海南热带兰花抗氧化活性的研究

海 南 师 范 大 学

本 科 生 毕 业 论 文

题目：海南热带兰花的抗氧化活性研究

系 别： 化学系 学 院： 化学与化工学院

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指 导 教 师 签 名： 日期：

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目 录

1 引言 ....................................................................................................... 1 2 实验部分 ............................................................................................... 2 2.1 主要仪器、试剂和材料 .................................................................. 2 2.2 实验方法 .......................................................................................... 3 2.2.1 实验原理 .................................................................................. 3 2.2.2 羟自由基检测 .......................................................................... 3 2.2.3 羟自由基清除率的测定.......................................................... 3 3 结果与分析 ........................................................................................... 4 3.1荧光光谱 ............................................................................................ 4 3.2实验原理验证 .................................................................................... 4 3.3实验条件的研究 ................................................................................ 6 3.3.1 反应时间的影响 ...................................................................... 6 3.3.2 H2O2溶液用量的影响 ............................................................... 7 3.3.3 FeSO4溶液用量的影响 .......................................................... 8 3.4 正交实验确定最佳实验条件 .......................................................... 9 3.5 方法精密度测定 ............................................................................ 10 3.6 方法准确度测定 ............................................................................ 10 3.7 热带兰花水提物对羟基自由基的清除作用 ................................ 11 3.8石斛兰玉玲珑水提物的抗氧化活性及最佳的提取工艺研究 ..... 12 3.8.1浸泡时间的影响 ....................................................................... 12 3.8.2花瓣质量的影响 ....................................................................... 13 3.8.3超声时间的影响 ....................................................................... 14 3.8.4浸泡温度的影响 ....................................................................... 15 3.8.5正交试验确定最佳提取条件 ................................................... 16 3.8.6热带兰花各个部位的抗氧化性 ............................................... 17 4 结论 .................................................................................................... 18 致谢 .......................................................................................................... 18 参考文献 .................................................................................................. 18

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海南热带兰花的抗氧化活性研究

摘 要: 目的：考察几种海南热带兰花的抗氧化活性。方法：采用罗丹明-6G为荧光探针,分别测定几种海南热带兰花的的水提物对Fenton反应生成的羟基自由基的清除率，优化了体系的测量条件，筛选出了对羟基自由基具有较好清除率的兰花的最好提取工艺条件。实验结果表明，体系的最佳测量条件：罗丹明-6G与H2O2用量的摩尔比为1：60，与FeSO4用量的摩尔比为1：20，反应时间40min。最佳的提取条件为: m(石斛兰玉玲珑)：v(水)= 2.5：50（g/mL），提取温度50 ℃，浸泡3 h，超声提取60 min，对羟自由基率的清除率可达88.35%，海南热带兰花对羟自由基有清除作用，其中石斛兰玉玲珑的清除效果最好。

关键词: 罗丹明-6G； Fenton反应；羟自由基；热带兰花

Tropical orchids of antioxidant activity

Abstract:To investigate antioxidant activity of several Hainan tropical orchids. Methods: Rhodamine-6G as the fluorescent probe, to measure hydroxyl radical scavenging rate in Fenton reaction of water extract of several Tropical orchids, optimize the system of measurement conditions, and selected the best orchid extraction process on hydroxyl radical good clearance. The results showed that the best measuringcondition: the amount of rhodamine-6G and H2O2 molar ratio of 1:60, and the amount of the molar ratio of FeSO4 1:20, reaction time:40min. The best extraction conditions: m (Dendrobium exquisite jade): v (water) = 2.5:50 (g / mL), extraction temperature 50 ℃, soaked 3 h, ultrasonic extraction of 60 min, the clearance rate of hydroxyl radical rate was 88.35%, Tropical Orchid has Scavenging Action of hydroxyl radicals, Dendrobium jade exquisite have best removal effection. Key words: Rhodamine-6G; Fenton reaction; hydroxyl radical ；tropical orchid

1 引言

热带兰花为兰科草本植物，热带兰花品种繁多，可分为石斛兰、文心兰、莫氏兰等。石斛兰有很好的药用价值，据《神农本草经》中记载石斛兰有滋养胃阴,生津止渴，兼能清胃热。主治热病伤津，烦渴、舌干苔黑。现代研究表明，石斛兰中含石斛碱等生物碱，粘液质、淀粉等。有一定解热镇痛作用；能促进胃液分泌，助消化；有增强新陈代谢、抗衰老等作用[1]。

