芦荟植物内生真菌抗真菌活性的研究

抗真菌

园艺博览《现代农业科技》"$$)年("月

芦荟植物内生真菌抗真菌活性的研究

尹建雯(

（"云南省疾病预防控制中心

陈有为"徐闻(杨慧敏’

,(**++；+云南大学微生物研究所；!安徽科技学院）

摘要对从芦荟中分离出的!!株内生真菌进行抗真菌活性物质筛选结果表明：’)株芦荟内生真菌对(种或多种皮肤

致病真菌，例如毛样枝孢（*"’<#.9#&,4>?&,@+#,<$.）、紧蜜单孢枝霉（/#&>#<$-<&4>@#>9’@?4>）、皮炎单孢枝霉（/#&>#<$-<&4>等具有抑制生长作用，占供试菌株的’03!5。来自中华芦荟、元江芦荟、库拉索芦荟分离获得内生真菌的抗真菌活<$&>’?,?,<,.）

性菌株比例分别为)$5、#)5和’(3)5。提示芦荟内生真菌种群可为人类寻找新的抗病原微生物活性物质提供基础条件。

关键词中华芦荟；元江芦荟；库拉索芦荟；内生真菌；抗真菌活性

由于某些植物病原真菌侵入宿主后，在特定环境和生（"$$接入0毫升-./液体培养基，置于"!,1",摇床上理条件下，可刺激宿主产生在正常情况下不能产生的小分子抗菌物质，促进寄主体内次生代谢物质的形成和积累，也能将植物体内和外源的化学物质转化成另一类物质。因此，人们在对内生真菌在形态特征和分布情况研究的基础上，对其次生代谢产物的研究逐渐增多。

我们从芦荟中分离出!!株内生真菌，并对芦荟植物内生真菌抗真菌活性物质进行了一系列筛选研究。

转2分钟）旋转培养0天，无菌条件下过滤除去菌丝体，取发酵液备用。

#"#真菌指示菌的培养

将供试的!株真菌指示菌接入-./斜面，置于"!,1

(,培养至长满孢子待用。#"$

抑菌试验

采用钢圈法进行抑菌试验。先用无菌水洗下真菌指示菌的孢子，制成孢子悬液。取$3)毫升孢子悬液于固体-./培养基平皿上涂皿，将无菌钢管（牛津杯）置于平板培养基上，加入芦荟内生真菌发酵液，置于"!,1(,培养"#40"小时，测量抑菌圈直径（!）。

!!"!

材料菌株来源

从中华芦荟（!"#$%$&’()%’&*+,-$.$（/’01$&2）、元

江芦荟（!)34’-5,’-2$-.,.6,#-278+$-2.9):#%)）及库拉索芦荟（!);’&;’<.,.=,"")）分离到的内生真菌!!株，其中中华芦荟"#株，元江芦荟"$株，库拉索芦荟##株。

$结果

从!种芦荟中分离获得!!株内生真菌，其中有’)株内

$"!$种芦荟内生真菌的抗真菌活性菌株数量及其分布

生真菌对(种或几种供试指示真菌具有拮抗作用，中华芦荟分离获得内生真菌的抗真菌活性菌株为("株，占总菌株数元江芦荟分离获得内生真菌活性菌株为6株，占总的)$5；

菌株数的#)5；库拉索芦荟分离获得内生真菌的抗真菌活性菌株为"#株，占总菌株数的!"$%&。在抗真菌活性菌株中，中度活性菌株（抑菌圈""’"(毫米）最多，有"%株（占总活性菌株数的("$#&），高活性菌株（抑菌株)"(毫米）有"*株，低活性菌株（抑菌圈!"*毫（占总活性菌株数的+%$,&）米）-株。

!"#!"#"!

培养基

芦荟内生真菌活化培养基。%&培养基酵母膏’克、

麦芽膏’克、葡萄糖($克、蛋白胨)克、琼脂()克、蒸馏水

($$$毫升、*+值自然、("(,灭菌’$分钟。!"#"#

芦荟内生真菌发酵培养基。-./培养基"$$克马铃

薯、"$克葡萄糖蒸馏水($$$毫升、*+值自然、("(,灭菌

’$分钟。!"#"$

指示菌培养基。沙孢弱培养基蛋白胨($克、葡萄糖

琼脂(!克、蒸馏水($$$毫升、#$克、*+值自然、("(,灭菌

’$分钟。!"#"%!"$

指示菌拮抗实验培养基。沙孢弱培养基。指示菌（&株）

毛样枝孢（*"’<#.9#&,4>?&,@+#,<$.A>>#-.）；紧蜜单孢枝霉（/#&>#<$-<&4>@#>9’@?4>*’&&,#-）；皮炎单孢枝霉（/#&>#<$-<&4><$&>’?,?,<,.）；裴氏着色真菌（/#&>#<$-<&4>；石膏样小孢子菌（=,@&#.9#&4>239.$4>）；B$<&#.#,1&4>9?）

