体肿瘤而言的。由于肿瘤的生物学特性的不同，分期的不同，能够应用手术进行治疗的，仅占实体肿瘤的一部分【３孔。通常认为：Ｉ期肿瘤是必须积极手术治疗的，此期手术，效果好，生存期长。据报道：Ｉ期食管癌的５年生存率可达９０％以上。ＩＩ期肿瘤也应积极手术治疗，ＩⅡ期恶性肿瘤应积极争取手术治疗，Ⅳ期由于多有远处转移，很难通过手术而治愈。恶性肿瘤原发灶的切除是肿瘤手术治疗的主要内容，根治性手术是主要手段。根治性手术是指对原发灶的广泛切除并连同周围淋巴结转移区的整块切除。目前对肿瘤局限于原发部位及区域淋巴结而未发现有其他转移病灶，患者全身情况能够耐受手术者，均适应于作根治术。目前，早期癌肿手术治疗后５年生存率可达８０％以上【３６１，但是，出现症状后就医的患者中，大多数为ⅡＩ、Ⅳ期患者，远远超出了局限性范围，治疗失败的原因主要是血道的播散，因而，加强综合治疗是提高疗效的关键。有些肿瘤在经过综合治疗后疗效已经有了很大的提高，如骨肉瘤、肢体软组织肉瘤等，单纯手术治疗５年生存率仅仅为１０＂～２０％，应用综合治疗后其５年生存率可达７５％以上。同时，综合治疗的应用也为各种保肢手术的开展提供了保障，创造了良好的条件。细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响综述４．１．２肿瘤的放射治疗肿瘤放射治疗是利用放射线如放射性同位素产生的０【、ｐ、１，射线和各类Ｘ射线治疗机或加速器产生的Ｘ射线、电子线、质子束及其它粒子束等治疗恶性肿瘤的一种方法。肿瘤放射治疗（简称放疗）就是用放射线治疗癌症。放射治疗已经历了一个多世纪的发展历史，目前放射治疗仍是恶性肿瘤重要的局部治疗方法。大约７０％的癌症病人在治疗癌症的过程中需要用放射治疗，约有４０％的癌症可以用放疗根治。放射治疗在肿瘤治疗中的作用和地位日益突出，已成为治疗恶性肿瘤的主要手段之一【３¨。但是，单纯放疗对肝肾胃肠道的损伤相当大，放疗的剂量受到很大限制，对不敏感的肿瘤难以提高剂量，效果就差。因此，根据肿瘤病人情况设定个性化综合治疗方案是非常必要的。４．１．３肿瘤的化学治疗肿瘤化学治疗（简称化疗），是利用化学合成药物治疗恶性肿瘤的方法。在恶性肿瘤治疗的诸多手段中，化疗作为一种全身性的治疗方法，有可能最大限度地杀灭患者体内的肿瘤细胞【３８１，因此，随着医学的发展，化疗已经不再是单纯起姑息性治疗作用的手段，正在从姑息向根治过渡【３９】。１９９８年世界卫生组织指出：使用适当，化疗在部分肿瘤（恶性滋养细胞肿瘤、急性淋巴细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、睾丸癌、急性粒细胞白血病、肾母细胞瘤、胚胎性横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、小细胞肺癌和卵巢癌等）中已成为可以治愈肿瘤的根治性治疗手段（单独或综合治疗）。经辅助化疗后可能治愈的肿瘤有乳腺癌、成骨肉瘤、大肠癌、骨肉瘤、Ｅｗｉｎｇ肉瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、软组织肉瘤及肾母细胞瘤等。化疗在部分晚期肿瘤中起姑息性治疗作用，如延长患者生命、减轻症状和减少痛苦，如胃癌、食管癌、非小细胞肺癌、头颈部癌、肾癌、黑色素瘤、前列腺癌和子宫内膜癌等。尽管化疗在恶性肿瘤的治疗中占有非常重要的地位，但是在临床实践中，化疗结果往往不尽如人意。目前临床上通常的做法是：根据国际肿瘤临床试验的循证研究结果，得知不同的化疗药物对不同肿瘤的治疗敏感性不同，即每一种肿瘤有相应有效的化疗药物敏感谱，从而选择疗效最高的化疗单药或多种药物组成的联合方案进行治疗。但在临床上，经常是经循证研究公认为对某种肿瘤有效的治疗方案，而对有的患者却毫无效果。如阿霉素对浸润性乳腺癌是一种具有里程碑意义的治疗药物，但仍有５０％的浸润性乳腺癌病人对这种药不敏感。又如健择，综述细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响公认对非小细胞肺癌疗效明显，但也有６０％以上的病人疗效并不明显。这是因为肿瘤是一个异质性、多形态、分化程度不等的细胞群体。肿瘤对各种化疗药物的敏感性存在着明显的个体差异。即不同的肿瘤类型或同一类型的不同病人，甚至同一病人在不同的发病阶段，对化疗的敏感性并不完全相同，治疗效果差别也很大。至今还没有一种化疗药物或几种化疗药物的联合应用，能对某一种肿瘤１００％有效。而且，化疗药物往往在杀灭肿瘤细胞的同时对机体各器官的毒性也非常大，所以，我们有必要寻求新的肿瘤治疗方法。４．２ＣＩＫ细胞在肿瘤治疗中的应用４．２．１ＣＩＫ细胞治疗的方法体细胞治疗是指应用人的白体、同种异体或异种（非人体）的体细胞经体外操作后回输（或植入）人体的治疗方法。