2015细胞生物学实验

实验一 线粒体和液泡系的超活染色

[实验目的]

1、学习一些细胞的超活染色技术。

2、通过超活染色观察活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。 [实验原理]

活体染色是指对生活有机体的细胞或 的某些结构组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构。而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。站那思虑B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 [仪器、材料与试剂]

1、仪器：显微镜、恒温水浴锅

2、材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、黄豆幼根根尖、载玻片、盖玻片、10ml量筒、吸管、吸水纸

黄豆幼根根尖培养方法：将黄豆种子用温水泡胀后，培养在培养皿内多层润湿的滤纸上（水稍淹住黄豆为宜），30℃使其发芽，3~4天后，胚根伸长到1cm以上。 3、试剂：

⑴ Ringer溶液（装入滴瓶） 氯化钠 0.85g 氯化钾 0.25g 氯化钙 0.03g

蒸馏水 100ml

⑵ 1%、1/3000中性红溶液（装入棕色滴瓶）

称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热（30~40℃）使之很快溶解，用滤纸过滤，装于棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。 临用前，取已配制好的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，制成1/3000中性红液装入棕色瓶备用。

⑶ 1%、1/5000詹纳斯绿B溶液（装入棕色滴瓶）

称取0.05g詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加热（30~40℃），使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。 [实验步骤]

(一)线粒体的超活染色与观察

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B是一种毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。

洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察

1)用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净的载玻片上，然后撕取一小片洋葱鳞茎内表皮，置于染液中，染色10－15分钟。

2)用吸管吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮细织展平，盖上盖玻片进行观察。

3)先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，在高倍镜下，可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至一侧贴细胞壁处。在它的周围有致密的原生质体，在原生质中有被染成蓝绿色的小颗粒。此即线粒体。仔细观察细胞质中线粒体的形态与分布。

(二) 液泡系的超活染色与观察

液泡系是指同一细胞内，许多大小相同或不同的液泡所组成的一个系统。存在于动物细胞和植物细胞。在植物细胞中，液泡有一个演进的过程。在动物胚胎或幼年细胞中，液泡大部分集中分布在细胞核的顶部上方，形成一个液泡区。 中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能与液泡中某些蛋白质有关。

黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察：

1、用双面刀片把初生的黄豆幼苗根尖(约1－2cm长)小心切一纵切面(切片应尽量切薄)，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色5－10分钟。

2、吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地压下盖玻片，使根尖压扁，利于观察。

3、在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。

实验二 细胞凝集反应

【实验目的】

1、初步掌握细胞凝集原理。 2、 观察细胞凝集现象。 【实验原理】

细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为：细胞间的联系、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝糖分子有关。

凝集素是一类含糖并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝结细胞和刺激细胞分化的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

【仪器、材料与试剂】

1、仪器：显微镜、离心机、天平

2、材料：土豆、鸡血(一份鸡血加两份阿氏液置4OC冰箱冷藏)、载玻片、盖玻片、滴管、离心管

3、试剂:

1)PBS缓冲液：称取NaCl 7.2g、Na2HP04 1.48g、KH2PO4 0.43g，加蒸馏水定容到1000m1，调Ph值到7.2。

2)阿氏液：葡萄糖2.02g，氯化钠0.42g，柠檬酸钠0.80g，柠檬酸0.055g，蒸馏水加到1000ml，置4OC冰箱中保存。

3)0.9%生理盐水

【实验步骤】

1、称取土豆去皮块茎2g，加10m1PBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。

2、制备2％的红细胞：(制备流程如下)

鸡血(一份鸡血加两份阿氏液)

混匀取15ml，离心(2000rpm)10’

弃上清 取沉淀

加0.9%生理盐水，混匀，离心(2000rpm)10’,重复2—3次

弃上清 取沉淀，滴管滴加5ml生理盐水，混匀，取0.5ml悬液

以生理上盐水定容到25ml,制成2%鸡红细胞备用

3、用滴管吸取土豆凝集素和2％红细胞各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20分钟后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。

