近代有机分析实验讲义

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有机实验分析员推荐度：
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实验一：气相色谱仪的操作使用和挥发性有机化合物分析

一、实验目的

1. 了解气相色谱仪的基本结构及掌握分离分析的基本原理

2. 了解氢火焰离子化检测器的检测原理

3. 了解影响分离效果的因素

二、实验原理

气相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的气相和固定相的分配系数不同，当气化后的试样被载气带入色谱柱进行时，组分就在其中的两相中进行反复多次的分配，由于固定相各个组分的吸附和溶解能力不同，因此各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，是彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器。检测器将各组分的浓度或质量的变化转换成一定的电信号，经过放大后在记录仪上记录下来，即可得到各组分的色谱峰。根据保留时间，便可进行定性分析。

三、实验仪器与分析

仪器：GC-2010气相色谱仪；SPB-3全自动空气泵；SPN-300氮气发生器；SPH-300氢气发生器；1uL进样器；容量瓶；毛细管色谱柱（SPB-5 30.0m×0.32mm×0.25um）；

试剂：乙酸乙酯，乙醇，乙酸乙酯和乙醇的混合液

四、试验步骤

1、样品及标准溶液的配置：实验室已准备好的乙酸乙酯标准溶液、乙醇标准溶

液及乙醇和乙酸乙酯混合的样品溶液

2、开机：依次打开全自动空气泵，氮气发生器（注意排气,预热30分钟，右边

松开螺丝后拧紧），氢气发生器。等载气稳定后打开氢火焰离子化检测器开关，最后打开电脑上的工作站。

3、色谱分离条件的设置：进样器温度100 ℃；检测器温度200 ℃、柱温为

65℃（保持6.5 min），停止时间6.5 min，分流比为100，尾吹流量30 mL /min，氢气流量40mL/min，空气流量400 mL /min。

4 、选择“数据采集”-“下载参数”，待进样器SPL1，柱箱、FID的温度达到设定

温度，依次打开氢气，打开火焰，等GC状态显示“准备就绪”后，点击“单

次分析”，再点“样品记录”，保存路径和文件名。

5、点“开始”，然后用微量注射器进样，之后按下面板的START，拔出针。依

次进样：乙酸乙酯和乙醇的混合液，乙醇标准溶液，乙酸乙酯标准溶液。

6、将图表复制到WORD文档，打印出来，观察记录的各峰保留时间，确定各

个峰的归属，从而达到定性的目的。

7、关机。

实验二：高效液相色谱仪的使用和不易挥发有机化合物的定性分析

实验目的：

1、

2、学习使用高效液相色谱仪。初步掌握获得高效液相色谱图和数据的一般操作程序与技术

实验原理：

高效液相色谱分是由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部份组成。由于样品溶液中的各组分在色谱柱中两相中的分配系数不同，当试样随流动相进入色谱柱后，组分就在两相间进行反复多次的分配，由于固定相对各种组分的吸附能力不同，各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定柱长后彼此分离，依次从色谱柱流出，通过检测器时样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

实验仪器与试剂：

一、仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，

C18色谱柱

二、试剂：甲醇（AR,色谱纯），超纯水

实验步骤：

1、准备

1.1准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。（这里用的是流动相是甲醇(B)和超纯水(A)，分别用有机相系和水相系的0.45µm滤膜过滤，超声脱气20min。）。用甲醇洗针。

1.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

1.3配制样品浓度为1000ppm（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（即用移液管量取0.5 mL的苯用甲醇定容在5 mL的容量瓶中（105ppm），然后用移液管量取1 mL刚定容的溶液并用甲醇稀定容在10mL的容量瓶后（104 ppm）并用移液管量取1 mL刚定容的溶液并用甲醇稀定容在10mL的容量瓶中，这样就配制成浓度为1000ppm，用0.45µm有机滤膜过滤。）

1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

2、开机

接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站（即电脑桌面上的CS-Light Real Time Analysis）。

3、参数设定

3.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键接着按[Enter]键，用数字键输入所需波长值254nm，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 3.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