这种体外操作包括细胞在体外的传代、扩增、筛选以及药物或其他能改变细胞生物学行为的处理。经过体外操作后的体细胞可用于疾病的治疗，也可用于疾病的诊断或预防。体细胞治疗具有多种不同的类型，包括体内回输体外激活的单个核细胞如多种因子诱导的杀伤细胞（ＣＩＫ）、肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）等。ＣＩＫ细胞治疗肿瘤就是一个体细胞治疗的过程。ＣＩＫ细胞治疗肿瘤过程中，首先从患者外周血中提取单个核细胞（具有抗癌功能的免疫细胞），采集的细胞在实验室进行细胞活化、增殖、刺激，大约经过一周的时间，细胞培养完成。此后，对细胞进行细胞毒活性和表型检测，以保证回输到患者体内的细胞具有一定数量和肿瘤细胞杀伤性，且存活率达到９９．９％。而后，将ＣＩＫ细胞回输到肿瘤患者体内，隔天一次，按疗程治疗。由于体细胞治疗的最终制品不是某一种单一物质而是一类具有生物学效应的细胞，其制备技术和应用方案具有多样性、复杂性和特殊性，因此，有必要对ＣＩＫ技术的整个操作过程和最终制品制定并严格执行标准操作程序，以确保ＣＩＫ治疗的安全与有效。其包括ＣＩＫ细胞的采集、制备、检测和体外操作过程的质量控制以及疗效评估。４．２．２ＣＩＫ细胞治疗的适宜人群ＣＩＫ细胞治疗肿瘤的适应症主要有：①各种免疫原性较强的肿瘤，如：肺癌、胃癌、肾癌、黑色素瘤等；②原发灶去除后免疫力低下，恢复慢，预防肿瘤复发，如：胃癌术后、肺癌术后、肝癌术后等；③肿瘤广泛转移，无法进行手术者；④对放化疗不敏感或者担心放疗化疗巨大副作用不愿意放化疗的肿瘤患者；⑤常规３２细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响综述治疗后（手术及放化疗）需要提高身体免疫力者；⑥肿瘤临床康复后的肿瘤复发预防等。４．２．３ＣＩＫ细胞治疗的效果经过大量的临床实践和研究，ＣＩＫ细胞治疗能有效缓解放化疗毒副作用，增强放化疗效果，并有效清除肿瘤术后残余肿瘤细胞，防治肿瘤复发，尤其在提高患者生活质量，延长患者生存期方面表现突出。具体表现在减轻病人的痛苦，提高生活质量，同时增强食欲、改善睡眠、增强体力，增加体重。大多数患者经过手术、介入等治疗的同时或之后，结合ＣＩＫ细胞治疗能进一步清除体内外残留的非正常细胞。患者的甲胎球蛋白值可有下降，ＨＢＶＤＮＡ可阴转，肝功能也可恢复正常。同时，患者血液中抗肿瘤免疫细胞数量和功能显著提高，并能维持较长时间。４．２．４ＣＩＫ细胞治疗的优势ＣＩＫ细胞治疗作为恶性肿瘤的一种新型治疗方式，具有其独特的优势。ＣＩＫ细胞增殖速度快，细胞数量大，细胞活性强。它具有识别肿瘤的机制，对正常的细胞无毒性作用，不破坏机体整体免疫系统功能，术后恢复快，生活质量高。其杀瘤谱广可用于白血病、淋巴瘤、肺癌、胃癌、肠癌等多种肿瘤的治疗，对多种耐药肿瘤细胞同样敏感。同时能够激发全身性的抗癌效应，对多发病灶或转移的恶性肿瘤同样有效。ＣＩＫ细胞治疗是典型的个性化生物治疗模式，将这类细胞回输后，还能使机体免疫能力提高，产生特异的抗病毒作用，从而对肿瘤治疗施以双重的作用。而且由于ＣＩＫ细胞是活化的自体细胞，应用比较安全。５结语以肿瘤免疫治疗为基础的肿瘤生物治疗作为现代肿瘤治疗的第四种模式，越来越受到重视。肿瘤的生物治疗更准确概括包括免疫治疗、基因治疗、分子靶向治疗、放免导向治疗、造血干细胞定向分化扩增和移植等各种新疗法。ＣＩＫ细胞作为过继免疫治疗的一种新方式，有着良好的抗肿瘤效果，而且副作用小。因此，临床上也越来越多地将其与传统的化学治疗相结合用于肿瘤治疗，从而达到最佳的治疗效果。这种肿瘤治疗新思维和新模式，也将成为现代肿瘤综合治疗新模式的里程碑。综述细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响参考文献［１］ＫａｎｅＭＡ．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇｃａｎｃｅｒ．ＣａｎｃｅｒＰｒｅｙｃａｎｃｅｒｗｉｔｈｖａｃｃｉｎｅｓ：ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｇｌｏｂａｌｃｏｎｔｒｏｌｏｆＲｅｓ（Ｐｈｉｌａ），２０１２，５（１）：２４－２９．ｅｔ［２】ＧｒｅｃｏＦＡ，ＯｉｅｎＫ，ＥｒｌａｎｄｅｒＭａ１．Ｃａｎｃｅｒｏｆｕｎｋｎｏｗｎｐｒｉｍａｒｙ：ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｓｅａｒｃｈｆｏｒｉｍｐｒｏｖｅｄａｎｄｒａｐｉｄｄｉａｇｎｏｓｉｓｌｅａｄｉｎｇｔｏｗａｒｄｓｕｐｅｒｉｏｒｐａｔｉｅｎｔｏｕｔｃｏｍｅｓ．