4、对照实验：PBS液加2％血细胞液。 【作业】

用简图表示血细胞凝集现象。

实验三 叶绿体的提取

【实验目的】

1、 2、

【实验原理】

细胞器的分离一般采用差速离心法，细胞经过破碎后，在适当的介质中进行差速离心，利用细胞各组分质量大小不同，在不同离心力的作用下，即可得到所需的组分。 【仪器、材料与试剂】

通过本实验掌握用差速离心法分离叶绿体的技术。 了解细胞器制备一般程序。

1、仪器：离心机、台秤、显微镜

2、材料：菠菜叶（或小麦叶、玉米叶、向日葵、、豌豆叶）、研钵一付、双层纱布、 玻璃漏斗、烧杯(200m1)2个、滴管1支、50ml量筒1个、擦镜纸、盖玻片、载玻片、吸水纸(可用卫生纸代替)

3、试剂：

(1）配制0.5M的蔗糖(分子量:342.30)水溶液

(2）磷酸钾缓冲液：将KH2P04(分析纯，分子量:136.09)溶于部分上述(1)液中，使其浓度为0.1M，pH调至7.4。

(3）完全介质:将EDTA-Na2(分子量:372.28)溶于B上述(2)液中，使其浓度为0.01mol/L，pH调至7.4。

【实验方法与步骤】

1、将叶片洗净吸干后，称取鲜重10g，剪成1－2cm2小块。 2、加入20ml完全介质，在研钵中充分研碎。 3、用双层纱布过滤残渣。

4、汁液在1000rpm下离心5分钟，弃去沉淀（完整细胞、核）。 5、上清在2000rpm下离心12分钟，大部分叶绿体在这次离心中沉淀。弃去上清液。

6、将沉淀悬浮于15mL蔗糖液中，再以2000rpm,离心12分钟，所得沉淀即为纯化叶绿体。

7、将沉淀悬浮于约3ml蔗糖液中。 8、制片，在高倍镜下观察

9、在光学显微镜下观察叶绿体形态及大小

10、对照实验：用过程(3)中的滤液制片观察完整细胞，与所得叶绿体形态及大小相比较。

【作业】

绘制所观察到的叶绿体

实验五 红细胞膜(Ghost)的制备

【实验目的】

掌握从哺乳动物红细胞中分离细胞质膜的步骤和方法。

【实验原理】

哺乳动物的红细胞膜在分离状态下，一般称为“血影”(ghost),由于哺乳动物的红细胞中没有通常真核细胞内所含有的任何细胞器，经过制备，容易得到纯净的细胞膜。

从哺乳动物红细胞中分离细胞质膜：第一步是将血液放入加有抗凝剂的容器内，用低速离心的方法从血液中分离出红细胞，然后用等渗缓冲液重复洗涤多次，去除血浆；第二步将洗净的红细胞转移到低渗缓冲液中，使红细胞膨胀而溶血，最后将溶血的红细胞经过反复洗涤，高速离心，去除血红蛋白和其他细胞内含物，而获得纯净的红细胞膜。

【仪器、材料与试剂】

1、仪器：冰冻离心机

2、材料：兔血(每６ml血液加１毫升肝素-pH7.4等渗磷酸盐缓冲液<配方见下>)、烧杯、玻棒、滴管、量筒、冰浴装置（容器盛水在冰箱中冷冻成冰）

3、试剂：

1)５mM,pH7.4等渗磷酸盐缓冲液(其中含有0.15M NaCl)

