孙宙 2009114010233 木芙蓉花中有效成份的提取与性能研究

木芙蓉花中有效成份的提取与性能研究(综合实验论文)

木芙蓉花中有效成份的提取与性能研究

报告题目: 木芙蓉花中有效成份的提取与性能的研究

作者姓名： 孙宙

指导教师： 倪明

所在院系： 生命科学学院

专业名称： 生物科学

班级学号： 0902/2009114010233

完成时间： 2012 年 3 月

木芙蓉花中有效成份的提取与性能研究(综合实验论文)

目 录

1 实验材料与方法 ........................................................................................................................ 3

1.1 实验材料和仪器 ..................................................................................................................... 3

1.1.1 实验材料 ........................................................................................................................ 3

1.1.1.1 木芙蓉和芦丁 .......................................................................................................... 3

1.1.2 仪器设备 .......................................................................................................................... 3

1.1.3 试剂及溶液 .................................................................................................................... 3

1.2 实验方法 ................................................................................................................................. 4

1.2.1 样品的处理及提取 .......................................................................................................... 4

1.2.2 样品测定 ........................................................................................................................ 4

1.2.2.1黄酮测定.....................................................................................................................4

1.2.2.1.1 黄酮类物质的鉴定方法.............................................................................. 4

1.2.2.1.2 黄酮类物质定量测定........................................ ............................................5

1.2.2.1.2.1 标准曲线的制备 ....................................................................................5

1.2.2.1.2.2样品黄酮含量定.......................................................................................5

1.2.2.2 多酚测定........................................................................................................5

1.2.2.2.1 福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂的配制.......................................................5

1.2.2.2.2 制作没食子酸标准曲线....................................................................................6

1.2.2.2.3 多酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu反应比法...........................................6

1.2.2.3 抑制亚硝化反应.......................................................................................................6

1.2.2.3.1 总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定.................................................................6

1.2.2.3.2 总黄酮对亚硝胺合成阻断率的测定..............................................................7

2 结果与分析.............................................................................................................................7

2.1 黄酮测定...................................................................................................................... ....7

2.1.1 黄酮类物质的鉴定方法.............................................................................................7

2.1.2 黄酮类物质定量测定.................................................................................................8

2.1.2.1 标准曲线的制备.................................................................................................8

2.1.2.2 样品黄酮含量测定...........................................................................................9

2.1.3 多酚测定.........................................................................................................9

2.1.3.1 制作没食子酸标准曲线.......................................................................................9

2.1.3.2 多酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu反应比色法................................... .10

2.1.4 抑制亚硝化反应.......................................................................................................10

2.1.4.1 总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定.....................................................................10

2.1.4.2 总黄酮对亚硝胺合成阻断率的测定................................................................11

参考文献......................................................................................................................................... 11

木芙蓉花中有效成份的提取与性能研究(综合实验论文)

摘 要：常是植物及微生物中产生的酚类次生代谢产物。具有抗氧化性、抗肿瘤、抗动脉硬化、防冠心病与中风等心脑血管病以及抗菌等多种生理功能，是自然界和人类的“健康卫士”。2l世纪随着抗氧化剂理论及研究工作的深入，以及消费者对食品安全性意识的提高，天然抗氧化剂的应用越来越受到人们的重视，回归大自然已是目前一个大趋势。木芙蓉（Hibiscus mutabilis L.）为锦葵科植物，又名拒霜花、木莲、醉芙蓉，为落叶灌木或小乔木。其花大色艳，花色一日三变，在寒凉的深秋傲霜怒放，观赏价值极佳。其花、叶、根富含生化药物成分，是极优良的中药材。中医认为，木芙蓉性平味辛，有清热、凉血、解毒、消肿、排毒之功效，适用于肺热咳嗽、月经过多、白带过多、痈疽肿毒、疔疮、水火烫伤等疾病。《本草纲目》言其“治一切大小痈疽，肿毒恶疮，消肿，排脓，止痛”。木芙蓉花、叶中含有多酚、黄酮类化合物。黄酮类化合物广泛存在于天然产物中，大多具有明显的抗炎、抗菌、生物抗氧化性、抗衰老、降血脂、治疗心血管疾病等功能。其中有些可用于心血管病的治疗。这项研究利用植物中有效成分提取及测定方法，了解植物中有效成分的药用价值。本实验通过黄酮类物质的鉴定，总黄酮的测定，多酚测定方法，总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定，总黄酮对亚硝胺合成阻断率的测定，了解黄酮的理化性质。在研究药用价值方面有很大的远景。