ＡｎｎＯｎｃｏｌ，２０１２，２３（２）：２９８—３０４．【３］ＬｉｓｓｏｎｉＰ，ＲｏｖｅｌｌｉＦ，ＢｒｉｖｉｏＦｊｅｔａ１．ＡｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｓｔｕｄｙｏｆｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｖｅｒｓｕｓｂｉｏｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｐｌｕｓＡｌｏｅａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍｅｔａｓｔａｔｉｃｃａｎｃｅｒ．ＩｎＶｉｖｏ，２００９，２３（１）：１７１—１７５．［４】Ｓｃｈｍｉｄｔ—ＷｂｌｆＩＧｌｙｍｐｈｏｍａｍｏｄｅｌａｃｔｉｖｉｔｙ．ＪＥｘｐＮｅｇｒｉｎＲＳ，ＫｉｅｍＨＰ，ｅｔａ１．ＵｓｅｏｆａＳＣＩＤｍｏｕｓｅ／ｈｕｍａｎａｎｔｉｔｕｍｏｒｃｅｌｌｔｏｅｖａｌｕａｔｅｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｗｉｔｈｐｏｔｅｎｔＭｅｄ，１９９１，１７４（１）：１３９—１４９．Ａ，Ｂｏｒｌｅｒｉ［５］ＰｉｅｖａｎｉｑＴ－ｃｅｌｌＰｅｎｄｅｓｕｂｓｅｔＤ’ｅｔｔｈａｔａ１．Ｄｕａｌ－ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｃｑｕｉｒｅｓＮＫｃａｐａｂｉｌｉｔｙｏｆＣＤ３＋ＣＤ５６＋ＣＩＫｅｅｌｌｓ，ａｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｔａｉｎｓＴＣＲ－ｍｅｄｉａｔｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｂｌｏｏｄ，２０１１，１１８（１２）：３３０１．３３１０．［６］ＧｈａｒｅｈｂａｇｈｉａｎＡ，ＤｏｎａｌｄｓｏｎＣ，ＮｅｗｍａｎＪ，ｅｔａ１．ＴｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔｏｆＣＤ３－ＣＤ５６＋ｃｅｌｌｓａｎｄＮＫｐｒｅｃｕｒｓｏｒｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＩｒａｎＪＡｌｌｅｒｇｙＡｓｔｈｍａＩｍｍｕｎｏｌ，２００６，５（４）：１６７—１７５．【７】ＣａｒｌｅｎｓＳ，ＧｉｌｌｊａｍＭ，ＣｈａｍｂｅｒｓＢＪ，ｅｔｏｆｃｙｔｏｔｏｘｉｃａ１．ＡｎｅｗｍｅｔｈｏｄｆｏｒｉｎｖｉｔｒｏｅｘｐａｎｓｉｏｎｈｕｍａｎＣＤ３一ＣＤ５６＋ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ．ＨｕｍＩｍｍｕｎｏｌ，２００１，６２（１０）：１０９２—１０９８．［８】ＭａＹＺｈａｎｇＺ，ＴａｎｇＬ，ｅｔｐａｔｉｅｎｔｓａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｗｉｔｈｓｏｌｉｄｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗａｎｄｐｏｏｌｅｄａｎａｌｙｓｉｓ．Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１２，【９】ＳｈｉｍｏｄａＫ，ＳａｉｔｏＴ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＭ．ＡｂａｓｉｃｓｔｕｄｙｏｆｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｃａｎｃｅｒｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈＯＫ－４３２ａｎｄｒｌＬ一２－一ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ—ａｃｔｉｖａｔｅｄＭｉｌｅｒ（ＬＡＫ）ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｃｅｌｌｓｉｎｍｕｒｉｎｅｓｐｌｅｅｎｂｙｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＯＫ．４３２．ＮｉｈｏｎＧａｎＣｈｉｒｙｏＧａｋｋａｉＳｈｉ，１９８８，２３（７）：１５６６－１５７３．