贮液Ａ：称取0.780gNaH2PO4.2H2O，用蒸馏水定容至1000ml。 贮液Ｂ：称取1.79gNa2HPO4.12H2O，用蒸馏水定容至1000ml。

工作液：取190ml贮液Ａ加810ml贮液Ｂ,再称取8.76gNaCl溶于其中。置冰箱中预冷。

2)10mM, pH7.4低渗Tris-HCl缓冲液

贮液Ａ：称取2.42gTris，用蒸馏水定容至1000ml。 贮液Ｂ：量取0.84ml36-38%盐酸，用蒸馏水稀释至1000ml。 工作液：取250ml贮液Ａ加207ml贮液Ｂ，用水稀释至近1000ml,用

6N盐酸调pH至7.4，再定容至1000ml。置冰箱中预冷。

3)肝素-pH7.4等渗磷酸盐缓冲液

将肝素溶在pH7.4等渗磷酸盐缓冲液中,每毫升含肝素500单位。

【实验方法与步骤】 （一）红细胞的制备和洗涤

1、用滴管取0.5ml血液，于冰冻离心机中，4OC,3000rpm离心20min,使红细胞沉淀。用吸管吸尽血浆及沉淀的红细胞表层的绒毛状沉淀层。

2、将红细胞放入三倍(1.5ml)预冷的pH7.4等渗磷酸盐缓冲液中，用吸管吹吸使其悬浮，于4OC,5000rpm离心15min，除去上清液及沉淀表层。 （二）溶血及红细胞膜的洗涤

1、在洗净的红细胞中，按1:40的比例加入预冷的pH7.4低渗Tris-HCl缓冲液，边加边搅拌，置冰浴装置中1小时，使之完成溶血。

2、于4OC,9000rpm离心20min，使红细胞膜沉淀，获得白色的红细胞膜。 3、将所得到的红细胞膜悬浮在2-3滴pH7.4等渗磷酸盐缓冲液中。 （三）细胞膜的镜检

取少量膜样品悬浮液，在相差显微镜下观察，纯净的膜为扁圆形，白色，膜表面略有皱纹。

实验六 光镜下植物细胞骨架的观察— 考马斯亮蓝R250染色法

【实验目的】

掌握观察植物细胞内细胞骨架的一种方法：考马斯亮蓝R250(Coomassie blue R250)染色法 【实验原理】

真核细胞胞质中有错综复杂的纤维网，称为细胞骨架（cytoskeleton），根据纤维的直径分为微丝(MS)、微(MT)、中间纤维(IF)。此外还散布着一些比微丝还细的纤维。

用适当浓度的非离子去垢剂Tritox-100处理植物细胞时，可抽提掉胞质中除骨架蛋白以外的其他蛋白，保留下来的细胞骨架经考马斯亮蓝R250染色后，可在光镜下清晰地观察到它的网状结构。

【仪器、材料与试剂】

1、仪器：温箱(或恒温水浴锅)、显微镜

2、材料：新鲜、幼嫩的洋葱鲜茎内表皮、烧杯、刀片、镊子、滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸 、擦镜纸、香柏油、洗镜液

3、试剂：

1)6mM,pH6.5磷酸缓冲液(内含5mM KCl)

贮液Ａ：称取2.149g Na2HPO4.12H2O，用蒸馏水定容至1000ml。 贮液Ｂ：称取0.936g NaH2PO4.2H2O，用蒸馏水定容至1000ml。 工作液：取685ml贮液Ａ加315ml贮液Ｂ，再称取0.372gKCl溶于其中。

2)M 缓冲液[其中EGTA又名乙二醇双(α-氨基乙苯)醚四乙酸，EDTA即乙二胺四乙酸]

咪唑 50mM 3.404g 氯化镁 0.5mM 0.101g EGTA 1mM 0.380g EDTA 0.1mM 0.029g DTT 1mM 0.155g 加蒸馏水至1000ml