3.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数(90%)，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

4、更换流动相并排气泡

4.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；

4.2逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；

4.3按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；

4.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

4.5如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

4.6如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。

5、平衡系统

5.1按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开"在线色谱工作站"软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下"数据收集"页的 [查看基线] 按钮。

5.2等度洗脱方式 5.2.1按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的

[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。

5.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。

5.2.3观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.6操作。

5.2.4观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。

6、进样

6.1进样前在CS-Light Real Time Analysis中:(1)点击“单次分析”，接着点击“样品记录”，在样品记录名称中输入所要检测得样品名称，然后点击“数据文件”选择该样品储存在哪里，最后在“数据储存的文件夹”后面输入该样品名称，点击确定。(2)在信号采集菜单中设定停止时间（6 min）和延迟时间(3 min)。

6.2进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零

点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。

6.3用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取20 L。

6.4进样时先注入注射器后向逆时针扳动进样阀的板扣后注入溶液再向顺时针扳动进样阀后取出注射器。

7、数据处理

7.1在桌面双击“CS-Light Postrum Analysis”，点击确定按钮后，在“文件夹目录中”选中该样品记录双击鼠标，在谱图上单击鼠标右键的“显示设置”，在“显示设置”中选择“展开色谱”的“时间”填写“0”到“20”后点击确定

7.2用鼠标点击“编辑”选择“积分”中的“最小峰面积/高”输入“最小峰面积值”，然后点击“查看”。

7.3复制谱图到Word文档，在谱图中点击鼠标右键选择“复制”；复制数据，单击鼠标左键全选，然后鼠标右键“复制表格到剪贴板（b）”。

8、关闭仪器

分析完毕后，关闭色谱工作站，再自上而下关闭仪器。

9、色谱柱的保存

如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。

实验三：气相色谱法用于挥发性有机化合物混合物的定性分析

实验目的：

1、

2、

3、

4、了解氢火焰离子化检测器的检测原理了解影响分离效果的因素掌握气相色谱法对挥发性有机化合物分离分析的基本原理掌握定量分析挥发性有机化合物混合物

实验原理：

气相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的气相和固定相的分配系数不同，当气后的式样被载气带入色谱柱时，组份就在其中的两相中进行反复多次的分配，由于固定相对各个组分的吸附或溶解能力不同，因此各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长使彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器。检测器将各组分的浓度或质量的变化转换成一定的电信号，经过放大后在记录仪上记录下来，即可得到各组分的色谱峰。根据峰高或峰面积便可进行定量分析。

实验仪器与试剂：

仪器：气相色谱仪（岛津GC-2010）；SPB-3全自动空气泵（北京中惠普分析技术研究所）；SPN-300氮气发生器；SPN-300氢气发生器；微量注射器；5mL容量瓶；SPB-5毛细管柱30m×0.32mm×0.25μm。试剂：体积比为7:3，3:7，5:5的乙酸乙酯和乙醇的混合液。

实验步骤：

1、样品及标准溶液的配制：实验室已准备好的乙酸乙酯和乙醇的混合液1，

2，3三个样品

2、开机：依次打开空气泵、氮气发生器、氢气发生器，排出仪器中的剩余空

气。打开氢火焰离子化检测器，打开“GC Read Time Analysis”软件，预热仪器打开电脑。

3、在软件上选择系统配置，选择FID检测器；设置相应的色谱条件：进样口温

度100 oC，检测器温度200℃，柱箱温度50 oC（保持5 min），分流比：100，停止时间5 min，尾吹流量30mL/min，氢气流量40mL/min，空气流量400mL/min。4、选择“数据采集”——“下载仪器参数”，待柱箱、检测器的温度达到设定值，打开氢气，打开火焰，等GC状态显示“准备就绪”，点击“单次分析”，“样品记录”，输入保存路径和文件名。