塑堕里三重量的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响——。一————————————————————————＿－●＿＿———－———————’—————－－ｈ———————＿—●——＿—－’——＿＿＿●—＿＿＿●＿———’———————－———－———一综述［１０】ＲｏｓｅｎｂｅｒｇＳＡ，ＳｐｉｅｓｓＰ，ＬａｆｒｅｎｉｅｒｅＲ．Ａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｔｏｔｈｅａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｏｆｃａｎｃｅｒｗｉｔｈｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８６，２３３（４７７０）：１３１８－１３２１．【１１］任欢，邢淑贤，徐红薇等．ＣＩＫ的体外增殖及体内外杀瘤活性的实验研究．中国肿瘤生物治疗杂志，１９９９，６（１）：１７２２１．［１２］Ｓｃｈｍｉｄｔ—ＷｏｌｆＩＧ，ＬｅＲｅｒｏｖａＰ，ＪｏｈｎｓｔｏｎＶ，ｅｔａ１．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｍｏｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓｔｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃｅｆｆｅｃｔｏｒｃｅｌｌｓ．ＣｅｌｌＩｍｍｕｎｏｌ，１９９６，１６９（１）：８５－９０．［１３］ＭｅｈｔａＢＡ，Ｓｃｈｍｉｄｔ—ＷｏｌｆＩＧ；ＷｅｉｓｓｍａｎＩＬ，ｅｔａＬＴｗｏｐａｔｈｗａｙｓｏｆｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓｏｆｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｇｒａｎｕｌｅｃｏｎｔｅｎｔｓａｎｄｔａｒｇｅｔｃｅｌｌｋｉｌｌｉｎｇｂｙｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｉｎｄｕｃｅｄＣＤ３＋ＣＤ５６＋ｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ，１９９５，８６（９）：３４９３．３４９９．［１４］ＶｅｍｅｒｉｓＭＲ，ＫｏｍａｃｋｅｒＭ，ＭａｉｌａｎｄｅｒＶ，ｅｔａＬＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｅｘｖｉｖｏｅｘｐａｎｄｅｄＣＤ３＋ＣＤ５６＋ＴｃｅｌｌｓｔｏＦａｓ—ｍｅｄｉｍｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２０００，４９（６）：３３５—３４５．［１５］ＬｉＹＳｃｈｍｉｄｔ－ＷｏｌｆＩＧＷｕＹＦ，ｅｔａ１．Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄｐｒｏｔｏｃｏｌｓｆｏｒｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｏｒｄｂｌｏｏｄ－ｄｅｒｉｖｅｄｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒ／ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ．ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓ，２０１０，３０（９）：３４９３—３４９９．【１６】刘军权，陈复兴，黄键等．银杏叶提取物增强细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤肿瘤细胞活性的研究．陕西医学杂志，２００２，３１（５）：４６９．４７１．［１７】刘军权，陈复兴，巩新建等．茶多酚对人细胞因子诱导的杀伤细胞和胃癌细胞株作用观察．东南国防医药，２００３，５（２）：８１．８３．［１８］ＬｉＹＱｕＹＨ，ＷｕＹＦ，甜ａ／．Ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｒｅｄｕｃｅｔｈｅａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒ／ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｉｎＫ５６２ＮＯＤ／ＳＣＩＤｍｉｃｅ．ＡｎｎＨｅｍａｔｏｌ，２０１１，９０（８）：８７３—８８５．