基于TGF-β信号传导通路探讨盆炎灌肠方治疗盆腔炎性疾病后遗症慢性盆腔痛止痛机理 - 图文

分类号：Ｒ２－０３１密级：科学学位口专业学位口学位类别：学校代码：１学００６２号：２０１１６０２７３５学科门类：医学。又滓鲁耕袁导万方数据硕士学位论文ＭＡＳＴＥＲ’ＳＤＩＳＳＥＲｌＩ＇ＡＴＩＯＮ论文题目：基于ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ信号传导通路探讨盆炎灌肠方治疗盆腔炎性疾病后遗症慢性盆腔痛止痛机理ＴＩＴＬＥＢａｓｅｄｏｎＴＧＦ—ｐ／ＳｍａｄｓｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｏｆＰｅｎｙａｎｅｎｅｍａｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｓｅｑｕｅｌａｅｏｆｐｅｌｖｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｏｆｃｈｒｏｎｉｃｐｅｌｖｉｃｐａｉｎａｎａｌｇｅｓｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍ一级学科：中西医结合二级学科：中西医结合临床论文作者：安泓润指导教师：曹保利教授导师组成员：宋骰荣教授天津医科大学研究生院二。一四年五月｜｜ＵｌｌＩＩＩＩＩＩＩＩＩＩＩＩＩＩＩｌ学位论文原创性声明Ｙ２６９８６１１本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：霪盈ｉ崮日期：为７｛ｆ年彤日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。不保密回。学位论文作者签名：篷蕴舀！国日期：如件年岁甩多日导师签名：鲤日期：刃７忙ｊ且匆日万方数据天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：基于细胞ＰｑＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ信号传导通路探讨盆炎灌肠方治疗盆腔炎性疾病后遗症慢性盆腔痛止痛机理，为盆炎灌肠方的临床广泛应用提供科学的理论依据。方法：选用离体培养的人增生性瘢痕成纤维细胞，传代培养，以中药盆炎灌肠方对细胞作用的最大无毒浓度６．２５ｍｇ／ｍｌ作用于人增生性瘢痕成纤维细胞，以加ＴＧＦ．１３１抗体组、ＴＧＦ．１３１抗体＋盆炎灌肠方组、盆炎灌肠方组作为实验组，加入细胞培养基组为对照组，应用双抗体夹心ＡＢＣ．ＥＬＩＳＡ法检测四组细胞培养上清液中Ｓｍａｄ３和Ｓｍａｄ７蛋白的含量变化，应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测四组细胞中ＴＧＦ．１３１、Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ７和Ｉ型胶原ｍＲ．ＮＡ的表达情况。结果：ｌ、与对照组相比，实验组三组中Ｓｍａｄ３的含量均明显降低，Ｓｍａｄ３在盆炎灌肠方组、盆炎灌肠方＋ＴＧＦ．Ｂ１抗体组、ＴＧＦ一１３１抗体组的含量依次为７９６．６０４－１８０．３２ｐｇ／ｍｌ、１６５９．９２－４－３０３．１２ｐｇ／ｍａ、２０９０．８８４－１２０．６７ｐｇ／ｒｒｄ，与对照组含量２５６９．８２４－１１１．８９ｐｇ／ｍｌ比较，差异均有统计学意义口＜０．０５），实验组各组间比较差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。而实验组三组中Ｓｍａｄ７的含量与对照组比较均明显升高，Ｓｍａｄ７在盆炎灌肠方组、盆炎灌肠方＋ＴＧＦ．Ｂ１抗体组、ＴＧＦ．１３１抗体组的含量依次为６８．９１４－１２．６２ｐｇ／ｍｌ、３０．６２＋６．３５ｐｇ／ｍｌ、１４．３９士１．９９ｐｇ／ｍｌ，与对照组含量０．９７＋１．Ｏｇｐ∥ｍｌ相比，差异均有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），实验组各组间比较差异均有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。２、实验组三组中的ＴＧＦ一１３１、Ｓｍａｄ３和Ｉ型胶原ｍＲＮＡ的表达与对照组相比均降低，其中ＴＧＦ．１３１ｍＲＮＡ在盆炎灌肠方组、盆炎灌肠方＋ＴＧＦ－ｐ１抗体组、ＴＧＦ—ｐ１抗体组的灰度与内参灰度比值依次为０．４４＋０．０３、０．９１４－０．２３、１．４６４－０．２６，与对照组２．１９士０．０４相比，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），实验组各组间比较差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。Ｓｍａｄ３ｍＲＮＡ在盆炎灌肠方组、盆炎灌肠方＋ＴＧＦ－１３１抗体组、ＴＧＦ．１３１抗体组的灰度与内参灰度比值依次为０．５４＋０．１０、１．３９士０．１０、１．７６士Ｏ．０５，与对照组２．０７＋０．１４相比，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），实验组各组间比较差异均有统计学意义口＜０．０５）。Ｉ型胶原ｍＲＮＡ在盆炎灌肠方组、盆炎灌肠方＋ＴＧＦ．１３１抗体组、ＴＧＦ一１３１抗体组的灰度与内参灰度比值依次为０．２１＋０．０２、０．７９ｉ０．０６、０．８７４－０．０２，与对照组１．０２＋０．０６相比，差异均有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），实验组各组间比较差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。而实验组三组中Ｓｍａｄ７ｍＲＮＡ与对照组相比均升高，Ｓｍａｄ７ｍＲＮＡ在盆炎灌肠方万方数据天津医科大学硕士学位论文组、盆炎灌肠方＋ＴＧＦ．１３１抗体组、ＴＧＦ．Ｂ１抗体组的灰度与内参灰度比值依次为１．２３－４－０．０６、１．００－士０．１５、０．７６：ｔ：０．０６，与对照组０．５７士０．０５比较，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），实验组各组间比较差异均有统计学意义ｆＰ＜Ｏ．０５）。结论：盆炎灌肠方治疗盆腔炎性疾病后遗症慢性盆腔痛是通过作用于ＴＧＦ．１３／Ｓｍａｄｓ信号传导通路，使通路中ＴＧＦ．Ｂ１和Ｓｍａｄ３的表达降低同时使该通路的负性调节因子Ｓｍａｄ７的表达增加以减少目的基因Ｉ型胶原的表达，来减轻慢性炎症引起的组织纤维化粘连程度，从而达到止痛效果。