3)1%Tritonx-100(用M 缓冲液液配制):取5mlTritonx-100于M缓冲液中，加热后定容至500ml。

4) 3% 戊二醛（用6mM,pH6.5磷酸缓冲液配制） 5) 0.2% 考马斯亮兰 R250

考马斯亮兰R250 0.6g 甲醇 139.5ml 冰醋酸 21ml 蒸馏水 139.5ml 混匀，装入棕色滴瓶中备用。 6)蒸馏水

【实验方法与步骤】

1、用镊子撕取洋葱鳞茎的内表皮(取材时注意不要用靠近边缘的内表皮)，大小约0.5～1cm，放入10mL，PH6.5的磷酸缓冲液中。 2、将材料取出，用 1%Tritonx-lOO 处理20-30min ， 3、用 M 缓冲液洗 3-5 次，每次5min。 4、用 3% 戊二醛固定0.5-1h。

5、用pH6.5的磷酸缓冲液洗 3-5 次,每次5分钟，将材料置于载玻片上，滤纸吸去残液。

6、用0.2%考马斯亮兰R250染色30min(在载玻片上进行)。 7、用蒸馏水冲洗数遍。

8、加滴蒸馏水制片，在高倍镜或油镜下观察，可见到与核联系的细胞骨架及靠近细胞壁的网状结构，呈深蓝色。 【作业】

绘制洋葱鳞茎内表皮细胞的细胞骨架图像

实验四 红细胞膜(Ghost)的制备

【实验目的】

掌握从哺乳动物红细胞中分离细胞质膜的步骤和方法。

【实验原理】

哺乳动物的红细胞膜在分离状态下，一般称为“血影”(ghost),由于哺乳动物的红细胞中没有通常真核细胞内所含有的任何细胞器，经过制备，容易得到纯净的细胞膜。

从哺乳动物红细胞中分离细胞质膜：第一步是将血液放入加有抗凝剂的容器内，用低速离心的方法从血液中分离出红细胞，然后用等渗缓冲液重复洗涤多次，去除血浆；第二步将洗净的红细胞转移到低渗缓冲液中，使红细胞膨胀而溶血，最后将溶血的红细胞经过反复洗涤，高速离心，去除血红蛋白和其他细胞内含物，而获得纯净的红细胞膜。

【仪器、材料与试剂】

1、仪器：冰冻离心机

2、材料：兔血(每６ml血液加１毫升肝素-pH7.4等渗磷酸盐缓冲液<配方见下>)、烧杯、玻棒、滴管、量筒、冰浴装置（容器盛水在冰箱中冷冻成冰）

3、试剂：

1)５mM,pH7.4等渗磷酸盐缓冲液(其中含有0.15M NaCl)

贮液Ａ：称取0.780gNaH2PO4.2H2O，用蒸馏水定容至1000ml。 贮液Ｂ：称取1.79gNa2HPO4.12H2O，用蒸馏水定容至1000ml。 工作液：取190ml贮液Ａ加810ml贮液Ｂ,再称取8.76gNaCl溶于其中。置冰箱中预冷。

2)10mM, pH7.4低渗Tris-HCl缓冲液

贮液Ａ：称取2.42gTris，用蒸馏水定容至1000ml。 贮液Ｂ：量取0.84ml36-38%盐酸，用蒸馏水稀释至1000ml。 工作液：取250ml贮液Ａ加207ml贮液Ｂ，用水稀释至近1000ml,用

6N盐酸调pH至7.4，再定容至1000ml。置冰箱中预冷。

3)肝素-pH7.4等渗磷酸盐缓冲液

将肝素溶在pH7.4等渗磷酸盐缓冲液中,每毫升含肝素500单位。

【实验方法与步骤】 （一）红细胞的制备和洗涤

1、用滴管取0.5ml血液，于冰冻离心机中，4OC,3000rpm离心20min,使红细胞沉淀。用吸管吸尽血浆及沉淀的红细胞表层的绒毛状沉淀层。

2、将红细胞放入三倍(1.5ml)预冷的pH7.4等渗磷酸盐缓冲液中，用吸管吹吸使其悬浮，于4OC,5000rpm离心15min，除去上清液及沉淀表层。

（二）溶血及红细胞膜的洗涤

1、在洗净的红细胞中，按1:40的比例加入预冷的pH7.4低渗Tris-HCl缓冲液，边加边搅拌，置冰浴装置中1小时，使之完成溶血。

2、于4OC,9000rpm离心20min，使红细胞膜沉淀，获得白色的红细胞膜。 3、将所得到的红细胞膜悬浮在2-3滴pH7.4等渗磷酸盐缓冲液中。 （三）细胞膜的镜检

