微生物和酶学技术在烟草发酵中的应用及展望

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ＣｈｉｎｅｓｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＢｕｌｌｅｔｉｎＶｏｌ．２３Ｎｏ．１２００７Ｊａｎｕａｒｙ

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微生物和酶学技术在烟草发酵中的应用及展望

赵铭钦，李芳芳

（河南农业大学农学院，郑州４５０００２）

摘要：综述了微生物和酶学技术在烟草发酵中的应用及其研究进展，重点阐述了陈化烟叶表面微生物区系与优势菌种的筛选、分离和鉴定；外源有益微生物协调与改善陈化烟叶化学组分，提高烟叶香气蛋白质、纤维素等大分子物质等方量，缩短烟叶陈化周期；以及添加外源生物活性酶降解烟叶中淀粉、

面的研究现状，分析了目前该领域研究中存在的问题，认为将现代分子生物学技术与传统的方法相结合来深入研究烟叶发酵机理及其增香技术仍是今后研究的关键。关键词：烟草；微生物；酶；发酵中图分类号：ＴＳ４１４

文献标识码：Ａ

ＴｈｅＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄＰｒｏｓｐｅｃｔｏｆｔｈｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＭｉｃｒｏｂｅａｎｄ

ＥｎｚｙｍｅｄｕｒｉｎｇＴｏｂａｃｃｏＬｅａｆＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ

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（ＡｇｒｏｎｏｍｙＣｏｌｌｅｇｅｏｆＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００２）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｍｉｃｒｏｂｅａｎｄｅｎｚｙｍｅｄｕｒｉｎｇｔｏｂａｃｃｏｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｗｅｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｅｘｐａｔｉａｔｅｄｏｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｉｓｏｌａｔｉｎｇａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇｏｆｔｈｅｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｏｎｔｏｂａｃｃｏｌｅａｆｄｕｒｉｎｇａｇｉｎｇ，ｕｔｉｌｉｚｉｎｇｓｏｍｅｕｓｅｆｕｌｍｉｃｒｏｂｅｓ，ｗｈｉｃｈｃａｎｗｅｌｌｂａｌａｎｃｅｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ｉｎｃｒｅａｓｅａｒｏｍａｏｆｔｏｂａｃｃｏｌｅａｆａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｆｅｒｍｅｎｔｔｉｍｅ，ｒｅｄｕｃｉｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｔａｒｃｈ，ｐｒｏｔｅｉｎ，ｃｅｌｌｕｌｏｓｅａｎｄｓｏｏｎｉｎｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｂｙａｄｄｉｎｇｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｎｚｙｍｅ，ａｎａｌｙｚｅｄｔｈｅｐｒｏｂｌｅｍｓｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ，ｔｈｉｎｋｔｈａｔｉｔｉｓｔｈｅｋｅｙｔｈａｔｃｏｍｂｉｎｉｎｇｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｉｔｈｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｔｈｅｏｒｙｏｆｔｏｂａｃｃｏａｇｉｎｇａｎｄｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｐｒｏｍｏｔｉｎｇｆｌａｖｏｒｉｎｔｏｂａｃｃｏ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｔｏｂａｃｃｏ，Ｍｉｃｒｏｂｅ，Ｅｎｚｙｍｅ，Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ烟叶发酵是烟草加工过程中改善烟叶品质的一个重要环节。烟叶经过适当的发酵后，青杂气消除，香气显露，颜色适当转深而光泽基本保持不变，烟叶品质明显改进，其商品等级也相应提高。越来越多的研究证明［１￣３］，发酵后的烟叶有某些优势菌种的微生物存在，即使在７０℃高温发酵中，烟叶表面仍有某些微生物的存活。目前，生物技术尤其是酶解和微生物发酵技术在烟草中的应用研究，已成为科技工作者关注的热点。近年来，一些烟草科技工作者在应用微生物和酶学技术改进烟叶发酵过程，缩短烟叶醇化的周期，提高发酵烟