科学表明，人类的许多疾病是由于体内存在过剩的羟基自由基·OH而引起的。常见的有心脑血管疾病，肿瘤、老年性痴呆、白内障、糖尿病、肝病以及过早衰老等。传统的一些人工合成抗氧化剂如丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸甲酯(PG)等，由于有较大的毒副作用，许多国家已经停止或严格限制它们的使用，从植物原料中提取天然抗氧化剂是生物医药和食品的发展方向之一。兰花中含有大量的黄酮和多糖，这些天然的有机分子均有可能被羟基自由基氧化，从而具有清除羟基

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自由基的作用。

目前，常用的抗自由基活性检测方法主要有： 化学发光法[2]、比色法[3]、电子自旋共振法[4]、荧光光谱法[5,6]等。本实验采用Fenton反应生成·OH，在稀硫酸介质中Fe2+-H2O2体系产生的羟自由基可以氧化罗丹明-6G使其荧光猝灭，体系的荧光强度降低。抗氧化剂（热带兰花水提物）与体系中的罗丹明-6G争夺羟自由基从而使体系荧光强度减弱程度减小，据此原理建立了一种测定抗氧化剂对羟自由基清除作用的新方法。本方法灵敏度高、操作简便迅速，适用范围广泛，是测定羟基自由基和筛选天然抗氧化食品的有效方法之一。

海南拥有得天独厚的自然环境优势，是我国热带兰花生产最佳区域。目前海南热带兰花产业化发展程度较低，主要集中为种植及鲜花销售上[7-10]，如文心兰、莫氏兰、石斛兰等热带兰花的种植栽培[11-13]。而一些高附加值的兰花深加工产品，如兰花茶、兰花保健品、兰花化妆品等市场目前尚未开发。本文将对海南热带兰花的抗氧化活性进行研究，为综合开发利用海南热带兰花提供理论依据和新的发展方向。

2 实验部分

2.1 材料、试剂和仪器

材料：石斛兰：彩虹、迷人蕉、约定、玉玲珑、花蝴蝶、绿意、艾玛、畅想、玉 观音; 莫氏兰：小淘气、小斑吉、金色阳光、午后阳光、丹顶鹤、黛安娜; 蜻蜓兰：红宝石、梦妮、贝莎、美洲豹、紫气东来;文心兰：黄金3号 试剂：罗丹明-6G（New Jersey USA,分析纯）；FeSO4（天津市化学试剂一厂，分析纯）；H2O2（30%，广州市番禺力强化工厂，分析纯）；抗坏血酸（广东光华化学厂有限公司，分析纯）；H2SO4溶液（98%，广州市东红化工厂，分析纯）；

仪器：RF-5301PC荧光分光光度计（日本岛津）；BS124S电子天平（德国赛多利斯股份有限公司）；SK2200H 超声波发生器（上海科导超声仪器有限公司）；DF-101S集热式磁力搅拌器（金坛市金南仪器制造有限公司）

2.2 实验方法

2.2.1 实验原理

依据文献[14-15]，在稀硫酸介质中，Fenton反应是以H2O2为氧化剂，以Fe2+为催化体系的氧化法。其反应机理如下：

Fe2+ + H2O2 → Fe3+ + OH- + ·OH Fe + H2O2 → Fe + ·O2 + 2H

- 2 -

3+

2+

-+

·OH + Fe → Fe + OH ·O2- + Fe3+ → Fe2+ + O2

e???净反应：2H2O2 ?F2?2+3+-

2H2O + O2

所产生的·OH与罗丹明-6G作用后使体系的荧光强度下降，荧光强度的变化值与·OH的量有关，由此可以测定·OH的产生量。海南热带兰花水提物的加入会与体系中的罗丹明-6G争夺·OH从而使体系荧光强度减弱程度受到抑制。根据抑制程度来计算几种热带兰花的抗氧化性的强弱。

