实验室常用溶液及试剂配制（重新排版）

实验室常用溶液及试剂配制

一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1

表一 普通酸碱溶液的配制 表二 常用酸碱指示剂配制 表三 混合酸碱指示剂配制

表四 容量分析基准物质的干燥 表五 缓冲溶液的配制

1、 氯化钾-盐酸缓冲溶液

2、 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、 乙酸-乙酸钠缓冲溶液

5、 磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、 硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、 氨水-氯化铵缓冲溶液 8、 常用缓冲溶液的配制

二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4

1、硝酸银（CAgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（CI2=0.1mol/L）标准溶液的配制

3、硫代硫酸钠（CNa2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（CHClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（CHCl=0.1mol/L）标准溶液的配制

6、乙二胺四乙酸二钠（CEDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（CK2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（CNaOH=1mol/L）标准溶液的配制

三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6

1、柠檬酸（C6H8O7·H2O）

2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷

9、硫酸镁（MgSO4）

四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8

1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱

3、维生素B6

4、维生素B2（核黄素）

5、维生素C（包被）

五、氨基酸检测----------------------------------------------------------------------------------10

1、赖氨酸硫酸盐含量的测定 2、苏氨酸的检测 3、赖氨酸

4、DL-蛋氨酸

六、抗生素测定----------------------------------------------------------------------------------12 七、氮（N）含量的测定（鱼粉）---------------------------------------------------------12

一、实验室常用溶液、试剂的配制

表一 普通酸碱溶液的配制

名 称 （分子式） 比重 （g/ml） 含量 近似摩尔浓（w/w%） 度 （mol/L） 36～38 65～68 95～98 99.9 85 28 12 15 18 17 15 15 欲配溶液的摩尔浓度（mol/L） 6 3 2 1 配制1L溶液所用的ml数（或g） 盐 酸（HcL） 1.18～1.19 500 381 84 253 39 400 250 191 42 177 19 200 167 128 28 118 12 134 （80） 83 64 14 59 6 77 （40） 硝 酸（HNO3） 1.39～1.40 硫 酸（H2SO4） 1.83～1.84 冰醋酸（Hac） 磷 酸（H3PO4） 1.05 1.69 氨水（NH3·H2O） 0.90～0.91 氢氧化钠（NaOH） 氢氧化钾（KOH）

表二 常用酸碱指示剂

指示剂 百里酚蓝（麝香草酚蓝） 甲基橙 溴甲酚绿 （240） （120） （339） （170） （113） （56.5） PKHIn 变色范围pH 酸色 碱色 1.65 3.4 4.9 12.～2.8 3.1～4.4 3.8～5.4 红 红 黄 黄 橙黄 蓝 配 制 方 法 0.1%的20%乙醇溶液 0.05%水溶液 0.1%的20%乙醇溶液或者 0.1g指示剂溶于2.9ml 0.05mol/L NaOH加水稀释至100ml 0.1%的60%乙醇溶液 0.1%的20%乙醇溶液 0.1%的60%乙醇溶液 0.1%的20%乙醇溶液 0.5%的90%乙醇溶液 0.1%的90%乙醇溶液 甲基红 5.0 4.4～6.2 6.2～7.3 6.8～8.0 8.0～9.6 8.0～10.0 9.4～10.6 红 黄 红 黄 无色 无色 黄 蓝 黄橙 蓝 红 蓝 溴百里酚蓝（麝香草酚蓝） 7.3 中性红 7.4 百里酚蓝（第二变色范围） 9.2 酚酞 百里酚酞

表三 混合酸碱指示剂

指示剂组成（体积比） 一份0.1%甲基橙水溶液 一份0.25%靛蓝二磺酸钠水溶液 9.4 10.0 变色点pH 4.1 酸色 紫 碱色 绿 备注 灯光下可滴定

一份0.02%甲基橙水溶液 一份0.1溴甲酚绿钠盐水溶液 三份0.1%溴甲酚绿20%乙醇溶液 一份0.2%甲基红60%乙醇溶液 一份0.2%甲基红乙醇溶液 一份0.1%次甲基蓝乙醇溶液 4.3 橙 蓝绿 PH3.5黄色 PH4.05绿黄 PH4.3浅绿 颜色变化极鲜明 PH5.2红紫 PH5.4暗蓝 PH5.6绿色 PH5.6蓝绿 PH5.8蓝色 PH6.0浅紫 PH6.2蓝紫 PH6.2黄紫 PH6.6紫 PH6.8蓝紫 PH7.0为蓝绿 必须保存在棕色瓶中 PH8.2玫瑰色 PH8.4紫色 PH9.0绿色 5.1 酒红 绿 5.4 红紫 绿 一份0.1%溴甲酚绿钠盐水溶液 一份0.1%绿酚红钠盐水溶液 6.1 黄绿 蓝紫 一份0.1%溴甲酚紫钠盐水溶液 一份0.1溴百里酚蓝钠盐水溶液 一份0.1中性红乙醇溶液 一份0.1次甲基蓝乙醇溶液 一份0.1甲酚红钠盐水溶液 三份0.1%百里酚蓝钠盐水溶液 一份0.1%百里酚蓝50%乙醇溶液 三份0.1酚酞50%乙醇溶液

