第四章 药物的含量测定方法与验证

第四章 药物的含量测定方法与验证

1、药物的含量：指药物中所含主成分的量，是评价药物质量的重要标准。 2、可供药物含量测定的分析方法： （1）容量分析法

①优点：操作简便，结果准确，方法耐用性高。 ②缺点：方法缺乏专属性。

③适用：适用于对结果准确度与精密度要求较高的样品的测定。 （2）光谱分析法

①优点：简便，快速，灵敏度高，并具有一定的准确度。 ②缺点：方法专属性稍差。

③适用：适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目。 （3）色谱分析法

①优点：高灵敏度与高专属性，并具有一定的准确度。 ②缺点：结果计算需要对照品。

③适用：适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的复杂样品的含量测定。 3、为确保分析结果的可靠性，要求分析方法应准确、稳定、耐用。

4、验证内容包括：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用

性。

§4-1 定量分析方法的分类与特点

一、容量分析法

容量分析法：也称滴定法。是将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到

被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当方法指示），然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。

当滴定液与被测药物完全作用时，反应达到化学计量点。在进行容量分析时，当反应达到化学计量点时应停止滴定，并准确获取滴定液被消耗的体积。但在滴定过程中反应体系常常无外观现象的变化，必须借助适当的方法指示化学计量点的到达。其中，最常用的方法是借助指示剂的颜色或电子设备的电流或电压变化来判断化学计量点。指示剂的颜色或检测设备的电信号的突变点通常被称为滴定终点。但滴定终点与滴定反应的化学计量点不一定恰好符合，二者之差被称为滴定误差。滴定误差是容量分析法中系统误差的重要来源之一，为了减少滴定误差，要选用合适的指示剂或指示方法（如在非水溶液中常见用电位滴定法），使滴定终点尽可能的接近滴定反应的化学计量点。

（一）容量分析法的特点与适用范围 1、容量分析法的特点

（1）方法简便易行：本法所用仪器廉价易得，操作简便、快速。 （2）方法耐用性高：影响本法测定的试验条件与环境因素较少。

（3）测定结果准确：通常情况下本法的相对误差在0.2%以下，适用于对准确度要求较高的试样的分析。 （4）方法专属性差

2、容量分析法的适用范围

由于容量分析法具有以上特点，被广泛应用于化学原料药物的含量测定，而较少应用于药物制剂的含量测定。

（二）容量分析法的有关计算

1、滴定度：指每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量。 《中国药典》用毫克（mg）表示。 2、滴定度的计算

被测物质分子（A）与滴定剂（B）进行反应

aA?bB?cC?dD

当反应完全时，被测药物的量（wA）与滴定剂的量（wB）

wAw?BaMAbMB wA?wBaa?aMA?nB??MA?mB?VB??MA bMBbbmB：滴定液浓度VB；：消耗的滴定液的体积滴定度T：单位体积（VB=1ml）的滴定液相当于被测药物的量。

awA?mB??MAb wA?T?VB

T：mg/ml不同药物的摩尔质量以及与滴定剂反应的摩尔比不同，同一滴定液对不同被测药物的滴定度是不同的。

T(mg/ml)?m?a?M bm：滴定液浓度；M：被测药物的毫摩尔质量[例1]用溴酸钾法测定异烟肼[M(C6H7N3O)=137.14]的含量时，溴酸钾滴定液的摩尔浓度为0.01667mol/L（以溴酸钾为单元），化学反应式如下

3C6H7N3O?2KBrO3?3C6H5NO2?3N2??2KBr?3H2O

3则滴定度T?0.01667??137.14?3.429mg/ml

23、含量的计算 （1）直接滴定法：

V?T?100% wV：滴定液的消耗体积；T：滴定度；w：供试品的称取量含量（%）?实际的滴定度（T′）=滴定度（T）×浓度校正因数（F） 实际的体积（V′）=滴定体积（V）×浓度校正因数（F）

F?实际摩尔浓度

规定摩尔浓度V?T?V??TV?T?F含量（%）??100%??100%??100%

www(2)间接滴定法

①生成物滴定法：指被测药物与化合物A作用，定量生成化合物B，再用滴定液滴

定化合物B。

该法的百分含量计算方法与直接滴定法相同，只是在计算滴定度时需考虑被测药物与化合物B以及化合物B与滴定剂三者之间的化学计量关系（摩尔比）。

[例2]葡萄糖酸锑钠的含量测定：取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水

100ml，盐酸15ml与碘化钾试液10ml，密塞，振摇后在暗处放置10分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试液校正。每1ml硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于6.088mg的锑（Sb）。反应式：

Sb5??2I??Sb3??I2I2?2S2O32??2I?S4O6?2?