叶内在品质方面做了许多有意义的探索。国内外近期

的研究表明［４￣６］，通过微生物发酵能够大大缩短烟叶醇化的时间，明显消除烟叶的青杂气，减轻刺激性，并且对烟叶香气质量的改善有一定的促进作用。特别是利用微生物或酶制剂发酵技术，对改善烟叶、烟草薄片及烟梗的品质和降解亚硝胺等有害物质的研究，日益受到烟草生产企业的广泛重视。文章主要对目前国内外有关微生物和酶学技术在烟草发酵中的应用效果及其与品质关系的研究进行了简要综述，以期为烟草发酵工艺的改革和微生物发酵技术的推广应用提供理论依

基金项目：国家烟草专卖局资助项目“烟草微生物发酵增香机理与增香技术研究”（１１０２００４０１０１４）。

第一作者简介：赵铭钦，男，１９６４年出生，河南农业大学副教授，主要从事烟草化学、烟草发酵与烟草加工工艺方面的研究。通信地址：４５０００２郑州市河南农

业大学农学院，Ｅ－ｍａｉｌ：ｆａｎｇｆａｎｇｌｉ＿ｌｆｆ＠１６３．ｃｏｍ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｑｚｈａｏ９９９＠ｔｏｍ．ｃｏｍ。

收稿日期：２００６－１０－１８，修回日期：２００６－１０－３０。

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中国农学通报

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据和技术支撑。

１关于微生物对烟叶发酵品质的影响研究

微生物在其自身生长发育过程中，通过降解蛋白质，吸收不同的微量元素，可以合成出不同种类的生物活性酶，并分泌到胞外环境中。当微生物作用于某一特定物质时，酶便对这一特定物质的分解合成起催化作用。在烟叶发酵过程中，特定物质主要指糖类化合物和蛋白质等。微生物对糖的作用主要表现为糖被快速、充分发酵，分解为醇类、酯类和各种有机酸，从而使烟草的香味物质得以提炼、显现［７］。微生物对蛋白质的作用是将蛋白质降解为氨基酸等物质，除去烟叶因蛋白质过多而产生的令人厌恶的臭味。微生物在其生理代谢过程中，需要一定量的微量元素（如Ｋ十、Ｃｌ－），这一过程使得发酵烟叶具有更好的持火性。烟草发酵过程中，烟叶表面存在大量的微生物，国内外一些学者对其进行了大量研究［３，５，８，９］，发现烤烟叶面微生物中，细菌占绝对优势，放线菌和霉菌较少；细菌中以芽孢杆菌属为优势菌群，霉菌中曲霉为优势菌群。优良品种烤烟叶面微生物的数量较大，种类较多。可见，微生物是推动烟叶发酵、提高烟叶香气不可忽视的原因之一，这对国内外从事烟叶香气研究的学者具有很大的吸引力。１．１陈化烟叶表面微生物的区系研究

通过对陈化烟叶表面微生物的种群变化及其区系研究发现，在烟叶表面存在着大量的微生物群落，但不同的研究者所分离鉴定出的烟叶表面微生物种类、数量等有所不同。Ｒｅｉｄ等［１０］将烘烤后的微生物加以分类，得出烟叶中的霉菌主要是青霉和曲霉，细菌中主要是巨大芽孢菌群的结论。Ｔａｍａｙｏ等［１１］从西班牙烟叶分离到的微生物主要是芽孢杆菌和球菌。Ｐｏｕｎｄｓ等［１２］分析了大量的烟叶样品，这些样品中普遍存在着嗜热性酵母菌和细菌。谢和等［１３］研究发现，烤烟ＮＣ８２叶表面的主要微生物类群是细菌，放线菌和霉菌。陈福星［１４］研究表明，在烤烟人工发酵中后期，烟叶表面均有大量稳定的微生物。韩锦峰等［１５］对未发酵、自然陈化及人工发酵期间的烤烟叶面微生物进行了分离、鉴定，并对不同发酵过程中微生物动态变化作了比较，结果表明：未发酵烤烟叶面微生物数量最多，随着自然陈化及人工发酵的进行，叶面微生物数量均逐渐减少，且均以能产生芽孢的芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）和梭状芽孢杆菌属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）为优势种群，没有酵母菌的存在。在自然陈化过程中，霉菌数量逐渐减少，至陈化后期，基本上未能检出；而人工发酵过程中霉菌数量有所增加。朱大恒等［８］研究结果表明，烤烟中芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）和梭菌属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）细菌为优势种群。在自然醇化与人