2.2.2 羟自由基检测

在室温（T=25±2℃）下，在两支10mL比色管中分别加入1.0mL 0.01mmol/L罗丹明-6G溶液，0.18mL 0.1mol/L H2SO4溶液，向其中一支再依次加入0.6mL 1mmol/LH2O2溶液，2.0mL 0.1mmol/L FeSO4溶液，分别加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，反应40min，于λex/λem=346/545nm、入射和出射光谱狭缝分别为5nm和3nm处测定参比溶液荧光强度（Fo）与反应溶液的荧光强度（F），计算试液的荧光猝灭值△F ( △F = Fo–F )并以此间接测定·OH的产生量。

2.2.3 羟自由基清除率的测定

在2.2.2所述体系中加入一定量的羟自由基清除剂（抗坏血酸VC），按2.2.2的操作测定加入羟自由基清除剂后溶液的荧光强度F?，羟自由基清除率的计算方法如下：

错误！未找到引用源。×100％ （2-1）

·2.2.4热带兰花（玉玲珑）的水提物的提取及抗氧化活性研究

运用单因素实验和正交实验考察花瓣的质量, 超声时间，浸泡超声温度三个影响因素对热带兰花（玉玲珑）的水提物的抗氧化活性影响，并筛选了最佳的提取工艺条件。

3 结果与分析

3.1荧光光谱原理分析

在346nm激发光的照射下，罗丹明-6G溶液的最大发射峰位在545nm, Fenton反应产生的·OH可以将其氧化并使荧光强度显著降低，加入羟自由基清除剂(抗坏血酸VC)后，与体系中的罗丹明-6G争夺羟自由基从而使体系荧光强度减弱程度减小，但荧光发射峰位保持不变。荧光光谱如图1所示。

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F5001400300200310020500520540560580600波长/nm

1. 罗丹明-6G（aq）+ H2SO4（aq）

2. 罗丹明-6G（aq）+ H2SO4（aq）+ H2O2（aq）+ FeSO4（aq）

3. 罗丹明-6G（aq）+ H2SO4（aq）+ H2O2（aq）+ FeSO4（aq）+VC（aq）

图1 荧光光谱

3.2实验原理验证

取四支10mL比色管，按表1分别加入相应试剂，定容至10mL，摇匀，反应40min，分别测定其荧光强度。实验结果如表1和图2所示。

由表1、图2可得结论，①号样的荧光强度很大，证明罗丹明-6G本身产生了特征荧光；②号样的的荧光强度介于①、③号样之间，说明抗坏血酸（VC）可以·OH反应；③号样的荧光强度最低，说明·OH可以使罗丹明-6G荧光猝灭；④号样与①号样的荧光强度大致相等，证明抗坏血酸（VC）不能和罗丹明-6G反应。

据此可知， Fenton反应生成的·OH可以将罗丹明-6G氧化并使其荧光猝灭，抗氧化剂（VC）与罗丹明-6G争夺·OH，使荧光强度减弱程度降低，而不是对罗丹明-6G的荧光猝灭才导致溶液荧光强度的改变。

表1 实验原理的验证

样品 1 2 3 4

R6G/mL 1.0 1.0 1.0 1.0

H2SO4/mL 0.18 0.18 0.18 0.18

H2O2/mL 0 0.6 0.6 0

FeSO4/mL 0 2.0 2.0 0

VC/mL 0 2.0 0 2.0

荧光强度F 494.8 376.5 38.27 496.3

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F50014400300200210030500520540560580600波长/nm1. 罗丹明-6G溶液+ H2SO4溶液

2. 罗丹明-6G溶液+ H2SO4溶液+ H2O2溶液+ FeSO4溶液+VC溶液 3. 罗丹明-6G溶液+ H2SO4溶液+ H2O2溶液+ FeSO4溶液 4. 罗丹明-6G溶液+ H2SO4溶液+VC溶液

图2 实验原理的验证

3.3 实验条件的研究

3.3.1反应时间的影响

按表2加入各种反应试剂，从反应10min起，每隔5min测定一次荧光强度，结果表明，反应30min以内，体系荧光强度随反应时间的增长而下降，反应30min以后，荧光强度下降的趋势变缓。实验数据见表2和图3。

