罗氏_荧光定量PCR仪_Lightcycler480使用说明书-中文版

羅氏應用科學

LightCycler 480 儀器操作手冊

軟體版本 1.0

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修訂史

前言 頁

一. 修訂史......................................................9 二. 聯繫地址....................................................9 三. 一致性申明..................................................10 四. 保證.......................................................10 五. 商標.......................................................10 六. 用途.......................................................11 七 LightCycler®許可聲明.......................................11 八. 軟體許可協定...............................................12 九. 導言...................................................... 16 十. LightCycler® 480儀器操作手冊的用法.........................16 十一. 本手冊中的約定 ............................................17

文字約定................................................17 符號....................................................17

十二. 警告和預防..................................................19

操作要求................................................19 一般預防................................................20 電氣安全................................................21

十三. 儀器處理....................................................22

A

概述 頁1. 介紹................................................................25 2. LightCycler® 480規格................................................26 2.1 一般規格............................................................ 26 2.2 環境參數.............................................................26 2.3 介面.................................................................27 2.4 樣本容量 .............................................................27 2.5 運輸..................................................................27 2.6 數據站................................................................28 3. 檢測單位規格.........................................................29 3.1 激發................................... .............................29 3.2 探測器 ..............................................................29 3.3 濾光器...............................................................29 4. 溫度阻斷迴圈控制器規格...............................................30 5. 多孔板條碼掃描器規格...............................................31 6. 手提式條碼掃描器規格. ............................................ 32

前言3

修訂史

B

系統描述 頁1. 系統包裝...........................................................35 2. 安裝 ..............................................................36 2.1 安裝要求.............................................................36 2.2 空間和電源要求.......................................................36 2.3 環境要求.............................................................38 2.4 LightCycler® 480 儀器安裝 ...........................................39 3. 系統描述...........................................................43 3.1 LightCycler® 480儀器描述.............................................43 3.2 熱迴圈器單元描述.................................................... 47 3.3 檢測單元描述.........................................................50 3.4 檢測通道描述.........................................................52 3.5 LightCycler® 480儀器耗材.............................................53 3.6 LightCycler® 480儀器PCR試劑 .........................................55 3.7 所需的額外設備.......................................................56 3.8 LightCycler® 480 儀器即時PCR檢測格式 ............................ ..56 3.8.1 概述...............................................................56 3.8.2 使用SYBR綠色I染料監控PCR ..........................................58 3.8.3 使用水解探針監控PCR ...............................................60 3.8.4 使用HybProbe探針監控PCR............................................62 3.8.5 使用SimpleProbe探針基因分型........................................64

C

操作

頁

1. 介紹……………………………………………………………………………………67 2. 系統的啟動……………………………………………………………………………68 3. 準備和開始LightCycler® 480儀器的運轉………………………………………69 4. 更換LightCycler® 480熱迴圈器……………………………………………………72

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4LightCycler 480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版

