黄连总生物碱提取工艺的优化研究

南 阳 理 工 学 院

本科生毕业论文

学 院（系）： 生物与化学工程学院

专 业： 生物工程 学 生： 贾建军 指 导 老 师： 李杰（讲师）

完成日期 2014 年 5 月

南阳理工学院本科生毕业论文

黄连总生物碱提取工艺的优化研究

Study on the Extraction Technology of Total Alkaloid from Coptis Chinensis

总 计:毕业论文24页 表 格: 9个 插 图： 11幅

南 阳 理 工 学 院 本 科 毕 业 论 文

黄连总生物碱提取工艺的优化研究

Study on the Extraction Technology of Total Alkaloid from Coptis Chinensis

学 院： 生物与化学工程学院 专 业： 生物工程 学 生 姓 名： 贾建军 学 号： 105010540075 指导教师（职称）： 李杰（讲师） 评 阅 教 师： 完 成 日 期： 2014年5月

南阳理工学院

Nanyang Institute of Technology

黄连总生物碱提取工艺的优化研究

黄连总生物碱提取工艺的优化研究

生物工程专业 贾建军

[摘 要]本论文主要对黄连总生物碱的提取工艺条件进行优化研究。首先，通过单因素试验研究提取时间、乙醇浓度、提取温度、料液比等因素对黄连总生物碱得率的影响，然后进行析因试验筛选出对黄连总生物碱得率影响显著的因子，再通过Box-Behnken试验对提取条件进行优化。结果显示黄连总生物碱的最佳提取条件为：提取时间120 min，乙醇浓度60%，提取温度81℃，料液比1：41。在最佳提取条件下黄连总生物碱得率可达73.21mg/g，与预测值73.44mg/g一致，证明试验结果准确可靠，可为黄连总生物碱的提取工艺研究提供参考。

[关键词]黄连总生物碱；提取工艺；响应面分析

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

Study on the Extraction Technology of Total Alkaloid from Coptis Chinensis

Biological engineering Major Jia Jianjun

Abstract: This paper is to optimize the extraction conditions of total alkaloids from Coptis chinensis. First, single factor experiments were done to examine the impact of ethanol concentration, extrating time, extracting temperature, ratio of solid to liquid and other effect on the extraction of Coptis chinensis alkaloids. Then factorial experiments were done to filter out the significant factors. Finally, Box-Behnken experiments were done to optimize the extraction conditions. The optimal extraction conditions of total alkaloids from Coptis chinensis are obtained as follows: ethanol concentration 60%,extraction time 120 min,extraction temperature 81℃ and the material liquid ratio of 1:41. The total coptis alkaloids yield could reach 73.21mg/g under the optimum technological conditions, which is similar with the predicted 73.44 mg/g. It proved that the test results are accurate, reliable and could provide the reference for the extraction of total alkaloids from Coptis chinensis.

Key words: total alkaloid of Coptis Chinensis ;extraction condition; response surface methodology

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

目 录

1绪论 ............................................................. 1

1.1黄连生物碱的研究现状......................................... 1

1.1.1黄连的自然分布和特性 ................................... 1 1.1.2黄连的主要化学成分 ..................................... 1 1.2黄连生物碱的药理活性......................................... 1 1.3黄连生物碱的应用现状......................................... 2 1.4黄连生物碱的提取技术的研究现状及进展......................... 3 1.5总生物碱含量的分析测定方法................................... 4 1.6响应面分析法简述............................................. 5 1.7本论文的选题依据及研究内容................................... 5

1.7.1本论文的选题依据 ....................................... 5 1.7.2本论文研究的主要内容 ................................... 6 2黄连总生物碱的提取工艺优化研究 ................................... 7 2.1 材料 ........................................................ 7

2.1.1原料 ................................................... 7 2.1.2试剂 ................................................... 7 2.1.3仪器设备 ............................................... 7 2.2 方法 ........................................................ 8

2.2.1黄连总生物碱的提取 ..................................... 8 2.2.2黄连总生物碱的检测 ..................................... 8 2.2.3盐酸小檗碱标准曲线的绘制 ............................... 8 2.2.4黄连总生物碱得率的计算 ................................. 8 2.2.5单因素试验 ............................................. 9 2.2.6析因试验设计 ........................................... 9 2.2.7响应面分析试验设计 .................................... 10 2.2.8最佳工艺条件的验证实验 ................................ 10 2.3 结果及分析 ................................................. 10

2.3.1盐酸小檗碱标准曲线的绘制及结果 ........................ 10 2.3.2单因素试验结果分析 .................................... 11 2.3.3析因试验及结果 ........................................ 13 2.3.4响应面结果及分析 ...................................... 14 2.3.5响应曲面图分析 ........................................ 16 2.3.6黄连总生物碱提取工艺最优值的预测 ...................... 18 2.3.7最佳工艺条件的验证实验 ................................ 19

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

3 结论与展望....................................................... 20

3.1主要结论.................................................... 20 3.2展望........................................................ 20 参考文献........................................................... 22 致谢............................................................... 24

II

黄连总生物碱提取工艺的优化研究

1 绪论

生物碱是一类碱性含氮有机化合物并广泛存在于自然界中，普遍含有复杂的环状结构，通常以盐或游离态两种形式存在，有显著的抗肿瘤、抗菌、抗过敏、抗炎症等药理活性，是一种重要的中草药有效成分，具有极为重要的药用价值和保健功能[1]。近年来，生物碱类化合物一直成为国内外研究的热点。

1.1 黄连生物碱的研究现状

1.1.1 黄连的自然分布和特性

黄连通常是指毛莨科植物味连、雅连或云连的干燥根茎，主要含异喹啉类生物碱，具有泻火解毒、清热燥湿的功效，对胃肠溃疡也有显著疗效。作为一种常用中药材，最早的记载见于《神农本草经》，因其根茎呈黄色连珠状，所以称之为“黄连”，根据其形状的不同又可分为味连、云连和雅连，其中味连大多聚集成簇且形状弯曲似鸡爪，习惯上称之为“鸡爪连”，主产于中国四川、重庆、贵州、湖北、陕西等省，云连多弯曲呈钩状，形如“蝎尾”，多为细小的单枝，主产于中国云南省，雅连多呈微弯曲的圆柱形，形似“蚕状”的 单枝，主产地为中国四川省[2]。黄连是一种大宗名贵中药材，因此具备相当的开发潜力，其开发利用备受关注。

