15.苗天红-输血前血型血清学检查 pdf - 图文

输血前血型血清学检查

疑难标本的实验操作

及试剂的使用

北京市红十字血液中心血液研究所血型室苗天

红

输血前血型血清学检查（输血相容性检测）

《临床输血技术规范》要求

血型鉴定（受血者、献血者的ABO和RhD血

?

?型）??? 抗体筛选（受血者意外抗体筛查）?? 交叉配血

?

一ABO血型

ABO 正反定型相符：正反定型相符且正定型反应强度4+；反定型反应强度≥2+。

ABO 正反定型不符的定义和范围

?? ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）。?

?

ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜

?

?4+，反定型反应强度＜2+。

?

正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差

?

别＞2+以上。

正反定型不符

?

ABO 正反定型不符

（多或少抗原、抗体）

正反定型不符

?

ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜4+，反定型反应强度＜

?

2+。

正反定型不符

正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度?差别?

＞2+以上?

?

正反定型不符处理的程序

?

??

排除仪器设备、试剂、标?

?

?本及操作失误。

?

DTT处理自身凝集

?

红细胞??

分子生物学检测（血型基因）?

查阅、询问病历资料，设

?

?计针对性试验。?? 选择试管法做正反定型。?

?

ABO血型鉴定的特殊技

?

术。?

??

吸收放散试验??? 唾液型物质检测?

??

毛细管离心分离自身和输入红细胞?

?????

询问、查阅病历? 试管法正反定型? 血型鉴定特殊技术?

观察 ↓ 假设 ↓ 验证 ↓ 解决

试管法

试管法：血型定型金标准，常用于疑难血型鉴定。

???

可以反复离心看结果。

?

可以延长抗原抗体反应时间，可以改变反应温度（4℃、37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集素

?

的干扰。???? 可以观察红细胞混合外观现象。

?

可以观察红细胞溶血现象。

?

试管法正反定型

ABO血型定型试剂

抗-A1

抗-A1 用于检测A亚型。

注意：

抗-A1反应阴性 ?? A亚型?

?

A型抗原减弱?

A型新生儿与抗A1反应阴性或弱反应

抗-H

抗-H用于检测ABO亚型及孟买、类孟买型。

?

( A或B亚型H抗原增强，孟买、

类孟买H抗原阴性。)

注意：

血液病致A、B抗原减弱，H抗

?

?原可能出现增强或减弱。?

必须做对照试验。?

抗-AB

抗-AB用于鉴定Ax和Bx，抗-AB与Ax、Bx抗原会产生较强反应。

反定型

（A亚型产生抗-A1抗体）。?

?

O细胞用于确认反定型的有效性,可以发现ABO系统以外室温反应性抗体干

?

扰ABO反定型。?

???

自身对照用于检测是否存在自身冷抗体干扰ABO反定型，确认正反定型的有

?

效性。?

??

A2细胞用于A亚型的鉴定

注意：

反定型抗-A减弱，可能出现与A1细胞阳性反应，与A2

?

细胞反应阴性。

?

规范的摇试管方法

试管法凝集强度判读

反应强度 红细胞凝集情况 一个结实的大凝块，背景清楚 几个大凝块，背景清楚 中等大小凝块，背景清楚 小凝块，背景较混浊

有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊，显微镜下可观察到较多凝

集细胞

没有可见的细胞凝集，呈均匀的红细胞悬液

部分溶血：残留部分红细胞，液体出现透明澄清红色 完全溶血：未见红细胞，液体出现透明澄清红色

混合外观凝集，部分红细胞形成较大凝块，周围是游离的红细胞

4+ 3+ 2+ 1+ w+ 0 pH H mf

试管法凝集强度

为什么要使用标准凝集强度：

???

????

操作标准化。?

实验结果有回溯性。?

保证不同实验室、不同工?作人员对同一标本实验结?果的一致性。?

吸收放散试验

??

???

表达弱A和弱B抗原的红细胞直接离心试验中不被抗-A、

抗-B所凝集，但可以吸收相应的抗体。可以通过将其吸收的抗体放散出来，并检测放散出来的抗体，以证明弱A或弱B抗原的存在。

吸收用RBC：盐水洗涤3次的待检压积RBC 1ml。?

吸收用的抗血清：人源抗-A、抗-B。?

将压积RBC和抗血清按等体积比例混合，在4℃孵育至少1小时，期间每?隔15分钟混匀一次。?