修訂史

D

軟體 頁前言5

修訂史

1. LightCycler® 480基礎軟體概述…………………………………………………81 1.1 LightCycler® 480基礎軟體用戶介面通則……………………………………81 1.2 LightCycler® 480基礎軟體的啟動..................................82 1.3 LightCycler® 480基礎軟體主視窗……………………………………………85 1.4 選擇與流覽特性…………………………………………………………………90 1.4.1 流覽器…………………………………………………………………………90 1.4.2 查詢表…………………………………………………………………………94 1.4.3 樣品選擇與樣品表……………………………………………………………98 1.5 導出與導入檔與物件……………………………………………………………100 2. 試驗的編程與運行………………………………………………………………109 2.1 試驗的編程…………………………………………………………………………110 2.1.1 設定檢測格式…………………………………………………………………112 2.1.2 定義程式與溫度靶……………………………………………………………113 2.1.3 定制線上資料顯示……………………………………………………………117 2.2 試驗運行……………………………………………………………………………118 2.3 輸入樣品資訊………………………………………………………………………120 3. 試驗分析概述……………………………………………………………………126 3.1 分析步驟概述………………………………………………………………………127 3.2 使用分析視窗………………………………………………………………………129 3.2.1 選擇濾光器組合與顏色補償…………………………………………………130 3.2.2 在分析中處理樣品……………………………………………………………131 3.2.3 使用圖表………………………………………………………………………132 3.2.4 添加分析注解…………………………………………………………………132 3.2.5 對分析進行刪除或重新命名…………………………………………………133 4. 進行絕對定量分析………………………………………………………………134 4.1樣品交叉點…………………………………………… …………………………135 4.2 關於標準曲線的作用………………………………………………………………136 4.3 提供標準曲線………………………………………………………………………138 4.4 使用絕對定量方法…………………………………………………………………140 5. 進行溶解曲線分析………………………………………………………………144 5.1 使用溶解曲線特徵進行DNA產物及其基因型的鑒定……………………………144 5.1.1 定義溶解程式…………………………………………………………………145 5.1.2 溶解溫度分析的內容…………………………………………………………145 5.2 進行溶解溫度調用分析…………………………………………………………146 6. 進行顏色補償分析………………………………………………………………152 6.1 進行顏色補償試驗…………………………………………………………………153 7. 使用範本與巨集……………………………………………………………………156 7.1 製作與使用範本……………………………………………………………………156 7.2 製作與使用宏………………………………………………………………………156 8. 使用子功能表………………………………………………………………………162 9. 使用圖表…………………………………………………………………………164 9.1 列印，導出與複製圖表……………………………………………………………165 9.2 進行變焦和變位元以查看圖表詳細內容……………………………………………169

D

軟體 頁10. 生成報告………………………………………………………………………………171

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6LightCycler 480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版

修訂史

11. 使用選項工作…………………………………………………………………………174 11.1使用圖解選項…………………………………………………………………………175 11.1.1 設定圖表表頭與標籤類型………………………………………………………176 11.1.2 設定螢光圖表內容………………………………………………………………177 11.1.3 設定標準曲線圖表的外觀………………………………………………………178 11.1.4 設定溫度圖表的內容與外觀……………………………………………………179 11.1.5 覆蓋默認的圖表選項……………………………………………………………180 11.2 使用樣品選項…………………………………………………………………………183 11.2.1 更改所有試驗的樣品選項………………………………………………………183 11.2.2 重新設置默認的圖表選項………………………………………………………185 11.3 生成一個單獨的選項專案並將其設為默認…………………………………………187 11.4 設定用戶選項…………………………………………………………………………188 12. 管理工具………………………………………………………………………………189 12.1 管理用戶訪問…………………………………………………………………………190 12.1.1用戶帳戶…………………………………………………………………………190 12.1.2組…………………………………………………………………………………191 12.3.3角色………………………………………………………………………………191 12.1.4 高級用戶角色的特權……………………………………………………………192 12.1.5 本地管理員角色的特權…………………………………………………………193 12.1.6 用戶訪問物件……………………………………………………………………194 12.1.7 管理用戶、組和角色……………………………………………………………197 12.1.8 使用角色…………………………………………………………………………202 12.1.9 更改密碼…………………………………………………………………………203 12.2 報告的設置………………………………………………………………………… 203 12.3. 資料庫資訊…………………………………………………………………………204 12.4. 儀器…………………………………………………………………………………207 12.4.1 定義儀器…………………………………………………………………………209 12.5 檢測格式……………………………………………………………………………210 13. 診斷工具………………………………………………………………………………213 14. LightCycler® 480基礎軟體的安裝與維護…………………………………………214 14.1初始啟動步驟.......................................................215 14.2 LightCycler® 480基礎軟體的安裝.....................................216 14.3 保存一個已有的資料庫和安裝附加資料庫 ………………………………………219 14.4 登錄到不同資料庫 …………………………………………………………………223 14.5 用一個資料庫檔替換一個已存在的同名資料庫....................... 224 14.6 在LightCycler® 480基礎軟體中

整合一個恢復的資料庫檔使之成為附加資料庫…………………………………225 14.7 刪除LightCycler® 480的基礎軟體………………………………………………228 14.8 FLE Xnet許可證管理員………………………………………………………………229