［１９］岑溪南，朱平，石永进，等．细胞因子诱导的杀伤细胞可诱导ｂｃｒ．ａｂｌ阳性的Ｋ５６２细胞凋亡．中国实验血液学杂志，２００２，１０（３）：２０１．２０４．［２０】ＦｒａｎｃｅｓｃｈｅｔｔｉＭ，ＰｉｅｖａｎｉＡ，ＢｏｒｌｅｒｉＧ，ｅｔａＬＣｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓａｒｅｔｅｒｍｉｎａｌｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄａｃｔｉｖａｔｅｄＣＤ８ｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴ－ＥＭＲＡｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．ＥｘｐＨｅｍａｔｏｌ，２００９，３７（５）：６１６—６２８．［２１］ＡｕｎｏｂｌｅＢ，ＳａｎｃｈｅｓＲ，ＤｉｄｉｅｒＥｅｔａ１．Ｍａｊｏｒｏｎｃｏｇｅｎｅｓａｎｄｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ３５综述细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响ｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒ（ｒｅｖｉｅｗ）．ＩｎｔＪＯｎｃｏｌ，２０００，１６（３）：５６７－５７６．ｉｎ［２２】Ｎｉｃｏｓｉａｏｖａｒｉａｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｓｖ，ＢａｉＷＣｈｅｎｇＪＱ，ｅｔａｔＯｎｃｏｇｅｎｉｃｐａｔｈｗａｙｓｉｍｐｌｉｃａｔｅｄｃａｎｃｅｒ．ＨｅｍａｔｏｌＯｎｃｏｌＷ，ＣｈｅｎＣｌｉｎＮｏｒｔｈＡｍ，２００３，１７（４）：９２７－９４３．［２３】ＺｏｕＬ．ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙＢ７一ｆａｍｉｌｙｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎｔｈｅｔｕｍｏｕｒｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ，２００８，８（６）：４６７－４７７．【２４】姚宇锋，项建斌，蔡端．Ｂ７反义肽预处理的受体树突状细胞诱导供体特异性的免疫低反应．中华实验外科杂志，２００６，２３（９）：１１３０．１１３２．［２５】ＰｒａｓａｄＤｖ，ＲｉｃｈａｒｄｓＳ，ＭａｉＸＭ，ｅｔａＬＢ７Ｓ１，ａｎｏｖｅｌＢ７ｆａｍｉｌｙｍｅｍｂｅｒｔｈａｔｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｓＴｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００３，１８（６）：８６３－８７３．【２６】ＳｉｃａＧＬ，ＣｈｏｉＩＨ，ＺｈｕＧＪｅｔａ１．Ｂ７－Ｈ４，ａｍｏｌｅｃｕｌｅｏｆｔｈｅＢ７ｆａｍｉｌｙ，ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｓＴｃｅｌｌｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００３，１８（６）：８４９—８６１．［２７】ＷａｎｇａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅＳ，ＣｈｅｎＬ．Ｃｏ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌｅｓｏｆｔｈｅＢ７一ＣＤ２８ｆａｍｉｌｙｉｎｐｏｓｋｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．ＭｉｃｒｏｂｅｓＩｎｆｅｃｔ，２００４，６（８）：７５９－７６６．【２８］ＣａｒｒｅｎｏＢＭ，ＣｏｌｌｉｎｓＭ．ＢＴＬＡ：ａｌｉｇａｎｄ．ＴｒｅｎｄｓｎｅｗｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｒｅｃｅｐｔｏｒｗｉｔｈａＢ７．１ｉｋｅＩｍｍｕｎｏｌ，２００３，２４（１０）：５２４—５２７．［２９］胡文蔚，蒋敬庭，吴昌平．协同刺激分子Ｂ７．Ｈ４在恶性肿瘤中的表达意义．医学综述，２０１０，１６（１）：５２—５４．【３０】王琦，蒋敬庭，邓海峰，等．细胞因子诱导的杀伤细胞治疗中晚期胃癌的疗效．江苏医药，２００７，３３（８）：８００．