山楂中黄酮的提取

1仪器与药品

台式超声波清洗器；紫外-可见分光光度计；可见分光光度计；SHZ-D循环水式真空泵；万分之一电子分析天平；抽滤瓶等。 芦丁标准品（中国药品生物制定检定所）；95%乙醇；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂，所用试剂均为分析纯；山楂。 2 实验部分 2.1对照品及供试品溶液的制备 2.1.1 对照品溶液的制备

精确称取芦丁对照品0.005g，置于小烧杯中，用体积分数70%的乙醇溶解并定量转移至25mL容量瓶中定容，摇匀，即得浓度为0.200mg/mL的芦丁标准品溶液。 2.1.2 供试品溶液的制备

称取干燥至恒重的山楂5.0g，置于100ml带塞锥形瓶中，按实验设计条件进行超声提取，提取液减压抽滤，取其滤液。将滤液定量转移至50ml容量瓶中，加相同浓度的乙醇定容至刻度，摇匀即得。 2.2 山楂中总黄酮含量测定方法的建立 2.2.1 测定波长的选择 精密量取芦丁对照品溶液1.50ml，置于10ml容量瓶中，加入体积分数70%乙醇至5ml。加5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，放置6min；再加入10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，放置6min；加入1.0mol/L的氢氧化钠溶液4.00ml，加水至刻度，摇匀，放置15min。以不加芦丁对照品溶液作为空白。选择于紫外分光光度计在

400nm-600nm波长范围内扫描。 2.2.2 线性实验 精密量取芦丁对照品溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL，分别置于25mL容量瓶中，各加入体积分数70%乙醇至10ml。加5%亚硝酸钠溶液1.00mL，摇匀，放置6min；加10%硝酸铝溶液1.00mL，摇匀，放置6min；加4%氢氧化钠溶液10.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15min。以不加芦丁对照品溶液为空白，采用分光光度法在510nm波长处测定吸光度，以芦丁浓度(mg/ml)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线。

2.2.3 精密度实验

准确吸取芦丁对照品溶液2.00ml，置于10ml的容量瓶中，加入一定量体积分数70%乙醇使成5mL。先加入5%的亚硝酸钠溶液0.30mL，摇匀，放置6min；再加入10%的硝酸铝溶液0.30mL，摇匀，再放置6min；加1.0mol/L的氢氧化钠溶液4.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15min。按以上方法连续测六次。 2.3 山楂中总黄酮的超声提取工艺研究 2.3.1 提取中主要影响因素的确定

用水浸提，提取物杂质多，后处理比较麻烦。甲醇、丙酮等作为提取剂，虽然效果不错，但二者有毒。乙醇浸提的选择性好，渗透性强，浸出率较高。本试验选择一定体积分数的乙醇溶液作为提取剂。为了提高有效成分的浸出，同时克服加热提取时产生水解产物的缺

1仪器与药品

台式超声波清洗器；紫外-可见分光光度计；可见分光光度计；SHZ-D循环水式真空泵；万分之一电子分析天平；抽滤瓶等。 芦丁标准品（中国药品生物制定检定所）；95%乙醇；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂，所用试剂均为分析纯；山楂。 2 实验部分 2.1对照品及供试品溶液的制备 2.1.1 对照品溶液的制备

精确称取芦丁对照品0.005g，置于小烧杯中，用体积分数70%的乙醇溶解并定量转移至25mL容量瓶中定容，摇匀，即得浓度为0.200mg/mL的芦丁标准品溶液。 2.1.2 供试品溶液的制备

称取干燥至恒重的山楂5.0g，置于100ml带塞锥形瓶中，按实验设计条件进行超声提取，提取液减压抽滤，取其滤液。将滤液定量转移至50ml容量瓶中，加相同浓度的乙醇定容至刻度，摇匀即得。 2.2 山楂中总黄酮含量测定方法的建立 2.2.1 测定波长的选择 精密量取芦丁对照品溶液1.50ml，置于10ml容量瓶中，加入体积分数70%乙醇至5ml。加5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，放置6min；再加入10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，放置6min；加入1.0mol/L的氢氧化钠溶液4.00ml，加水至刻度，摇匀，放置15min。以不加芦丁对照品溶液作为空白。选择于紫外分光光度计在

