药物分析实验教材

药物分析化学实验指导

实验一 葡萄糖的杂质检查

一、目的要求

1、了解药物的一般杂质检查的项目和意义。

2、掌握葡萄糖中一般杂质限度检查的项目和限量计算方法。

3、掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、炽灼残渣限量检查的基本原理和方法。 二、基本原理

1、氯化物检查法 Cl?3?AgNO????AgCl?(白) 3HN0 所生成的浑浊液与一定量的标准液在同样条件下生成的浑浊液相比较，以判断本品中含氯化物的限量。 2、硫酸盐检查法

2? SO4?BaC2l????BaSO4?(白)

HCl 与一定量的标准溶液在同一条件下生成的硫酸钡浑浊比较, 以判断本品中含硫酸盐的限量。

3、铁盐检查法

Fe3??6SCN????? [Fe(SCN)6]H?3? 红色

与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。 4、重金属检查法

CH3CSNHPd2?2?H2O?CH3CONH2?H2S?H2S?PdS? 黑色可与对照标准液按同法处理比较。 5、砷盐检查法

AsO3?3Zn?9HAsHAsH333???AsH3??3Zn2??3H2O?2HgBr?3HgBr22?2HBr?AsH(HgBr)2 黄色?3HBr?As(HgBr)3 棕色与定量标准砷溶液所生成的砷斑比较。 6、干燥失重测定法

干燥失重是指药物在规定的条件下经干燥后所减失的重量，根据减失的重量和取样量计算供试品干燥失重的百分率。干燥失重检查法主要控制药物中的水分,也包括其它挥发性物质如乙醇等。

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三、实验材料

葡萄糖 氢氧化钠（0.02mol/L） 酚酞指示剂 90%乙醇 硝酸 稀硝酸 硝酸银试液 标准氯化钠溶液 盐酸 稀盐酸 标准硫酸钾溶液 25%氯化钡 碘试液 硫氰酸铵溶液 标准铁溶液 标准铅溶液 醋酸盐缓冲液（PH3.5） 硫代乙酰胺试液 稀硫酸 溴化钾试液 碘化钾试液 酸性氯化亚锡试液 醋酸铅棉花 溴化汞试纸 标准砷溶液 磺基水杨酸溶液 试(检)砷器 水浴 四、操作方法

1. 酸度 取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定（0.02 mol/L）0.20ml，应显粉红色。

2. 溶液的澄清度与颜色 取本品5g，加水溶解后，放冷，用水稀释至10ml，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录ⅣB）比较，不得更深；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液3ml、比色用重铬酸钾液3ml与比色用硫酸铜液6ml，加水稀释成50ml）1.0ml加水稀释至10ml比较，不得更深。

3. 乙醇溶液的澄清度 取本品1.0g，加90%乙醇30ml，置水浴上加热回流约10分钟，溶液应澄清。

4. 氯化物 取本品0.60 g,,加水溶解使成25 ml(溶液如显碱性, 可滴加硝酸使成中性),再加稀硝酸10 ml；溶液如不澄清,应滤过；置50 ml纳氏比色管中,加水使成约40 ml,摇匀,即得供试液。另取标准氯化钠溶液(10μg Cl/ml)6.0 ml,置50 ml纳氏比色管中,加稀硝酸10 ml, 加水使成约40 ml,摇匀,即得对照品。于供试液与对照液中,分别加入硝酸银试液1.0 ml,用水稀释使成50 ml,摇匀,在暗处放置5分钟,同置黑色背景上,从比色管上方向下观察、比较，供试溶液不得比对照溶液更浓(0.010%)。

5. 硫酸盐 取本品2.0ｇ,加水溶解使成约40 ml(溶液如显碱性,可滴加盐酸使成中性)；溶液如不澄清，应滤过；置50 ml纳氏比色管中, 加稀盐酸2 ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液(100μg SO42-/ml)) 2.0ml置50 ml纳氏比色管中，加水使成约40 ml, 加稀盐酸2 ml，摇匀，即得对照溶液；于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5 ml, 用水稀释使成50 ml，充分摇匀，放置10分钟, 同置黑色背景上, 从比色管上方向下观察、比较，供试溶液不得比对照溶液更浓(0.010%)。

