HPLC法测定芩连平胃汤中小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀含量-张华,刘敏,李忠东

辽宁中医药大学学报

第16卷 第12期 2014 年 12 月

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

辽宁中医药大学学报

Vol. 16 No. 12 Dec .，2014

DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2014.12.022

HPLC法测定芩连平胃汤中小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀含量

张华，刘敏，李忠东

（空军总医院药学部，北京 100142）

摘 要：目的：建立芩连平胃汤中小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀的高效液相色谱测定方法。方法：采用

Hypersil ODS2 C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.025 mol/L磷酸二氢钾溶液（50∶50，每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.1 g，再以磷酸调节pH为4.0），检测波长为345 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：25 ℃。结果：盐酸小檗碱的进样量在0.238~1.428 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 9。结论：该测定方法简便、准确、重复性好，可用于芩连平胃汤的质量控制。

关键词：芩连平胃汤；高效液相色谱法；小檗碱；表小檗碱；黄连碱；巴马汀；含量测定

(2014) 12- 中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X 0056- 03

Content Determination of Berberine，Epiberberine，Coptisine and

Palmatine in Qinlian Pingwei Decoction by HPLC

ZHANG Hua，LIU Min，LI Zhongdong

（Pharmacy Department of General Hospital of the Air Force PLA，Beijing 100142，China）

Abstract：Objective：To build a method for determination of berberine，epiberberine，cptisine and

palmatine in Qinlian Pingwei Decoction by HPLC. Methods：Hypersil ODS2 C18 column（4.6 mm×150 mm，5 μm）was used with acetonitrile-0.025 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution（50∶50，0.1 g sodium dodecyl sulfate was added in each 100 mL solution；adjusting the pH to 4.0 with phosphoric acid）as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 345 nm. The column temperature was 25 ℃. Results：Berberine hydrochloride showed a good linear relationship in the range of 0.238~1.428 μg（r=0.9999）. Conlusion：The method is simple，accurate and reproducible and it can be used for the quality control of Qinlian Pingwei Decoction.

Key words：Qinlian Pingwei Decoction；HPLC；berberine；epiberberine；coptisine；palmatine；content determination

芩连平胃汤是由黄连、黄芩、甘草等6味中药组成的复方制剂，具有燥湿健脾、消胀散满之功效，临床上用于治疗脾土不运、湿浊困中、胸腹胀满等疾病。

为有效控制该制剂质量，本文采用高效液相色谱法对芩连平胃汤中盐酸小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀进行含量测定。

1 仪器与试药

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适

Agilent1100高效液相色谱仪，DAD检测器。盐酸小檗碱对照品（批号：MUST-10092001，含量≥98%）购自北京恒元启天化工技术研究院；芩连平胃汤样品（批号：20131201、20131202、20131203）自制；乙腈为色谱纯（TEDIA），水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件

量，精密称定，加甲醇制成每毫升含119 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试液的制备 取本品适量，精密吸取2 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声5 min，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性供试液的制备 按处方比例称取除黄连外的其余药材，按工艺方法制备阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.3 系统适用性试验

按“2.1”项下色谱条件，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪中。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有一相同保留时间的色谱峰，阴性无干扰。色谱图见图1。

2.4 线性关系考察

色谱柱：Hypersil ODS2 C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），以乙腈-0.025 mol/L磷酸二氢钾溶液（50∶50，每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.1 g，再以磷酸调节pH为4.0）为流动相，检测波长为345 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：25 ℃。理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5 000。

分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（浓度为119 μg/mL）2、4、6、8、10、12 μL注入液相色谱仪中，测定峰面积，以峰面积和进样量进行线性回归。回归方程、相关系数以及线性范围分别为：Y=3899X-53.613，r=0.9999，线性范围：