1.1.2 黄连的主要化学成分

黄连的化学研究表明[3、4]，其主要药理成分除异喹啉类生物碱外，还含有木兰花碱、黄柏酮、黄柏内酯、阿魏酸和多种微量元素，其中异喹啉类生物碱主要包括小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、非洲防己碱和药根碱。季铵型生物碱小檗碱的含量最高，约为8%～10%，是其主要成分，具有抗菌、抗肿瘤和抗心律失常等生物活性。其他异喹啉类生物碱，如黄连碱、药根碱和掌叶防己碱等，也具有降血糖、抗菌、抗肿瘤、保护胃黏膜等活性。

1.2 黄连生物碱的药理活性

（1）抗肿瘤、抗癌作用

黄连生物碱多具有显著的抗肿瘤和抗癌作用，但由于其结构复杂、作用机制繁杂且作用位点较多，因而对某些病症缺乏选择性和针对性，又由于尚不清楚一些生物碱的作用机制，因此进一步分离、纯化、筛选生物碱，加强深层次针对性的病理、药理和毒性研究，对于新药的研发与应用具有重要的现实意义。试验证明[5、6]，黄连生物碱具有抑制人结肠癌细胞中环氧合酶、肿瘤坏死因子、人肝细胞中激活蛋白酶、DNA拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ活性及食道癌细胞生长繁殖的作用。

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

（2）抗焦虑作用

Krom hout[7]等人的一系列实验证明浓度为40μg/ml的黄连丁醇提取物，可阻断生物合成儿茶酚胺。经柱层析分离纯化后的提取物，FrⅡ和FrⅢ中均含有异喹啉类生物碱，如小檗碱和巴马汀碱。浓度为40μg/ml的FrⅢ能使嗜铬细胞瘤（PC12）细胞中多巴胺的合成减少77％，其半数抑制量（IC50）为195μg/ml。这说明这些异喹啉类生物碱能够抑制PC12细胞中的酪氨酸羟化酶活性而阻止儿茶酚胺合成，因此具有抗焦虑作用。

（3）抗氧化和自由基清除作用

来自于阳光、紫外线、化学反应、物理辐射和新陈代谢的自由基会引起人机体的多种病理损害，如细胞的老化、癌症的发生以及动脉粥样硬化、血栓的形成等。黄连生物碱对小鼠红细胞溶血和脂质过氧化过程具有显著的抑制作用，并且具有极强的自由基清除活性。YANG DM[8]等考察了中国和地中海沿岸20种传统药材的抗氧化活性，发现浓度为100μg/ml时的黄连提取液对自由基的清除性能高于其它植物。

（4）保护胃粘膜的作用

黄连中的黄连碱具有显著的保护胃粘膜作用，而所含有的其它异喹啉类生物碱，如黄连素、氧化黄连素、巴马汀碱则对胃粘膜损伤不具有保护作用。韦记青

[9]

等人研究表明小檗碱有利于肠道的收缩幅度的增加，黄柏酮则能使张力和振幅

都有所增加，而黄柏内酯则使肠管弛缓。黄柏的甲醇提取物对大鼠胃肠溃疡具有明显抑制作用，并且强于小檗碱及黄连碱。

（5）抑制碱性磷酸化酶作用

盐酸小檗碱对碱性磷酸酶的抑制作用与浓度呈正相关，其在浓度为0.1-6mol/L时抑制作用较强，此范围内的线性公式为Y=4310X＋56255（r=0.97）。因此，测定血液中小檗碱的浓度可根据小檗碱对碱性磷酸酶的抑制作用这一原理，同样这一原理也可用于控制黄连的质量标准 [9]。

1.3黄连生物碱的应用现状

由于黄连生物碱的这些生物活性使对其的研究进人了一个新的阶段，不仅促进了黄连生物碱类化合物研究、开发利用，也促使其在医药、化妆品、食品等工业中有广泛的应用。

（1）黄连生物碱在食品工业中的应用 ①天然甜味剂

柚皮苷属二氢黄连生物碱，经过加氢处理可以转变为二氢查尔酮，具有甜味，因此可为糖尿病人食用且不引起血糖的升高，是具有保健作用的良好食品甜味添加剂替代产品。

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

②天然抗氧化剂

由于黄连生物碱均具有较强的抗氧化能力。其中以巴马亭的抗氧化效果最为显著，又由于其具有更多的生理活性，且无毒副作用，因此可以作为抗氧化剂在食品工业中广泛的应用。

③天然色素

黄连生物碱多呈黄色，同时又由于其良好的溶解性，既能溶解于水等极性溶剂，又能溶解于多种非极性溶剂，所以可以根据不同的需要来选择适宜的黄连生物碱作为食品工业的着色剂。

（2）黄连生物碱在医药工业中的应用

随着分离纯化提取技术的发展，一些微量黄连生物碱被不断发现，生理活性被不断的研究，开发了数种含有黄连生物碱类物质的产品。在医药方面，根据其在抗肿瘤、抗菌、抗癌等方面的药理作用，很多以黄连生物碱为主要成分的药物已经上市推广。

①用于抗癌抗肿瘤药物

以黄连提取物为主要成分的一些药物在国内外先后研制开发，对于癌症肿瘤等疾病均有良好的疗效。利用黄连生物碱开发的药剂可用于治疗各种良性恶性肿瘤的预防与治疗。

②用于抗菌药物

黄连生物碱均具有明显的抗菌活性。其中小檗碱具有最大的抑菌活性,黄连碱和巴马亭碱次之，且对革兰氏阳性菌的抑制活性相对于酵母菌大。因此黄连生物碱广泛地应用于抑制革兰氏阳性菌的药物。

（3）黄连生物碱类化合物在化妆品行业中的应用

医学美容事业的课题之一便是消除脂褐素(老年斑)。黑色素细胞的密度和黑色素的量等因素决定了皮肤肤色的深浅，而黑色素的生成与酪氨酸酶活性有直接关系。所以，抗自由基氧化的同时抑制酪氨酸酶的活性对于去斑增白具有重要作用，黄连生物碱恰好适宜，因此广泛应用于美容化妆品中。另外黄连生物碱在化妆品中还可用作天然防晒剂、增白剂、皮肤调理剂 [1、3、10]。

1.4黄连生物碱的提取技术的研究现状及进展

生物碱又称为植物碱，通常是指生物体内存在的一类含氮碱性有机化合物，在植物体内通常以游离态或与无机酸有机酸结合成的盐的形式存在，所以植物体粉末可以直接用水、稀酸、有机溶剂或有机溶剂水溶液等冷浸、渗漉或回流提取生物碱。黄连生物碱的主要提取方法有：稀酸提取技术、回流提取技术、超声波辅助技术、微波辅助提取技术等。