6. 亚硫酸盐与可溶性淀粉 取本品1.0g，加水10ml溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。

7. 铁盐 取本品2.0ｇ,加水20 ml溶解后,加硝酸3滴, 缓缓煮沸5分钟, 放冷, 加水稀释成45 ml，加硫氰酸铵溶液（30→100）3 ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液2.0 ml用同一方法制成的对照液比较,不得更深(0.001%)。

8. 重金属 取50 ml纳氏比色管两支, 甲管中加标准铅溶液(10μg Ｐｄ/ml))一定量与醋酸盐缓冲液(pH3.5) 2 ml后,加水稀释成25 ml。取本品4.0ｇ，置于乙管中，加水23 ml溶解后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5) 2 ml；若供试品带颜色, 可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲 乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2 ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深(含重金属不得过百万分之五)。

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9. 砷盐 取本品2.0ｇ置试砷瓶中，加水5 ml溶解后，加稀硫酸5 ml与溴化钾-溴试液0.5 ml，置水浴上加热约20分钟, 使保持过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾-溴试液适量，并随时补充蒸散的水分, 放冷, 加盐酸5 ml与水适量使成28 ml, 加碘化钾试液5 ml与酸性氯化亚锡试液5滴。在室温放置10分钟后,加锌粒2ｇ，迅速将瓶塞塞紧(瓶塞上已按好有醋酸铅棉花及溴化汞试纸的试砷器), 并在25～40℃的水溶液中反应45分钟, 取出溴化汞试纸,将生成的砷斑与标准砷溶液一定量制成的标准砷斑比较，颜色不得更深，以符合规定(0.0001%)。

标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液(1μｇ/ｍｌ) 2 ml, 置另一试砷器中，加盐酸5 ml与蒸馏水21 ml，照上述方法，自”加碘化钾试液5 ml…”起依法操作，即得标准砷斑。

10. 干燥失重 取本品, 混合均匀(如为较大的结晶，应迅速捣碎使成2ｍｍ以下的小粒)，分取约1ｇ，置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称瓶中，精密称定，在105℃干燥至恒重。从减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。减失重量不得过9.5%。

11. 蛋白质 取本品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液（1→5）3ml，不得发生沉淀。

12．炽灼残渣 取供试品1.0～2.0g，置巳炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温；除另有规定外，加硫酸0.5～1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700～800℃炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700～800℃炽灼至恒重，即得。不得过0.1%。

五、注意事项

1．限度检查应遵循平行操作原则．即供试品与对照品的实验条件应尽可能一致，包括实验用具的选择、试剂与试液的量取方法及加入顺序、反应时间的长短等。

2．比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀。比色方法是将两管同置于白色背景上，从侧面或自上而下观察；比浊方法是将两管同置于黑色背景上，从上向下垂直观察。所用比色管刻度高低差异不应超过2mm，使用过的比色管应及时清洗，注意不能用毛刷刷洗，可用铬酸洗液浸泡。

3．一般情况下可取1份供试品进行检查。如结果不符合规定或在限度边缘时，对供试品和对照管各复捡2份，方可判定。 4．砷盐检查

(1)新购置的试（检）砷器使用前应检查是否符合要求，可将所有检砷器依法制备标准

砷斑，所得砷斑应显色一致，同一套仪器应能辨别出标准砷溶液1．5ml与2．0ml所呈砷斑的差异。所使用的检砷器和试药应按本法作空白试验，均不得生成砷斑或生成可辨认的斑痕。

(2)不能用定性滤纸制备溴化汞滤纸，因为所显的砷斑色暗，梯度不规律, 应采用质地疏松的定量滤纸制作。应用镊子取用溴化汞试纸, 不可用手接触生成砷斑部分。

(3)应使用干燥的导气管。

(4)锌粒的大小以通过1号筛为宜。

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(5)砷斑遇光、热、湿气即变浅或褪色。如需保存，可将砷斑在石蜡饱和的石油醚溶液中浸过晾干或避光置于干燥器内，也可将砷斑用滤纸包好夹在记录本中保存。

(6)反应时温度应保持在25～40℃。反应时间45分钟。

(7) 所取的试（检）砷器、标准管与供试管应力求一致,注意选管的长短, 自瓶内液面到溴化汞试纸之间的距离应相同, 管的内径应相同。试（检）砷器的安装加入约5cm长的醋酸铅的棉花, 置于1/2管长以上。