表四 容量分析基准物质的干燥

基准物质 6.7 黄 紫蓝 7.0 蓝紫 绿 8.3 9.0 黄 黄 紫 紫 干燥温度和时间 基准物质 干燥温度和时间 500-650℃，干燥40-50min 碳酸钠（NaCO3） 500～650℃，40-50min 氯化物（NaCl） 草酸钠（H2C2O4） 150-200℃，1-1.5h 硝酸银（AgNO3） 室温，硫酸干燥器中至恒温 120℃，干燥至恒重 800℃灼烧至恒重 草酸（H2C2·2H2O） 室温，空气干燥2-4h 碳酸钙（CaCO3） 硼砂（Na2B2O·10H2O） 室温，在NaCl和蔗糖氧化锌（ZnO） 饱和液的干燥器中，4h 邻苯二甲酸氢钾（KHC6H4O4） 100-120℃干燥至恒重 锌（Zn） 室温，干燥器24h以上 800℃灼烧至恒重 重铬酸钾（K2Cr2O7） 100-110℃，干燥3-4h 氧化镁（MgO）

表五 缓冲溶液的配制

1、 氯化钾-盐酸缓冲溶液 0.2mol/LKCl（ml） 50 50 64.3 85.5 50 41.5 108.5 50 26.3 123.7 50 16.6 133.4 50 10.6 139.4 50 6.7 143.3 0.2mol/LHCl（ml） 97.0 水（ml）

53.0 PH（20℃） 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2

2、 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 0.2mol/LKHC6H4O4（ml） 50 0.2mol/LHCl（ml） 水（ml） PH（20℃）

3、 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 0.2mol/LKHC6H4O4（ml） 50 0.2mol/LHCl（ml） 水（ml） PH（20℃）

4、 乙酸-乙酸钠缓冲溶液 0.2mol/LHAc（ml） 185 0.2mol/LNaAc（ml） 15 PH（20℃） 3.6

5、 磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 0.2mol/LKH2PO4（ml） 0.2mol/LNaOH（ml） 水（ml） PH（20℃）

6、 硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 0.2mol/L硼砂（ml） 0.2mol/LNaOH（ml） PH（20℃）

7、 氨水-氯化铵缓冲溶液 0.2mol/LNH3·H2O（ml） 1 0.2mol/LNH4Cl（ml） 32 PH（20℃）

8、 常用缓冲溶液的配制 PH 3.6 4.0 4.5 5.0 8.0 8.5

50 32.95 117.05 2.6 50 20.32 129.68 3.0 50 9.90 140.10 3.4 50 2.63 147.37 3.8 46.70 103.30 2.2 50 7.50 142.50 4.4 50 17.70 132.20 4.8 50 29.95 120.05 5.2 50 39.85 110.15 5.6 0.40 149.60 4.0 164 36 4.0 126 74 4.4 80 120 4.8 42 158 5.2 19 181 5.6 50 3.72 146.26 5.8 50 8.60 141.20 6.2 50 17.80 132.20 6.6 50 29.63 120.37 7.0 50 39.50 110.50 7.4 50 45.20 104.80 7.8 90 10 9.35 80 20 9.48 70 30 9.66 60 40 9.94 50 50 11.04 40 60 12.32 1 8 8.58 1 2 9.1 2 1 9.8 8 1 10.4 32 1 11.0 8.0 配制方法 NaAc·3H2O 8g， 溶于适量水中，加6mol/LHAc 134ml，稀释至500ml NaAc·3H2O 20g 溶于适量水中，加6mol/LHAc 134ml，稀释至500ml NaAc·3H2O 32g 溶于适量水中，加6mol/LHAc 68ml，稀释至500ml NaAc·3H2O 50g 溶于适量水中，加6mol/LHAc 34ml，稀释至500ml NH4Cl 50g 溶于适量水中，加15mol/LNH3·H2O 3.5ml，稀释至500ml NH4Cl 40g 溶于适量水中，加15mol/LNH3·H2O 8.8ml，稀释至500ml

9.0 9.5 10 NH4Cl 35g 溶于适量水中，加15mol/LNH3·H2O 24ml，稀释至500ml NH4Cl 30g 溶于适量水中，加15mol/LNH3·H2O 65ml，稀释至500ml NH4Cl 27g 溶于适量水中，加15mol/LNH3·H2O 197ml，稀释至500ml