（1）稀酸提取法

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

稀酸提取法的原理是利用小檗碱的无机酸盐溶解度大于其有机酸盐和游离态单体的性质，将植物体在硫酸酸化条件下提取。如宁娜[11]等以黄连须根边角料为原料，采用冷浸提取、盐酸盐析和重结晶等过程，得到的小檗碱和药根碱，纯度可达到95％以上。胡保平[12]等研究了提取纯化黄连中小檗碱的工艺，详细考察了实验过程所涉及到的各种因素，较为系统完善的优化了盐析法提取纯化小檗碱的工艺，为近一步实现工业化打下基础。

（2）回流提取法

水、乙醇等低沸点提取剂是回流提取常用的提取剂，加热不但有利于提取而且使提取剂不断汽化，提取剂经冷凝，再回到提取器中继续进行浸提，直至有效成分回流提取完全。徐蓉[20]等以乙醇为提取剂回流提取总生物碱，采用紫外分光光度法测定提取液中总生物碱的含量，并以此优化提取工艺，优化得到的工艺生物碱的提取效率高，稳定性好，总生物碱平均含量为15.06％。

（3）超声辅助提取法

超声辅助提取是在溶质颗粒与溶剂之间产生声波空化作用，致使溶液内气泡的形成、膨胀和破裂，从而更加充分的使样品颗粒分散，增加溶质颗粒与溶剂间的接触面积，提高生物活性成分从固体颗粒转移到液体提取剂的传质速率。如黄罗生[13]等采用正交设计法对超声波提取小檗碱进行研究，小檗碱得率达8.38％。

（4）微波辅助提取法

微波具有良好的穿透能力，能够透过细胞壁直达植物的腺细胞和维管束，又由于其较强的加热作用使细胞内的游离水加热沸腾，使细胞内部压力逐渐增大，当超过细胞壁的承受能力，将致使细胞破裂，细胞内的物质自由流出传递至周围的提取剂中溶解。从而有利于有效成分的浸出。

1.5 总生物碱含量的分析测定方法

目前，生物碱的分析检测主要包括比色法、碘量法和高效液相色谱法。

（1）比色法 ①间接比色法

标准物质采用盐酸小檗碱，依次加入1ml一定浓度标准品溶液，5ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH=4.5），2ml溴甲酚绿指示液，摇匀，室温下静置10 min，用分光光度记在最大吸收波长下检测，一般在416nm处有最大吸收峰[14]。

②直接比色法

将不同浓度的标准品溶液在紫外可见光谱区进行测定，确定最大吸收波长，绘制标准曲线测定总生物碱含量，最大吸收峰一般为350nm [14]。 （2）碘量法

对照品采用盐酸小檗碱，按《中国药典》中盐酸小檗碱项下国标方法测定总生物碱含量，测定过程应注意准确多次滴定[15]。

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

（3）高效液相色谱法

提取液中的总生物碱含量采用高效液相色谱法测定时，通常以盐酸小檗碱为单一对照品，也可用一定比例的盐酸小檗碱、盐酸药根碱和盐酸黄连碱三种物质共同作为对照品[16、17、18]。

以上三类方法中，HPLC法较为精确，但对提取物的纯度有较高的要求。黄连生物碱因其分子结构的不同，而对不同波段的光具有不同的吸收度，又因最大吸光值相差不大，所以对提取物的总生物碱进行整体评价可用直接测定法，对测种生物碱的具体结构可采用间接测定法，测定方法不同，结果会有所差异。因此对于测定提取液总生物碱含量，应根据不同目的，选择恰当的方法进行[19]。

1.6 响应面分析法简述

响应曲面设计方法(Response Surface Methodology, RSM)这种回归分析方法可用于研究几种因素间交互作用。通过一定的试验设计方法和试验数据，采用响应面分析法将多因子试验中因子与指标的相互关系拟合多元二次回归方程，依此对函数的响应面和等高线进行分析，研究因子与响应面之间以及因子与因子之间的相互关系。其可以在较短的时间内通过少量的试验对所选的试验参数进行全面研究，通过对回归方程的分析来寻求最优工艺参数，解决多变量问题的一种统计方法[20、21、22]。

响应面分析法可作为最优化方法，可将体系的响应作为一个或多个因素的函数，以图像形式将这种函数关系显示出来，通过直观观察来选择试验设计中的最优化条件。克服了正交设计只能处理离散的水平值，而存在无法对各因素的连续作用具体的最优值缺陷，且求得的回归方程的精度高。本研究选择Minitab15数据分析软件对试验安排进行设计及对试验结果进行分析，确定优化后的试验结果。

1.7本论文的选题依据及研究内容

1.7.1本论文的选题依据

通过化学合成的产品有一定的毒副作用，而且在生产过程中会产生不必要的污染。化学合成产品在化妆品、医药、食品领域的安全性也越来越备受人们的关注。由于人们逐渐增强的追求绿色健康、回归自然的生活的观念，因此天然产物逐渐受到人们的青睐与厚爱。我国具有丰富的动植物资源，从动植物中提取的天然生物碱无毒安全,可用于食品、医药、化妆品等领域，这符合人们对于绿色健康的生活追求，将有很大的应用前景。

研究表明，黄连根茎含多种生物碱，主要成分为小檗碱，其次为黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、非洲防己碱。也含黄柏酮、黄柏内酯、阿魏酸等。生物碱是

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

黄连在生长过程中产生的次生代谢产物，通常以游离态或化合态的形式存在，不仅数量种类繁多，而且结构类型复杂多样，表现出多种多样的药理活性，具有抗炎抑菌、抗氧化、延缓衰老抗肿瘤以及增强免疫能力等药理作用。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而生物碱类化合物更是以其广谱的药理作用备受世人瞩目。

本题目主要是对黄连生物碱的提取工艺条件进行优化，为黄连生物碱的开发和利用提供科学依据。 1.7.2本论文研究的主要内容

本文以市售黄连为原料提取生物碱，首先分别进行单因素试验，考查不同的提取溶剂、提取溶剂浓度、提取时间、提取温度、提取次数、料液比对黄连总生物碱得率的影响；然后在单因素试验的基础上进行析因试验，筛选出显著性因子；最后结合单因素试验和析因试验确定Box-Benhnken响应面设计试验的因素与水平[22]。以黄连总生物碱得率为响应值，通过响应面分析及等高线分析对提取条件进行优化，在较优条件下进行提取，以提高黄连总生物碱的提取率，进而达到降低成本改进生产工艺的目的，为新药的开发提供新的参考资料，为黄连资源的有效利用提供理论依据。