1mol锑与1mol碘化钾作用生成1mol碘单质，而1mol碘单质消耗2mol硫代硫酸钠。所以，硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）对葡萄糖酸锑钠（以Sb=121.76计算）的滴定度

a1T?m??M?0.1??121.76?6.088mg/mL

b2②剩余量滴定法：亦称回滴定法。先加入定量过量的滴定液A，使其与被测药物定量

反应，待反应完全后，再用另一滴定液B回滴定反应后剩余的滴定液A。在计算含量时，要考虑滴定过程中是否进行空白试验校正。

当不进行空白试验校正时：

含量（%）?(VA?FA?VB?FB)?TA?100%WVA：滴定液A的体积 VB：滴定液B在回滴定中被消耗的体积FA：滴定液A的浓度校正因数当进行空白试验校正时：

0S（VB-VB）?FB?TA含量（%）??100%W0VB：空白试验时消耗滴定液B的体积 SVB：样品测定时消耗滴定液B的体积W：供试品的称取量[例3]司可巴比妥钠的含量测定：取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1分钟，在暗处放置15分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。

已知：M=260.27；司可巴比妥钠与溴反应比为1:1；W=0.1022g；F（Na2S2O3）

=1.038；供试品滴定消耗硫代硫酸钠滴定液15.73ml；空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液23.21ml。

计算：溴滴定液的滴定度[T（Br2）]及司可巴比妥含量。

1解：TBr2?0.05??260.27?13.01mg/mL1（V0?VS）Na2S2O3?FNa2S2O3?TBr2司可巴比妥%??100%

W（23.21?15.73）?1.038?13.01??100%?98.8%0.1022?1000二、光谱分析法

光谱：当物质吸收辐射能（或热能）后，其内部发生能级跃迁。记录由能级跃迁所产

生的辐射能随波长的变化所得到的图谱。

光谱分析法：利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法。 （一）紫外-可见风光光度法

紫外光区：波长为200-400nm；可见光区：波长为400-760nm 1、朗伯-比耳定律

单色光辐射穿过被测物质溶液时，在一定的浓度范围内被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层厚度（光路长度）成正比。

1?Ecl TA：吸光度；T：透光率；E：吸收系数；c：溶液浓度；l：液层厚度A?lgE通常采用百分吸收系数（E1m）表示，其物理意义为：当待测溶液浓度为每100ml中还有待测药物1g（1%，g/ml），该液层厚度为1cm时的吸光度值。

计算出供试品含量：c(g/100ml)?A1%

E1cm2、方法特点与适用范围

（1）简便易行：本法使用的仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。

（2）灵敏度高：本法灵敏度可达10-7—10-4g/mL，适用于低浓度试样分析。 （3）准确度较高：本法的相对误差约为2%—5%。 （4）专属性较差：

由于紫外-可见分光光度法具有以上特点，故本法较少应用于原料药的含量测定，可用于药物制剂的含量测定，但更多应用于药物制剂的定量检查，如片剂的溶出度或含量均匀度检查。 3、仪器校正和检定 （1）波长

仪器波长的允许误差为：紫外光区±1nm，500nm处±2nm。 （2）吸光度的准确度

可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。 （3）杂散光的检查 （4）对溶剂的要求

含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。

当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品之前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求。 （5）测定法 ①对照品比较法