二、实验室常用标准溶液的配制及其标定

1、硝酸银（CAgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制

配制：称取硝酸银17.5g，溶于1000ml水中，摇匀，溶液保存于棕色瓶中。 标定：称取基准氯化钠（NaCl）0.2g（110℃高燥至恒重）（精确到0.0002g），加水50ml溶解， 再加2%淀粉（不含Cl-）溶液5ml，碳酸钙（CaCO3）0.1g与荧光黄指示剂8滴，用配制 好的硝酸银溶液滴定至溶液由黄绿色变成微红色。即为终点。

计算： CAgNO3= m（NaCl） / V（AgNO3）×58.44 ×1000 C-----硝酸银溶液的浓度，mol/L； m-----氯化钠的质量，g；

V----消耗硝酸银溶液的体积，ml； 58.44----每mol氯化钠的克数。

2、碘（CI2=0.1mol/L）标准溶液的配制

配制：称取13g碘及35g碘化钾，溶于100ml水中，稀释至1000ml，摇匀，保存于棕色瓶中。 标定：称取0.15g基准三氧化二砷于碘量瓶中，加4ml氢氧化钠（1mol/L）溶解，加50ml水， 2滴酚酞指示剂（10g/L），用硫酸（1mol/L）中和，加碳酸氢钠（NaHCO3）3g及3ml淀 粉（5g/L），用配制好的碘液滴定至溶液为浅蓝色，同时作空白试验。 计算： CI2= m / （V1-V2）×0.04946 C---碘溶液的浓度，mol/L；

V1----试验组消耗碘溶液的体积，ml； V2----空白组消耗碘溶液的体积，ml； m----三氧化二砷的质量，g。

3、硫代硫酸钠（CNa2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 配制：称取26gNa2S2O3·5H2O或16g Na2S2O3，溶于1000ml水中，缓缓煮沸10min，冷却， 放置两周后过滤备用。

标定：称取0.15g（精确到0.0001g）于120℃烘至恒重的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中，溶于 25ml水，加2g碘化钾及20ml硫酸（20%），摇匀，于暗处放置10min，加150ml水， 用配制好的Na2S2O3（0.1mol/L）滴定，近终点时加3ml淀粉指示剂（5g/L），继续滴 定至溶液由蓝色变为亮绿色，同时作空白试验。

计算： C Na2S2O3= m / （V1-V2）×0.04903 C------ Na2S2O3标准溶液的摩尔浓度，mol/L； V1-----试验组消耗Na2S2O3溶液的体积，ml； V2----空白组消耗Na2S2O3溶液的体积，ml； m-----重铬酸钾的质量，g。

0.04903-------与1.00ml Na2S2O3标准溶液相当的以g表示的重铬酸钾的质量。

4、高氯酸（CHClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制

配制：量取8.5ml高氯酸，在搅拌下注入500ml冰乙酸中，混匀。在室温下滴加20ml乙酸酐， 搅拌至溶液均匀。冷却后用冰乙酸稀释至1000ml，摇匀。

标定：称取0.6g于105-110℃烘至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾（精确到0.0001g），置于干燥的

锥形瓶中，加入50ml冰乙酸，温热溶解。加2-3滴结晶紫指示剂（5g/L），用配好的高 氯酸溶液滴定至溶液由紫色变为蓝色（微带紫色）。（注：本溶液使用前标定，标定高氯 酸标准溶液时的温度应与使用该标准溶液滴定时的温度相同。） 计算：C= m / V×0.2042

C------高氯酸标准溶液的浓度，mol/L； V-----消耗高氯酸溶液的体积，ml； m-----邻苯二甲酸氢钾的质量，g。

5、盐酸（CHCl=0.1mol/L）标准溶液的配制

配制：量取9.0ml盐酸，注入1000ml水，摇匀。

标定：称取于270-300℃灼烧至恒重的基准无水碳酸钠0.2g（精确到0.0001g），溶于50ml水 中，加10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗 红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同时作空白。 计算： C= m / （V1-V2）×0.05299 C-----盐酸标准溶液的浓度，mol/L； m-----无水碳酸钠的质量，g；

V1----试验组消耗盐酸溶液的体积，ml； V2----空白组消耗盐酸溶液的体积，ml；

6、乙二胺四乙酸二钠（CEDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制

配制：称取40g乙二胺四乙酸二钠，加热溶于1000ml水中，冷却，摇匀。 标定：称取0.25g于800℃灼烧至恒重的基准氧化锌（精确到0.0001g），用少量水润湿，加2ml 盐酸溶液（20%）使样品溶解，加100ml水用氨水溶液（10%）中和至PH7-8，加10ml 氨-氯化铵缓冲溶液甲（PH≈10）及5滴铬黑体指示剂（5g/L），用配好的乙二胺四乙酸 二钠（0.1mol/L）溶液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色。同时作空白。 计算： C= m / （V1-V2）×0.08138 C-----乙二胺四乙酸二钠标准溶液的浓度，mol/L； V1----试验组消耗乙二胺四乙酸二钠溶液的体积，ml； V2----空白组消耗乙二胺四乙酸二钠溶液的体积，ml； m----氧化锌的质量，g。