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

2黄连总生物碱的提取工艺优化研究

2.1 材料

2.1.1原料

黄连购自校医院，清洗干净，去除杂质，放在烘箱中80℃进行烘干。烘干后在粉碎机中粉碎放入干燥洁净的密封袋中，密封保存。 2.1.2试剂

表 2-1主要试剂 Table 2-1 Main reagents

材料与试剂 氢氧化钠 甲醇 乙酸乙酯 正丁醇 浓硫酸 浓盐酸 无水乙醇 蒸馏水

级别 分析纯 分析纯 AR AR AR AR 分析纯 ——

产地

天津化学试剂厂

天津化学试剂厂

天津市科密欧化学试剂有限公司 天津市科密欧化学试剂有限公司 天津市科密欧化学试剂有限公司 天津市科密欧化学试剂有限公司 天津化学试剂厂 实验室自制

2.1.3 仪器设备

表 2-2 试验仪器

Table 2-2 Experimental instrument

名称

电子天平

自动纯水蒸馏器 电热恒温干燥箱 循环水式多用真空泵 可见光分光光度计 恒温水浴锅 旋转蒸发仪

双人单面净化工作台 恒温振荡器

型号

BS-210S SZ-96 CS101-A SHB-Ⅲ UV-l100 HH-S

RE-52 AAB SW-CJ-1CU

PYX-DHS-50X65-S

生产厂家

北京塞多利斯天平有限公司 上海亚荣生化仪器厂 北京市永光明医疗仪器厂 郑州杜甫仪器厂 上海精密仪器厂 巩义设备有限公司 上海亚荣生化仪器厂 苏州净化设备有限公司 上海跃进医疗器械厂

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

2.2 方法

2.2.1黄连总生物碱的提取

黄连生物碱溶解性因结构及存在状态的不同有很大差异，一般游离态缓溶于冷水（1:20）和冷乙醇（1:100），在热乙醇和热水中溶解度较大，难溶或不溶于氯仿、丙酮、乙醚和苯等有机溶剂。其盐在冷水中溶解度较小，例如：盐酸盐微溶于冷水（1:500）、硫酸盐缓溶于冷水（1:100），但在热水和热乙醇中溶解度较大。考虑到乙醇更易浓缩且对黄连生物碱溶解性合适，因此选择乙醇加热恒温条件下震荡提取[23]。 2.2.2黄连总生物碱的检测

黄连生物碱均属异喹啉类季胺碱，其分子内含有相同的基团使各种黄连生物碱在350nm的紫外光下均有最大吸收峰，因此可以根据粗提取液在350nm下吸光度的不同对照盐酸小檗碱标准曲线，确定浸提液中总生物碱的浓度，进而计算出黄连总生物碱的得率[20]。 2.2.3 盐酸小檗碱标准曲线的绘制

精密称取102℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品2.81mg，于50mL容量瓶中以蒸馏水摇匀定容，得浓度为0.056 2 mg/mL的盐酸小檗碱对照品溶液。分别吸取盐酸小檗碱对照品溶液0，0. 4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0，2.4，2.8，3.2，3.6mL于10 mL量瓶中，以0.05 moL/L 硫酸水溶液定容至刻度，350nm测吸光度值。以溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，得回归方程y=0.0653x+0.0856 r=0.998（n=10），线性范围2.248-20.232 ug/mL[20]。 2.2.4黄连总生物碱得率的计算

根据黄连总生物碱含量标准曲线得出的回归方程y=0.0653x+0.0856 ，计算提取液中的黄连总生物碱含量。黄连总生物碱得率计算公式如下：

y?0.0856?1000?v t=

0.0653t——提取液中的黄连总生物碱含量（mg）

y——黄连总生物碱测定中提取物的吸光度 v——黄连提取液的体积(mL) tY= mY——黄连总生物碱得率（mg/g) t——提取液中黄连总生物碱含量（mg） m——黄连粉末的质量（g）

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

2.2.5 单因素试验

（1）不同提取溶剂对黄连总生物碱得率的影响

分别准确称取1.0g经过预处理的黄连粉末，控制料液比为1：30，提取温度70℃，提取时间1h，,提取1次，在不同的提取剂（蒸馏水，甲醇，70%乙醇，乙酸乙酯和正丁醇）条件下提取，测定提取液吸光值，并计算黄连总生物碱得率。

（2）乙醇浓度对黄连总生物碱得率的影响

分别准确称取1.0g经过预处理的黄连粉末，控制料液比1：30，提取时间1h，提取温度70℃，提取1次，不同乙醇浓度(50%，60%，70%，80%和90%)的条件下提取，测定提取液吸光值，并计算黄连总生物碱得率。

（3）料液比对黄连总生物碱得率的影响

分别准确称取1.0g经过预处理的黄连粉末，控制提取温度70℃，提取时间1 h，乙醇浓度70%，提取1次，不同料液比(1：10，l：20，l：30，1：40和1：50)条件下提取，测定提取液吸光值，并计算黄连生物碱得率。

（4）提取温度对黄连总生物碱得率的影响

分别准确称取1.0g经过预处理的黄连粉末，控制料液比1：30，提取时间为1h，乙醇浓度为70%，提取1次，在不同提取温度(65，70，75，80和85℃)条件下提取，测定提取液吸光值，并计算黄连总生物碱得率。

（5）提取时间对黄连总生物碱得率的影响

分别准确称取1.0g经过预处理的黄连粉末，控制提取温度为70 ℃，料液比为1：30，乙醇浓度为70%，提取1次，不同提取时间(40，60，80，100和120min)条件下提取，测定提取液吸光值，并计算黄连总生物碱得率。

（6）提取次数对黄连总生物碱得率的影响

分别准确称取1.0g经过预处理的黄连粉末，控制料液比为1：30，提取时间为1h，提取温度70℃，乙醇浓度为70%，不同提取次数（1次，2次和3次）的条件下提取，提取液吸光值，并计算黄连总生物碱得率。 2.2.6 析因试验设计

析因试验是一种将两个或多个因素的不同水平交叉分组进行试验，以期检验各因素内部不同水平间或因素间是否存在交互作用及其显著性的设计方法。若因素间存在交互作用，则一个因素的变化将会引起具有交互作用的其他因素的变化。