??

?????

用冷盐水洗涤孵育后的细胞4-6次，得到压积RBC，加入等量盐水。?

56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。?

用试剂红细胞检测放散液（人源抗体要做盐水介质和IAT）。? 注意：一定要用O型红细胞做阴性对照。?

巯基试剂消除自身凝集红细胞

???

巯基试剂：DTT、2-Me

?

巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝

?

集的红细胞。?

?

用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等量的0.01M的DTT，37℃孵育30分钟，将细胞洗涤3遍后配成

?

2-4%的悬液备用。

DTT处理自凝红细胞

?

????

??

二 RhD血型

被检红细胞与抗-D试剂凝集者为RhD阳性，不凝

?

集者为RhD阴性。?

正常的RhD阳性：与IgM抗-D≥3+反应强度。 红细胞与IgM抗-D反应强度≦2+

?

?

?

D变异型??? 自身凝集红细胞

????

抗-D引起的新生儿溶血病。 血液病致D抗原减弱?

?

?

直接抗人球蛋白强阳性红细胞

?

D抗原分类

D抗原的分类：根据D抗原的数量和表位不同，

将D抗原分为以下3类：

???

正常的D：与IgM抗-D≥3+反应强度。

?

D变异型：与IgM抗-D弱反应或阴性，需IgG抗-DIAT才能

检出。

1.弱D（weak D）

2.部分D（partialＤ）

?

?

DEL型：只有吸收放散才能检出D。

IgM抗-D试剂

对受血者只需用IgM抗-D试剂检

?

测红细胞上是否有D抗原。?

?

?

以输血为目的常规检测没有必要使

?

?用高效价的单克隆抗-D试剂及

IgM+IgG单克隆抗-D试剂检测D变异型及对D阴性的标本进行确认试

?

验，否则有不必要的风险。因为：

1. 2. 3.

?

必须设立一个凝集强度来区分正常D和D变异型，增大了误判的风险。

用于献血者的抗-D试剂盐水介质离心能检出部分D变异型。

如果DAT阳性，用IgG抗-D做IAT试验时将D阴性误判为D阳性。

切记：使用错误试剂的风险远远大于

报告一个D变异型。

IgM+IgG抗-D试剂

?

对初检为RhD阴性的献血者须进行RhD阴性确认试验，以确认其是RhD阴性还是D变异

?

型。?

??

D变异型红细胞与大多数抗-D试剂在盐水介质中弱凝集或不凝集，但与抗-D试剂孵育或在间接抗人球蛋白试验中发生凝?集?

。?

?

抗-D试剂

三抗体筛选

?

抗体筛选的目的是确定患者血清中是否存在有临床意义的

?

抗体。?

?

如果抗筛阳性，需要做抗体鉴定来确认有临床意义的抗体、最终选择合适的血液输注，同时提醒临床医生可能推迟提供

?

?配合的血液。

?

抗体筛选应该作为输血前检测的一部分，它提供了比交叉

?

?配血更为可靠和灵敏的检测抗体的方法（剂量效应等）。

?

抗体筛选或鉴定比交叉配血更敏感，认为：最严格的配血

?

能配上就安全的认识是不全面的。

抗体鉴定

?

1. 2. 3.

患者抗体筛选阳性，如果时间允许，应做抗体鉴定并评估

?

其临床意义，抗体鉴定结果应记录在患者病历中。

鉴定抗体类型：IgM、IgG。

鉴定抗体种类：同种抗体、自身抗体。 鉴定抗体特异性:抗-？

?????

输血科工作人员可根据抗体鉴定的结果判断配血的相合率?

?

?和选择最佳的交叉配血方法。 抗原检测的效率比盲配较高。?

同种抗体

??

?

同种抗体的结果须永久保存

?

?

有剂量效应的抗体及一些弱抗体，与相应抗原纯合子反应、与杂合子不反应，配血相合不能保证输血安全性。

?

随着时间的推移，有些抗体会减弱甚至无法检出，配血相合，输血后会引起免疫记忆细胞在短时间产生大

?

?量抗体，引起溶血性输血反应。

?

对于同种抗体，每次输血都应选择无对应抗原的红细

?

胞成分，而非仅配血相合。

抗体筛选的技术

???

患者血浆＋筛选细胞

?