前言7

修訂史

E 維護

頁1. 常規維護.................................................. .........237 2. 儀器清潔操作指南 ...................................................237 2.1 常規清潔.................................................. ........ 237 2.2 預防性維護.................................................. ...... 237 3 更換氙氣燈................................................. ........238 4 更換風道灰塵篩檢程式......................................... ........242 5 更換保險絲 ..................................................... ...244

F 附錄

頁

1. 訂購資訊……………………………………………………………………………251 2. 索引................................... ..........................253

前言

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8LightCycler 480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版

修訂史

一、修訂史

版本

1.0

時間2005年9月

© 版權2005， Roche Diagnostics GmbH. 版權所有.

本手冊資訊可以在未經通知的情況下變更。未經羅氏診斷公司明確書面同意，本手冊所有內容不得以任何目的通過任何形式或任何方法（包括電子和機械手段）複製或傳播。

有關本手冊的問題和建議可以直接向以下位址或您的羅氏診斷公司代表提出。 Roche Diagnostics GmbH Roche Applied Science Customer Support Nonnenwald 2 82372 Penzberg，Germany

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羅氏診斷已盡一切努力確保LightCycler 480儀器操作手冊付印時內容正確無誤。

然而，羅氏診斷仍有權未經通知即進行必要的修改，以順應其產品發展的需要。

二、聯繫地址

製造商Roche Instrument Center AG Forrenstrasse CH-6343Rotkreuz SwitzerlandRoche Diagnostics GmbH Sandhofer Straße 116 D-68305 Mannheim GermanyRoche Diagnostics 9115 Hague Road PO Box 50457 Indianapolis， IN 46250 USA銷售商

美國銷售商

三、一致性申明

前言

9

修訂史

測量，控制和實驗室用UL 61010-1電氣設備；第一部分： 一般要求 CAN/CSA-C22.2 No. 61010-1 （第二版） —測量，控制和實驗室用電氣設備的安全性要求

第一部分：一般要求

四、保證

有關保證條件的資訊會在銷售合同中詳細說明。欲知更多詳情，請與您的羅氏公司代表聯繫。

對本儀器任何未經授權的修改將導致擔保和維修合同無效。

五、商標

LIGHTCYCLER， LC， HYBPROBE和SIMPLEPROBE是羅氏公司的注冊商標。 PROBELIBRARY 是位於丹麥維比克（Vedbaek）市的Exiqon A/S公司注冊商標。通用探針庫（Universal ProbeLibrary）屬於Exiqon A/S公司擁有的美國和其他專利應用。 SYBR 是位於美國俄勒岡州Eugene市的Molecular Probes， Inc.公司的商標。 FAM和HEX都是位於美國康涅狄格州Norwark市的Applera Corp公司的商標。

其他品牌和產品名稱分別為其各自持有者的商標。

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10LightCycler 480 儀器操作手冊-操作手冊1.0

版

預定用途

六、 預定用途

LightCycler® 480儀器預定用於實施快速、準確的聚合酶鏈反應（PCR）以及即時、線上檢測從而可對靶核酸進行絕對或相對量化，同時還可通過分析溶解曲線對擴增的核酸進行後PCR分析。 LightCycler® 480儀器預定用於一般實驗室用途，而且必須由受過實驗室技術方面的培訓且學習過該儀器使用說明書的實驗室專業人士專門操作。LightCycler® 480儀器不能用於診斷過程。

七、LightCycler® 480儀器許可聲明

LightCycler® 480 即時PCR系統是獲得許可的溫度迴圈反應器。 其購買價格包含對豪夫邁.羅氏有限公司（“Roche"）擁有的美國專利號46832024683195 及 4965188的非美國同類產品的許可證前期費用部分，該費用包括聚合酶反應（PCR）過程，因而可使用該儀器執行PCR過程進行內部研發。該許可證中需支付定期使用費的專利部分可以從Applied Biosystems公司（美國應用生物系統公司）購買，也可以通過購買經授權的試劑而獲得。該儀器還是一台經授權的溫度迴圈反應器，可用於經Applied Biosystems公司授予應用許可證的用途。其與經授權的試劑一同使用時，根據此類試劑所附帶的標籤上的權利，該儀器還提供限制性的PCR許可。