7、高锰酸钾（CK2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制

配制：称取3.3g高锰酸钾，溶于1050ml水中，缓缓煮沸15min，冷却后置于暗处保存两周， 过滤于干燥的棕色瓶中。

标定：称取0.2g于105-110℃烘至恒重的基准草酸钠（精确到0.0001g），溶于100ml硫酸溶液 （8+92），用配好的高锰酸钾溶液滴定，近终点时加热至65℃，继续滴定至溶液呈粉红色 保持30秒，同时作空白。

计算：CK2MnO4= m / （V1-V2）×0.06700 C-----高锰酸钾标准溶液的浓度，mol/L； V1----试验组消耗高锰酸钾溶液的体积，ml； V2----空白组消耗高锰酸钾溶液的体积，ml； m----草酸钠的质量，g。

8、氢氧化钠（CNaOH=1mol/L）标准溶液的配制

配制：称取100g氢氧化钠，溶于100ml水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清 亮。用塑料管虹吸取52ml上清液，注入1000ml无二氧化碳的水中，摇匀。 标定：称取于105-110℃烘至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾6g（精确到0.0001g），溶于80ml无

二氧化碳的水中，加2滴酚酞指示剂（10g/L），用配好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉 红色，同时作空白试验。

计算：CNaOH= m / （V1-V2）×0.2042 C-----氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L； V1----试验组消耗氢氧化钠溶液的体积，ml； V2----空白组消耗氢氧化钠溶液的体积，ml； m----邻苯二甲酸氢钾的质量，g。

三、常见物质的实验室试验方法

1、柠檬酸（C6H8O7·H2O）

实验：称取试样1.5g（精确到0.0002g）于三角瓶内，加入水50ml溶解，加酚酞指示剂3滴， 用1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色为终点，同时做空白试验。 计算：X%（一水）= （V1-V0）×C×0.06404 / m×（1-0.08566）×100 X%（无水）= （V1-V0）×C×0.06404 / m×100 V1-----消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；

V0-----空白所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml； C------氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L； m---样品质量。

2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 实验：称取2g（精确到0.0002g）样品，用10ml盐酸（1+1）溶解，转移至100ml容量瓶中定溶， 用移液管吸取10ml于250ml锥形瓶中，加50ml水，5ml蔗糖溶液（25g/L），2ml三乙酸 胺（1+1），1ml乙二胺（1+1），1滴孔雀绿指示液（1g/L），滴加氢氧化钾溶液（200g/L） 至无色，再过量10ml，加0.1g盐酸羟胺（每加一种试剂都要摇匀），加钙黄绿素少许，在 黑色背景下用0.05mol/L的EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点。 计算：Ca%= C×V×0.4008 / m ×100 C------EDTA标准溶液的浓度，mol/L； V-----消耗EDTA标准溶液的体积，ml； m----样品质量。

3、氟（Fˉ）含量的测定： a、标准曲线的绘制； b、试样含量的测定：

实验：称取0.5g（精确到0.0002g）置于50ml纳氏比色管中，加1mol/L盐酸10ml，密闭提取 1h（不时摇动），避免粘于管壁，提取后加总离子强度缓冲液25ml，加水至刻度，以滤 纸过滤。以氟电极测平衡电位值。

计算：X= C×50×1000 / m×1000 = 50C m X-----试样中氟含量， m---试样质量，g；

C-----据电位值查得的浓度，

总离子强度缓冲液：现配现用，3mol/L乙酸钠；0.75mol/L柠檬酸钠，配成（1+1）。 测定时，用蒸馏水洗电极装置至值为-370以后。

4、磷（P）的测定

磷标准曲线的绘制：准确移取磷标准溶液（分析纯的磷酸二氢钾，在105℃干燥1h，冷却后称 取0.2195g，溶于1L的容量瓶中，加硝酸3ml，用水稀释至刻度，得到50ug/ml溶

液），分别吸取0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、15.0ml于50ml容量瓶 中，各加入磷显色液（钒-钼酸铵显色液：偏钒酸铵1.25g，加250ml硝酸于1000ml 容量瓶中；钼酸铵25g于烧杯中，加400ml水溶解，冷却下，将此液倒入容量瓶中， 定容）10ml，用蒸馏水定容，摇匀放置10min以上，以0.0为参比，在400nm波长 测定各溶液的吸光度。以横坐标为磷含量，纵坐标为吸光度，作标准曲线。 样品的测定（磷酸氢钙）：移取测钙时所用的试样溶液5ml于100ml容量瓶中，用水定容，摇 匀，准确移取2ml于50ml容量瓶中，加磷显色液10ml，用水定容，测其吸光度。 计算： P%= W×稀释倍数 / m×106 ×100 W----以吸光度算出的浓度， m----试样质量，g。