(8)检查中加浓溴试液的目的是氧化以破坏葡萄糖的环状结构（据有关报告，糖精钠、葡萄糖、水杨酸、磺胺等环状有机化合物如不经有机破坏，则所显砷斑均较浅），故在加热20分钟内必须保持稍过量的溴存在，20分钟后要继续加热把溴赶完，并同时作一空白作标准砷斑用。

(9) 实验中规定”按干燥品(或无水物，或无溶剂)计算”时，除另有规定外, 应取未经干燥(或末去水, 或末去溶剂)的供试品进行试验, 并将计算中的取用量按检查项下测得的干燥失重(或水分, 或溶剂)扣除。

干燥 失重%?(称量瓶?样品重)-(称量瓶?干燥后样品重(称量瓶?样品重)-称量瓶)?100%

六、思考题

1、一般杂质检查在药品质量控制中的意义及检查的主要事项？ 2、比色、比浊操作应遵循的原则？

3、古蔡氏法中成加各个试剂的作用与操作要点？

实验二 葡萄糖注射液的含量测定

一、实验目的

1．掌握比旋度的概念和旋光法测定旋光性物质含量的原理与计算方法。 2．掌握折光法测定葡萄糖注射液含量的原理与计算方法。

3．掌握快速分析法（剩余碘量法）测定葡萄糖含量的基本原理和方法。 二、实验原理

1．旋光法 葡萄糖为旋光性药物，其比旋度为+52.5°，用旋光计测出样品溶液的旋光度后，根据公式可计算含量。

c%?100?[?]LtD

25? L=2 dm [?D］?52.5~53.3

2．折光法 光线自一种透明介质进入另一透明介质时，由于两种介质的密度不同，光

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的进行速度发生变化，即发生折射现象。一般折光率系指光线在空气中进行的速度与在供试

t品中进行速度的比值。折光率以nD表示，D为钠光谱的线，t为测定时的温度。折光率与

水溶液中溶质溶液的关系可用下式表示：

nD?nD?F?PP?nD?nFttD水tt

20℃蒸馏水的折光率为1.3330，20℃葡萄糖的折光率因素为0.00142，所以测定20℃时供试液葡萄糖注射液的折光率，即可求得其含量。

3．剩余碘量法

（1）葡萄糖为一醛糖，具有还原性。在碱性介质中，过量的标准碘溶液将葡萄糖氧化成葡萄糖酸。剩余碘量法即在酸性介质中用硫代硫酸钠回滴。反应式如下：

I2 + 2NaOH → NaIO + NaI + H2O

CH2OH(CHOH)4CHO + NaIO + NaOH → CH2OH(CHOH)4COONa + NaIO + H2O 3NaIO → NaIO3 + 2NaI

（2）过量的I2一部分在氢氧化钠生成NaIO，继而进一步氧化成NaIO3，一部分由于碱量不足仍以游离碘形式存在。加酸酸化后，又全部还原以碘的形式存在。剩的碘液用酸中和后，用硫代硫酸钠标准液反滴定。

I2 + 2NaOH → NaIO + NaI + H2O 3NaIO →NaIO3 + 2NaI

NaIO3 + 5NaI + 3H2SO4 → 3I2 + 3Na2SO4 + 3H2O （3）硫代硫酸钠回滴

I2 + 2Na2S2O3 → NaI + Na2S4O6 三、仪器和试剂

仪器 自动指示旋光仪，阿培折光仪。

试剂 葡萄糖注射液，氨试液，0.1 mol/L碘溶液，1 mol/l氢氧化钠溶液，1 mol/l盐酸溶液，0.1 mol/L硫代硫酸钠溶液。 四、实验步骤

1．旋光法测定葡萄糖注射液的含量 精密量取本品适量（约相当于葡萄糖10 g），置100 ml容量瓶中，加氨试液0.2 ml（10％或10％以下规格的本品可直接取样测定），用水稀释至刻度，摇匀，静置10 min，得供试液，测定旋光度。用读数至0.01并经过检定的旋光仪，将测定管（长度为2 dm）用供试液冲洗数次，缓缓注入供试液适量（注意勿使发生气

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