表2 反应时间对荧光变化的影响

样品 1 2 3 4 5 6

R6G/ml 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

H2SO4/ml 0.18 0.18 0.18 0.18 0.18 0.18

H2O2/ml 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40

FeSO4/ml 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00

时间 10 15 20 25 30 35

F 48.37 40.54 32.93 27.83 25.34 25.34

- 5 -

7 8 1.00 1.00 0.18 0.18 0.40 0.40 2.00 2.00 40 50 25.76 25.67

F50484644424038363432302826241020304050时间/min图3 反应时间对荧光变化的影响

3.3.2 H2O2溶液用量的影响

测量1mmol/L H2O2溶液的加入量分别为为0.10mL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.50mL、0.60mL、0.70mL时的各样品的荧光强度。结果表明，当罗丹明6G与H2O2的摩尔比在1:10-1:40范围时荧光强度随着H2O2的加入量的增加而降低，在摩尔比为1：50之后，荧光强度几乎不变。实验数据见表3和图4示。

表3 H2O2溶液用量的影响

样品 1 2 3 4 5 6 7

R6G/ml 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

H2O2/ml FeSO4/ml H2SO4/ml 0.10 2.00 0.18 0.20 2.00 0.18 0.30 2.00 0.18 0.40 2.00 0.18 0.50 2.00 0.18 0.60 2.00 0.18 0.70 2.00 0.18

- 6 -

时间 35 35 35 35 35 35 35 摩尔比 1:10 1:20 1:30 1:40 1:50 1:60 1:70 F 117.9 57.45 39.50 25.85 20.99 20.38 22.29

8 1.00 0.80 2.00 0.18 35 1:80 20.48

F120100806040201:101:201:301:401:501:601:701:80罗丹明6G与H2O2的摩尔比

图4 H2O2溶液用量的影响

3.3.3 FeSO4溶液用量的影响

测量0.1mmol/L FeSO4溶液的加入量分别为0.40 mL、0.80 mL、1.20 mL、1.60 mL、2.00mL、2.40 mL、2.80 mL时的各样品的荧光强度，结果表明，当罗丹明-6G与FeSO4溶液的摩尔比为1:4-1:16范围时，随着FeSO4溶液加入量荧光强度下降较明显，在此之后荧光强度下降较缓。实验数据见表4和图5。

表4 FeSO4溶液用量的影响

样品 1 2 3 4 5 6 7

R6G/ml 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

H2O2/ml 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40

FeSO4/ml 0.40 0.80 1.20 1.60 2.00 2.40 2.80

H2SO4/ml 0.18 0.18 0.18 0.18 0.18 0.18 0.18

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时间 35 35 35 35 35 35 35 摩尔比 1:4 1:8 1:12 1:16 1:20 1:24 1:28 F 225.0 107.7 62.13 45.59 33.31 20.70 16.33

F2502001501005001:41:81:121:161:201:241:28罗丹明6G与FeSO4的摩尔比

图5 FeSO4溶液用量的影响

3.4正交实验确定最佳实验条件

综合考虑，选择罗丹明-6G与FeSO4溶液的摩尔比(A), 罗丹明-6G与H2O2溶液的摩尔比(B)，反应时间C(min)三个影响因素，设计三因素三水平的正交实验来确定最佳实验条件，因素水平设计见表5。实验结果如表6所示。

表5 因素水平表

因素 1 2 3

A 1：16 1：18 1：20

B 1：50 1：60 1：70

C 30 35 40

表6 正交实验的结果与分析

样品 1 2 3 4

A 1:16 1:16 1:16 1:18

B 1:50 1:60 1:70 1:50

C 30 35 40 35

荧光强度F 42.31 28.95 30.45 37.66

△F 383.1 396.4 394.9 387.7

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5 1:18 1:60 40 6 1:18 1:70 30 7 1:20 1:50 40 8 1:20 1:60 30 9 1:20 1:70 35 K1 1174 1171 1186 K2 1184 1198 1184 K3 1204 1193 1192 k1 391.5 390.3 395.4 k2 394.5 399.4 394.5 k3 401.4 397.7 397.5 极差R 9.9 9.1 2.9 主次顺序 A＞B＞C 优水平 A3 B2 C3 优组合 A3B2C3

