遗传学实验报告总结

更新时间：2023-09-13 21:02:02 阅读量：教学研究文档下载

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遗传学实验报告

栀子花开

5219751086 生物有志班梦想实验学院

实验1 植物有丝分裂染色体制备

一、实验目的

主要掌握有丝分裂染色体制片技术；了解有丝分裂各个时期染色体的特征。

二、实验原理

各种生长旺盛的植物组织，如根尖、茎尖、愈伤组织等常进行着活跃的细胞分裂。通过对材料进行适当的固定处理，酶解和染色，就可以在显微镜下观察到细胞内染色体的变化过程。

有丝分裂中期的染色体长度较短，具有典型的形态特征，易于记数和分析。因此，在细胞的分裂过程中，进行药物或冰冻处理，可阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期。同时，对组织细胞进行酸性水解或酶解处理，降解细胞之间的果胶质和细胞的纤维素壁，使细胞易于散开。

三、实验材料、器具及试剂

大麦、玉米及洋葱等根尖。

显微镜、水浴锅、镊子、载玻片、盖玻片、小瓶、酒精灯、滤纸等。

固定液：95％乙醇:冰醋酸＝3:1；染液：甲基改良品红；处理液：0.002M8-羟基喹林水溶液，0.075M KCl；酶解液：2.5％纤维素酶和2.0％果胶酶水溶液。

四、实验步骤

步骤1：

1、浸种催芽：取少许种子放入培养皿中，加水浸没，于30℃左右浸种1－2天。当种子萌动时，把水倒去，在铺有湿滤纸的培养皿中催芽。

2、预处理：根长至0.5-1.0cm时切取根尖，投入0.002M8-羟基喹林水溶液中处理；18℃，1-1.5h。 3、前低渗：吸去预处理液，加入0.075M KCl，或水低渗处理10-30min。

4、固定：用95％乙醇:冰醋酸＝3:1固定30min以上，也可固定后放入4℃冰箱保存。水洗3次，每次10min。

5、酶解：加入2.5％纤维素酶和2.0％果胶酶水溶液，在37℃酶解处理70－120min（根据软化程度而定）。

6、后低渗：倒去酶液后用蒸馏水冲洗2－3次，在水中停留30min以上，即可直接用于制片。也可换入固定液保存。

7、火焰干燥制片：放2－3个根尖在载片上，加一小滴固定液，用镊子将根尖敲碎至浆状。再滴2－3滴固定液，迅速用镊子夹住载片在酒精灯火焰上加热至着火，然后吹灭火焰。载片在空气中自然干燥。

8、染色：Giemsa染色液染色，1－3h。自来水冲洗，晾干。步骤2：（本实验内容）

1、浸种催芽：取少许种子放入培养皿中，加水浸没，于30℃左右浸种1－2天。当种子萌动时，把水倒去，在铺有湿滤纸的培养皿中催芽。

4、固定：用95％乙醇:冰醋酸＝3:1固定30min以上，也可固定后放入4℃冰箱保存。水洗3次，每次10min。

5、酶解：加入2.5％纤维素酶和2.0％果胶酶水溶液，在37℃酶解处理70－120min（根据软化程度而定）。

6、后低渗：倒去酶液后用蒸馏水冲洗2－3次，在水中停留30min以上，即可直接用于制片。也可换入固定液保存。

7、切去根冠，后取根尖1-2mm，加入一小滴染色剂，用镊子将根尖敲碎至浆状。染色10-15分钟。 8、染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在实验台上，用大拇指用力压住，并横向揉几次，（注意不要使盖片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉。）挤压出多余染液，然后置于显微镜下观察（先10x，找到分裂相后，40x观察记录）。

五、作业

1、制备分散良好的染色体制片。

2、绘出有丝分裂各时期的简图(中、后期)。

解：有丝分裂各时期简图如是：

后期末期

中期

如图中标示，染色体整齐排列在赤道板上的是有丝分裂中期的细胞，而染色体趋向于细胞两极，并有纺锤体牵引的是分裂后期的细胞，染色体完全分布在细胞两极，并中间可见模糊的凹陷即为末期分裂细胞。

六．实验分析

1.在此实验中，取材是关键步骤，去掉顶端1mm的根尖，取下方2mm左右的位置，进行切割，会利于后续有丝分裂的全过程观察，若是取材过于靠下，会取到伸长区的细胞，就无法观察有丝分裂现象，造成实验失败。

2.染色时间应该尽量控制在10—15min中内，过短着色过浅，过长则不利于观察细胞有丝分裂各时期。

3.染色完成后，要进行压片处理，用大拇指横向压几下，在用解剖针的背面轻击使细胞均匀分散，避免盖玻片移动，否则会使得分散的染色体聚集或者破坏染色体排布情况。

由于操作不甚熟练，所以实验重复了两次，不过最终取得了较满意的结果。