工发酵过程中，微生物总数均呈现出下降趋势，但不同

微生物种群在不同发酵过程中数量的变化有明显差异。赵铭钦等［１６］以烤烟品种ＮＣ８９为试验材料，研究了陈化期间烤烟叶片生物活性的变化，结果表明：烤烟ＮＣ８９在０￣１７个月的陈化期间，陈化初期叶面微生物的数量和种类分布较多，以后随着陈化时间的延长而逐渐减少，生物活性随之降低；在烤烟叶面微生物中，细菌占绝对优势，霉菌和放线菌数量较少；细菌中芽孢杆菌属为优势菌群，曲霉和青霉是霉菌的优势菌群，放线菌中以链霉菌为主。邱立友等［２］研究发现，在自然发酵烤烟叶面微生物中，细菌占绝对优势，放线菌和霉菌尤其是放线菌数量较少。细菌中芽孢杆菌属为优势菌群，霉菌中曲霉为优势菌群。自然发酵烤烟叶面微生物的数量和种类与烤烟品种、产地、等级和陈化时间有关。不同品种的烤烟中，优良品种烤烟叶面微生物的数量较大，种类较多。自然发酵烤烟叶面的微生物可能是推动烟叶自然发酵过程中物质转化和品质改良的生物催化剂之一。

１．２微生物增进发酵烟叶香吃味质量的研究

１９世纪８０年代，小什列晋格提出了烟叶发酵原因的新假说。他认为烟叶发酵最初是由微生物的活动引起，发酵后期才是在无机催化剂的催化下进行化学反应。Ｒｅｉｄ等［１７］在研究雪茄烟发酵过程时发现，微生物的活动比较活跃，并与发酵强度和发酵质量有一定关系。如果发酵条件不当，温湿度过高或缺氧，导致厌氧性微生物数量增加，发酵后烟叶将产生异味。Ｇｉｏｖａｎ－ｎｏｚｚｉＳｅｒｍａｎｎｉＧ．［１８］在实验室内采用微生物Ｄｅｈａｒｙ－ｏｍｙｃｏｓｎｉｃｒｏｔｉａｎａｃｅ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｎｉｃｏｔｉａｎａｅ、Ｍ．ｎｉｃｏ－ｔｉａｎａｅｖａｒ．ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓＢａｃｉｌｌｕｓｓｐ．和Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｎｉｃｏ－ｔｉａｎａｅ对雪茄烟用的肯塔基烟叶进行发酵处理，结果由于柠檬酸、苹果酸、马来酸和琥珀酸的分解，导致烟叶变为碱性，其中可使烟叶中游离氨基酸的含量增加。而Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｎｉｃｏｔｉａｎａｅ可利用这些氨基酸进行代谢，产生ＣＯ２、氨、丙烷和丙烯。ＧｉｏｖａｎｎｏｚｚｉＳｅｍａｎｎｉＧ．［１９］的后续研究进一步表明，用上述微生物制剂处理的烟叶总氮、可溶性氮和烟碱含量均大幅度降低，而蛋白质氮含量在所有情况下均增大。ＲａｙＦ．Ｄａｗｓｏｎ［２０］的研究表明，嗜热性放线菌属在非常低的湿度的陈化烟叶中生长缓慢，可使陈化烟叶中产生一种令人感兴趣的香气，尤其是水果香气和酿香等。Ｒｅｉｄ等［１０］和Ｅｎｇ－ｌｉｓｈ等［５］研究表明，烟叶中的芽孢杆菌、嗜热细菌和小球菌对烟叶的香气和品质是有益和必要的。