5、点击“开始”，用5ul微量注射器进样，进样前用待测液润洗10次，用微量注

射器依次进样体积比为7:3，3:7，5:5的乙酸乙酯和乙醇的混合液进行分析。之后按下面板的START，拔出针。

6、将图表复制到word文档打印，根据各峰的保留时间确定峰的归属，根据各

峰的峰面积并用归一化法计算溶液中各组分的质量分数。

7、关机：关软件上的氢气按钮、火焰按钮，关氢气源，将SPL、柱箱、FID温

度设到80 oC，等温度达到设定值，点系统关闭按钮，关软件，关主机，关氮气发生器并旋松右边的旋钮，关空气源。

8、处理实验数据，完成实验报告。

实验四：液相色谱法用于不易挥发有机化合物混合物的定性分析

实验目的：

1、

2、学习利用高效液相色谱仪分离化合物和检测化合物的含量的方法通过对样品的定量测定，初步掌握获得高效液相色谱图和数据的一般操

作程序与技术

3、学习谱图和数据的处理方法

实验原理：

高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的流动相和固定相间的分配系数不同，当试样随流动相进入色谱柱后，组分就在两相间进行反复多次（103~106）的分配，由于固定相对各种组分的吸附能力不同，各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定柱长后彼此分离，依次从色谱柱流出，通过检测器时样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。

实验仪器与试剂：

仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱

试剂：苯（水杨酸甲酯）浓度为1000 ppm，甲苯（烟酸乙酯）浓度为1000 ppm，3个不同比例的苯和甲苯（水杨酸甲酯-烟酸乙酯混合液），甲醇（AR），超纯水

样品的配制：苯和甲苯浓度为1000ppm的配置：用移液管分别量取0.5 mL的苯和甲苯用甲醇定容在5 mL的容量瓶中（105ppm），然后用移液管量取1 mL刚定

容的溶液再用甲醇定容在10mL的容量瓶后（104ppm）并用移液管量取1 mL刚定容的溶液再用甲醇稀定容在10mL的容量瓶中，这样就配制成浓度为1000ppm，用0.45µm滤膜过滤。苯-甲苯混合液：用苯和甲苯的浓度为1000ppm按体积不同体积比定容至10mL

实验步骤：

1、准备

1.1准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。（这里用的是流动相是甲醇(B)和超纯水(A)，分别用有机相系和水相系的0.45µm滤膜过滤，超声脱气20min。）

1.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

1.3配制样品浓度为1000ppm（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（苯和甲苯浓度为1000ppm的配置：用移液管分别量取0.5 mL的苯和甲苯用甲醇定容在5 mL的容量瓶中（105ppm），然后用移液管量取1 mL刚定容的溶液再用甲醇定容在10mL的容量瓶后（104ppm）并用移液管量取1 mL刚定容的溶液再用甲醇稀定容在10mL的容量瓶中，这样就配制成浓度为1000ppm，用0.45µm滤膜过滤。苯-甲苯混合液：用苯和甲苯的浓度为1000ppm按体积不同体积比定容至10mL）

1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

2、开机

3、参数设定

3.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入

流动相B的浓度百分数(80%)，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

4、更换流动相并排气泡

4.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；

4.2逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；

4.3按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；

4.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

4.5如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

5、平衡系统

5.1按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开"在线色谱工作站"软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下"数据收集"页的 [查看基线] 按钮。

5.2等度洗脱方式 5.2.1按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的

[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。

5.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。

5.2.3观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.6操作。

5.2.4观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。

6、进样

6.1进样前在CS-Light Real Time Analysis中:(1)点击“单次分析”，接着点击“样品记录”，在样品记录名称中输入所要检测得样品名称，然后点击“数据文件”选择该样品储存在哪里，最后在“数据储存的文件夹”后面