患者血浆＋自身细胞（自身对照）

自身对照无须作为抗体筛检的一部分。

抗体筛选阳性，应做患者自身细胞对照，这有助于识别高频抗原的抗体还是自身抗体。

?

?

方法：LISS-IAT法（低离子强度盐溶液-间接抗人球蛋白试验）由于它的速度快、灵敏度和特异性高，被公认为检测有临床意义抗体的最适合

?

?方法。?? LISS-IAT法可以检测IgG抗体和37℃有反应性的IgM抗体。??

LISS-IAT法（试管法、 LISS/Coombs卡）。?

筛选细胞

?

3%

?

0.8%

抗人球蛋白卡（LISS/Coombs卡）

?

凝胶

??

玻璃珠

抗人球蛋白试剂

???

多特异抗-IgG+C3d 单特异抗-IgG

?

?

抗体筛选

抗体筛选：存在血浆干扰时应选择试管LISS-IAT法；存在自身抗体时选择

盐水介质-IAT法。

LISS-IAT：2滴血清（血浆）、1滴2-4%的红细胞，加2-4滴LISS液后混匀，37℃

孵育15分钟，离心观察细胞的凝集、溶血情况，用生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂后混匀，1000g离心15s后判读结果。

盐水介质-IAT：2滴血清（血浆）、1滴2-4%的红细胞，37℃孵育45-60分钟，离心

观察细胞的凝集、溶血情况，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂后混匀，1000g离心15s后判读结果。

可以将细胞配成0.8%的悬液，加50ul到LISS/Coombs卡中，直接离心判读结果。

特别注意：抗人球蛋白试剂

凝聚胺

???

试管中加入2滴血清（血浆）和1滴2%-4%红细胞悬液，混匀。?

以1000g离心15秒，观察结果。如果阴性则继续试验；如果阳性，需?分析原因排除干扰后继续后续试验（此处发现并处理冷凝集素）。??? 加0.6-1mlLIM试剂，混匀后室温放置1分钟。??

加入2滴Polybrene试剂，混匀后立即以1000g离心15秒，弃去试管中液体，轻摇试管，肉眼判断红细胞凝集情况。如果有凝集出现则继续操作，如果没有凝集出现则该试验无效。??? 加入2滴重悬液，轻摇试管，肉眼观察结果。??

结果判定：1分钟内凝集消失为聚凝胺试验阴性，1分钟内凝集不消失

?

?为聚凝胺试验阳性。?

对于可疑的弱阳性结果，可用生理盐水洗涤3遍后，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。?

四交叉配血

???????

抗体筛选阴性：LISS/Coombs卡、凝聚胺法。

?

如患者血浆中有（或既往曾有）临床可能有意义的

?

红细胞抗体，必须使用间接抗人球蛋白法进行交叉配血。

1.同种抗体： LISS/Coombs卡（选择没有抗体对应抗原的红细胞成分）。

注意：IgM抗体，应加做试管盐水离心法。

2.自身抗体：经典-IAT法。

3.同种抗体+自身抗体：经典-IAT法（选择没有抗体对应抗原的红细胞成分）。

抗人球蛋白卡

VS

凝聚胺

抗体筛选阴性

两种方法交叉配血结果不一致

??

按那种方法的结果发血？?

以抗人球蛋白卡为准吗？?

?

怎么办？

找原因！找原因！！找原因！！！

抗人球蛋白卡

VS

凝聚胺

凝聚胺法配血不合、LISS/Coombs卡配血相合

??

37度无反应性的IgM抗体（同种抗体、冷自身抗体）?? 凝聚胺能检出而抗人球法漏检的抗体

?

LISS/Coombs卡配血不合、凝聚胺法配血相合

凝聚胺法会漏检抗体，交叉配血结果以LISS/Coombs卡为准。

抗体筛选阴性、

LISS/Coombs卡配血不合

???????

献血者DAT阳性。

?

?

新生儿血清中存在母体的IgG抗-A/B抗体。 患者曾接受ABO不相合造血干细胞移植。

?

患者3个月内曾接受ABO同型的实体器官移植，由于供者

?

?淋巴细胞产生的IgG型抗-A及抗-B。

?

患者血清中有针对进口筛选细胞没有但亚洲人有的抗原的

aa?

抗体，如抗-Mi、抗-Mur、抗-Di。??? 静脉丙球中的血型抗体。

?

患者血清中有抗低频抗原的抗体。?

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