5、硫酸铜（CuSO4·5H2O）

鉴别：1、Cu2+，取试样溶液，加0.5ml乙二胺四乙酸二钠溶液（15%，m/v），0.5ml氢氧化钠 溶液（0.1mol/L），1ml乙酸乙酯，振摇，有机层显黄棕色。

2、SO42-，取试样溶液，置于白色瓷板上，加BaCl2溶液（5%，m/v），即有白色沉淀生 成，在盐酸和硝酸中不溶。

测定：称取0.35g左右（精确到0.0002g）置于碘量瓶中，加50ml水溶解，40ml冰乙酸，2g碘 化钾（10mlKI溶液），摇匀，于暗处放置10min，用Na2S2O3标准溶液滴定至淡蓝色， 加2ml淀粉，继续滴定至无蓝色（或蓝色刚刚消失为终点）。 计算：硫酸铜%= C×V×0.06355 / m ×100 C------Na2S2O3标准溶液的浓度，mol/L； V-----消耗Na2S2O3标准溶液体积，ml； m-----样品质量，g。

6、硫酸锌（ZnSO4·H2O）

实验：称取0.2g试样，加50ml水溶解，加3g酒石酸钾钠，2ml浓氨水，50mg络黑体，用EDTA 标准溶液（0.05mol/L）滴定至紫色变为纯蓝色。

计算：ZnSO4%= C×V×0.06537 / m ×100% C-----EDTA标准溶液的浓度，mol/L； V-----消耗EDTA标准溶液的体积，ml； m----样品质量。

7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O）

实验：称取0.35g试样于250ml三角瓶中，加50ml水，5ml浓硫酸（缓慢加入），2ml浓磷酸， 冷却至室温，用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液滴定至粉红色即为终点。 实验：FeSO4%= C×V×0.05585 / m×100% C-----高锰酸钾标准溶液的浓度，mol/L； V-----消耗高锰酸钾标准溶液的体积，ml； m----试样的质量。

8、砷

原理：在酸性介质中，金属锌将砷化物还原为砷化氢，砷化氢在溴化汞试纸上形成棕黄色砷斑 与标准砷进行比较。 试剂：盐酸（HCl），碘化钾（KI），氧化亚锡盐酸溶液（40%、m/v），无砷金属锌，乙酸铅棉花·溴 化汞试纸，砷标准溶液（1ug/ml）。

测定：称取1g试样（精确到0.01g）置于广口瓶中，用水稀释至70ml，加6ml盐酸，摇匀，加 1g碘化钾（5mlKI溶液、200g/L），再滴加氯化亚锡，直到溶液由黄色变成无色或白色，

摇匀，放置10min，加2.5g无砷金属锌，装好置于暗处25-30℃放置1-1.5h，溴化汞试纸 所呈棕黄色不得深于标准。

9、硫酸镁（MgSO4）：无色结晶或白色粉末。 实验：称取试样1g（精确到0.0002g），用水溶解，转移至100ml容量瓶中，定容，准确吸取 25ml溶液至250ml锥形瓶中，加30ml水，10ml氨-氯化铵缓冲溶液（PH=10），及5滴 铬黑体指示剂（0.5%），用EDTA滴定至溶液由紫红色变为纯蓝色为终点。 计算：X%= C×V×0.02431 / m×100 C------EDTA标准溶液的浓度，mol/L； V-----消耗EDTA标准溶液的体积，ml； m----样品质量，g。

另：沸石粉、滑石粉、石膏粉和膨润土，只测Pb、Cd和As。

四、维生素检测

1、甜菜碱盐酸盐 1）、原理：采用非水滴定法，用乙酸汞将甜菜碱盐酸盐转化为乙酸盐和难电离的氯化汞，在乙酸介 质中用高氯酸滴定溶液对生成的乙酸盐进行滴定。 2）、试剂：①冰乙酸；②乙酸汞溶液，将50g乙酸汞研细，加1000ml冰乙酸溶解，置棕色瓶中， 密闭保存。③结晶紫指示剂；2g/L，取2g结晶紫加100ml冰乙酸；④高氯酸标准滴定液， 0.1mol/L的溶液。 3）、测定：取试样预先在105℃烘箱中干燥至恒重，称取干燥试样0.4g（精确到0.0002g），加50ml 冰乙酸加热溶解，加25ml乙酸汞溶液，冷却，加结晶紫指示剂2滴，用0.1mol/L的高 氯酸标准溶液滴定到溶液呈绿色，同时作空白试验。 4）、计算： X%= （V-V0）×C×0.01536 / M×100 C----高氯酸标准溶液的浓度mol/L