输入该样品名称，点击确定。(2)在信号采集菜单中设定停止时间（8 min）和延迟时间(3 min)。

6.2进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。

6.3用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取20 L。

7、数据处理

7.2用鼠标点击“编辑”选择“积分”中的“最小峰面积/高”输入“最小峰面积值”，然后又点击“定量”在“定量方法”中选择“面积归一法”，然后点击查看。

7.3复制谱图到Word文档，在谱图中点击鼠标右键选择“复制”；复制数据，单击鼠标左键全选，然后鼠标右键“复制表格到剪贴板（b）”。

8、关闭仪器

分析完毕后，关闭色谱工作站，再自上而下关闭仪器。

实验五：固相微萃取气相色谱法用于挥发性有机化合物混合物

的分离与定量分析

实验目的

1、了解固相微萃取及气相色谱仪的基本结构和分离分析的基本原理

2、了解影响分离效果的因素

3、掌握定性分析与测定

实验原理

固相微萃取 (SPME) 是20世纪90年代初发展的一种集萃取、浓缩、解吸于一体的样品前处理技术。其装置类似于一支气相色谱的微量进样器，萃取头是在一根石英纤维上涂上固相微萃取涂层,外套细不锈钢管以保护石英纤维不被折断,纤维头可在钢管内伸缩。将纤维头浸入样品溶液中或顶空气体中一段时间,

同时搅拌溶液以加速两相间达到平衡的速度,待平衡后将纤维头取出插入气相色谱汽化室，热解吸涂层上吸附的物质。被萃取物在汽化室内解吸后,靠流动相将其导入色谱柱,完成提取、分离、浓缩的全过程。固相微萃取技术几乎可以用于气体、液体、固体等样品中各类挥发性或半挥发性物质的分析。

实验仪器与分析

1、仪器：气相色谱仪；全自动空气泵；氮气发生器；氢气发生器；SPB-5毛细

管柱30 m×0.32 mm×0.25 μm, 微量注射器；容量瓶；毛细管色谱柱；固相微萃取装置；水浴锅。

2、试剂：乙醇，正丁醇，乙醇和正丁醇的混合液

试验步骤

1、样品及标准溶液的配置：实验室已准备好的乙醇标准溶液、正丁醇标准溶液

及乙醇和正丁醇混合的样品溶液

2、开机：依次打开全自动空气泵，氮气发生器，氢气发生器，排出仪器中的剩

余空气。等载气稳定后打开氢火焰离子化检测器，最后打开电脑上的工作站。

3、色谱分离条件的设置。

柱箱温度：50℃，进样器温度：200 ℃，检测器温度：200 ℃。分流比：

10。尾吹流30 mL/min，氢气流量40 mL /min，空气流量400 mL /min。

4、选择“数据采集”—“下载仪器常数”，待柱箱、FID的温度达到设定温度，依

次打开氢气，打开火焰，等GC状态显示“准备就绪”后，点击“单次分析”，再点击“样品记录”，保存路径和文件名。

5、点击“开始”，用微量注射器进样，之后按下面板的START，拔出针。依次

进样：乙醇标准溶液，正丁醇标准溶液。用固相微萃取装置提取的乙醇和正丁醇混合液的挥发性物质。

6、将图表复制到WORD文档，打印出来，观察记录的各峰保留时间，确定各

个峰的归属，从而达到定性的目的。

7、关机。

二、思考题。

1、固相微萃取技术相比于传统样品处理方式的优势是什么？

2、SPME测定样品时，萃取与哪些因素有关？

实验六：高效液相色谱法用于有机农药残留的分离与定量分析

实验目的：

1、应用高效液相色谱法对磺胺类抗生素的定性和定量检测

2、学习谱图和数据的处理方法

实验原理：

磺胺族抗生素包括磺胺嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺甲噁唑，等, 被广泛应用到水产、畜禽类养殖中。它们被添加到动物饲料中, 以促进动物的生长以及防治各种疾病, 如果不能严格控制停药期, 很容易造成在动物肉和组织中残留, 给人体健康带来危害, 因此世界各国对畜禽肉中的磺胺族残留都有严格的限量要求。GB/T 5009.116- 2003 用液相色谱法检测畜禽肉中的磺胺类药物残留量, 操作简单快速,但是该方法灵敏度比较低。

实验仪器与试剂：

仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱

试剂：磺胺嘧啶标准溶液，磺胺吡啶标准溶液，磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合液（1：1），乙腈（AR），0.05%甲酸溶液