按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被

测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度：

cX?AX?cRAR

cX：供试品溶液的浓度；AR：对照品溶液的吸光度原料药百分量的计算公式如下：

cX?D?10%0 WD：稀释体积W；：供试品取样量含量（%）?固体制剂含量相当于标示量的百分数计算公式：

cX?D?W?100% W?BW：单位制剂的平均重量；B：制剂的标示量标示量（%）?②吸收系数法

按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量：

当测定液体含量时

标示量（%）?A?D?V?1000?100%1ácm?100?V?BD：供试品溶液的稀释体积 A：测得的吸光度；

V：注射液规格；V：供试品取样量；B：标示量（mg/支）当测定固体（片剂）含量时

标示量（%）?A?D?W?1000?100%1á?100?W?Bcm

W：平均偏重；W：供试品取样量；B：标示量（mg/片）③计算分光光度法

④比色法

（二）荧光分析法（详见《药物分析》P151） 1、方法特点与适用范围 （1）高灵敏度 （2）荧光自熄灭 （3）易受干扰 2、干扰的排除 （1）溶剂 （2）溶液

（3）玻璃量器 （4）温度

3、测定法与含量计算 三、色谱分析法

色谱分析法：是根据混合物中各组分的色谱行为差异（如在吸附剂上的吸附能力的不

%）? 回收率（测得量?100%

加入量2、制剂的含量测定

（1）已知量被测物的制剂各组分混合物（包括制剂辅料）进行测定。 （2）向制剂中加入已知量的被测物进行测定。

（3）用本法所得的结果与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较。

%）? 回收率（测得量-本底量?10%0

加入量（二）杂质定量测定方法的准确度

杂质定量测定方法多采用色谱法，其准确度可通过向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测试。 （三）数据要求

在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。 二、精密度

精密度：指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间

的接近程度。

精密度一般用标准偏差（s或SD）或相对标准偏差表示（RSD）。

n?1

SDRSD(%)??100%X（一）验证内容

1、重复性：同一实验室，同一人，多次测定。 2、中间精密度：同一实验室，不同人，不同仪器。 3、重现性：不同实验室，不同人。 （二）数据要求

精密度验证中所测数据均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限。 三、专属性

专属性：指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正

确测定出被测物的特性。

（一）鉴别反应

应能与可能共存的物质或结果相似化合物区分，不含被测成分的供试品，以及结果相似或组分中的有关化合物，均应呈负反应。 （二）含量测定和杂质测定

1、杂质可获得：对于含量测定，试样中科加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干

扰，并可与未加杂质和辅料的试样比较测定结果；对于杂质测定，也可向试样中加入一定量的杂质，考察杂质之间能否得到分离。

2、杂质或降解产物不能获得：可将含有杂质或降解产物的试样进行测定，与另一个

经验证了的方法或药典方法比较结果；用强光照射、高温、高湿、酸碱水解或氧化的方法进行加速破坏，以研究可能的降解产物及其降解途径。含量测定方法应比对二法的结果，杂质检查应比对检出的杂质个数。

四、检测限

SD??(Xi?X)2

检测限：指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。

LOD是一种限度检验效能指标，它反映方法是否具有灵敏的检测能力，即是否具备足够的灵敏度。 （一）常用的方法

1、目视法：用已知浓度的被测物，通过目视法试验出能被可靠地检测出的最低浓度

或量。

2、信噪比法：用已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号（基线噪声）进

行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

一般以信噪比S/N=3（或2）时的相应浓度或注入仪器的量确定LOD值。 3、标准偏差法

CLOD?f?3S空?样?3S空A样 f：校正因数；C样：低浓度样品溶液的浓度值

A样：低浓度样品溶液光的度吸值（二）数据要求 五、定量限

定量限：指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精

密度。

可通过不同浓度（在低浓度区）的试样测定响应信号后，计算信噪比S/N=10时，相应的浓度或注入仪器的量确定定量限。 六、线性

线性：指在设计的“范围”内，测试结果（响应值）与试样中被测物浓度直接呈正比

关系的程度。

应列出回归方程、相关系数和线性图。 Y?aX?b，（r?0.9999） 七、范围 范围：指能达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 1、原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的80%—120%。 2、制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的70%—130%。 3、溶出度或释放度中的溶出量测定 4、特殊元素含量测定 5、杂质测定 八、耐用性

耐用性：指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。 影响因素：被测溶液的稳定性；流动相的组成和pH；柱温 九、验证内容的选择 1、非定量分析方法 2、定量分析方法 3、微量定量分析方法 补充

1、各种含量测定方法对效能指标的要求

（1）容量分析法：用原料药精制品（含量>99.5%）或对照品考察方法的精密度，RSD

≤0.2%；回收率一般在99.7—100.3%之间。

（2）UV法：用适量浓度的精制品进行测定，其RSD≤1%。制剂的测定，回收率一般

应在98%—102%之间。

（3）HPLC法：要求RSD<2%，回收率98%—102%之间。 2、验证方法应用

（1）用于鉴别方法：专属性、耐用性、检测限

（2）用于原料药中主成分或制剂中有效成分含量测定方法

除不需检测限、定量限外其余6项

（3）原料药中杂质测定或制剂中降解产物等其他杂质测定方法

用于定量：除检测限外其余7项

用于限度检查：专属性、耐用性、检测限

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