28.19 26.78 25.19 20.85 25.95

397.2 398.6 400.2 404.5 399.5

由表6正交实验分析可知，测定体系荧光强度的实验条件最优组合为：A3 B2 C3，

即罗丹明-6G与H2O2溶液的摩尔比为1：60；罗丹明-6G与FeSO4溶液的摩尔比为1：20；反应时间为40min；也即：0.01mmol/L罗丹明-6G溶液用量为1mL，0.1mol/L H2SO4溶液用量为0.18mL，1mmol/L的H2O2溶液用量为0.6mL，0.1mmol/L的FeSO4溶液用量为2mL，反应时间为40min。

由表6极差分析结果显示，因素影响主次顺序为A＞B>C，即：罗丹明-6G与FeSO4溶液的摩尔比为主要因素，罗丹明-6G与H2O2溶液的摩尔比为次要因素，反应时间为不重要因素。

3.5方法精密度测定

在3.4所得最佳的实验条件下，按照2.2.3所述方法进行精密度实验。即：在10mL比色管中依次加入1.0mL 0.01mmol/L罗丹明-6G溶液，0.18mL 0.1mol/L H2SO4-溶液， 0.6mL 1mmol/L的H2O2溶液，同时加入1.0mL 1mmol/L VC溶液，然后加入2.0mL 0.1mmol/L的FeSO4溶液，反应时间是40min，平行测定荧光强度6次，相对标准偏差的计算公式如下，实验结果如表7所示。 标准偏差计算公式: 标准差 S =

?(x?x)n?12 (3-1)

相对标准偏差计算公式：RSD =

(3-2)

表7 方法的精密度实验

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样品 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD（%） F样 205.9 208.8 211.6 211.6 216. 4 206.4 210.1 ------- F样-F 193.3 196.2 199.0 199.1 203.8 193.8 197.5 ------- ·OH清除率/﹪

46.82 47.53 48.20 48.21 49.36 46.94 47.84 1.98

其中Fo =425.4 F=12.59 △F=Fo-F=412.8

本实验的相对标准偏差为1.98﹪，这表明本方法具有较好的稳定性和重现性。

3.6方法准确度测定

在选定的最佳实验条件下进行工作曲线的绘制，分别加入1mmol/L抗坏血酸（VC）溶液0.20mL、0.60mL、1.00mL，按方法2.2.3测定体系的荧光强度。得到线性回归方程为Y= 70.90375 X+58.05008，相关系数R=0.9993。另取2支比色管，在实验最佳条件下，分别加入1mmol/L抗坏血酸（VC）溶液0.30mL、0.90mL，采用同样的方法测定体系的荧光强度。结果如表8和图6所示。

表8 方法准确度的测定

样品 1 2 3 4 5

R6G/ml 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

H2SO4/ml 0.18 0.18 0.18 0.18 0.18

H2O2/ml 0.60 0.60 0.60 0.60 0.60

FeSO4/ml 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00

VC 0.20 0.60 1.00 0.30 0.90

F 72.84 99.37 129.6 79.92 121.2

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F130120?1101009080?700.20.40.60.81.0VC的体积/mL图6 方法准确度的测定

由公式3-3计算得到，当体系加入VC体积为0.3mL和0.9mL时，相对误差分别为0.76% 和-0.51%，说明该实验所采用的方法系统误差较小，准确度较高。

3.7海南热带兰花水提物对羟自由基的清除作用

将兰花花瓣称取1g，放在50ml锥形瓶中，加水50.00ml，在室温下（25 ℃左右），浸泡3h，超声60min，取水提物1.00ml，在本实验选定的体系最优条件下，即0.01mmol/L罗丹明-6G溶液用量为1mL，0.1mol/L H2SO4溶液用量为0.18mL，1mmol/L的H2O2溶液用量为0.6mL，0.1mmol/L的FeSO4溶液用量为2.0mL，反应时间为40min，测定几种热带兰花水提物对羟基自由基的清除率。结果见表9。结果表明，石斛兰中玉玲珑的水提物对羟基自由基的清除很好。