購買該產品本身並不賦予購買者實施PCR過程的全部許可或權利。 LightCycler® 480 即時PCR系統是經許可的溫度迴圈反應器，可用於美國專利號6814934及其非美國同類產品的相應申明，及美國專利號5038852、5656493、5333675中的其中一項或多項及其非美國同類產品的相應申明中提及的研究用途，這些專利均歸Applera公司所有。任何其他專利聲明中，如對設備、試劑、試劑盒以及如5’核酸酶法的研究方法的聲明，未進行任何明示、默示或禁止反悔形式的權利轉移。該儀器只能用於研究。欲瞭解有關購買使用許可證（體外診斷除外）的更多資訊，請聯繫Applied Biosystems公司的許可證發放主任，地址， 850 Lincoln Centre Drive， Foster City， California 94404， USA。 LightCycler® 480 系統中使用的部分軟體經位於美國猶他州鹽湖城的IdahoTechnology公司許可。 The LightCycler® 480儀器和LightCycler® 480基礎軟體屬於美國專利5871908的組成部分並共同獲得Evotec OAI AG公司的獨家許可。

前言11

軟體許可協定

八、軟體許可協定

在安裝LightCycler® 480軟體（後文中稱"軟體"）之前，請仔細閱讀以下軟體許可協定中的條款和條件（稱"協議"）。實施軟體安裝意味著對該協定中條款和條件的接受。一經接受本協定條款和條件，終端用戶（“被許可人”）將承擔因選擇該使用軟體實現既定目標及其安裝及後續使用所引發的所有全部責任和義務。如果被許可人不願意受本協議中條款和條件約束，其應立即將套裝軟體連同收據複印件歸還到羅氏公司（“供應商”），並據此獲得該軟體退款。

1. 程式許可協定

被許可人將承擔因選擇使用該軟體完成既定目標及其安裝和後續使用所引發的所有責任和義務。軟體受版權保護。

2.軟體許可的授予

如果被許可人同意持續遵守下文中的所有條款，供應商將授予被許可人根據本協定中條款及條件使用該軟體的非獨占及一次性使用許可。

被許可人可以： a. 一次在三個工作站上使用該軟體，此類工作站應以網路或其他配置形式由被許可人擁有、租借或以其他方式掌控。 b.通過向其他方轉讓本協定權利而轉讓該軟體，但其他方應書面同意接受本協議條款和條件。此外，被許可人必須確保版權聲明保留在被轉讓的軟體中。

被許可人不得： a.部分或全部使用該軟體，除非本協定有明文規定。 b. 一次在三個以上工作站使用該軟體。 c.複製、銷售、或以其他方式向其他方轉讓該軟體或轉讓其在本協定中的權利的全部或部分，除非本協定有明文規定。 d. 租賃、分銷，許可或再許可該軟體。 e. 根據該軟體編制衍生軟體。 f.修改、改編、轉換、反向工程、反向編譯或分解該軟體。

供應商保留此處未明文賦予的所有權利，包括但不限於直接或通過附屬公司、分銷商和/或第三方銷售該軟體的權利

欲知更多詳情，請聯繫您所在地的羅氏應用科學支持機構。您可登錄以下網址查找聯繫資訊：.

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12LightCycler 480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版

軟體許可協定

3.有限保證

軟體以“現狀”提供，且無任何形式的明示或暗示保證，包括但不限於適銷性﹑特殊用途適宜性的暗示保證。如果軟體經證實存在缺陷，被許可人應承擔軟體質量和性能方面的全部風險。被許可人承擔軟體所有必要的維修、修理或修改費用。但是，供應商保證，在自您收據複印件上注明的交付日起90天的正常使用期限內，裝配該軟體的程式媒介在材料和工藝上無缺陷。供應商不作其他明示或暗示的擔保或保證。