依据单因素试验的结果，确定乙醇为提取溶剂，利用Minitab 15软件试验设计中的Plaekett-Burman设计，来筛选主要因素。Plackett-Burman设计方法通过对每个因子取两水平来进行分析，它可用最少的试验次数达到使因素的主效应尽可能精确的估计，适用于从众多的考察因素中快速有效地筛选出重要因子供进一步研究。其中1取每个因素里最高响应值Y(得率)所对应的水平，-1则取每个因

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素里最低响应值Y所对应的水平[24]。因素水平如表2-3所示：

表2-3析因试验设计因子及编码值

Table2-3 Analyzes the factor of design and coding value

因素

编码值

A提取温度 B料液比 C 提取时间 D 乙醇浓度

-1 65℃ 1:10(g/ml) 40min 80%

1 80℃ 1:50(g/ml) 120min 60%

2.2.7 响应面分析试验设计

根据Box-Behnken设计原理，综合单因素试验和析因试验结果，以黄连总生物碱得率为响应值，选取提取时间、料液比、提取温度为自变量，并在每个因素中最大提取率区域选取合适的水平，运用Minitab 15软件进行3因素3水平响应面试验设计，其中12个为析因点，3个为零点，重复三次零点，用以计算试验误差[25]。因素的水平设计见表2-4（1、0、-1依次表示自变量中的高、中、低三水平）。

表2-4 响应面法的因素和水平

Table2-4 The factors and levels of response surface methodology

因素 水平 Level Factor

-1 0 1

A 料液比(%) 1:30 1:40 1:50

B 提取时间(min) 80 100 120 C 提取温度(℃) 75 80 85

2.2.8 最佳工艺条件的验证实验

利用Minitab 15的响应优化器进行分析，求取在模型预测稳定状态下黄连总生物碱的最优提取条件。为了验证最优值的可靠性，进行最佳工艺条件的验证试验。由于试验条件有限和方便试验操作，将最优条件进行取整数后，进行3次平行试验，测得提取率后取平均值。通过实测平均值与预测值间的比较，证明预测是否准确可靠，具有应用价值。

2.3 结果及分析

2.3.1 盐酸小檗碱标准曲线的绘制及结果

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1.61.41.2y = 0.0653x + 0.0856R2 = 0.9975吸光度(A)10.80.60.40.200510盐酸小檗碱含量(ug/ml)1520

图2-1 盐酸小檗碱标准曲线

Fig.2-1 The standard curve of berberine hydrochloride

2.3.2单因素试验结果分析

（1）不同提取溶剂对黄连总生物碱得率的影响

50403020100蒸馏水甲醇70%乙醇不同溶剂乙酸乙酯正丁醇得率（mg/g）

图2-2 不同提取溶剂对黄连总生物碱得率的影响

Fig.2-2 Effect of different extraction solvent on the yield of totalalkaloids from Rhizoma Coptidis

由图2-2可以看出浸提效果最好的是甲醇，其次是蒸馏水，70%乙醇的浸提效果略低于蒸馏水，乙酸乙酯和正丁醇的浸提效果比较差，综合考虑提取剂的毒性、经济性及沸点，选择一定的乙醇水溶液为浸提剂。

（2）乙醇浓度对黄连总生物碱得率的影响

得率（mg/g）51494745506070乙醇浓度（%）8090

图2-3乙醇浓度对黄连总生物碱得率的影响

Fig.2-3 Effects of ethanol concentration on yield of total alkaloids from Rhizoma Coptidis

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

由图2-3可知，在一定条件下，随着乙醇浓度的增大，黄连总生物碱的得率也随之增加，达到最高的乙醇浓度为60%，之后又出现下降。其原因是乙醇的浓度增大，黄连生物碱类浸出率相应增大，而此时有机杂质也更易浸出，使提取液浓度不断增大，不利于黄连生物碱的浸出，因此选择最优乙醇浓度为60%。

（3）料液比对黄连总生物碱得率的影响

55504540353025201:101:201:301:401:50得率(mg/g)液料比图2-4 料液比对黄连总生物碱得率的影响

Fig.2-4 The effect of ratio of solid to liquid on yield of total alkaloids from Rhizoma Coptidis 由图2-4可知：增大料液比，黄连总生物碱得率逐渐增大，当料液比达1:40

（g/ml）后再增大料液比，总生物碱得率上升缓慢。其原因是样品量一定时,增加溶剂的量可以有效扩大物料颗粒与提取液间溶质的浓度差，有利于生物碱由固相原料向浸提液的扩散，有利于有效成分的溶出；但料液比过大得率上升不明显，不仅造成提取剂的浪费也影响浓缩过程的进行，因此取料液比在1:50（g/ml）左右为宜。

（4）提取温度对黄连总生物碱得率的影响

得率（mg/g）55453525657075提取温度（℃）8085

图2-5提取温度对黄连总生物碱得率的影响

Fig.2-5The effect of extraction temperature on yield of total alkaloids from Rhizoma Coptidis

由图2-5可知：温度的升高，有利于黄连总生物碱得率的提高。这是因为升高温度溶质分子运动速度加快，提取液的扩散系数增加，促进了有效成分的浸出。然而，当温度超过80℃，再升高温度，黄连总生物碱得率明显下降，过高的温度

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

会使生物碱变性，且提取剂挥发加快，从而导致生物碱得率下降，因此选择提取温度为80℃。

（5）提取时间对黄连总生物碱得率的影响

55得率（mg/g）453525406080提取时间（min）100120

图2-6 提取时间对黄连总生物碱得率的影响

Fig.2-6 The effect of extraction time on yield of total alkaloids from Rhizoma Coptidis

由图2-6可知：提取时间在40min到120min内，黄连总生物碱得率逐渐上升，然后逐渐趋于稳定。出现这种情况，可能是因为对于一定量的提取溶剂所能溶解的生物碱的量有限，随着时间的延长溶液中生物碱的量逐渐增加，当溶液中的生物碱的量已经达到动态平衡时，将不再溶出。所以提取时间选择在120min左右为宜。

（6）提取次数对黄连总生物碱得率的影响

55提取率（%）50454012提取次数3 图2-7 提取次数对黄连总生物碱得率的影响 Fig .2-7 The effect of extraction times on yield of total alkaloids from Rhizoma Coptidis