早期关于向烟叶中接种微生物以提高烟叶香气和吃味的报道，结果往往不能令人满意。Ｋｏｌｌｅｒ［２１］最早进

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行了添加微生物以提高雪茄烟香气和吃味的尝试。在雪茄烟中添加酵母菌，可大大加速发酵进行，发酵更为彻底，但同时也会促进细菌和霉菌生长。Ｐｏｕｎｄｓ等［１２］在贮存的烟叶中接种不同的微生物，其中绝大部分微生物会造成烟叶腐烂和产生不愉快的气味。后来的研究工作则收到了良好的结果。ＩｚｑｕｉｅｒｄｏＴａｍａｙｏＡ．等人［４］发现，用微生物接种的烟叶，香气和性状均得到改善，尤其是当采用微球菌属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）或杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）或两者的混合物接种烟叶时，效果更为显著。在Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ烟叶中分别或混合接种Ｂａｃｉｌｌｕｓ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ和Ｂａｃｉｌｌｕｓ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ，迅速产生一种愉快的香气。Ｋｏｉｗａｉ等［２２］研究表明，在Ｎａｍｂｕ雪茄烟中接种从烟叶中分离出的细菌菌株，尽管总氮含量没

［５］

一种直接利用产香微生物发酵定向生产烟草香料的方法。结果表明，该香料能显著地提高卷烟香气质量，使烟气醇和饱满，并能谐调烟香，减轻杂气和刺激性，改善余味，可用于中、高档卷烟加香。同时，他还利用从烟叶中分离、纯化、培养出的优势微生物菌种对烟叶进行了抑霉试验［２６］，结果表明：从烤烟（Ｃ３Ｆ）中分离、筛选出５株优势微生物（Ｍ１．Ｍ２．Ｍ３．Ｍ４．Ｍ５）对培养基、烟丝和烟叶中霉菌的生长繁殖均有不同程度的抑制作用，以Ｍ１菌株的抑霉作用最为显著。这一研究结果为利用微生物抑制烟叶霉变开辟了新途径。１．３利用微生物降解烟碱的研究

利用微生物降解烟碱的研究已经进行了多年，并且在将来的一段时间这仍然是烟草行业研究的一个重要方向。Ｖ．Ｌ．Ｇｅｉｓｓ介绍［２７］，用微生物Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｄｅｎ－ｉｔｒｉｆｃａｎｓ和Ｇｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓｓｐ．从配方中除去硝酸盐，Ｇｅｌ－ｌｕｌｏｍｏｎａｓｓｐ．还能同时除去烟碱。ＷａｄａＥ．［２８］等在合成介质上，用由土壤中分离出的假单胞菌属（Ｐｓｅｕ－