V---试验组消耗高氯酸标准溶液的体积ml V0---空白组消耗高氯酸标准溶液的体积ml m---试样质量。

2、氯化胆碱 1）、操作步骤：称取经105℃干燥至恒重的试样1g（精确到0.0002g），置于100ml容量瓶中， 加水70ml混匀，在约80℃水浴上加热15min，取出，在电动振荡器振荡20min，用水定容 至100ml，过滤，吸取10ml滤液于100ml高型烧杯中，在冰箱内冷却到5℃以下，加10ml 雷氏盐溶液（2%），不时搅拌反应30min（再令沉淀静置陈化15min），然后将沉淀定量到 转移到事先在105℃烘干至恒重的玻璃砂芯坩埚中，减压抽滤，在用水洗涤沉淀3-4次， 每次10ml，将装有沉淀的坩埚滤器放入烘箱，105℃烘2h称重。 2）、试剂： 雷氏盐甲醇溶液（2%）：2g雷氏盐，溶于100ml甲醇中，放置于低温下保存。

氨制硝酸银溶液：取硝酸银1g，加水20ml，滴加氨试剂（取浓氨水400ml，加水至1000ml）， 边加边搅拌，至棕色沉淀将近全溶，过滤，置于棕色瓶中，在暗处保存。

胺盐定性分析：称取3-4g试样，煮50ml水至70-80℃，在加样品，摇匀充分溶解，过滤于150ml 三角瓶中，加入1ml浓硫酸，摇匀，将滤液煮沸，用氨制硝酸盐试剂沾滤纸测 其气，观察试纸颜色是否发黑，继续煮1-2min，从电炉上取下放冷，加40%氢 氧化钠5ml再煮沸，用PH湿润试纸测其蒸气的PH值，PH在7-8为合格。 3）、计算：氯化胆碱%= 沉淀重×3.3045 / 样品重量×100% 氯化胆碱仲裁法（非水滴定法）：

1、原理：采用非水滴定法，用乙酸汞将氯化胆碱转化成乙酸盐和难电离的氯化汞，在乙酸介 质中，以高氯酸对生成的乙酸盐进行滴定。

2、试剂：5%乙酸汞溶液、50g/L（称取5g乙酸汞研细，用微热的冰乙酸溶解并稀释至100ml， 在棕色瓶中密封保存；0.2%结晶紫、2g/L（称取0.2g，加100ml冰乙酸）

3、测定步骤：称取试样0.3g（精确到0.0002g）置于100ml锥形瓶中，加20ml冰乙酸，2ml 乙酸酐，10ml乙酸汞溶液和2滴结晶紫指示剂，摇匀，用高氯酸标准溶液滴定至溶 液呈纯蓝色。即为终点。同时做空白试验。

4、计算：X%= C×（V1-V0）×139.63 / m×1000 ×100 C-----高氯酸标准溶液的浓度，mol/L； V1----试验组消耗高氯酸溶液的体积，ml； V0----空白组消耗高氯酸溶液的体积，ml； m----样品的质量，g。

139.63-----氯化胆碱的分子量。

3、维生素B6 1）步骤：称0.15g样品（精确到0.0002g），加冰乙酸20ml，乙酸汞溶液5ml，温热溶解，放冷， 加结晶紫指示剂1滴，用高氯酸标准溶液滴定至溶液呈蓝绿色，同时做空白校正。 2）计算：VitB6%= （V-V0）×F×0.02056 / m×100 V----样品溶液耗高氯酸标准溶液的体积，ml； V0----空白溶液耗高氯酸标准溶液的体积，ml； F-----高氯酸标准溶液浓度，mol/L； m-----样品重，g。

本法适用于化学合成制得的vitB6。

4、维生素B2（核黄素）

1）步骤：避光操作，称取0.075g（精确到0.0002g），置于烧杯中，加冰乙酸1ml和水75ml， 加热溶解后，加水稀释放冷，移置500ml容量瓶中，用水定容。摇匀，吸取10ml 于100ml容量瓶中，加1.4%乙酸钠溶液7ml。并用水定容，同时做空白试验作对 照。以444nm波长测吸光度。

2）计算： VitB2%= A / 323×L×C×100= 50A 323m×100% A-----样品吸光度；

323----维生素B2的系数； L----光路长度1cm；

C-----100ml溶液中样品的g数。

5、维生素C（包被）

1）步骤：称取0.2g于250ml三角瓶中，加水100ml（煮沸，冷却），10ml冰乙酸，1ml1%淀 粉指示剂，用0.1mol/L碘标准溶液滴定至溶液为蓝色。 2）计算：VitC%= V×F×0.00886 / m×100 V-----消耗碘标准溶液的体积，ml； m----试样质量，g；

F---浓度校正系数（碘标液/样品液浓度）碘标准溶液的浓度，mol/L。

五、氨基酸检测

1、赖氨酸硫酸盐含量的测定

1）原理：赖氨酸在PH≤3.0是与茚三酮反应生成红色化合物，其颜色深浅与赖氨酸含量存在性性关

系。

2）试剂：1、茚三酮A液：称取茚三酮1.50g于烧杯中，量取110ml乙二醇-甲谜于烧杯中，溶解。 2、茚三酮B液：称取1.80g二水氯化铜（CuCl2·2H2O）于烧杯中，再量取0.1mol/L柠檬 酸39ml于烧杯中，搅拌使其溶解。