关键词：盆炎灌肠方盆腔炎性疾病后遗症慢性盆腔痛增生性瘢痕成纤维细胞ＴＧＦ－１３１Ｓｍａｄ３Ｓｍａｄ７Ｉ型胶原ＩＩ万方数据天津医科大学硕士学位论文Ａｂｓｔｒａｃｔｏｂｊｅｅｔｉｖｅ：ＢａｓｅｄｏｎｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＴＧＦ－ｆ３／ＳｍａｄｓｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｏｆＰｅｎｙａｎｅｎｅｍａｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｓｅｑｕｅｌａｅｏｆｐｅｌｖｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏＤ＂ｄｉｓｅａｓｅｏｆｃｈｒｏｎｉｃｐｅｌｖｉｃｐａｉｎｐａｉｎｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ｐｒｏｖｉｄｅａｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｗｉｄｅｓｐｒｅａｄｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｅｎｅｍａｏｆｐｅｌｖｉｃｉｎｆｌａｍｎｍｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ，ｗｉｔｈＣｈｉｎｅｓｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅＰｅｎｙａｎｅｎｅｍａｍａｘｉｍｕｍｎｏｎｔｏｘｉｃｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆ６．２５ｍｇ／ｍｌｏｎｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ｗｉｔｈＴＧＦ－１３１ａｎｔｉｂｏｄｙｇｒｏｕｐ，ＴＧＦ—Ｂ１ａｎｔｉｂｏｄｙ＋Ｐｅｎｙａｎｅｎｅｍａｇｒｏｕｐ．ｐｅｌｖｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｓｉｄｅｇｒｏｕｐａｓｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ，ｗｅｒｅａｄｄｅｄｉｎｔｏｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｇｒｏｕｐａｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＳｍａｄ３ａｎｄＳｎｍｄ７ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｓｕｐｅｍａｔａｎｔｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｂｏｄｙｓａｎｄｗｉｃｈＡＢＣ－ＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄｉｎｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓｏｆｃｅｌｌｓ，ＲＴ－ＰＣＲｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｆｏｕｒｇｒｏｕｐｏｆｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅＴＧＦ一１３１．Ｓｍａｄ３．Ｓｍａｄ７ａｎｄｔｙｐｅＩｃｏｌｌａｇｅｎｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：１．ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＳｍａｄ３ｔｈｒｅｅｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ，Ｓ．ｍａｄ３ｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅＰｅｎｙａｎｅｎｅｍａｇｒｏｕｐ．ｐｅｌｖｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｅｎｅｍａ＋ＴＧＦ—Ｂａｎｔｉｂｏｄｙｇｒｏｕｐ，ＴＧＦ一１３１ａｎｔｉｂｏｄｙｇｒｏｕｐｗｅｒｅ７９６．６０士１８０．３９．。ｏｒａｌ，１６５９．９２４－３０３．１２ｐｇ／ｍ１．２０９０．８８士１２０．６７ｐｇ／ｍｌ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓ２５６９．８２４－１１１．８９ｐｇ／ｍｌ，ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｗｅｒｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）：ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｅａｃｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｈａｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（Ｐ＜Ｏ．０５）．ＣｏｎｔｅｎｔｏｆＳｍａｄ７ｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｉｎｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｓｍａｄ７ｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅＰｅｎｙａｎｅｎｅｍａｇｒｏｕｐ，ｐｅｌｖｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｅｎｅｍａ＋ＴＧＦ一￥１ａｎｔｉｂｏｄｙｇｒｏｕｐ、ＴＧＦ一１３１ａｎｔｉｂｏｄｙｇｒｏｕｐｗｅｒｅ６８．９１４－１２．６２ｐｇ／ｍ１．３０．６２士６．３５ｐｇ／ｍ１．ｔ４．３９±１．９９ｐｇ／ｍ１．ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓＯ．９７＝１．０９ｐｇ／ｍ１．ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｗｅｒｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｅａｃｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｈａｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．２．ＴｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓｏｆＴＧＦ—ｐ１．Ｓｍａｄ３ａｎｄｔｙｐｅｌｃｏｌｌａｇｅｎｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｄｅｃｒｅａｓｅｄ、ｇｒａｙａｎｄｇｒａｙｒａｔｉｏｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅｉｎｔｅｒｎａｌＴＧＦ一１３１ｍＲＮＡｉｎｐｅＭｃｉｎｆｌａｎｍｎａｔｉｏｎｅｎｅｍａｇｒｏｕｐ．ｐｅｌｖｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｅｎｅｍａ＋ＴＧＦ一１３１ａｎｔｉｂｏｄｙｇｒｏｕｐ．ＴＧＦ一９１ａｎｔｉｂｏｄ）ｇｒｏｕｐｗｅｒｅＩｌＩ万方数据

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