血凝实验步骤

血凝血抑试验

一、1%红细胞

准备：新鲜鸡抗凝血、PBS缓冲液或生理盐水、离心管、低速离心机

步骤：

1、抗凝血第一次离心：1500rpm，5min。去除上层白细胞血浆等

2、加入PBS或生理盐水，颠倒混匀

3、第二次离心：1500rpm，5min。去除上层白细胞血浆等

4、第三次离心：2000rpm，10min。去除上层白细胞血浆等

5、 99ml生理盐水或PBS+1ml红细胞。

二、血凝

物品准备：

待检测的样品、1%鸡红细胞、96孔血凝板、移液器及吸头、恒温箱

试验步骤：

1、用PBS（生理盐水）铺板：采用50微升体系进行试验。调节移液器至

50微升，吸取PBS缓冲液加入96孔血凝板中，有几个样品就加几排孔。

2、倍比稀释：吸取50微升待检样品依次加入第1纵排孔中，吹打15下后

吸取50微升再加入第2纵排孔，再吹打15下，吸取25微升加入第3纵排孔中，依次类推，直至第11纵排孔，吹打混匀后吸50微升后连同吸头一起弃去，第12纵排为红细胞对照。

3、加红细胞：加1%红细胞，每孔50微升，然后置于37℃温箱或者室温

反应20-40分钟左右，读数即可。

4、读数时，以出现完全凝集的孔作为病毒的血凝滴度。

三、4单位抗原

1、物品准备：病毒抗原、PBS缓冲液、1%鸡红细胞、单道和多道移液器及

吸头、20ml青瓶及塞子、96孔微量血凝板

2、测定病毒滴度：

血凝，假设测得的血凝滴度为2的8次方，则四单位病毒的稀释倍数为2的6次方（2的8次方除以4），即64倍稀释。

3、计算抗原用量

根据所需的四单位抗原的总量来确定抗原液的用量。比如，需四单位抗原总量为20ml，则利用公式：抗原原液*64（稀释倍数）=20ml，求出抗原原液的体积为0.312ml，需要PBS缓冲液的体积约19.7ml，根据计算的结果配置即可。

4、取PBS缓冲液19.7ml，加入20ml的小青瓶中，取0.312ml的病毒抗原液，加入到缓冲液中，盖上塞子，充分混匀，最好用涡旋仪混匀，至此，四单位抗原配制完成。

四、血抑

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