星形石膏样毛癣菌（!"#$%&’%()&*+(’,-*./,)-"&#0-,）；疣状毛癣菌（!"#$%&’%()&*1-""2$&,2.）；犬小孢子菌（=,@&#.9#&4>。上述菌种由云南省微生物研究所真菌资源及菌种保*’&,.）藏室保藏。

$"#$种芦荟内生真菌的抗真菌活性

从!种芦荟的根中分离到内生真菌为!!株，叶中分离到内生真菌为+%株，花和花柄中分离到内生真菌为+-株。芦荟根组织分离到内生真菌共有"#株具抗菌活性作用，占总菌株的#+$#&；叶中分离到内生真菌共有"(株具抗真菌活性作用，占总菌株的(!$,&；花和花柄中分离到内生真菌有,株具抗真菌活性，占总菌株的++$+&（见表"）。

从表"可以看出，抗毛样枝!种芦荟植物内生真菌中，孢、紧蜜单孢枝霉、皮炎单孢枝霉、裴氏着色真菌、石膏样小孢子菌、星形石膏样毛癣菌、疣状毛癣菌、犬小孢子菌的活性菌株分别为.、!、"、,、%、%、(和"#株。不同种类芦荟内生真菌的抗真菌活性差异较大。其中，中华芦荟的活性菌株对疣状毛癣菌无抑制生长作用。而一株丝核菌属对裴氏

##"!

方法

抗真菌菌株的培养

经%&培养基活化0"小时的芦荟内生真菌菌株，分别

抗真菌

《现代农业科技》,../年*,月

表"

芦荟内生真菌的抑菌试验

（1%(+%$/*$(2+$/(+#,),)$)&）；$：裴氏着色真菌（1%(+%$/*$(2+

3/$(%&%)4(*+’,）；%：石膏样小孢子菌（?;@A;5B;A4>CDB564>）；&：

星形石膏样毛癣菌（5()-.%’.6,%*76’&/*+#&,/(%)$)&）；’：疣状毛癣菌（5()-.%’.6,%*8/((2-%&2+）；(：

大小孢子菌（9)-(%&’%(*+!#()&）。着色真菌的抑菌圈直径为!"毫米，表现出较高的抗菌活性。另一株暗梗梭孢霉属对毛样枝孢、紧蜜单孢枝霉、裴氏着色真菌和犬小孢子菌均有抗性，抑菌圈在##$#%毫米之间。

元江芦荟内生真菌的活性菌株中，对紧蜜单孢枝霉、皮炎单孢枝霉、石膏样小孢子菌和星形石膏样毛癣菌均无抑制生长作用。

在库拉索芦荟内生真菌的活性菌株中，对皮炎单孢枝霉无抗性作用。但对石膏样小孢子菌具有抑制生长作用的菌株有%株。一株黑孢霉对星形石膏样毛癣菌抑菌圈直径最大为&"毫米。另一株束丝菌属对毛样枝孢、紧蜜单孢枝霉、裴氏着色真菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌均有不同程度的抑制生长作用。

园艺博览

!种芦荟植物内生真菌抗真菌活性菌株的种群组成及

分布不仅表现出多样性，同时也呈现出特异性特点（表&）。

从表&中可看出，抗真菌活性菌株归属于!目、’科、#(属。由于不同芦荟植物中的活性菌株种类组成和分布存在差异，对供试指示菌的拮抗作用也不尽相同。可见，芦荟植物内生真菌的拮抗作用、生态分布及种属构成具有多样性的同时，表现出特异性差异。

!讨论

以上研究结果表明，!种芦荟植物内生真菌中分布着抗

真菌（占供测菌株的!()*+）活性菌株。提示芦荟植物内生真菌中蕴藏着丰富的抗菌活性菌株资源。从一个侧面说明内生真菌能产生丰富的抗菌活性物质与其宿主植物存在特殊关系，特别是与其具有增强宿主对病虫害的抵抗能力有关。

,-./也曾对此进行较为深入的研究，发现感染内生真菌的

草遭到真菌病害影响的程度远低于没有感染内生真菌的。这是因为在内生真菌的宿主体内可产生某些代谢产物，这些内生真菌的代谢产物一方面可对植物致病菌和有害昆虫具有抗性；另一方面也为人类发现具有应用价值的化合物提供了一个尚未开发的新资源。

植物内生真菌长期生活在寄主体内，其生理代谢活动与宿主生命活动过程息息相关，一旦离开寄主植物，自身的一些特征可能随之消失，出现退化现象。例如本研究曾分离获得到一株产生抗菌活性物质的内生真菌，连续!次发酵产物都有抗菌活性，但出现抑菌圈减小的现象，意味着活性作用降低。因此，除培养、发酵条件影响之外，减少传代次数，也可避免内生真菌退化现象。

通过抗菌活性研究，从库拉索芦荟的花柄中发现菌株编号为01!*&(2（黑孢霉属）的内生真菌，对星形石膏样毛癣菌具有较强的抑制生长作用，而且微生物学特征稳定，不易退化。所以，选择01!*&(2作为芦荟植物内生真菌抗菌活性物质以及代谢产物研究的出发菌株。

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/k031.html