4. 免責聲明

上段規定的保證將取代在執行、交易、商業使用或其他過程中由法律規定的所有其他明示或暗示的保證。 供應商及控制供應商、被供應商（“供應商附屬公司”）控制或共同控制的任何實體特別聲明拒絕作出包括但不限於以下任何形式的任何明示或暗示保證，這些保證包括但不限於，適銷性、特定用途適宜性及非侵權性的暗示保證。供應商及供應商附屬公司不作有關該軟體或被許可人或任何第三方將從該軟體取得的成果方面的任何聲明或保證。被許可人承認除本協議特別明確規定的責任或保證外，其未曾要求供應商或供應商附屬公司作出任何聲明或保證。

前言13

軟體許可協定

5. 補救措施的限制

供應商的唯一責任及對被許可人的唯一補救措施應是： a. 將不符合供應商有限保證的程式媒介連同被許可人收據複印件退還供應商並更換該程式媒介。 b. 如果供應商不能免費更換在材料和工藝上無缺陷的程式媒介，被許可人可將軟體及被許可人向供應商開具的收據複印件退還供應商從而終止本協議，而被許可人的付款將被退回。

在任何情況下，對於直接或間接因該軟體、本協定或本協定終止而引起或與此相關的被許可人或第三方可能發生或經歷的任何特殊、間接、偶然以及繼發性損失（包括但不限於虧損、資料或資訊丟失、軟體功能喪失、經營中斷、商業信譽或聲譽受損或停工期成本），供應商或其任何下屬機構（或其各自的官員、員工、顧問、律師或代理人）不承擔任何責任，即使供應商或其下屬機構已被告知此類損失的可能性且儘管出現了任何關鍵功能的運行故障。對於與本協定、或該軟體相關或由此引發的任何原因及任何行為形式造成的損失，供應商及其下屬機構（及其各自官員、員工、顧問、律師、及代理人）共同承擔的全部責任應限於，由供應商自行決定更換該軟體、或退還供應商或其附屬機構從被許可人處收到的與該軟體相關的款項。

6. 基本資訊

除非本協議明確規定，被許可人不得再許可、轉讓、或轉移部分或全部該許可或軟體。應避免再許可、轉讓或轉移本協議規定的任何權利、責任或義務的任何其他做法。

7.知識產權

被許可人只擁有本協定第二部分中明確規定的對該軟體的權利。與該軟體相關的任何其他權利，包括但不限於所有權和專利權、版權、商標、商業秘密以及其他知識產權，應為供應商獨家所有財產。被許可人不能從軟體中刪除提及版權、商標或其他所有權的任何內容、或覆蓋或改動提及此類資訊的任何內容。被許可人應採取一切合理措施以防止對該軟體任何未經授權的使用、複製、銷售或出版，或未經授權即為取得該軟體提供渠道的任何做法。被許可人應補償並使供應商免於因被許可人、被許可人違反本協議或被許可人以未經本協定授權的方式使用該軟體而造成的任何與供應商侵權相關的任何損失、損害、索賠及開支（包括但不限於合理的法律費用）。

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14LightCycler 480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版

軟體許可協定

8. 期限和終止

本協議在終止之前始終有效。被許可人可隨時採取任何形式破壞該軟體和與該軟體相關的檔從而終止本協議。如被許可人未能遵守本協議任何條款和條件，則本協議將自動終止，供應商無需發出通知。被許可人同意，供應商一經終止協定，其應將軟體銷毀。無論本協定以何種方式終止，被許可人擁有的軟體全部使用權將隨之失效。

9. 軟體的輸入，輸出和使用

被許可人應全權負責確保遵守與其輸入、輸出或使用該軟體的權利相關的法規。

10. 其他事項

如本協議任何條款被具有司法管轄權的法院宣佈為無效或不可執行，其餘條款仍將繼續具有完全的效力和效應。

供應商未能行使本協議中的任何權利不應視為對其權利的放棄，包括但不限於其對今後違反行為的回應權。

只要打開並使用軟該件，被許可人即承認其已閱讀並理解本協議，並且同意遵守本協議條款和條件。被許可人還同意本協議是被許可人和供應商之間完全、唯一的協議陳述，並取代被許可人及供應商之間有關本協定主題事項的任何提議或以前達成的口頭或書面協議及任何其他通報。

