标准的-定量Q-PCR仪器的具体使用步骤和操作方法

Q-PCR仪器使用具体步骤

1.首先将MX3000P电源打开，大约1min,将会听到启动的声音。然后打

开桌面上的“ MX3000P软件”，确定软件界面右下面的联机标志呈绿色。如果不是绿色而是红色，软件会提示Instrumdht to PC

Com muni catio ns have failed , 一| 这时只需稍等片刻，待仪器自检完成，会自动连接计算机；

2.在“ Mx3000P软件”的“ New Experiment type ”弹出框中选择需

要的实验类型：通常选择“SYBRGreen（with dissociation

curve）, 点击“ OK键”；

3.确定“Mx3000P软件”界面上面（Selection命令下）的卤钨灯已经

打开。绿色说明已经打开，黄色说明正在预热，红色说明没有打开；

4.最好在仪器与光源预热20min后开始实验；

5.在“ Plate Setup ”里，对96孔板的各空进行设定。设定

Standard（标准品）、NTC（阴性对照）、Unknown样品）等，并选择正确的通道（FAM,HEX,ROX,Cy5.对于标准品，设定其模板浓度，还需要对不同的样品进行编号。或者点击“Import ” ,导入以前使用的96孔板设定。具体为：

首先选择Welltype中的Unknown然后选择下方的ROXSYBR;

选择Referenee dye 的ROX

用Replicate symbol对每个样品进行标记（1,2,3 ，XXX等）

6.切换至“ Thermol profile setup ”界面，进行PCF循环的设定。

可以改变各项温度、时间、循环数等，或者删除、添加特定步骤和循环。或者点击“Import ”，导入以前设定的PC A程序。表示表示在这一步结束时采集荧光信号N D * 代表在这一步的全

过程中都采集荧光信号，一般用作溶解曲线分析。

7.“Thermol profile setup ”设定结束后，点击软件界面右上方

的“ Run",软件界面右下方会出现运行状态显示框“ Run

Status ”

可以选择“ Turn lamp off at end of run ”，点击“ start ”开始

实验，弹出“保存文件的对话框”，选择后保存，弹出另外一个对话框，选择第二个（预热之后跑），另外在运行过程中可通过点击

“Add cycles ”来增加扩增的循环数，在PCR运行结束后软件将自动关闭卤钨灯。

8.在PCR运行的过程中可以点击“ RawData plots ” ,观察样品的实

时扩增原始结果。

9.PCR运行结束后，点击“ Analysis ” ,在点击“ Results ” ,软件

将会自动进行结果分析，也可以点击「

手动进行结果分析。

结果分析：

1.将Q-PCF结果从电脑中拷出来，在电脑上打开文件；

2.点击菜单栏的“ File ”命令，选择“ Con vert to New Experime

nt

type ”子命令，弹出“ Selection new Experiment type ”对话框；

3.在“Selection newExperiment type ” 对话框中选择“Comparative

Quantitation(Calibrator) 命令，将文件转化成分析结果的模式，点击OK键；

4.弹出“ Mx3000P软件”界面，在“ Plate Setup ”界面中“首先选

择Welltype中的Un known然后选择下方的ROX SY BR选择

Reference dye 的ROX

5.将96孔板中的Actin 样品选中，然后在Nomalizing assay 中选

择SYBR；

6.然后对相同模板的样品标记相同的字母，对相同引物的样品标记相同

的数字；

7.最后任意(通常选最左侧的)选择一列，在Well type 中选择

“Calibrator ” , 然后可以进行所含特异引物的样品的选择，选择后，点击“ Analysis ”命令，在点击“ Results ”即可对结果进行可视化的各项分析。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/j13l.html