3、将A、B两液全部转入1000ml容量瓶中定容，摇匀得茚三酮显色液。 4、赖氨酸空白显色液、称取1.80g二水氯化铜（CuCl2·2H2O）于烧杯中，再量取0.1mol/L 柠檬酸39ml于烧杯中，搅拌使其溶解。转移至1000ml容量瓶中定容，摇匀即可。 3）标准曲线的绘制

标准贮备液：称取L-赖氨酸2克左右于1000ml容量瓶中,加1mol/L盐酸1ml用水溶解，定容。 则浓度大约在0.2mg/ml.

标准曲线的绘制:分别吸取3.0,5.0,10.0,11.0,12.0,13.0和14.0ml标准贮备液于100ml容量瓶中, 加水定容摇匀.在以上各容量瓶中分别吸取2.00ml于比色管中,然后在每只比色 管中再加10ml印三酮显色液,不定容,用力振摇.于沸水浴中水浴40分钟.立即冷 却至室温.同时作空白(只是不加分解液).在分光光度计上于475nm波长处,以空白 调零,测量各吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,作图. 4）、样品的测定：称取样品1.5克左右,加1mol/L的盐酸7ml充分溶解样品，用水定容，过滤，吸 取2.00ml于100ml容量瓶中，加水定容，摇匀。其它同作标准曲线的步骤。测 出吸光度。 5）、计算：于标准曲线上查出所测样品的浓度，代入公式 X（%）= C×500 / M

C--------为从标准曲线上查得的样品的浓度。 M-------样品的质量。

500-----为样品稀释的倍数和转变为百分含量的系数。（空白加样品液和空白试液。

2、苏氨酸的检测：允许相对偏差不得超过0.3%. 项目 含量 比旋度 干燥失重 铵盐 灼烧残渣 重金属(以铅计), 砷(以砷计) 指标 一级 98．5 -26.0~-29.0 1.0 0.04 0.3 20 2 0.50 0.5 二级 95．0 -25.5~28.5 1）试剂和溶液：L-苏氨酸标准品:生化试剂BR,

硅胶GF254薄层层析板.若发现受潮,需要80度烘干30分钟,恢复活性后使用. 展开剂:正丁醇:醋酸:水=6.17:2.86:1(体积比) 显色剂:0.5%茚三酮丙酮溶液.

2） 鉴别步骤：取适量样品与L-苏氨酸标准品,用蒸馏水分别制成浓度30毫克每毫升的溶液,照 薄层色谱法试验.取上述两种溶液0.5毫升分别点样于同一硅胶薄层板上,将点好的 样的薄层板放入层析缸的展开剂中展开,展开后于70度烘干.以0.5%茚三酮显色剂 喷雾,70度烘干显色.供试品与L-苏氨酸标准品均显紫红色,两者主斑点位置相同,则 判定本品为L-苏氨酸．

3）试剂：盐酸：１＋３；冰乙酸：６％（v/v）溶液；

硫化钠：１克硫化钠溶于１０ml水中，临用时新配制；铅标准溶液：１ml

比旋度：称取干燥试样3g，用水溶解，转移至50ml容量瓶，加水定容，摇匀过滤， 测定，预热旋光仪后，用蒸馏水调零，润洗至少2遍。苏氨酸为右旋用“-”

4）含量：试样先在105度干燥至恒重，称取样品0.2克,置于250ml的三角瓶中,加3ml甲酸和 50ml冰乙酸使之溶解，5ml乙酸汞，10滴α-奈酚苯基甲醇指示剂,用0.1mol/L的高氯 酸标液滴定至橙黄→黄绿色为终点，并做空白试验校正.

若滴定样品时与标定高氯酸滴定液时的温度差在10度,则应重新标定,若未超过10度, 则可根据下式将高氯酸滴定浓度加以校正。

5）结果计算:C1= C0 / 1+0.0011(t1-t0)

样品中L-苏氨酸的含量按式计算:X%= 0.1191×C1×(V1-V0)×100 m% 6）鉴别试验：本鉴别试验采用薄层层析法

3、赖氨酸 1）、失重（水分），称取约1g试样于105℃烘箱中烘至恒重。 2）、含量测定：称取约0.2g试样，加水3ml甲酸（使之溶解后），加5ml冰乙酸和5ml乙酸汞， 加10滴α指示剂，用0.1mol/L高氯酸的冰乙酸标准溶液滴定至溶液由橙黄色变为黄绿色为终 点。