样品的配制：

0.05%甲酸溶液：取0.25ml的甲酸标准溶液用去离子水定容至500ml的容量瓶中。

磺胺嘧啶标准溶液与磺胺吡啶标准溶液：分别称取0.10g的磺胺嘧啶、磺胺吡啶用甲醇定容至100.0 mL，用0.45µm滤膜过滤（先在一次性注射器加上0.45µm滤膜，然后把活塞杆拉出来，把要过滤的溶液倒进去再把杆推进滤出溶液。）得到磺胺嘧啶和磺胺吡啶的分别为1 mg/mL（1000ppm）。分别吸取磺胺嘧啶和磺胺吡啶标准溶液各5mL，置于10 mL容量瓶中磺胺吡啶和磺胺嘧啶-磺

胺吡啶混合0.5 mg/mL（500ppm）

实验步骤：

1、准备

1.1准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。（这里用的是流动相是乙腈(B)和0.05%甲酸溶液(A)，分别用有机相系和水相系的0.45µm滤膜过滤，超声脱气20min。）

1.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

1.3配制样品浓度为1000ppm（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（即分别称取0.10g的磺胺嘧啶、磺胺吡啶用甲醇定容至100.0 mL，用0.45µm滤膜过滤（先在一次性注射器加上0.45µm滤膜，然后把活塞杆拉出来，把要过滤的溶液倒进去再把杆推进滤出溶液。）得到磺胺嘧啶和磺胺吡啶的分别为1 mg/mL（1000ppm）。分别吸取磺胺嘧啶和磺胺吡啶标准溶液各5mL，置于10 mL容量瓶中磺胺吡啶和磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合0.5 mg/mL（500ppm）。

1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

2、开机

3、参数设定

3.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键接着按[Enter]键，用数字键输入所需波长值281nm，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 3.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1.0 mL/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

3.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B乙腈的浓度百分数(20%)，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

4、更换流动相并排气泡

4.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；

4.2逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；

4.3按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；

4.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

4.5如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

5、平衡系统

5.1按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开"在线色谱工作站"软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下"数据收集"页的 [查看基线] 按钮。

5.2等度洗脱方式 5.2.1按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的

[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。

5.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。

5.2.3观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.6操作。

5.2.4观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。

6、进样

6.1进样前在CS-Light Real Time Analysis中:(1)点击“单次分析”，接着点击“样品记录”，在样品记录名称中输入所要检测得样品名称，然后点击“数据文件”选择该样品储存在哪里，最后在“数据储存的文件夹”后面输入该样品名称，点击确定。(2)在信号采集菜单中设定停止时间和延迟时间。

6.2进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。

6.3用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取20 L。

7、数据处理

7.1在桌面双击“CS-Light Postrum Analysis”，点击确定按钮后，在“文件夹目录中”选中该样品记录双击鼠标，在谱图上单击鼠标右键的“显示设置”，在“显示设置”中选择“展开色谱”的“时间”“0”到“20”后点击确定

7.3复制谱图到Word文档，在谱图中点击鼠标右键选择“复制”；复制数据，单击鼠标左键全选，然后鼠标右键“复制表格到剪贴板（b）”。

8、关闭仪器

分析完毕后，关闭色谱工作站，再自上而下关闭仪器。

实验七：气相色谱外标法精确测定有机混合物中单一有机化合物

的浓度

实验目的：

1、

2、了解影响分离效果的因素和分离分析的基本原理掌握外标法定量分析与测定的方法

实验原理：

标准曲线法也称外标法或直接比较法，是一种简便、快速的定量方法。用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的色谱条件下，等体积准确进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准曲线，在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准曲线完全相同的色谱条件作出色谱图，测量色谱峰面积或峰高，然后根据峰面积和峰高在标准曲线上计算出注入色谱柱中样品组分的浓度。

实验仪器与试剂：

仪器：气相色谱仪（岛津GC-2010）；SPB-3全自动空气泵（北京中惠普分析技术研究所）；SPN-300氮气发生器；SPN-300氢气发生器；微量注射器；5mL容量瓶；SPB-5毛细管柱30 m×0.32 mm×0.25 μm