８０２．【３１］ＯｌｉｏｓｏＰ，ＧｉａｎｃｏｌａＲ，ＤｉＲｉｔｉＭ，ｅｔａＬＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｉｎｓｏｌｉｄａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｔｕｍｏｕｒｓ：ａｐｉｌｏｔｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌ．ＨｅｍａｔｏｌＯｎｃｏｌ，２００９，２７（３）：１３０－１３９．【３２］ＳｏｊｋａｍｏｄａｌｉｔｉｅｓＤＫ，ＤｏｎｅｐｕｄｉＭ，ＢｌｕｅｓｔｏｎｅＪＡ，ｅｔａＬｉｎＭｅｌｐｈａｌａｎａｎｄｏｔｈｅｒｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ．Ｊａｎｔｉｃａｎｃｅｒｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅＢ７一．ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＩｍｍｕｎｏｌ，２０００，１６４（１２）：６２３０－６２３６．［３３］ＳｕｎＳ，ＬｉＸＭ，ＬｉⅫＪｅｔａ１．ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｉｎｄｕｃｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＣＩＫｃｅｌｌｓｆｏｒＭＧＣ一８０３ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓ．ＣａｎｃｅｒＢｉｏｔｈｅｒＲａｄｉｏｐｈａｒｍ，２００５，２０（２）：１７３—１８０．［３４】ＷｅｌｌｎｅｒＵＦ，ＨａｉｌｅｒＦ，ＫｅｃｋＴ．Ｉｎｃｉｄｅｎｔａｌｃｙｓｔｉｃｔｕｍｏｒｉｎｔｈｅｐａｎｃｒｅａｓ：ｏｂｓｅｒｖｅ３６细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响综述ｏｒｏｐｅｒａｔｅ？Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１１，１４０（５）：ｅｌ一２．【３５】ＣｒｏｃｉＤＯ，ＳａｌａｔｉｎｏＭ．Ｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｅｅｓｃａｐｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｔｈａｔｏｐｅｒａｔｅｄｕｒｉｎｇｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．ＣｕｒｒＰｈａｒｍＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１１，１２（１１）：１９２３—１９３６．［３６］贾忠，刘国琼，金慧成，等．早期胃癌的?临床病理特征与治疗方法的选择．中国中西医结合外科杂志，２００５，１１（２）：１１２．１１４．［３７】陶仲强，王培中，梁建平，等．早期鼻咽癌手术摘除肿瘤后减量放疗可行性研究．广西医学，２００１，２３（２）：２４８．２５０．【３８］方珊珊，毛小刚．４７例早期乳腺癌患者保乳手术联合化疗临床效果研究．中国民族民间医药，２０１１，２０（２３）：２５．２６．［３９］ＫｅｌｓｅｎＤＥＡｄｊｕｖａｎｔａｎｄｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ．ＳｅｍｉｎＯｎｃｏｌ，１９９６，２３（３）：３７９—３８９．３７攻读硕士学位期间发表和完成的文章细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响攻读硕士学位期间发表和完成的文章１．石旦，沈月平，裴红蕾，郑晓，吴骏，季枚，吴昌平，蒋敬庭；细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响。中华实验外科杂志，２０１２，２９（３）：３９５－３９７．２．石旦，何小舟，徐海燕，夏萤，等；肾缺血再灌注损伤及其保护的研究进展。医学综述，２００９，１５（１８）：２８０２．２８０６．３．石旦，史伟峰；肠道病毒７１型的流行病学特征及实验诊断研究。国际检验医学杂志，２０１０，３１（１０）：１１２６．１１２８．４．石旦，李坤，史伟峰，罗光华，徐晓怡，丁翠君，等；常州地区２００９年５～１０月肠道病毒７１型遗传进化初步分析。临床检验杂志，２０１０，２８（６）：４７３．４７４．３８细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响本研究所获的基金资助本研究所获的基金资助国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．８１１７１６５３）国家自然科学基金资助项目（ＮＯ．３０９５００２２）江苏省自然科学基金项目（ＮＯ．ＢＫ２０１１２４６）江苏省卫生厅医学科技发展基金资助项目（Ｐ２００９３２）“六大人才高峰”资金资助项目（ＢＲＡ２０１００３７）３９