400nm-600nm波长范围内扫描。 2.2.2 线性实验 精密量取芦丁对照品溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL，分别置于25mL容量瓶中，各加入体积分数70%乙醇至10ml。加5%亚硝酸钠溶液1.00mL，摇匀，放置6min；加10%硝酸铝溶液1.00mL，摇匀，放置6min；加4%氢氧化钠溶液10.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15min。以不加芦丁对照品溶液为空白，采用分光光度法在510nm波长处测定吸光度，以芦丁浓度(mg/ml)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线。

2.2.3 精密度实验

准确吸取芦丁对照品溶液2.00ml，置于10ml的容量瓶中，加入一定量体积分数70%乙醇使成5mL。先加入5%的亚硝酸钠溶液0.30mL，摇匀，放置6min；再加入10%的硝酸铝溶液0.30mL，摇匀，再放置6min；加1.0mol/L的氢氧化钠溶液4.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15min。按以上方法连续测六次。 2.3 山楂中总黄酮的超声提取工艺研究 2.3.1 提取中主要影响因素的确定

用水浸提，提取物杂质多，后处理比较麻烦。甲醇、丙酮等作为提取剂，虽然效果不错，但二者有毒。乙醇浸提的选择性好，渗透性强，浸出率较高。本试验选择一定体积分数的乙醇溶液作为提取剂。为了提高有效成分的浸出，同时克服加热提取时产生水解产物的缺

点，本试验利用超声波辅助提取。据文献报道，超声波提取不会破坏芦丁的成分结构。 2.3.2 不同乙醇浓度对山楂中总黄酮量的影响

准确称取5.0g干燥恒重的山楂5份，分别加入10mL50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，超声提取20min，减压过滤，分别取2.00ml按2.2.3条件测其吸光度A值，以总黄酮量为指标来考察山楂中总黄酮的超声法提取工艺条件。 2.3.3 不同料液比对山楂中总黄酮量的影响

准确称取5.0g干燥恒重的山楂5份，采用70%乙醇，1：15、1：20、1：25、1：30、1：40五种不同料液比，超声提取20min，减压过滤，分别取2.00ml按2.2.3条件测其吸光度A值，以总黄酮量为指标来考察山楂中总黄酮的超声法提取工艺条件。 2.3.4 不同提取时间对山楂中总黄酮量的影响

准确称取5.0g干燥恒重的山楂5份，分别加入30mL70%乙醇的乙醇溶液，超声提取

10min，20min，30min，40min，50min，减压过滤，分别取2.00ml按2.2.3条件测其吸光度A值，以总黄酮量为指标来考察山楂中总黄酮的超声法提取工艺条件。 2.4 正交实验因素与水平安排

采取超声提取法，通过单因素实验得出：乙醇浓度（%）、料液比、提取时间（h）三个因素对总黄酮的量有影响。因此按正交表L9(33)安排三因素三水平的正交实验，准确称取5.0g干燥恒重的山楂9份，按表1正交实验设计条件进行超声提取，减压过滤，分别取

2.00ml按2.2.3条件测其吸光度A值，分别测定山楂中总黄酮的含量。2.5 提取工艺验证实验（重现性试验？）

为进一步考察上述最佳工艺的稳定性和合理性，在优化组合条件下进行3次平行实验。准确称取5.0g干燥恒重的山楂3份，分别加入 mL %乙醇的乙醇溶液，超声提取 min，减压过滤，滤液定容至50ml，分别取2.00ml按2.2.3条件测其吸光度A值，分别测定山楂中总黄酮的含量。 3 实验结果与分析

3.1 山楂中总黄酮含量测定方法的建立 3.1.1 测定波长的选择结果分析 3.1.2 标准曲线的绘制

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