烟碱含量大ｄｏｍｏｎａｓ）第４ｌ小种处理烟碱溶液２４ｈ后，

幅度降低，微生物数量增大，溶液的ｐＨ值由６．４降为

４．６，且由于ｐＨ值的降低和菌落数的增大，烟碱的分解停止，约有３５％的起始烟碱未发生变化。ＦｒａｎｋｅｎｂｕｒｇＷ．Ｇ．等［２９］用３种烟籽表面的微生物降解烟碱的研究均表明，烟碱降解生成了甲酰胺、氨、草酸以及微量的丙二酸和琥珀酸。Ｇｉｏｖａｎｎｏｚｚｉ－ＳｅｒｍａｎｎｉＧ．［３０］采用棒状杆菌属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）的新品系９小种降解烟碱，先生成黄色化合物，尔后是蓝色，最后是深的葡萄酒红色。ＣａｓｉｄａＴ．Ｅ．Ｊｒ．等［３１］从烟叶中分离出可将烟碱氧化成γ－氨基丁酸的细菌。ＷａｄａＥ．等［３２］从土壤中分离出Ａ和Ｂ两种类型的细菌，Ａ型菌仅能降解烟碱，Ｂ型菌可同时分解降烟碱、假木贼碱和烟碱。Ｇｉｏｖａｎ－ｎｏｚｚｉ－ＳｅｒｍａｎｎＧ．［３３］从烟叶仓库中分离出一种节细菌属菌—烟草节细菌（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｎｉｃｏｔｉａｎａｅ），该菌在烟碱－琼脂上大量繁殖并使烟碱降解，降解产物为黄色。随后又变为深的葡萄酒红色。Ｂｒｏｗｎ＆Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ烟草公司在２０世纪７０年代开展了利用纤维单胞菌来降低烟草中烟碱和硝酸盐含量的研究［３４］。Ｃｉｖｉｌｉｎｉ等［３５］采用微生物来降解烟草加工中产生的高烟碱含量的烟末。王革等［３６］从烟叶上分离获得了３株降解烟碱和蛋白质能力较强的菌株。

２酶学技术对增进发酵烟叶香味质量的研究

微生物在烟草发酵中的作用机理还不清楚，但有研究表明，在烟草发酵过程中，微生物的变化与酶活性存在明显的相关性，不同微生物影响不同酶的活性。微生物在其自身代谢过程中，产生许多次生代谢物质，主

Ｅｎｇｌｉｓｈ等

有发生明显的变化，但游离氨基酸的含量发生了显著的变化，游离氨基酸有利于改进烟叶的香气。

中国烟草科技工作者也在利用微生物改善烟叶发酵品质方面做了大量研究。韩锦峰等［１５］将分离筛选到的几株优势菌混合配制成生物制剂（ＴＦＡ）用于烟草发酵，结果表明：ＴＦＡ可加速烤烟发酵，提高发酵烟叶品质，同时具有抑制烟叶霉变的作用。赵铭钦等［１］利用４种由优势增香菌种和高生物活性的α－淀粉酶、蛋白酶等配制而成的烟草发酵增质剂，对人工发酵和自然陈化过程中的烤烟烟叶的增质增香效果进行了研究。结果表明，烟草发酵增质剂具有促进烟叶内部有机物质的分解与转化，加速烟叶的发酵进程，缩短发酵周期等作用。与对照相比，经过发酵增质剂处理后的烟叶香气质改善，香气量增加，烟叶固有的杂气和刺激性减轻，烟叶内部的糖、氮、碱等主要化学成分及其比值趋于协调、平衡。罗家基等［７］研究结果也表明，微生物发酵能提高烟叶等级质量，缩短发酵时间。徐洁等［２３］从分离纯化得到的全部真菌菌株中筛选出了具有明显诱香效果的真菌菌株，改善烟叶香吃味。

此外，朱大恒等［２４］研究了利用产香微生物发酵生产烟用香料的方法。马林［６］将酶解和微生物发酵等生物技术综合用于改变低次烤烟化学组分，有效地降低了对吸食品质和安全性不利的蛋白质成分及小分子含氮化合物等。周瑾等［２５］将从优质烤烟叶上分离筛选得到的微生物菌Ｙｕ－１接种于灭菌后的低次烤烟碎片上，对利用微生物发酵改良烤烟碎片品质进行了研究，结果表明，发酵后的烟叶碎片中的可溶性还原糖含量明显降低，同时有机酸性成分增多，酸值提高。用发酵烟叶碎片提取物进行了卷烟加香评吸试验，结果显示：与未发酵的相比，发酵烤烟碎片的提取物能显著降低卷烟的刺激性，掩盖杂气，改善吸味。朱大恒等［２４］提出

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要是酶，对烟叶成分（主要是蛋白质和糖）起催化作用，

促进香气物质的产生。在烟草发酵过程中，由于酶的催化作用，烟叶中的化学成分分解、合成和再转化。蛋白质在蛋白酶的作用下水解成氨基酸；淀粉和糖在水解酶的作用下水解生成葡萄糖、果糖等还原糖。