由图2-7可知：黄连总生物碱得率随着提取次数的增加而增加，但当提取次数大于两次后，总生物碱得率增加幅度较小，且以第一次浸提后的得率值相当于第三次浸提后的得率的89.38%，从节约成本、操作时间及提高提取率的角度综合考虑，选择一次浸提 [26]。 2.3.3 析因试验及结果 根据单因素试验结果，确定析因试验设计为4因素2水平，由Plackett-Burman

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

致谢

本论文是在李杰老师的悉心指导下完成的，从论文的选题、设计、试验进程、疑难问题的解决直至论文的定稿无不凝聚着李杰老师的沥沥心血。在试验整个过程中，李老师都本着严肃认真的师长态度，悉心教导我，严格地要求试验的进度，严谨地要求试验的思路和问题的处理解决。在李老师的严格把关下，我又学到了很多书本上没有和不可能学到的的东西，比如严谨的态度，认真的分析，以及敢于对权威的怀疑和创新的尝试等等。李老师严谨的作风、求实创新的态度，对学生认真和真诚，使我无论在生活上还是学习上都获益匪浅。让我在即将离开大学校的时刻收获了大学最丰硕的果实，也为我的大学画上一个圆满的句号。四年的本科生学习生活中，使我的人生得到了更多的关爱，思想上得到了更深刻的指导和锻炼。值此即将完成学士学业之际，谨向四年来给予的培养和爱的老师们致以崇高的敬意和衷心的感谢。

论文的完成也离不开多位老师、同学的帮助。臧晋老师、李继红老师都十分关注论文的进展并提出了宝贵的指导意见。田启良、刘亦良、李昉同学在试验的过程中也给了很多帮助和建议。总之，没有他们的热忱相助，本论文难以顺利完成。在此，向他们表示衷心的感谢!

最后，我要向自始至终都在默默关怀、鼓励、支持着我的远方的父母表示深深的感谢和敬意!由于忙于学业，我对父母未尽应有的责任和义务，他们的理解、支持和鼓励是我奋发向上的动力。

毕业在即，四年的学习生涯留下了人生中难忘而美好的经历，再次向所有关心、支持过的提及和未提及的老师、同学、家人和朋友致以最诚挚的谢意!

贾建军

二零一四年五月于南阳

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

设计方案所得的试验结果见表2-5，各因素的方差分析见表2-6。

析因试验的各因素的方差分析见表2-6，当P<0.05说明考查因素有显著影响，当P<0.01说明考查因素有极显著的影响。从方差分析表中可以看出，料液比、提取温度、提取时间三因素为显著性影响因子，其中料液比为极显著影响因子，而乙醇浓度影响不显著，故选择料液比、提取温度、提取时间这3个因素作为主要因素作进一步的响应面分析试验，以确定这些因素所对应的最优水平[27]。乙醇浓度依据效应分析和节约成本的原则，将其控制在较好水平上进行试验，即60%。

表 2-5 N=4的析因试验设计与响应值

Table2-5 Analyzes the factor of experimental design and response value (N=4)

试验号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A提取温度

1 1 -1 1 1 1 -1 -1 -1 1 -1 -1

B料液比 -1 1 1 -1 1 1 1 -1 -1 -1 1 -1

C提取时间

1 -1 1 1 -1 1 1 1 -1 -1 -1 -1

D乙醇浓度

-1 1 -1 1 1 -1 1 1 1 -1 -1 -1

得率（Ymg/g）

45.94 46.31 46.20 45.96 46.32 46.79 46.58 45.77 45.59 45.71 46.01 45.66

表 2-6 各因素的方差分析表 Table2-6 Variance analysis of factors

项 效应 系数 系数标准误 T P 常量 1.07475 0.04199 25.59 0.000 A 0.20017 0.10008 0.04199 2.38 0.049 B 0.59683 0.29842 0.04199 7.11 0.000 C 0.27350 0.13675 0.04199 3.26 0.014 D 0.27350 0.01725 0.04199 0.41 0.694

2.3.4 响应面结果及分析

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究 表2-7 Box-Behnken试验方案与结果

Table2-7 Box-Behnken design and experimental results

试验号 A料液比 B提取时间 C提取温度 得率Y(mg/g) 1 -1 -1 0 2 1 -1 0 3 -1 4 1 5 -1 6 1 7 -1 8 1 10 0

1 1 0 0 0 0

0 0

64.79 71.38 69.02 70.85 62.01 69.17 65.85 67.24

68.18 69.06 67.31 70.93 72.63 72.85 72.83

-1 -1 1 1

9 0 -1 -1

1 -1

1 1 0 0 0

11 0 -1 12 0 1 13 0 0 14 0 0 15 0 0

表2-8回归方程系数显著性检验

Table2-8 Significance test of regression coefficient

项 系数 系数标准误 T P 常量 72.7700 0.11978 607.508 0.000 A 2.1213 0.07335 28.918 0.000 B 1.0250 0.07335 13.974 0.000 C 0.3637 0.07335 4.959 0.004 A*A -3.2813 0.10797 -30.390 0.000 B*B -0.4787 0.10797 -4.434 0.007 C*C -3.4212 0.10797 -31.686 0.000 A*B -1.1900 0.10374 -11.471 0.000 A*C -1.4425 0.10374 -13.905 0.000 B*C 0.6850 0.10374 6.603 0.001 “×”表示A、B、C以及D之间的交互作用

R-Sq = 99.84% R-Sq（调整） = 96.24%

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表2-9 回归方程的方差分析 Table2-9 Anova for regression equation

来源 自由度 Seq SS Adj SS Adj MS F P 回归 9 138.377 138.3766 15.3752 357.19 0.000 线性 3 45.461 45.4611 15.1537 352.04 0.000 平方 3 77.051 77.0509 25.6836 596.67 0.000 交互作用 3 15.865 15.8645 5.2882 122.85 0.000 残差误差 5 0.215 0.2152 0.0430

失拟 3 0.186 0.1856 0.0619 4.18 0.199 纯误差 2 0.030 0.0296 0.0148 合计 14 138.592

根据表2-7结果可得回归方程为：Y=72.7700+2.1213X1+1.0250X2+0.3637X3 -3.2813X12-0.4787X22-3.4212X32-1.1900X1X2-1.4425X1X3+0.6850X2X3

