RP-HPLC法测定路路通胶囊中原儿茶醛的含量

RP-HPLC法测定路路通胶囊中原儿茶醛的含量

发表时间：2012-07-12T16:05:53.947Z 来源：《中外健康文摘》2012年第10期供稿作者：赵慧[导读] 本法专属性强，准确度高，重现性好，可作为该产品质量控制方法。

赵慧（长沙市第四人民医院湖南长沙 418000）【摘要】目的建立路路通胶囊中原儿茶醛的含量测定方法。方法用HPLC法测定路路通胶囊中原儿茶醛的含量。结果色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5m），以甲醇－1%醋酸（12:88）为流动相，流速为1.0mL?min-1，柱温：35℃，检测波长：279nm。Diamonsil C18柱进样量在0.01349～0.1349μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r＝1.0000），平均加样回收率为99.02%（RSD=0.83%，n=9）。结论本法专属性强，准确度高，重现性好，可作为该产品质量控制方法。【关键词】高效液相色谱法路路通胶囊原儿茶醛路路通胶囊是由水蛭、三七、枳实、皂角刺、桃仁、莪术、柴胡、赤芍、当归、红花、路路通、丹参、鸡血藤、香附、王不留行等十五味中药组方而制成的复方制剂，具有祛风活络，利水通经的作用。关节痹痛，麻木拘挛，水肿胀痛，乳少闭经等症。为有效的控制本品质量，保证疗效，笔者参考有关文献，采用RP-HPLC法测定原儿茶醛的含量，为该药品的质量控制提供了全面的、客观的定量评价方法。

1 仪器与试药

岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪（SIL-10ADvp进样器，Column Oven CO-Ⅳ柱温箱，SPD-10AVP紫外检测器）；YB-2真空恒温干燥箱（天津药典标准仪器厂）；瑞士梅特勒AB135-S电子分析天平；湘仪AEU-210电子分析天平，水浴锅。对照品：原儿茶醛（批号：110810-200506）（中国药品生物制品检定所）。路路通胶囊（某医院制剂室；0.5g/粒，批号为20110811，20100813，20100815）及阴性样品（某医院提供）。甲醇、冰醋酸、乙腈为色谱纯，水为超纯水；其它试剂均为分析纯。

1.1 色谱条件

色谱柱：DikmaDiamonsilC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇－1%醋酸（12:88）；流速：1.0mL?min-1；柱温：35℃；检测波长：279nm；进样量：10μL。按原儿茶醛峰计算，理论板数不低于5000。

1.2 对照品溶液制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥16h的原儿茶醛对照品13.49mg，置100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含原儿茶醛6.745μg的溶液。

1.3 供试品溶液制备

取本品20粒的内容物，研匀，精密称取约5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加水10mL使溶解，用稀盐酸调节pH至2，用乙醚提取4次，每次10mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.4 阴性对照溶液的制备

取缺丹参阴性制剂适量（约相当于供试品的量），按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

1.5 阴性样品试验

取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液，按上述色谱条件，分别进10μL，测定，结果见图1。由图可见，样品溶液色谱中出现的峰与对照品溶液色谱峰保留时间一致，而阴性样品色谱图在此保留时间无峰，且样品色谱中原儿茶醛峰与其他成分峰可达到基线分离，分离度大于1.5。结果表明阴性样品对结果无干扰。

1.6 线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液2.0，6.0，10.0，14.0，20.0μL分别注入液相色谱仪测定，记录峰面积，以峰面积为纵座标，以进样量为横座标，绘制标准曲线，原儿茶醛回归方程为：Y＝4269926.3798－2076.3852（r=1.0000），原儿茶醛在0.01349～0.1349μg范围内呈良好的线性关系。

1.7 精密度试验

按上述色谱条件，用同一供试品溶液连续进样6次，每次10μL，分别测得各次峰面积。原儿茶醛峰面积的RSD值为0.83%。

1.8 稳定性试验

取同一供试品溶液在0，2，4，8，10，12h分别进样10μL，结果6次进样原儿茶醛峰面积的RSD为1.08%，结果表明供试品溶液在12h 内稳定。

1.9 阴性对照实验

取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，按上述色谱条件分别进样测定并记录色谱图。结果显示，阴性对照溶液对测定结果无干扰。见图1。

1.10 重复性试验

取同一批样品，按供试品溶液制备方法，平行制备6份，依法测定，原儿茶醛平均含量为5.1561μg?粒-1，RSD=0.98%，结果表明该方法的重复性好。

1.11 回收率试验

称取已知含量的样品约2.5g，共9份，精密称定，（批号为20111219，含量为10.2611μgg-1），精密加入原儿茶醛对照品溶液（0.02512mg?mL-1）的对照品溶液0.8mL、1.0mL、1.2mL。按供试品溶液制备方法制备供试液，依法进行含量测定并计算回收率。见表1。

表1 回收率试验结果（n=9）

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