本協定中幾個部分的標題只是為了便於參考，不應成為本協議的組成部分或者影響本協議的含義和解釋。

11. 適用法律及司法管轄地

本協議受美國印地安那州法律管轄，並按該州法律釋義，但不影響其任何法律原則的選擇。各方同意聯合國國際貨物買賣合同公約不適用於本協議。

前言15

本手冊習慣用法

九、前言

在實施LightCycler® 480儀器操作前，仔細通讀這本操作員手冊非常重要。違反本手冊中指示將可能產生安全風險。

十、LightCycler® 480儀器操作員手冊用法

本操作員手冊為操作LightCycler® 480儀器提供指導。它包括以下章節：

章節A 概述包括LightCycler® 480儀器操作模式簡介以及對系統規格的說明。

章節B 系統說明包括對LightCycler® 480儀器安裝的指導和該系統元件及耗材的說明。

章節C 操作說明LightCycler® 480儀器的操作程式。

章節D LightCycler® 480 基礎軟體包括LightCycler® 480儀器運行編程和資料分析方面的指導。

章節E 維護說明LightCycler® 480儀器所需的維護程式。

章節F 附錄包含索引和訂購資訊。

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16LightCycler 480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版

本手冊習慣用法

十一、本手冊習慣用法

文本習慣用法

為保持傳輸的資訊一致並可存儲，本手冊使用下列文本習慣用法

編碼的列表 操作方法的步驟必須按照列出的順序實施

斜體，藍色 指明應參考這一特殊章節

斜體 描述運行LightCycle

r® 480基礎軟體過程中的處理

方法

星號（*）

表明羅氏應用科學提供此產品

符號

在本手冊中，符號作為視覺信號用於指明重要事物。

符號 標題 描述

警告 此符號用於說明違反操作指導或程式可能導致軀體損傷甚至死

亡，還可能損害儀器。請參考本操作員手冊。

表面高溫

此符號用於標明儀器表面可能存在的高溫。

生物危害

此符號用於說明在使用可能傳染的物質時，應保持一定的警惕。重要提示

操作成功或產品使用的關鍵資訊

資訊提示

有關當前主題或操作方法的附注

前言17

本手冊習慣用法

儀器上出現的下列符號

CE 標誌 位於儀器類型板上的CE標誌表明符合指導委員會的相關要求。

請參考操作手冊 位於儀器類型板上

生物危害 位於多孔板載入器邊緣。

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18LightCycler 480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版

儀器處理

十二、警示和注意事項

LightCycler 480儀器只能由經過培訓、熟練掌握使用方法的人員使用。

必須仔細閱讀並遵守下列LightCycler®

480儀器的安裝和操作所需的安全資訊。請保證每一位元使用LightCycler®

480儀器的人員能夠得到這些安全資訊。

操作要求

遵守各項適用於電器設備的一般安全注意事項。 不得用濕手接觸開關和電源線。

清洗儀器時，應關閉電源開關，斷開電源線。

只允許經授權的維修人員提供儀器所需的維修服務。

清洗LightCycler®

480儀器請參考維護章節中的指導說明。

前言19

儀器處理

一般注意事項

微軟Office軟體和諾頓殺毒軟體經測試不會與LightCycler480軟體和軟體模組相衝突。禁止在Li

ghtCycler

480儀器所用的個人電腦中安裝其他軟體。否則會有與LightCycler480軟體和軟體模組發生衝突的風險，還可能影響結果的可靠性。

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不允許將兩台LightCycler480儀器連接到同一個資料站。

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不正確的擺放會產生錯誤的結果，並且損傷儀器部件。請仔細遵循安裝指導操作。儀器移動須有合格的羅氏維修人員實施。

切勿隨意撥弄儀器。

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20LightCycler 480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版

儀器處理

用電安全

對於互動和非推薦功能，應注意警告。必須考慮到誤操作發生的可能範圍。應注 意到可能發生的後果。

前言21

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