关键词：木芙蓉；理化性质 ； 药用价值

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木芙蓉花中有效成份的提取与性能研究

孙宙（指导老师：倪明）

（湖北师范学院生命科学学院 湖北 黄石 435000）

1 实验材料与方法

1.1 实验材料和仪器

1.1.1 实验材料

1.1.1.1 木芙蓉和芦丁

木芙蓉花采自湖北师范学院校区；芦丁购自上海展云化工有限公司

1.1.2 仪器设备

分析天平 （AB204-N型，梅特勒-托利多仪器上海有限公司）

数显恒温水浴锅（DK-8D型，金坛市医疗仪器厂）

粉碎机

三用紫外仪

真空泵

分光光度计

调温电热套（KDM型，武汉精华科教仪器有限公司）

比色管

1.1.3 试剂及溶液

对氨基苯磺酸（分析纯）；柠檬酸（分析纯）；磷酸氢二钠（分析纯）；盐酸萘乙二胺（分析纯）；二甲胺（分析纯）；1-萘胺（分析纯）；钨酸钠（分析纯）；钼酸钠（分析纯）；没食子酸（分析纯）；乙醇（分析纯）；A1(NO3)3（分析纯）；盐酸（分析纯）；NaOH（分析纯）；浓H2SO4（分析纯）；