收稿日期：2014-05-17

作者简介：张华（1963-），女，山东人，副主任药师，学士，研究方向：临床药学。

56

辽宁中医药大学学报

16卷 辽宁中医药大学学报

C

A.盐酸小檗碱对照品；B.供试品；C.阴性供试品

图1 芩连平胃汤中盐酸小檗碱、表小檗

碱、黄连碱、巴马汀HPLC色谱图

2.5 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液10 μL，按上述色谱

条件连续进样6次，测定，结果小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的RSD分别为0.33%、0.34%、0.25%和0.27%。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、24 h进样10 μL，测定峰面积，结果小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的RSD分别为1.61%、1.57%、1.84%和1.83%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重现性试验

取同一批号样品（批号：20131201），平行6份，

按“2.2.2”项下制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算样品中小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量。结果小檗碱含量为0.730 mg/mL，RSD为1.82%；表小檗碱含量为0.079 mg/mL，RSD为1.80%；黄连碱含量为0.055 mg/mL，RSD为1.32%；

巴马汀含量为0.156 mg/mL，RSD为1.86%。结果表

明本方法重现性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的样品（批号：20131201），平行6份，精密吸取1 mL置25 mL容量瓶中，精密加入对照品溶液适量，按“2.2.2”项下制备供试品溶液。按上述色谱条件测定，计算小檗碱的含量。结果表明，样品中盐酸小檗碱平均回收率为97.54%，RSD为1.66%。结果见表1。

表1 盐酸小檗碱加样回收率实验

取样量样品中含量加入量测得量回收率平均回收率RSD

10.730.830.81097.5410.730.830.82499.2910.730.830.82599.4097.541.6610.730.830.79295.4510.730.830.81197.692.9 样品含量测定

取芩连平胃汤3批样品，每批样品平分2份，按项下制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，以盐酸小檗碱对照品的峰面积为对照，分别计算小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀含量。结果见表2。

表2 样品中小檗碱、表小檗碱、黄连碱和

巴马汀含量测定结果（mg/mL，n=2）

201312010.7300.0790.0550.1561.020201312020.7430.0810.0520.1691.0453 讨 论

3.1 提取溶剂的选择

《中华人民共和国药典》[1]

上多采用甲醇-盐酸作为黄连中生物碱的提取溶剂，本文对甲醇和甲醇-盐酸（100∶1）进行了比较，结果两种提取溶剂对小檗碱的含量影响不大，可能是因为本制剂为液体，甲醇和甲醇-盐酸（100∶1）只起到了稀释作用，选择甲醇为提取溶剂。

3.2 流动相的选择

参照文献[1-2]上以乙腈-0.05 mol/L磷酸二

氢钾溶液（50∶50，每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g，再以磷酸调节pH为4.0）为流动相，本文对磷酸二氢钾和十二烷基硫酸钠的加入量进行了考察，结果乙腈-0.025 mol/L磷酸二氢钾溶液（50∶50，每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.1 g，再以磷酸调节pH为4.0）也可达到上述分离效果，故将流动相调整为乙腈-0.025 mol/L磷酸二氢钾溶液（50∶50，每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.1 g，再以磷酸调节pH为4.0）。

3.3 测定方法

本实验采用一测多评法，以盐酸小檗碱为对照

品，通过与其他成分之间的函数关系，实现同时测定。该方法稳定，简便易行，为制剂质量控制提供了实验依据。◆

参考文献

[ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[ S ] .北京：中

国医药科技出版社，2010：285.[ 2 ] 侯建忠，喻利坚，杨铖.HPLC测定舒通安泰胶囊中小檗碱、

表小檗碱、黄连碱、巴马汀含量[ J ] .中国中医药信息杂志，2014，21 ( 7 )：61-63.