表9热带兰花的花瓣水提物对羟基自由基的清除作用

名称 石斛兰彩虹 石斛兰迷人蕉 石斛兰约定 石斛兰玉玲珑

拉丁文名

Den. Chaopraya Gem×Burana

jabe-compactum

Den. Woon Leng×Compactum

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F

314.9 283.1 235.5 356.2

·OH清除率/﹪

61.06

54.20 43.92 69.98

石斛兰绿意 Den. Burana Green 石斛兰艾玛 Den. Emma White 石斛兰畅想 Den. Emma White 石斛兰玉观音 Den. Burana jabe×Compactum 文心兰黄金3号 Onc. Gower Ramsey 'Gold 3' 莫氏兰小淘气 Mokara Choapraya Boy 莫氏兰小斑吉 Mokara Chittl Orange Spot 莫氏兰金色阳光 Mokara Sunshine Yellow 莫氏兰午后阳光 Mokara Kitiya 莫氏兰丹顶鹤 Mokara Top Red 莫氏兰黛安娜 Mokara Dianah Shore 蜻蜓兰红宝石 Aranda Ruby Makense 蜻蜓兰梦妮 Arathera Anne Block 蜻蜓兰贝莎 Arathera Beatrics NG 蜻蜓兰美洲豹 Aranda Bertha Brega 蜻蜓兰紫气东来 Aranda Chark Kuan \

F0 = 495.300 , F = 32.080

334.4 323.9 298.4 293.1 264.4 236.3 286.5 266. 0 216.0 261.4 268.3 236.5 271.2 298.7 215.3 271.1 65.27 63.00 57.49 56.36 50.16 44.10 54.93 50.49 39.71 49.51 51.01 44.14 51.63 57.56 39.56 51.60

3.8石斛兰玉玲珑水提物的抗氧化活性及最佳的提取工艺研究

3.8.1花的浸泡时间的影响

在最佳实验条件下，分别称取玉玲珑花瓣1g，加入50mL蒸馏水，在室温条件下，超声 60min，浸泡时间分别为1h，2h，3h，4h，5h，6h，7h。测量其荧光强度，结果表明，浸泡时间对花瓣的水提物的抗氧化活性影响不大。实验数据见表10和图7。

表10 浸泡时间的影响

样品 1 2 3 4 5 6 7

浸泡时间/h

1 2 3 4 5 6 7

花的质量/g 1.0016 1.0021 1.0009 1.0041 1.0023 0.9999 1.0001

F 193.8 210. 2 230.8 233.8 231.4 232.5 230.9

·OH清除率/﹪

40.15

43.86 48.59 49.26 48.73 48.96 48.61

- 12 -

F2802602402202001801601401200123456浸泡时间/h

图7 浸泡时间的影响

3.8.2 花瓣质量的影响

在最佳实验条件下，分别称取玉玲珑花瓣0.5g，1g，1.5g，2g，2.5g，3g，4g，5g，加入50mL蒸馏水，在室温条件下，浸泡3h，超声1h。测量其荧光强度。结果表明，加入1.5g花瓣以后，荧光强度增长趋势变缓。实验数据见表11和图8。

表11 花瓣质量的影响

样品 1 2 3 4 5 6 7 8

浸泡时间/h 3 3 3 3 3 3 3 3

超声时间/min 60 60 60 60 60 60 60 60

花的质量/g 0.5018 1.0094 1.4987 1.9959 2.5156 3.0117 3.9955 4.9950

F 292.2 337.4 380.3 392.5 394.7 397.9 398.8 400.1

- 13 -

F400380360340320300280024质量/g6

图8 花瓣重量的影响

3.8.3 超声时间的影响

在最佳实验条件下，分别称取玉玲珑花瓣1g，加入50mL蒸馏水，在室温条件下，浸泡3h，超声时间分别为15min，30min，45min，60min，75min，90min，105min，120min。测量其荧光强度。结果表明，超声60min以后，荧光强度增长的趋势变缓。实验数据见表12和图9。

表12 超声时间的影响

样品 1 2 3 4 5 6 7 8

浸泡时间/h

3 3 3 3 3 3 3 3 超声时间/min

15 30 45 60 75 90 105 120 花的质量/g 1.0049 0.9911 1.0018 1.0028 1.0077 1.0096 0.9935 1.0049 F 261.8 292. 2 315. 3 336.27 343.8 348.7 351.7 352.4

- 14 -

F360340320300280260020406080100120时间/min

图9 超声时间的影响

3.8.4 浸泡温度的影响

在最佳实验条件下，分别称取玉玲珑花瓣1g，加入50ml蒸馏水，浸泡3h，超声1h，分别在25 ℃，30 ℃，35 ℃，40 ℃，45 ℃，50 ℃，60 ℃，70 ℃的条件下浸泡超声。结果表明，浸泡超声温度为50℃时，荧光强度增长的趋势变缓。实验数据见表13和图10。

