HPLC法测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量

HPLC法测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量

HPLC法测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量

汪寒林

(安徽省黄山市药品检验所,安徽屯溪　245000)

摘要:目的　采用HPLC法测定黄连上清片中盐酸小檗碱的

含量。方法　十八烷基硅烷键合硅胶为填空剂柱;0.033mol

L-1

磷酸二氢钾2乙腈(60∶40)为流动相;检测波长为424nm。结果　盐酸小檗碱含量在1～5mg L-1线性范围为内,r=0.9999,平均加样回收率为99.67%,RSD=0.76%(n=5)。结论　实验表明,该方法方便快捷,准确,灵敏度高,重现性好。

关键词:盐酸小檗碱含量测定;黄连上清片;高效液相色谱　　黄连上清片是由黄连、黄柏等17味中药组成的复方制剂,具有清热通便、散风止痛功效。临床多用于头晕目眩,暴发火眼,牙齿疼痛,口舌生疮,咽喉肿痛,耳痛耳鸣,大便秘结,小便短赤等症。处方中黄柏、黄连中盐酸小檗碱是其主要有效成分。现行的质量标准[1]中没有盐酸小檗碱含量测定方法,故探索以高效液相法(HPLC)[2]测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量并做系统的方法学研究论证。研究发现:该法的系统误差小、测定快捷、准确、可靠,能更好地控制黄连上清片的质量。1　实验仪器与材料

仪器:高效液相色谱仪:Agilent1100。试药:乙腈为色谱纯(天津四友批号为030603101);水为二次重蒸水;其他试剂为分析纯;对照品:盐酸小檗碱对照品070829704(中国生物制品检定所供);样品:黄连上清片(批号040225、040607、040812,均由黄山天目药业有限公司提供)。2　方法与结果2.1　色谱条件与系统适用性试验　柱:以十八烷基硅烷键合

硅胶为填空剂;0.033mol L-1

磷酸二氢钾-乙腈(60∶40)为流动相;检测波长为424nm,理论板数按盐酸小檗碱蜂面积计算不低于4000;盐酸小檗碱的保留时间5～6min;进样量10μl。2.2　对照品溶液的制备　取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,用甲醇制成每1ml含盐酸小檗碱10μg的溶液,作为盐酸小檗碱对照品贮备溶液。2.3　样品溶液制备　取样品黄连上清片20片,除去糖衣,精密称定,研细,取2片的量,精密称定,置250ml烧瓶中,加沸水约150ml使溶解,稍冷后加入稀盐酸3ml,搅匀,放冷,转移至250ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,离心,取上清液作为供试品溶液。2.4　盐酸小檗碱线性关系　精密吸取盐酸小檗碱对照品贮备溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,将其配制成系列浓度对照品液,在上述色谱条件下,进样10μl,记录色谱图,以含量(mg L-1)为横坐标(X),峰面积(μV min-1)为纵坐标(Y),得回归方程为:Y=13020.6-2578.8,r=0.9999,表明含脱水穿心莲内酯的溶液浓度1～5mg L-1范围内具有良好线性关系。2.5　色谱进样精密度实验　精密吸取同一盐酸小檗碱对照

品溶液(2mg L-1),重复进样5次,每次10μl,以盐酸小檗

碱的峰面积计,RSD为0.96%(n=5)。结果表明,精密度较好(图1A)

。

图1　HPLC图谱

A.盐酸小檗碱对照品;B.黄连上清片盐酸小檗碱;C.黄连上清片空白

2.6　样品测定　精密吸取上述样品溶液,进样量10μl,注入高效液相色谱仪,记录色谱图(图1B),以外标法计算样品中

的盐酸小檗碱的含量,结果见表1。

表1　样品测定结果

产品批号

峰面积

PLC法测得的盐酸小檗碱含量(mg/片)

040225

25318.20.26804060730025.10.3132.7　重复性实验　同一批样品取5份,分别按2.6项下操作

测定,结果样品的盐酸小檗碱RSD为0.69%,重复性良好。结果见表2。

表2　重复性实验结果

进样次序

峰面积

RSD(%)

1

26113.3226352.4326067.30.64

426234.22.8　稳定性实验　以样品制成供试品溶液,分别在0、0.5、1、3、6、10h测定,RSD为0.31%,表明样品在10h内基本稳

定。结果见表3。

表3　稳定性实验结果

进样时间(h)

峰面积

RSD(%)

26113.30.526067.3125915.40.31

326091.5626362.510

26138.