3）计算：X%= C×（V-V0）×0.09132 m×100 C-----标准溶液的浓度，mol/L； V----消耗标准溶液的体积，ml； V0----0.05ml；

m----试样质量，g。

4）溶液的比旋度：指在液层长度为1dm，浓度为1g/mp，温度为20℃及用钠光谱线波长测定 的旋光度，符号用[α]20δ表示，单位（°）度，左旋以负值，右旋以正值表示：

比旋度测定：称取约2g样品，加0.5g活性炭，用10ml（1+1）盐酸溶解，煮沸过滤，用（1+1） 洗涤数次，转入50ml容量瓶中，用（1+1）盐酸定容。赖氨酸为左旋用“+”或不 用。 [a]10D= 100a L·C

4、DL-蛋氨酸

性状：本品为白色或淡黄色的结晶粉末，具有微弱的含硫化合物或蛋氨酸的特殊气味，易溶 于水，稀酸或稀碱，微溶于乙醇，不溶于乙醚，无旋光性，熔点为281℃分解，其1% 的水溶液的PH值为5.6-6.1。

鉴别：1、取本品25mg于干燥烧杯中，加入由无水硫酸铜饱和的硫酸1ml，应立即显黄色。 2、取本品0.5g，加20ml水溶解时，溶液是无色至淡黄色，差不多是澄清液。 样品测定：将本品在105℃烘干至恒重，准确称取0.2-0.25g（0.26）（精确到0.0002g）置于500ml 锥形瓶中，加水100ml，磷酸氢二钾（K2HPO4）（500g/L）10ml，磷酸二氢钾（KH2PO4） （200g/L）10ml，碘化钾（KI）（200g/L）10ml，充分振荡溶解后，准确加入0.1mol/L 碘溶液50ml（0.2mol、25ml），加塞摇匀，用水冲洗碘塞，并用水封口，在暗处放 置30min，用0.05mol/LNa2S2O3标准溶液（滴定过量的碘）至溶液微黄色时，以淀 粉作为指示剂，再滴溶液由黑色至无色，同时做空白试验。 计算： X%= C×（V2-V1）×0.07460 m×100 C----Na2S2O3标准溶液的浓度，mol/L；

V1----试验组消耗Na2S2O3标准溶液的体积，ml； V2----空白组消耗Na2S2O3标准溶液的体积，ml； m----试样质量，g。

六、抗生素测定

1、盐霉素含量测定（分光光度法） 1）、 香草醛试剂（现配现用），称取1.5g香蓝素溶于50ml甲醇，加0.25ml浓硫酸。 2）、 盐霉素标准贮备液，准确称取一定量的盐霉素标准品，用甲醇配成1000ug/ml标准贮备液于棕色瓶中，冰箱内保存。 3）、标准中间工作液（现配现用），准确吸取标准盐霉素贮备液5ml用甲醇稀释至100ml。 4）、标准曲线的绘制，取5个50ml容量瓶，分别准确加入3中溶液：0.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml， 150ug/ml的盐霉素标准中间工作液，各加3ml香草素试剂，转动，使之混合，60℃水浴25min， 其中摇动瓶数次，冷却，用甲醇定容，于分光光度计518nm处，测定吸光度，以浓度为横 坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线图并建立回归方程。 5）、样品制备稀释10000倍，12%称取0.35g（10%的称取0.49 g）于250ml碘量瓶中，加100ml 甲醇，加塞，搅拌30min，过滤，吸取滤液10ml于100ml容量瓶中，用甲醇定容，吸取上液 5ml于50ml容量瓶中，各加3ml香草醛试剂，水浴定容，测得吸光度代入回归曲线方程。 6）X%= C×稀释倍数 m ×100% C---吸光度在回归曲线方程查得的浓度， m----试样的质量，g。

七、氮（N）含量的测定（鱼粉）

称取0.5g样品，用滤纸将样品包好置干燥500ml凯氏烧瓶中，依次加入硫酸钾（K2SO4）或无水 硫酸钠（Na2SO4）10g，硫酸铜（CuSO4）粉末0.5g，沿壁缓缓加入浓硫酸20ml，→消化：在凯 氏烧瓶口放置一小漏斗，以45°角倾斜在电炉上加热（大概4h）。待溶液为明绿色后，继续加热 30min，取下，放冷，沿瓶壁缓缓加水250ml，混匀放冷后，加氢氧化钠溶液（40%）75ml，加 锌粒数粒→定氮，取硼酸50ml于500ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂10滴，将冷 凝管的一端浸入，加热蒸馏，至接受液的总体积为250ml时，提出尖端，停止蒸馏，馏出液用 0.05moll/L硫酸标准液滴定至溶液由蓝绿色为灰紫色，同时作空白。 计算：X%= （V-V0）×F×0.001401 / m×（1-X1）×100 V-----滴定样品蒸馏液消耗标准硫酸液的体积，ml； V0----滴定空白消耗硫酸标准液的体积，ml； F-----硫酸标准溶液浓度校正系数， m----样品质量，g。 X1----样品干燥失重，

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