列夫理论及周冀衡等［３７］认为，烟叶本身所含的氧化酶类引起发酵作用，烟叶发酵是多种酶联合作用的结果。但韩锦峰等［３８］对不同时期烤烟中的α－淀粉酶、蛋白酶、脂氧合酶、多酚氧化酶和琥珀酸脱氢酶的活性进行了研究，结果表明，烤烟醇化过程在１２个月至１８个月左右的时间内已经基本结束，认为烤烟的陈化从酶促反应机理来看是烤烟本身所含的酶和微生物酶共同作用的结果。所以引用外源酶用于烟叶发酵，增加烟叶香气不失为一种理想的方法。Ｃ．Ｆ．Ｂａｉｌｅｙ和Ａ．Ｗ．Ｐｅｔｒｅ在温度为－９￣３９℃和相对湿度为８０％￣１００％范围内用硝酸盐还原酶和蔗糖转化酶处理的烟叶进行了研究［３９］，结果表明：１０天后烟叶具有调制干草样的甜香，１２天后甜香更浓，并具有香豆素的气息。张立昌［４０］研究结果显示，只要加酶催化适当，所得酶制剂可明显增加卷烟香气，减轻青杂气和刺激性，改善卷烟吸味品质。任军林等［４１］通过控制一定的温度在烟丝中施加一定浓度的高活性微生物转化酶，贮藏２ｈ以上，证明可以增加卷烟香气，消除或减轻烟气中的杂气和刺激性，提高卷烟感官质量。姚光明［４２］的研究采用酶解的方法来降低烟叶中蛋白质的含量。结果表明：中性蛋白酶对烟叶中蛋白质的降解作用最为明显；中性蛋白酶的用量为１２０ｕ／ｇ，在温度４５℃、烟叶水分为２５％、作用时间为４ｈ的条件下，可降解烟叶蛋白质１２％左右；烟叶的燃吸质量得到明显改善。

３存在问题及前景展望

尽管在烟叶发酵过程中存在着大量微生物，但其具体的作用机理因其复杂性而不十分清楚。要将烟叶发酵过程中微生物的作用用于生产实践，还必须继续进行大量的试验研究，才能弄清楚具体的发酵增香机理，以便更好的指导实践。另外，由于酶的催化活性受多方面的调节和控制（如温度、酸碱度、酶和底物的浓度以及抑制剂的存在等），这些因素对酶的催化作用的影响既错综复杂又相互联系和相互制约，而且烟叶发酵与加工工艺的特殊要求，未必完全适应酶处理的需要。因此，应针对不同烟叶的具体情况，在完成了酶种类的筛选精制的基础上，继续研究各种酶对烟叶化学成分的影响，优化复合酶配方，合理调配各种酶之间的比例和主次关系，逐渐摸清影响酶作用的主要因素，探索和完善烟叶酶处理的工艺措施和条件。目前，在研究

烟叶发酵过程中微生物的多样性及其作用时，大部分

还是运用传统的手段如采用平板分离的方法来鉴定微生物的优势菌，这种传统的方法亟待完善、提高，今后发展的趋势应该是将分子生物学的手段运用到陈化烟叶微生物多样性的研究中，将现代的分子生物学技术与传统的方法相结合来进行深入的研究。

在烟叶发酵与陈化过程中伴随大量微生物参与活动，这些微生物可直接利用烟叶中的某些成分作为营养源，而对烟叶中的有关复杂的大分子化合物，则需经过这些微生物合成并分泌的酶系统降解后，才能作为营养源。通过烟叶的微生物发酵作用，使烟叶中的一些化学成分发生变化，微生物消耗或转化了烟叶中的有关成分，同时又产生一些代谢产物或生物量，从而能增强烟叶的抗感染能力，消除烟叶本身的不利因素，提高烟叶的香味质量。然而，烟叶发酵质量的改善是多种因素综合作用的结果，因此加强对烟叶发酵机制和应用技术的研究应是今后烟草行业深入攻关的重大课题。

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（责任编辑：杜宏）

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