2

2.9　加样回收试验　精密吸取按上述2.3方法制得的黄连

上清片上清液2ml,至25ml量瓶中,加入10mg L-1盐酸小檗碱对照品溶液3ml,用流动相稀释至刻度,按2.6方法测定,结果盐酸小檗碱含量平均回收率为96.34%,RSD=0.59%。2.10　空白对照试验　按处方比例制备黄连上清片阴性对照

HPLC法测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量

妇炎康复胶囊中黄芩苷TLC方法的改进

杨　惠

(安徽省铜陵市药品检验所,安徽铜陵

244000)

关键词:黄芩苷;薄层色谱测定法

妇炎康复胶囊具有清热利湿、化淤止痛的功效。用于湿

热淤阻所致的妇女带下,色黄质粘稠,或如豆渣状,气臭,少腹,腰骶疼痛,舌暗苔黄腻等症及慢性盆腔炎等疾病治疗。质量标准收载于《国家药品新药转正标准》第35册[1]。按此标准对本品中黄芩苷成分进行了薄层色谱定性鉴别,结果难以判定。而采用本文改进后方法,操作简便,重现性好,易于判定,结果令人满意。1药品及试剂　妇炎康复胶囊样品由四平市塔山制药厂提供;黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0715-9909);阴性对照品(缺黄芩,自制。处方中所用药材经检验符合《中国药典》2000年版的规定)。硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂),所用化学试剂均为分析纯。2实验方法与结果2.1标准方法　取样品约3.8g,加乙醚50ml回流1h,滤过,滤液挥干后加甲醇30ml,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水使溶解,加于已处理好的D101型大孔树脂柱上,用水50ml洗脱,弃去水液,再用70%乙醇50ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,滤过,滤液作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品,加乙醇制成每1ml含2mg的溶

μl,在醋酸乙酯-丁酮-甲酸-液,作为对照品溶液。点样5水(5∶3∶1∶1)展开系统中展开后晾干,喷以三氯化铁乙醇溶液。

2.2改进后的方法　取样品3.8g,同时取阴性对照品3.5g,分别加甲醇30ml超声处理30min,滤过;滤液蒸干,加水溶解[2],用盐酸调pH值到2～3,再用醋酸乙酯20ml提取2

次,合并醋酸乙酯层,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液、阴性对照品溶液。展开系统同上

。

图1　妇炎康复胶囊中黄芩苷TLC图

1.黄芩苷对照品溶液;2.供试品溶液;3.阴性对照品溶液

3　讨论　

妇炎康复胶囊黄芩苷的鉴别按标准的方法进行检验,结果供试品在与对照品相应的位置上,不能得到清晰可见相同颜色的斑点。而改用新方法检验所显斑点清晰,专属性好,重现性好,分离度高,易于判定。采用新法对市场的妇炎康复胶囊进行数批跟踪检验,结果完全一致,质量可控。参考文献:

[1]　国家药品新药转正标准[S].第35册:38.

[2]　刘晓琳.黄连上清胶囊的薄层色谱鉴别研究[J].安徽医药,

2003,7(4):303.

(收稿日期:2005-03-28)

表5　加样回收试验结果

黄连上清片盐酸小檗碱测得量回收率平均回收率RSD含量(mg)

0.

0.0.0.0.2825262728

3　讨论

(%)

(%)

加入量(mg)

0.

0.0.0.0.3131313131

(mg)0.0.0.0.0.588562571577587

(%)99.35100.64100.3299.0399.03

通过方法的方法学研究及样品含量实测,本文方法能方便快捷地检测出黄连上清片中盐酸小檗碱的含量(每片约为0.25～0.32mg),系统误差小、测定快捷、方法可行。参考文献:

[1]　中华人民共和国卫生部药典委员会.黄连上清片.卫生部药品

99.670.76

标准标准中药成方制剂.第6册[S].3-1225-92.

品,按含量测定方法项下处理,经HPLC法进样10μl测定,发

现在相同色谱条件下,阴性对照品在盐酸小檗碱相同保留时间处无吸收峰。结果见图1C。

[2]　中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典一部

[S].2000:附录ⅥB.

(收稿日期:2005-07-15)

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/jfi4.html