表13 浸泡温度的影响

样品 1 2 3 4 5 6 7 8

浸泡时间/h

3 3 3 3 3 3 3 3

温度/oC 25 30 35 40 45 50 60 70

超声时间/min

60 60 60 60 60 60 60 60

花的质量/g 1.0046 1.0059 1.0096 1.0019 1.0069 1.0083 1.0044 1.0044

F 291.5 293.5 298.2 304.4 316.5 328.9 332.5 333.4

- 15 -

F340330320310300290203040506070温度/℃

图10 浸泡温度的影响

3.8.5 正交试验确定最佳的提取工艺条件

综合考虑，选择花瓣的质量(A), 超声时间(B)，浸泡超声温度（C）三个影响因素，设计三因素三水平的正交实验来确定最佳实验条件，因素水平设计见表14。实验结果如表15所示。

表14 因素水平表

因素 1 2 3

A 1.5 2.0 2.5

- 16 -

B 45 60 75 C 45 50 55

表15 正交实验的结果与分析

样品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3 k1 k2 k3 极差R 主次顺序 优水平 优组合

A 1.5037 1.4981 1.5002 2.0013 2.0008 2.0066 2.5068 2.5091 2.5069 994.7 1071 1098 331.6 357.0 366.0 34.4

A3

B 45 60 75 45 60 75 45 60 75 1012 1063 1088 337.2 364.4 362.8 27.2 B2

C 45 50 55 50 55 45 55 45 50 1051 1068 1045 350.3 355. 9 348.2 7.7 A > B > C

C2 A3B2C2

荧光强度F 309.6 339.1 346.1 353.4 349.9 367.3 348.5 374.2 375.1

由表15正交实验的结果分析可知，测定体系荧光强度的提取工艺最优组合为：A3 B2C2，即：花瓣质量2.5 g；超声时间60min；超声浸泡温度50 ℃；

由表15极差分析结果显示，因素影响主次顺序为A>B>C，即：花瓣质量为主要因素，超声时间为次要因素，超声浸泡温度为不重要因素。

3.8.6热带兰花（玉玲珑）各个部分的抗氧化性

在最佳条件下，即：0.01mmol/L罗丹明-6G 1ml，0.1mol/LH2SO4 0.18ml，1mmol/LH2O2 0.6ml，花瓣2.5g中加入50ml水，在50 ℃下浸泡3h，超声60min，取1ml水提物后，加入0.1mmol/LFeSO4 2ml，实验结果见表16.

表16 玉玲珑各个部位的抗氧化性

编号 1 2 3 4

部位 花瓣 花心 花托 花茎

F 382.5 380.5 381.3 382.4 ·OH清除率/﹪

88.35 87.87 88.06 88.32

- 17 -

4 结论

用荧光法间接测定Fenton反应生成的羟基自由基，测定多种热带兰花的抗氧化能力，结果表明，石斛兰中的玉玲珑对羟基自由基的清除效果比较好。进一步优化了系的测量条件和筛选出了玉玲珑水提物最佳的提取工艺条件，即：0.01mmol/L罗丹明-6G 1ml，0.1mol/LH2SO4 0.18ml，1mmol/LH2O2 0.6ml，花瓣2.5g中加入50ml水，在50 ℃下浸泡3h，超声60min，取1ml水提物后，加入0.1mmol/LFeSO4 2ml，石斛兰玉玲珑花瓣的羟自由基率为88.35%，花心为87.87%，花托为88.06%，花茎为88.32%。

致谢

值此论文完稿之际，谨向导师纪明慧老师表示深深的感谢，感谢一直以来给我关心支持和悉心指导!纪老师以其严谨求实的治学态度、高度的敬业精神、孜孜以求的工作作风和大胆创新的进取精神对我今后的工作和学习产生重要影响。同时向张连华老师表示感谢，教授我许多关于荧光方面的专业知识。

另外，我还要感谢姜甫芝、林小连、李龙梅三位同学对我提供的无私的帮助，使我得以顺利完成实验部分。

最后，再次对关心、帮助过我的老师和同学表示衷心地感谢。

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