Treg

CD 4+CD 25+调节性T细胞

CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）首次由日本学者Sakaguchi等于1995年所报道，这类T细胞介导的免疫调节作用是维持自身免疫耐受的关键，由于其表面持续表达IL-2受体α链(IL-2Rα,CD25分子)，故将其命名为CD4+CD25+调节性T细胞。此发现引起了免疫学界的广泛关注。CD4+CD25+Tregs主要分布于人体的胸腺、外周血、淋巴器官及脐静脉血中。在小鼠和健康人体中约占外周CD4+T细胞5%-10%，新生儿、幼儿与成人外周血中 CD4+CD25+Tregs含量无明显差异。

CD4+CD25+Tregs的免疫抑制性是指经TCR介导的信号刺激活化以后能够抑制CD4+CD25-T细胞的活化和增殖。大量研究表明，CD4+CD25+Tregs不仅在自身耐受的获得和维持及自身免疫的防御中起重要作用，在肿瘤、移植耐受甚至是病原体感染等免疫反应调节中也扮演重要角色。

CD127

虽然FoxP3被公认为CD4+CD25+Tregs的高特异性标志，用于鉴定已分离的Tregs的数量和纯度，也可以用来描述固定后的调节性T细胞。然而，由于FoxP3的染色需要细胞的破碎，不适用于活细胞的分离。因此这种情况下，CD127-是一个好的选择。

来自于Barbara Fazekas de St.Groth，Jeffrey Bluestone 及BD生命科学系统实验室的研究表明，CD127在T细胞一些群体中时会下调表达，这与Tregs标记FoxP3的表达量之间有很好的相关性，即Foxp3的细胞群为CD127-。因此结合CD4和CD25高表达而CD127低表达，则可鉴定出具有高度抑制活性、高表达FoxP3的Tregs。

CD25

对Treg细胞类群分析后认为，人体中只有那些占所有CD4细胞的2-3%的高水平表达IL-2受体的a链（CD25）分子的细胞群体，表现出体外抑制活性；那些表达水平低或者介于中间水平的CD25细胞体外不呈现任何的抑制性。组成性高表达CD25是CD4+CD25+Tregs的特征，但是CD25并非其特异性标志，还可表达于活化的T细胞表面。在CD4+CD25-T细胞上诱导CD25表达并不能使之

具有抑制功能。此外，CD25表达不足的小鼠的CD4+Foxp3+细胞在体外与其野生型有相似的抑制活性。

CD 4+CD 25+Tregs与自身免疫性疾病

鉴于Tregs对维持机体免疫耐受的关键作用，不难理解，其数量和(或)功能的异常必定和疾病的发生发展密切相关。研究表明Treg数量或者功能缺陷可能导致诸如Ⅰ型糖尿病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化病等多种自身免疫性疾病的发生。另一方面，提高或增强Treg的数量或功能可防止或抑制许多自身免疫性疾病的发生或发展。Treg与常见自身免疫性疾病关系的研究已较为广泛和深入，下面就类风湿性关节炎、特发性血小板减少性紫癜和系统性红斑狼疮病中CD 4+CD 25+Tregs发挥的作用及临床意义进行详细阐述。 CD 4+CD 25+Tregs与类风湿性关节炎(RA)

类风湿性关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎为特征、免疫紊乱为主的慢性全身性自身免疫性疾病。近年来人们发现，CD4+CD25+Tregs与RA密切相关，RA患者Treg数量及功能状态以及其与T细胞库收缩的关系与RA均相关。通过对这些方面的深入研究，对于明确RA的病因、致病机制及研制新的治疗方法均有重要意义。

RA患者外周循环中CD4+CD25+Tregs的比例与正常人是否相同存在争议。Cao等对27例RA患者外周血和关节液中的CD4+CD25+T细胞进行了检测，发现RA患者外周血中CD4+CD25+T细胞数量与正常对照组差异无显著性。国内南京中医药大学的王云（2007年）等却发现RA患者外周血的CD4+CD25+Tregs数目比正常人高的多，这与Ehrenstein等人2004年的发现相一致。这些不同的结果可能与对CD4+CD25+Tregs的定义不同有关，有人认为CD25brightT细胞是CD4+CD25+Tregs，有人定义为总CD25+T细胞。

最近有研究表明，滑液中与外周循环中的CD4+CD25+Tregs不同。RA患者滑液中CD4+CD25+Tregs的数量中表达CTLA4和GITR的细胞比例较正常人和RA患者外周血中的高，体外实验表明，较外周血中CD4+CD25+Tregs的抑制能力强。尽管RA患者关节液Treg的数量较外周血Treg高，较外周血中CD4+CD25+Tregs的抑制能力强，但却不能阻断RA关节软骨及骨质的侵蚀破坏过程，其可能机制包括：

1）滑液中反应性T细胞对CD4+和CD25+Tregs的敏感性降低。滑液中反应性T细胞对CD4+CD25+Tregs的敏感性降低。尽管RA患者滑液中CD4+CD25+Tregs数目众多且功能强大，由于滑液较外周血中的反应性T细胞对CD4+CD25+Tregs的敏感性降低，CD4+CD25+Tregs仍然不能有效抑制反应性T细胞引起的滑膜增生(LIN2003)。此外，大量存在于RA滑膜中的IL26，可以加强反应性T细胞对CD4+CD25+Tregs抑制作用的抵抗。

