鉴别培养基

麦康凯琼脂

麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。

麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。 MACCONKEY AGAR

MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment created by fermenting lactose. Organisms that do not ferment lactose do not cause a color change.

配方 g/l

蛋白胨 20.0 乳糖 10.0 胆盐 5.0 氯化钠 5.0 中性红 0.075 琼脂 12.0 pH 7.4±0. 配制

取52克CM7，加1升蒸馏水，加热至溶解完全，121℃灭菌15分钟。待琼脂表面变干方可接种。 特点

CM7符合世界卫生组织（WHO）推荐的培养基。工业用于检测水、乳制品和生物标本的大肠菌群和肠道致病菌，临床用于分离肠细菌。此培养基可抑制革兰氏阳性菌，可区分乳糖发酵性和非发酵性菌。还可以区分耶尔森菌和巴斯德氏菌，巴斯德氏菌不能生长。

以下是各菌种在麦康凯琼脂经35℃培养24小时后的菌落外观： 菌种 形态 菌落颜色、

大肠杆菌 红色、非黏液样有胆盐沉淀环 产气杆菌 粉红色、黏液样 肠球菌 红色、微小、圆形 链球菌 苍白粉红色、不透明 绿脓杆菌 棕绿色、荧光绿 乳糖发酵性菌 红色 乳糖非发酵性菌 无色

沙门氏菌 无色大菌落 使用

按常规操作，将尿液、粪便、污水等标本接种至麦康凯琼脂，分离单菌落，35℃培养18-24小时。

其实该菌最重要的用途还不只是在肠道细菌的鉴别上，对于非发酵菌的鉴定中就有一项是麦康凯生长，主要是观察细菌对胆盐的耐受性的，在这里是作为一项生化反应试验而应用的。

另外，在实际工作中巧妙的利用不同细菌在各种不同的培养基上的生长特性就可以快速的对细菌进行初步分群和鉴定：

例如：痰标本，直接接种标本后的第二天，如果在血琼脂上形成针尖状透明小菌落，在巧克力培养基上形成无色到灰色半透明，光滑闪光菌落，在麦康凯上不生长，直接涂片均为G-细小杆菌，或者细丝状杆菌的就多半是嗜血杆菌；

而如果在CSF标本，血琼脂上生长良好，含万古霉素巧克力不生长，麦康凯上不生长，直接涂片是杆菌，氧化酶阴性，触酶阳性，动力阳性，哪怕染出来看起来是“G-杆菌”，我也不会考虑G-，而会毫不犹豫的判断为G+杆菌，李斯特菌！

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中国蓝平板

中国蓝平板中含有中国蓝和玫瑰红酸。中国蓝在酸性溶液中呈蓝色，在碱性溶液中呈微蓝至无色。玫瑰红酸在酸性溶液中呈黄色，在碱性溶液中呈红色。此培养基pH7.4，制好后应呈淡紫色。过碱呈鲜红色，过酸呈蓝色，均不适用。

玫瑰红酸能抑制革兰阳性细菌生长，但对大肠埃希菌没有抑制作用，故粪便标本接种量不宜过多。

多数肠道致病菌不分解乳糖，其菌落为透明或半透明淡红色；大肠埃希菌分解乳糖产酸，形成大而浑浊的蓝色菌落。

中国篮平板正常颜色是蓝色,不是红色,这一点要注意.

该平板的指示剂就是中国篮，时何种成分有待查找。35度18小时培养后细菌颜色如下： 中国蓝平板中的生长现象：

显蓝色 大肠埃希氏菌 菌落大小 3－4mm 葡萄球菌属 菌落大小 1mm 链球菌 菌落大小 0.5mm 不显色 沙门氏菌，沙雷氏菌属等

中国蓝平板指示剂是用的10g/L中国蓝的水溶液，其水溶液应隔水煮沸灭菌使用，不发酵乳糖细菌的菌落是半透明，淡紫红色，分解乳糖的细菌是大而浑浊的蓝色菌落

大肠杆菌菌落蓝色，克雷伯兰粉色大而粘稠，不动杆菌粉色，沙门氏菌和痢疾杆菌为透明，嗜麦芽窄食单孢菌为黄粉色特别典型，霉菌、酵母杨真菌也都可生长，易于鉴别，建议你试一试。

记录部分

科玛嘉念珠菌显色培养基（大多数典型菌落形态）

白色念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌

草绿色 蓝绿色 紫色

翠绿色 铁蓝色 光滑型

克柔念珠菌 粉红色 粗糙型、菌落大

中国蓝平板细菌生长现象：

显蓝色 大肠埃希氏菌 菌落大小 3－4mm 葡萄球菌属 菌落大小 1mm 链球菌 菌落大小 0.5mm 不显色 沙门氏菌，沙雷氏菌属等

不发酵乳糖细菌的菌落 半透明，淡紫红色， 分解乳糖的细菌 大而浑浊的蓝色菌落 大肠杆菌菌落 蓝色，

克雷伯 兰粉色大而粘稠， 不动杆菌 粉色 沙门氏菌和痢疾杆菌 透明 嗜麦芽窄食单孢菌 黄粉色

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伊红美兰琼脂培养基 质控菌株 金黄色葡萄球菌 大肠埃希氏菌 沙门氏菌 福氏志贺氏菌 ATCC25923 ATCC25922 ATCC14028 ATCC12022 - +++ +++ +++ / 紫黑色菌落，有金属光泽 灰白色半透明菌落 灰白色半透明菌落 菌株编号 生长情况 其它特征