上式中的Y为黄连总生物碱得率的预测值，X1、X2、X3为自变量的编码值。 对回归方程进行方差分析，见表2-9，由表可以看出建立的模型具有较高的决定系数R2 =0.9624，说明二次回归方程与试验结果拟合度较好，误差较小。对此方程的回归系数进行检验，可以看出：自变量线性项效果显著，即料液比（A）、提取时间（B）和提取温度(C)能够显著的影响黄连生物碱的提取工艺(P<0.05)。失拟表示模型预测值与实际值不拟合的概率，反应拟合出来的模型与试验数据的接近程度。从表2-9可知：模型失拟检验的P值为0.199，大于0.050，因此，回归模型拟合较好，不需要对回归方程调整。因此该回归方程给黄连总生物碱的提取工艺提供了一个良好的模型[28]。 2.3.5 响应曲面图分析

通过令一些因素水平值为定值，只考虑其中两个因素对得率的影响，可以更为直观的了解两个因素同时对总生物碱得率的影响，得到相应的响应面图和等高线图。

通过Minitab 15 软件分析，可得到的等高线图和响应面，因素交互作用对响应值的影响可以直观的反应出来，其中圆形表示两因素交互作用不显著，椭圆则与之相反，交互作用的强弱也可通过等高线图的形状反应出来 [22、21]。

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图2-8 料液比与提取时间对得率的响应面图和等高线

Fig.2-8 Solid-liquid ratio and the extraction time on yield of total alkaloids from Rhizoma

Coptidis by response surface and contour

图2-8是料液比与提取时间对黄连总生物碱得率的响应面图和等高线图，响应面开口向下，随着料液比与提取时间的逐渐增加，响应值首先逐渐增大，当响应值达到最大值后，响应值又开始下降。等高线呈椭圆形，表明料液比与提取时间两因素有交互作用，与方差分析统计表相符。

图2-9 提取时间与提取温度对黄连总生物碱得率的响应面图和等高线

Fig.2-9 the extraction time and the extraction temperature on yield of total alkaloids from

Rhizoma Coptidis by response surface and contour

图2-9是提取时间与提取温度对黄连总生物碱得率的响应面图和等高线图，响应面开口向下，随着提取时间与提取温度的逐渐增加，响应值逐渐增大，当响应值达到最大值后，响应值又开始下降。等高线近似圆形，表明提取时间与提取温度两因素交互作用显著，与方差分析统计表相符。

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图2-10 料液比与提取温度比对黄连总生物碱得率的响应面图和等高线

Fig.2-10 Solid-liquid ratio and the extraction temperature on yield of total alkaloids from

Rhizoma Coptidis by response surface and contour

图2-10是料液比与提取温度对黄连总生物碱得率的响应面图和等高线图，响应面 开口向下，随着料液比与提取温度的逐渐增加，响应值逐渐增大，当响应值达到最大值 后，响应值又开始下降。等高线为椭圆形，表明料液比与提取温度两因素之间交互作用显著，与方差分析统计表相符。

2.3.6黄连总生物碱提取工艺最优值的预测

利用Minitab 15特有的响应优化器做寻优处理，结果如图2-11。

图2-11 黄连总生物碱提取工艺的响应优化图

Fig.2-11 Optimization of process response graph extraction of total alkaloids from Rhizoma

Coptidis

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

根据图中得出的固液比[0.1111]、提取时间[1.0]、提取温度[0.1313]的编码值,再根据响应面设计中1、0、-1编码值所对应的的关系，可得出的最优工艺条件为：料液比为1:41.11、提取时间为120min、提取温度为80.66℃，在此条件下，黄连总生物碱得率为73.44mg/g。 2.3.7最佳工艺条件的验证实验

为了验证试验的可靠性，根据上面的预测条件进行验证实验。为方便实验操作，将上面的最优提取条件取整数，即料液比为1:41、提取时间为120min、提取温度为81℃。分别准确称取1.0g经过预处理的黄连粉末，以60%的乙醇为提取溶剂，在料液比为1：41（g/ml），81℃的水浴，提取次数一次，恒温振荡条件下提取120min，进行3次平行试验，测得黄连总生物碱得率平均值为73.21mg/g。预测总生物碱得率为73.44mg/g，实测平均值与预测值相差不大，证明采用响应面分析法优化的试验结果准确可靠，具有实用价值。

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

3 结论与展望

3.1 主要结论

（1）对影响黄连中生物碱提取的因素进行考察，在单因素的基础上，采用Plaekett-Burman试验设计的方法，以黄连总生物碱得率为响应值，筛选出了3个影响显著的主要因子，即料液比、提取时间、提取温度；

（2）采用Box-Behnken试验设计对黄连总生物碱提取条件进行优化，使用Minitab 15软件进行数据拟合，建立了黄连总生物碱工艺数学模型；

（3）回归分析表明，该模型的稳定性较好，通过对模型的响应曲面图和等高线图进行分析，结果显示料液比与提取时间、提取温度交互效应对黄连总生物碱提取的影响显著；

（4）通过响应面分析法优化，得到较优的工艺条件为：料液比1:41.11、提取时间120min、提取温度80.66℃；

（5）通过对较优条件进行调整，具有实际操作性的较优条件为：乙醇浓度为60%、提取时间为120min、提取温度为81℃、料液比1:41、提取一次，在此条件下，实测黄连总生物碱得率的平均值为73.21mg/g，与预测值73.44mg/g相符。 （6）经优化后的工艺参数，可有效的降低应用于黄连总生物碱提取工艺条件组合的复杂性，减少工艺操作的盲目性，能够为进一步的试验研究和工业化奠定基础。

3.2展望

（1）提取方法方面，恒温振荡浸提效果良好，其原因是在水浴恒温下，溶质分子运动速度加快，提取速率大，持续振荡起到搅拌的作用，使由于溶入溶质而导致浓度不同的提取剂充分混合，总生物碱得率较高。为其他提取工艺如酶辅助、微波辅助、超声波辅助浸提，回流提取、索氏提取等的深入研究提供了基本的方法和步骤，为探索出更合理高效的提取方法和工艺条件奠定了基础。

（2）测定方法方面，分光光度法简单快捷，但精确度相对低且不能具体分析样品中各组分的含量、性质，因此若要精确对样品中各组分定性定量的分析，还应选择高效液相色谱法、核磁共振法、质谱法等。

（3）测定吸光度时，发现测定数据有时不稳定。经过分析发现是样品溶液的不稳定性，造成测定数据不稳定，在试验过程中，对一个样品的吸光值测定应避免时间过长，以期减小测定数据不稳定的现象。

（4）试验设计分析方面，在单因素试验的基础上以影响显著的因素为对象设计响应面试验，避免了过多因素的试验麻烦，但这样也不可避免的丢失了一些对

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

得率具有一定影响作用的因素，故在进一步的优化中还应考察其他次要因素。 （5）本论文进行黄连总生物碱提取工艺的研究，得到了最佳的提取条件，以后在此基础上进行黄连生物碱的纯化工艺的研究，将来能够进行大规模的黄连生物碱的提取、纯化工作。生物碱是植物化学及医药保健领域研究的热点之一。随着对生物碱类化合物研究和应用的不断发展, 人们将目光转向寻找生物碱类化合物的新资源, 黄连是一种优良的资源。随着对黄连生物碱有效化学成分、药理作用等的研究，能够更好的开发其潜在的保健功能、药用价值，使它更好的为人类服务。

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黄连总生物碱提取工艺的优化研究

参考文献

[1].代国友,潘晓鸥,罗红霞.黄连的药理研究进展[J].疾病控制杂志,2003,7(3): 239-242.