2）细胞因子抑制了CD4+CD25+Tregs的功能。炎症性滑液环境里的许多前炎性细胞因子，如IL-2和IL-7，能明显降低Tregs的功能。Ehrenstein等2004年研究发现，活动性RA患者滑液中的CD4+CD25+Tregs功能缺陷，不能有效抑制反应性T细胞。

虽然RA炎症滑膜中的CD4+CD25+Tregs不能充分阻止关节炎症，但是它能下行性调节炎症反应，从而延缓组织的进一步破坏。因此，扩张RA患者滑膜局部的CD4+CD25+Tregs可能是有效缓解关节炎症的方法之一。近年抗TNF-α药物在RA治疗中展示了神奇的疗效，不仅明显改善了大部分RA患者的临床症状，也明显降低了RA的疾病活动性。研究提示，抗TNF-α治疗一方面直接中和了关节液中的TNF-α，并使Treg中TNFR-II表达下调而FoxP3表达上升，恢复了Treg对细胞因子产生和对效应T细胞增殖的抑制功能；另一方面，抗TNF-α治疗可通过抑制多种促炎细胞因子的产生，纠正抗炎和促炎细胞因子间比例的失衡，减弱促炎细胞因子对Treg功能的抑制；此外，抗TNF-α治疗可阻断Treg的自发凋亡过程，使

RA患者外周血

Treg恢复至接近正常水平

[Bayry,McInnes,Nadkarni2007]。如图1为:Nadkarni2007研究的部分结果示意图，研究发现患有RA的病人外周血中调节性T细胞虽然有所增加，但是是存在功能缺陷的；经过infliximab治疗后，发现CD4+CD25+Tregs的数量增加，Tregs抑制活性有所提高，但是如图可以看出新产生的CD4+CD25+Tregs是一个新的群体，它们是低表达CD62的，而正常人或活动期RA病人的CD4+CD25+Tregs是高表达的。

图1 infliximab治疗后Foxp3+CD62L?CD4+Tregs相对正常人和活动期RA患者的数量变化情况图 A anti-CD4 FITC 和anti-Foxp3 PE染色后生成的CD4和Foxp3两参数的散点图,双阳性区代表CD4+CD25+. B CD4+CD25high调节性T细胞对应CD62的单因素直方图.C CD4+Foxp3+对应的CD62的单因素直方图.

CD 4+CD 25+Tregs与特发性血小板减少性紫癜

特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一因血小板免疫性破坏，导致外周血中血小板减少的出血性疾病，以广泛皮肤、粘膜及内脏出血、血小板减少、骨髓巨核细胞发育成熟障碍、血小板生存时间缩短及抗血小板自身抗体出现等为特征，其主要病因有：感染、免疫因素、肝脾作用、遗传因素等。以前医学界普遍认为ITP的发病机制是体液免疫， 患者体内存在大量的IgG型自身抗体,结合血小板表面的糖蛋白分子，包括GPⅡb2Ⅲa,GPIb2Ⅸ和GPIV形成抗原抗体复合物，通过Fc受体被巨噬细胞摄取，并主要在脾脏被吞噬、破坏。但是并非所有ITP患者的血浆/血清能引起正常人血小板减少，小板自身抗体只能在50%-70%ITP患者中检测到，并且阴性结果不能排除诊断。近几年，随着科学的不断进步和研究的不断深入，人们发现ITP发病机制中也有细胞免疫的作用，而自身反应性T细胞的激活及异常的自身抗原呈递过程则是ITP发生细胞免疫异常的两个关键环节。 大量研究表明：ITP患者外周血CD4+T、CD4+CD25+调节性T细胞数量明显低于对照（图2），CD4+CD25+T／CD4+T的比值也显著降低，使机体内免疫耐受平衡破坏。南京医科大学芮耀耀等研究发现，ITP患儿治疗前CD4 T细胞比例

明显低于正常对照组(P<0．01)，治疗后CD4+T细胞比例显著升高，明显高于治疗前，但仍低于正常对照组(P<0．01)。因此，ITP患者外周血淋巴细胞的CD4+T细胞不仅无表达增高，反而显著降低，与国内外其他相关报道一致。

图2 ITP患儿治疗前后和正常对照CD4+T淋巴细胞的比较

Treg细胞数量减少后不能正常抑制T细胞的活化，使患者体内存在大量活化的T淋巴细胞，参与血小板的损伤，可能的机制为：

1)过度活化增殖的Th细胞通过分泌IL-2、IFN-7等细胞因子，激活细胞毒T细胞、巨噬细胞，吞噬杀伤血小板，也可通过辅助B细胞产生抗血小板相关抗体，进而通过补体系统或调理吞噬作用破坏血小板；

2)过度活化增殖的Tc细胞可通过分泌穿孔素、颗粒酶特异性地杀伤血小板；

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