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磷酸（分析纯）。

1.2 实验方法

1.2.1 样品的处理及提取

处理：新鲜木芙蓉花水洗后，于60℃烘干，粉碎机粉碎，过筛备用。 提取：精密称取干燥、粉碎的木芙蓉花粉末1.0000 g置于锥形瓶中，加入

60 %乙醇溶液30mL，于60℃浸提2 h，滤去残渣，残渣洗涤2-3次，定

容至100 mL，即得提取液。

1.2.2 样品测定

1.2.2.1 黄酮测定

1.2.2.1.1 黄酮类物质的鉴定方法

(1)盐酸一镁粉反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，加入少许镁

粉振摇，滴加几滴浓盐酸，观察反应现象。

(2)氨水反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，滴加几滴氨水振摇，

观察反应现象。

(3)硝酸铝反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，滴加几滴硝酸铝

振摇，观察反应现象。

(4)三氯化铝反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，滴加几滴1 %

三氯化铝振摇，观察反应现象。

(5)氯化铁反应：在试管中加1 mL提取物，再加入1．0 mL的2％FeCl3，

观察反应现象。

(6)浓硫酸反应: 在样品液中滴加少量浓H2SO4溶液，观察反应现象。

(7)碱性试剂显色反应在样品液中加入5 % NaNO2溶液; 摇匀，旋转

6 min 后，加入等体积10% A1(NO3)3溶液，6 min 后再加入4 %

NaOH 溶液，混匀，用65 %乙醇稀释，观察反应现象。

(8)与5％的醋酸铅反应：在5％的醋酸铅溶液中滴加数滴提取物，

观察反应现象。

(9)与1％高锰酸钾溶液反应：在试管中加1．0 mL 1％KMnO4，滴入

3～4滴提取物，观察KMnO4溶液是否褪色。

(10)与碱性试剂(1％NaOH)反应：在1 mL提取物中加入0．5 mL的1％

NaOH，观察颜色变化。

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1.2.2.1.2 黄酮类物质定量测定

1.2.2.1.2.1 标准曲线的制备

精密称取芦丁对照品10 mg，置50 mL量瓶中，加80%乙醇溶解

至刻度，摇匀即得对照品溶液。分别精密吸取1.0 mL，2.0 mL，

3.0 mL，4.0 mL和5.0 mL置于10mL比色管中，各加80%乙醇至5

mL，加5% NaNO2溶液0.5 mL，摇匀放置6 min，再加10 % A1(NO3)3。

溶液0.5 mL，摇匀，再放置6 min，加4 % NaOH溶液4mL，摇匀

放置15min，在510 nm波长处，以同法配制空白对照，测定吸

光度值，得回归方程。

1.2.2.1.2.2 样品黄酮含量测定

精密吸取提取液1.0 mL于10 mL比色管中，按“各加80 %乙醇

至5 mL”起依法进行操作，同时精密吸取黄酮提取液1.0 mL

于10 mL比色管中，加80 %乙醇至5 mL，再加1mL水，4 mL4 %NaOH

溶液，作样品空白测定吸光度值。按回归方程计算样品黄酮

提取得率。

1.2.2.2 多酚测定

1.2.2.2.1 福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂的配制

称取100 g钨酸钠和25 g钼酸钠置于2L的磨口圆底烧瓶中，用700 mL

蒸馏水溶解，再缓慢加入50 mL 85 %的磷酸和100 mL的浓盐酸，充

分混匀，放入数粒玻璃珠，连接回流冷凝装置，文火回流10 h。用

50mL蒸馏水冲洗冷凝管上的附着物，拆开冷凝管后加入150 g无水

硫酸锂和几滴溴水（边加边摇晃），开口继续加热沸腾15 min，使

溴水完全挥发为止，终点颜色为黄绿色。冷却后定容至1000 mL，

过滤，储存于棕色瓶中，放入冰箱中保存备用。

1.2.2.2.2 制作没食子酸标准曲线

精确称取0.070 g的干燥没食子酸标准品，用蒸馏水溶解，定容于

100 mL的容量瓶中，配成浓度为700 mg/L的没食子酸溶液。然后分

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别精密吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0和4.0 mL没食子酸标准溶

液定容于50 mL容量瓶内，配成浓度为0-56 mg/L的系列标准溶液。

再从各系列标准溶液中吸取1mL于25 mL比色管内，加10 mL蒸馏水，

摇匀，再加1.5 mL Folin- Ciocalteu试剂，充分摇匀，立即加入6

mL 10 % Na2CO3溶液，混匀，加水定容，再混匀，然后在30℃下避

光放置反应1h，以试剂样为空白，在波长760 nm处测定吸光值，以

吸光度值为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1.2.2.2.3 多酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu反应比色法

取1mL提取稀释液（样液稀释10倍）于25mL比色管内，加10 mL蒸馏

水，摇匀，再加1.5 mL Folin- Ciocalteu试剂，充分摇匀，立即

加入6 mL10 % Na2CO3溶液，混匀，加水定容，再混匀，然后在30℃

下避光放置反应1 h，以试剂样为空白，在波长760 nm处测定吸光

值，根据绘制的标准曲线方程计算提取液中多酚含量(以没食子酸

计)，经进一步计算即得多酚提取得率。

1.2.2.3 抑制亚硝化反应

1.2.2.3.1 总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定

分别吸取50 mg/L的NaNO2标准液1.0 mL于6支25 mL比色管中，再分别

加入提取液0.0、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 mL，加入pH3.0 的

柠檬酸- 磷酸氢二钠缓冲液10 mL， 37℃条件下反应1h。加入质量分

数0.4 % 对氨基苯磺酸2.0 mL，摇匀静置5 min，再加入质量分数0.2%

盐酸萘乙二胺1.0 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀静置15 min。在确

定的最大吸收波长λmax = 540 nm 处测定吸光度，并计算总黄酮对

亚硝酸钠清除率。

1.2.2.3.2 总黄酮对亚硝胺合成阻断率的测定

分别吸取总黄酮提取液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，于6支25

mL 比色管中。加入pH 3.0 的柠檬酸- 磷酸氢二钠缓冲液10 mL，1

mmol/L 的NaNO2 溶液1.0 mL，1 mmol/L 的二甲胺溶液1.0 mL，用蒸

馏水稀释至刻度，在37℃条件下恒温1 h。用移液管吸取1.0mL 上述

溶液加到7 cm2 培养皿中，加入质量分数0.5% Na2CO3 溶液0.5 mL，

于紫外分析仪(254nm 波长)上辐照15 min。取出后加入质量分数 1%

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对氨基苯磺酸1.5 mL，再加入质量分数0.1% 1-萘胺1.5 mL，蒸馏水

0.5 mL，摇匀静置15 min。用分光光度计在确定的最大吸收波长λmax

= 525 nm 处测吸光度，计算总黄酮对亚硝胺合成阻断率。

2 结果与分析

2.1 黄酮测定

2.1.1 黄酮类物质的鉴定方法

(1)盐酸一镁粉反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，加入少许镁粉振摇， 滴加几滴浓盐酸，产生泡沫反应，反应完后溶液呈橙红色，表明有黄 酮类化合物。

(2)氨水反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，滴加几滴氨水振摇，反应 完后溶液呈黄色，表明有黄酮类化合物。

(3)硝酸铝反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，滴加几滴硝酸铝振摇。 反应完全后溶液呈黄色，表明有黄酮类化合物。

(4)三氯化铝反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，滴加几滴1 %三氯化 铝振摇，反应完全后溶液呈黄色，表明有黄酮类化合物。