缩写词表细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响缩写词表英文缩写英文全称中文全称细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响缩写词表ＳＣＩＤＴＣＲＴＧＦ．ａＴＩＬＴＮＦＶＥＧＦＳｅｖｅｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＴｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－ａＴｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓＴｕｍｏｒＮｅｃｒｏｓｉｓＦａｃｔｏｒＶａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ重症联合免疫缺陷Ｔ细胞受体转化生长因子．０【肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤坏死因子血管内皮生长因子４ｌ致谢细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响致谢时光荏苒，转眼三年而过。在论文即将完成之际，敲下“致谢”两个字，心中无限感慨。回眸过去，一路走来，需要感谢的人太多，实在是这些简单的文字所不能表达和承载的。首先诚挚的感谢恩师蒋敬庭教授对我的严格要求和悉心指导，他对科学执着、严谨以及永无止境的创新意识、勤奋忘我的工作作风、渊博的学识、非凡的气质、独特的人格魅力，始终感染着我、激励着我，这些都将成为宝贵的财富让我享用终身。三年来，导师在我的课题选题、科研设计及实验实施过程中倾注了大量心血，并在工作、学习、生活等各方面给予了我大力支持，使我的课题研究任务能够如期顺利完成。感谢我的硕士启蒙恩师史伟峰副教授。三年来史教授在理论基础和动手实践能力上都给了我很多实质性的帮助，并在论文的架构和思路上提出很多宝贵的意见。史教授严谨的科研作风和平易近人的教学态度让我终身难忘，由衷地感谢史教授多年的指导和帮助。非常感谢苏州大学基础医学和生物科学学院的沈月平副教授、魏文祥教授、朱一蓓副教授、沈新娥老师三年来在我的学习和生活中给予莫大的帮助，在我最为艰苦和一筹莫展的时候伸出援手，让我内心倍感温暖。特别感谢常州市第一人民医院（苏州大学附属第三医院）的各位院领导多年来对我的关心和培养！衷心感谢中美现代医学实验室主任杨伊琳副院长、徐海燕博士、支枫、施倩倩、王榕等同事的理解、支持和帮助！衷心感谢肿瘤生物诊疗中心邓海峰、郑晓、徐斌、周怡、刘检、陆明洋、沈琼等老师，肿瘤中心主任吴昌平副院长、吴骏、季枚副主任，放疗科裴红蕾主任，正是你们的大力支持和热心帮助，才能使我顺利完成课题任务！衷心感谢常州市第一人民医院科教科王智刚科长、郑璐副科长、居玲萍、钱慧珠、徐怡等老师一直以来对我的关心、支持和帮助！在这里也要感谢同门程贵、好友张梅等硕士的无私帮助，你们的存在为我的研究生生活平添了许多色彩，你们的关心和爱护让我在这个集体里倍感温暖，一起走过的日子将成为我美好的回忆。祝你们事业有成！同时感谢课题组的所有师弟师妹们，谢谢你们在项目推进中的积极配合１４２细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响致谢最后，衷心感谢我的父母、家人和亲朋好友，正是他们多年来的关心、爱护和支持，才使我能够顺利地完成学业。在这硕士研究生毕业的时刻，我谨以此文作为礼物献给他们１４３２０１２年５月于苏大附三院细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响

作者：

学位授予单位：

石旦苏州大学

本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Thesis_Y2134500.aspx

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