[2].江苏省植物研究所,中国医学科学院药物研究所,中国科学院昆明植物研究所.新华本草纲要[M] .第1册,上海：上海科学技术出版社,1988.

[3].王萌.常用中药川黄柏和黄连化学成分及生物活性比较研究[D].北京协和医学院研究生院,2009.

[4].程轩轩.岩黄连生物碱类化学成分及其抗肿瘤活性研究[D].中山大学研究生院,2008. [5].谢沛珊.中草药抗肿瘤筛选的实验研究[J].时珍国医国药,1996,7(1): 19-20.

[6].张乃哲,江平.DNA拓扑异构酶—肿瘤化疗的重要靶点[J].实用心脑肺血管病杂志,2002,10 (2): 121-124.

[7].Krom hout.Serum cholesterol in cross-cultural perspective.The seven countries study[J]. 1995,54-155.

[8].YANG DM,XU SHB.The preliminary research ofanti,inflammation and toxicity of cansora Lueidissima Hand Mazz[J]. Academic Journal of uangdong CollegeOfPHarmacy,2001,17(1) : 33-35.

[9].韦记青,蒋水元,蒋运生,等.药用植物岩黄连研究概述[J].广西科学院学报,2006,22(2): 108-111.

[10].蒋伟哲.岩黄连的研究进展[J].中国药业,2006,15(10): 1-3.

[11].宁娜,韩建军,杨政水.黄连生物碱4种提取方法的比较[J].湖北农业科学,2012,12(4): 5453-5456.

[12].胡宝平,税丕先.小檗碱提取工艺研究进展[J].泸州医学院学报,2011,34(2): 214-216.

[13].黄罗生,徐德然.黄连解毒片中黄连黄柏提取工艺的优选[J].中成药,2002,22(2): 122-124. [14].李洪.两种盐酸小檗碱含量测定方法比较[J].药物鉴定,2005,14(11): 35-37.

[15].国家药典委员会中华人民共和国药典[M].第1册,北京：化学工业出版社,2000.

[16].刘建华,王志祥,刘岭. HPLC法测定中草药饲料添加剂中盐酸小檗碱含量[J].兽药与饲料添加剂,2006,11(2): 23-24.

[17].王宝辇.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京：中国匡药科技出版社,1994. [18].王柳卜,贾宪生,胡成刚,等.三颗针中盐酸小檗碱、盐酸药根碱及盐酸巴马汀的含量测定[J]. 时珍国医国药,2011,22(1): 17-18.

[19].Middeton J R.Biological properities of plant flavonoid：an overview[J].Im,JpHarmacognos, 1996(34):344-348.

[20].徐蓉,陈钧,徐骅,等.响应面法优化黄连黄柏中总生物碱的提取工艺[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(9): 26-29.

[21].赵强,余四九,王廷璞,等.响应面法优化秃疮花中生物碱提取工艺及抑茵活性研究[J].草业学报,2012,21(4): 206-212.

[22].海洪,汪坤,金文英. Box-Behnken响应面法优化超声波提取蚕沙中叶绿素的工艺研究[J]. 食品工业技术,2009,30(3): 207-211.

[23].Joglekar A M, May A T. Product excellence through design ofexperiments[J]. Cereal Foods World,1987,32(2): 857?868.

[24].Ozeclik B，Lee J．H．，Min D．Effects of light，oxygen，pH on the absorbance of 2-2-diphenyl-1-picrylhydrazy[J]. Food science,2003,68(2): 487-490

22

黄连总生物碱提取工艺的优化研究

[25] .Gonfii I, Carron N M. In vitro fermentation and .hydration properties of commercial dietary fiber-rich supplements[J].Nutrition Research,1998,18（06）:1077-1089.

[26].齐海涛,王有为,等.不同栽培模式下黄连质量评价[J].中国中药杂志,2007,4(3): 570-572. [27].程华,余龙江,胡琼月,等.分光光度法测定岩黄连不同部位总生物碱的含量[J].时珍国医国药,2006,7(3): 364-366.

[28].冀满丰.黄连中的盐酸小檗碱的提取分离及分离物的含量测定研究[J].国际医药卫生导报,2006,12(24): 239-242.

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致谢

本论文是在李杰老师的悉心指导下完成的，从论文的选题、设计、试验进程、疑难问题的解决直至论文的定稿无不凝聚着李杰老师的沥沥心血。在试验整个过程中，李老师都本着严肃认真的师长态度，悉心教导我，严格地要求试验的进度，严谨地要求试验的思路和问题的处理解决。在李老师的严格把关下，我又学到了很多书本上没有和不可能学到的的东西，比如严谨的态度，认真的分析，以及敢于对权威的怀疑和创新的尝试等等。李老师严谨的作风、求实创新的态度，对学生认真和真诚，使我无论在生活上还是学习上都获益匪浅。让我在即将离开大学校的时刻收获了大学最丰硕的果实，也为我的大学画上一个圆满的句号。四年的本科生学习生活中，使我的人生得到了更多的关爱，思想上得到了更深刻的指导和锻炼。值此即将完成学士学业之际，谨向四年来给予的培养和爱的老师们致以崇高的敬意和衷心的感谢。

论文的完成也离不开多位老师、同学的帮助。臧晋老师、李继红老师都十分关注论文的进展并提出了宝贵的指导意见。田启良、刘亦良、李昉同学在试验的过程中也给了很多帮助和建议。总之，没有他们的热忱相助，本论文难以顺利完成。在此，向他们表示衷心的感谢!

最后，我要向自始至终都在默默关怀、鼓励、支持着我的远方的父母表示深深的感谢和敬意!由于忙于学业，我对父母未尽应有的责任和义务，他们的理解、支持和鼓励是我奋发向上的动力。

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贾建军

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