(5)氯化铁反应：在试管中加1 mL提取物，再加入1．0 mL的2％FeCl3，若

呈蓝绿色或绿色，表明含有酚类化合物。

(6)浓硫酸反应: 在样品液中滴加少量浓H2SO4溶液，观察反应颜色变橙色，

表明有黄酮类化合物。

(7)碱性试剂显色反应在样品液中加入5 % NaNO2溶液; 摇匀，旋转6 min

后，加入等体积10% A1(NO3)3溶液，6 min 后再加入4 % NaOH 溶液，

混匀，用65 %乙醇稀释，观察反应颜色变橙红色，表明有黄酮类化合 物。

(8)与5％的醋酸铅反应：在5％的醋酸铅溶液中滴加数滴提取物，有黄色 沉淀产生的表示有黄酮类成分。

(9)与1％高锰酸钾溶液反应：在试管中加1.0 mL 1％KMnO4，滴入3～4滴

提取物，观察KMnO4溶液是否褪色，若褪色表明含有酚类化合。

(10)与碱性试剂(1％NaOH)反应：在1 mL提取物中加入0．5 mL的1％NaOH 观察颜色变化，若呈黄色、橙色或红色，表明含有黄酮类成分。

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2.1.2 黄酮类物质定量测定

2.1.2.1 标准曲线的制备

2.1.2.2 样品黄酮含量测定

样品A510=0.685，带入标准曲线

回归方程可得黄酮的体积为：2.71 ml

根据样品黄酮提取含量按照如下公式计算

式中：Y：黄酮提取含量（%）；

V：提取黄酮液体积（mL）；

C：提取原液中黄酮的浓度（g/mL）；

M：木芙蓉花质量（g）。

M=1.009g v=100ml

则Y=5.4%即黄酮提取含量为5.4%

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2.1.3 多酚测定

2.1.3.1 制作没食子酸标准曲线

2.1.3.2 多酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu反应比色法 多酚含量的测定

样品A760=0.165，带入标准曲线根据制作标准曲线回归方程可得x=3.78 根据多酚提取得率按照如下公式计算

式中：Y：提取得率（%）；

V：提取多酚液体积（mL）；

C：提取原液中多酚的浓度（g/mL）；

M：木芙蓉花质量（g）。

M=1.009g v=100ml

得到多酚提取含量为0.102﹪

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2.1.4 抑制亚硝化反应

2.1.4.1 总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定

根据石榴皮总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定

式中：A0 为未加样品溶液时NaNO2 的吸光度(以试剂空白溶液为参比溶液)；

2.1.4.2

A

为加入样品溶液后NaNO2 的吸光度(以样品溶液为参比溶液)。

总黄酮对亚硝胺合成阻断率的测定 根据总黄酮对亚硝胺合成阻断率按照如下公式计算

式中： A0 为未加样品溶液时NaNO2 的吸光度(以试剂空白溶液为参比溶液)；为加入样品溶液后NaNO2 的吸光度(以样品溶液为参比溶液)。 A

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【注意事项】

1. 使用浓硫酸时一定要小心，注意安全。

2. 使用紫外分析仪时，三用紫外分析仪使用和注意事项：

1）三用紫外分析仪采用波长分别254nm、365nm的石英紫外线灯管各一组及滤色片组成。 为层析板点样、定位照明，座内还装有一根普通荧光灯。连接上电源后，打开“开/ 关”点亮灯管，即可将被检测的样品放在灯下观察分析，如果将仪器放置在暗室中或 用黑布遮去亮光，效果更佳。

2）紫外滤色片不能和金属物体碰擦，不能受力，表面应保持干燥清洁，应该常用酒精或 乙醚等擦拭，防滤色片霉变。

3）操作人员使用时，应将紫外线对准样品照射，避免照射到人体，最好戴上眼镜，以免 对人体造成伤害。

3. 由于多酚在光照、温度等的条件下极易发生变化，如分解等，因此在实验操作过程中需

要进行避光处理来防止多酚的分解。

4. 配制的Folin- Ciocalteu试剂过滤后的滤液溶剂不应成绿色，否则重配。

总结

在这一周的实验中，在老师的领导下完成该次实验，其中遇到很多的问题都在大家的相互实验与讨论下得到的了证实，因此此次实验还是比较成功的。具体的是需要注意实验的一些小细节方面，往往很多实验的不成功，大多原因都是因为不注意细节，从而做不出理想的实验效果。经过这次对黄酮的提取，让大家对黄酮有了初步的认识，并从中对学到了很多的东西，这是难得真贵的。 参考文献

l. 石榴皮总黄酮的提取工艺及抑制亚硝化反应，吴佳，解成喜，食品科学，2011, 32, 111-114。

2. 人参果总黄酮含量的超声提取工艺研究，任雪峰，吴冬青，王永生，周国

宏，王克众，朱学芳，食品工业科技，2011, 32, 307-310。

3. 荠菜中总黄酮的提取及含量测定，刘春风，化工技术与开发，2011，40，

11-13。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/h991.html