试剂：一个系列浓度的乙醇，乙酸乙酯和乙醇混合液

实验步骤：

1、样品及标准溶液的配制：配制好一个系列浓度的2，4，6-三甲基吡啶溶液，

乙酸乙酯和2，4，6-三甲基吡啶混合液

2、开机：依次打开空气泵、氮气发生器、氢气发生器，排出仪器中的剩余空

气。打开氢火焰离子化检测器，打开电脑。

3、在软件上选择系统配置，选择FID检测器；设置相应的色谱条件：进样口温

度250 oC，柱箱温度50 oC，升温速率30 oC/min，检测器温度300 oC，停止时间7 min，尾吹流量15 mL/min，氢气流量30 mL/min，空气流量300 mL/min。

4、选择“数据采集”——“下载仪器参数”，待柱箱、检测器的温度达到设定值，

打开氢气，打开火焰，等GC状态显示“准备就绪”，点击“样品记录”，输入保存路径和文件名，准备就绪后，选择“数据分析”——“单次分析”。

5、依次进样一个系列浓度的2，4，6-三甲基吡啶溶液，绘制标准曲线。进乙酸

乙酯和2，4，6-三甲基吡啶的混合液进行精确浓度分析。

6、关机：关软件上的氢气按钮、火焰按钮，关氢气源，将SPL、柱箱、FID温

度设到80 oC，等温度达到设定值，点系统关闭按钮，关软件，关主机，关氮气发生器并旋松右边的旋钮，关空气源。

7、处理实验数据，完成实验报告。

实验八：高效液相色谱外标法精确测定有机农药残留的浓度

实验目的：

1、应用高效液相色谱外标法测定磺胺类抗生素的浓度

2、学习谱图和外标法测定数据的处理方法

实验原理：标准曲线法也称外标法或直接比较法，是一种简便、快速的定量方法。用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的色谱条件下，等体积准确进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准曲线，在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准曲线完全相同的色谱条件作出色谱图，测量色谱峰面积或峰高，然后根据峰面积和峰高在标准曲线上直接查出注入色谱柱中样品组分的浓度。

试剂：乙腈、甲醇: 色谱纯， 0.05%甲酸溶液，超纯水。磺胺嘧啶，磺胺吡啶主要仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18 色谱柱

色谱条件：流动相: 乙腈和 0.05%甲酸混合溶液；测定波长 280 nm; 流速 1.0 mL/min；柱温 30℃；进样量 20 μL。

实验步骤：

1、准备

1.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

1.3配制样品浓度为1000ppm（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤

膜过滤。（分别精确称磺胺嘧啶和磺胺吡啶标准品各0.100g，再分别用甲醇溶解，用一次性无菌注射器和0.45 mm有机相过滤膜过滤后，于100 mL容量瓶定容，配成1 mg/mL单一药物标准储备溶液。用1 mL移液管分别移取1 mg/mL标准储备溶液2、4、6和8 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇定容稀释10倍，配成0.2、0.4、0.6和0.8 mg/mL储备溶液，置于- 4℃冰箱中储存。

混合储备溶液的配制：用1 mL移液管分别各移取1 、2和4mL 1 mg/mL的2种单一药物标准储备溶液至10 mL容量瓶中，用甲醇定容稀释成各单一药物浓度为0.1 、0.2和0.4mg/mL混合储备溶液，置于- 4℃冰箱中储存。）

1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

2、开机

3、参数设定

3.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键接着按[Enter]键，用数字键输入所需波长值355nm，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 3.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1.0 mL/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

3.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B乙腈的浓度百分数(25%)，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

4、更换流动相并排气泡

4.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；

4.2逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；

4.3按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；

4.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

4.5如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

5、平衡系统

5.1按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开"在线色谱工作站"软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下"数据收集"页的 [查看基线] 按钮。

5.2等度洗脱方式 5.2.1按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的

[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。

5.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。