57

“2.2.2”（100∶1）

辽宁中医药大学学报

第16卷 第12期 2014 年 12 月

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

辽宁中医药大学学报

Vol. 16 No. 12 Dec .，2014

DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2014.12.023

桂枝、白芍药对不同比例配伍提取物指纹图谱研究

闫玉军

（辽河油田第二职工医院药剂科，辽宁 盘锦 124120）

摘 要：目的：建立桂枝、白芍药对不同比例配伍提取物的高效液相指纹图谱。方法：采用Agilent Eclipse

XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈（A）-0.1%磷酸水（B）为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长为254 nm，柱温25 ℃。结果：以1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖为参照峰，标定18个共有峰，指认了其中8个色谱峰。通过桂枝、白芍7个比例指纹图谱的研究，初步确定了两药材主要成分的归属，以芍药苷与肉桂酸峰面积比值为指标确定其配伍比例。结论：建立了桂枝、白芍药对不同比例配伍提取物的高效液相指纹图谱，为桂枝、白芍药对提取物的质量控制和成分鉴别及配伍提供依据。

关键词：桂枝；白芍；指纹图谱；HPLC

(2014) 12- 中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X 0058- 03Fingerprint for Different Compatibility Proportions in Persicae Ramulus and Paeoniae Radix Alba

YAN Yujun

（№2 Hospital of Liaohe Oil Field，Panjin 124120，Liaoning，China）

Abstract：Objective：To develop an HPLC fingerprint for the different compatibility proportion Persicae

Ramulus and Paeoniae Radix Alba. Methods：Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）was adopted. The mobile phase was acetonitrile（A）-0.1% phosphoric acid solution（B）with gradient elution

-1

at a flow rate of 1.0 mL·min，and the detection wavelength was 254 nm. Results：It developed an HPLC fingerprint for the different compatibility proportion Persicae Ramulus and Paeoniae Radix Alba. There were a total of 18 chromatographic peaks and we identified 8 chromatographic peaks. Through studying 7 proportions of fingerprint of Persicae Ramulus and Paeoniae Radix Alba，preliminary identified the main components of two herbs belonging. Conclusion：This method may be used to control quality and identificate component of Persicae Ramulus and Paeoniae Radix Alba.

Key words：Persicae Ramulus；Paeoniae Radix Alba；fingerprint；HPLC桂枝、白芍药对始见于张仲景的《伤寒论》，桂

枝、白芍二药配伍，既有收调营卫、和气血，又有启发

[1-2]

心阳、益阴止汗之功。本文通过建立桂枝、白芍药对不同比例配伍提取物的高效液相指纹图谱，为桂枝、白芍药对提取物的质量控制和成分鉴别及配伍提供依据[3-6]。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪，配置四元梯度泵，在线脱气机，G1314A紫外检测器，安捷伦HP-1100工作站，日立U-3010紫外可见双光束扫描分光光度计，2140型电子分析天平，METTLER AB135-S十万分之一电子天平（瑞士），SG3300H超声提取器。

对照品没食子酸（批号20120702，纯度为98%）和氧化芍药苷（批号20120920，纯度为95%）由鼎瑞化工有限公司提供；芍药内酯苷（批号20120408，纯度为98%）、芍药苷（批号20121122，纯度为98%）、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖（批号20120725，纯度为98%）、香豆素（批号20120815，纯度为98%）、肉桂酸（批号20120314，纯度为98%）、苯甲酰芍药苷（批号20120123，纯度为98%）由天津一方科技有限公司提供。

甲醇、乙腈均为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯，桂枝和白芍饮片经辽宁中医药大学李峰教授鉴定为肉桂（Cinnamomum cassia Presl.）的干燥嫩枝、芍药（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根。

桂枝、白芍药对提取物的制备：分别称取桂枝、白芍按照3∶1、2∶1、1.5∶1、1∶1、1∶1.5、1∶2、1∶3比例称取每份30 g，加10倍量70%乙醇回流提取3次，每次2 h，滤过，合并滤液，蒸干，于70 ℃减压干燥，粉碎成细粉，即得桂枝、白芍药对提取物。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）- 0.1%磷酸水（B），梯度洗脱见表1；流速：1.0 mL·min-1，检测波长：254 nm，柱温：25 ℃，进样量：20 μL。

表1 梯度洗脱

0204050 510152095908580收稿日期：2014-05-09作者简介：闫玉军（1970-），女，辽宁盘锦人，主管药剂师，学士，研究方向：中药配伍研究。

58

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/hks1.html