SS琼脂平板 使用方法： 1、原理：

胨、牛肉膏粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；乳糖、葡萄糖为可发酵的糖类；三号胆盐、柠檬酸钠和煌绿抑制革兰氏阳性菌及大多数的大肠菌群和变形杆菌，但不影响沙门氏菌的生长；硫代硫酸钠和柠檬酸铁用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；中性红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无色；琼脂是培养基的凝固剂。

称取本品56.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，待冷至50℃左右，在无菌环境中，倾注灭菌平皿，待凝固后，备用。

2、分离：用接种环取增菌液一环，划线接种于平板上。

3、培养：将平板放入恒温培养箱中，36±1℃培养18—24h。

4、观察结果。本培养基倾注平皿，待冷却后呈暗红色，质控菌株接种后。36±1℃培养18—24h，观察结果如下表：

用途：用于沙门氏菌和志贺氏菌的选择性分离培养。 主要有ss平板，EMB:伊红美兰培养基和双糖铁培养基， 肠道致病菌不分解乳糖，所以在SS平板上生长的菌落为无色透明的小菌落。如能产生H2S，则菌落中心呈黑色。大肠杆菌在SS平板上一般不生长，但如粪便标本接种得多，大肠杆菌量多所以仍有少数生长。大肠杆菌能发酵乳糖产酸，菌落呈红色，或菌落中心显红色，很容易和致病菌区分。

观察半固体-双糖铁培养基结果。如果双糖铁培养基中乳糖不发酵，可能为肠道致病菌。根据葡萄糖发酵结果、运动力的有无等可初步判定为哪一类细菌。

伊红美兰培养基上大肠埃希菌(非致病菌)发酵乳糖产酸，结合伊红美兰形成紫黑色金属光泽有色的菌落，伤寒沙门菌等(致病菌)不发酵，不能结合乳糖伊红美兰，形成无色的菌落

SS为强选择性培养基.其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。如柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠杆菌的生长。对志贺菌属及沙门 菌属相对抑制性较弱。硫代硫酸钠有助于大肠菌的着色，柠檬酸铁能缓解某些药物对病原菌的毒副作用，同时与细菌产物起反应呈黑色菌落。中性红指示剂可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落。

表10-1 大肠杆菌在普通琼脂平板及选择鉴别培养基上的菌落特征 培 养 基 菌 落 特 征

普通琼脂平板 圆形，中等大小，灰白，整齐，光滑菌落 SS平板 呈红色 中国蓝平板 呈蓝色

伊红美蓝平板 呈紫黑色，有金属光泽

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*Salmonella -Shigella medium ss是 沙门氏菌 贺志氏菌的意思 请问霍乱弧菌进行分离培养时常用的选择培养基TCBS是那些成分组成?

其他细菌在碱性pH平板上不易生长,故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基; 在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形,光滑,透明. 常用的选择培养基为：硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板(TCBS),霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落。

1882年Koch发现结核杆菌 结核杆菌培养特性 1. 液体培养基（苏通氏培养基、小川培养基、血清酸性培养基等）结核杆菌生长表现：标本材料经前处理（即酸碱处理，可液化标本，也可杀死杂菌，还可浓缩集菌）后接种液体培养基，35℃培养1-2周，由于表面生物，可在培养基表面表成污灰、干燥、有皱褶的菌膜。 2. 固体培养基（改良罗氏培养基----Lownstein-Jenson，L-J、丙酮酸钠培养基等）结核杆菌生长表现：标本材料经前处理后，接种固体培养基，37℃培养2-4周，在培养基表面可形成乳白或米黄色、干燥、不透明、粗糙颗粒状或节状堆聚的菌落，呈现“菜花状”。 （L_J培养基中的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长），如果涂片结果为阴性或菌落有色素产生，同时菌落形态不典型，则需将接种物于27—33℃继续培养至12周。 3. 结核杆菌快速培养检测方法：无菌手续将前处理后的材料涂片，臵液体培养基中，35℃恒温箱CO2培养箱内培养，3-5日后，每隔日取出一玻片，染色镜检，可快速获得结果。 外毒素 内毒素 来源 存在部分 化学成分 稳定性 毒性作用 抗原性 特点 G+菌和部分G-菌 从活菌分泌出，少数菌崩解后释出 蛋白质 不稳定，60~80℃，30分钟 强，对组织器官有选择性毒害效应，引起特殊临床表现 强，刺激机体产生抗毒素；甲醛液处理脱毒形成类毒素（类毒素可刺激机体产生具有中和外毒素作用的抗毒素） 1、大多数的化学本质是蛋白质 2、毒性作用强，对组织器官有高度选择性 3、绝大多数不耐热 4、抗原性强 5、可用人工化学方法脱去毒性（A亚基活性），保留其抗原性（B亚基结构） 1、神经毒素：破伤风痉挛毒素、肉毒毒素。 2、细胞毒素：能直接损失宿主细胞（白喉毒素成孔毒素、磷脂酶类）。 3、肠毒素：霍乱毒素和葡萄球菌肠毒素。 G-菌 细胞壁组分，菌体裂解后释出 脂多糖 160℃，2~4小时 较弱，各菌的毒性作用大致相同，引起发热、白细胞增多、微循环障碍、休克、DIC等全身反应 弱，刺激机体产生的中和抗体作用弱；甲醛液处理不产生类毒素 1、产生于G-菌细胞壁 2、化学性质是LPS 3、对理化因素稳定 4、毒素作用相对较弱 5、不能用甲醛液脱毒而成为类毒素 分类 主要生物学作用 1、 2、 3、 发热反应 白细胞反应 内毒素血症和内毒素休克

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