取少量膜样品悬浮液，在相差显微镜下观察，纯净的膜为扁圆形，白色，膜表面略有皱纹。

实验五 光镜下植物细胞骨架的观察— 考马斯亮蓝R250染色法

【实验目的】

掌握观察植物细胞内细胞骨架的一种方法：考马斯亮蓝R250(Coomassie blue R250)染色法 【实验原理】

真核细胞胞质中有错综复杂的纤维网，称为细胞骨架（cytoskeleton），根据纤维的直径分为微丝(MS)、微(MT)、中间纤维(IF)。此外还散布着一些比微丝还细的纤维。

用适当浓度的非离子去垢剂Tritox-100处理植物细胞时，可抽提掉胞质中除骨架蛋白以外的其他蛋白，保留下来的细胞骨架经考马斯亮蓝R250染色后，可在光镜下清晰地观察到它的网状结构。

【仪器、材料与试剂】

1、仪器：温箱(或恒温水浴锅)、显微镜

2、材料：新鲜、幼嫩的洋葱鲜茎内表皮、烧杯、刀片、镊子、滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸 、擦镜纸、香柏油、洗镜液

3、试剂：

1)6mM,pH6.5磷酸缓冲液(内含5mM KCl)

贮液Ａ：称取2.149g Na2HPO4.12H2O，用蒸馏水定容至1000ml。 贮液Ｂ：称取0.936g NaH2PO4.2H2O，用蒸馏水定容至1000ml。 工作液：取685ml贮液Ａ加315ml贮液Ｂ，再称取0.372gKCl溶于其中。 2)M 缓冲液[其中EGTA又名乙二醇双(α-氨基乙苯)醚四乙酸，EDTA即乙二胺四乙酸]

咪唑 50mM 3.404g 氯化镁 0.5mM 0.101g EGTA 1mM 0.380g EDTA 0.1mM 0.029g DTT 1mM 0.155g 加蒸馏水至1000ml

3)1%Tritonx-100(用M 缓冲液液配制):取5mlTritonx-100于M缓冲液中，加热后定容至500ml。

4) 3% 戊二醛（用6mM,pH6.5磷酸缓冲液配制） 5) 0.2% 考马斯亮兰 R250

考马斯亮兰R250 0.6g 甲醇 139.5ml 冰醋酸 21ml 蒸馏水 139.5ml 混匀，装入棕色滴瓶中备用。

6)蒸馏水

【实验方法与步骤】

1、 用镊子撕取洋葱鳞茎的内表皮(取材时注意不要用靠近边缘的内表皮)，大小约0.5～1cm，放入10mL，PH6.5的磷酸缓冲液中。 2、 将材料取出，用 1%Tritonx-lOO 处理20-30min ， 3、 用 M 缓冲液洗 3-5 次，每次5min。 4、用 3% 戊二醛固定0.5-1h。

5、用pH6.5的磷酸缓冲液洗 3-5 次,每次5分钟，将材料置于载玻片上，滤纸吸去残液。

6、用0.2%考马斯亮兰R250染色30min(在载玻片上进行)。 7、用蒸馏水冲洗数遍。

8、加滴蒸馏水制片，在高倍镜或油镜下观察，可见到与核联系的细胞骨架及靠近细胞壁的网状结构，呈深蓝色。 【作业】

绘制洋葱鳞茎内表皮细胞的细胞骨架图像

实验六 RNA的细胞化学反应——Unna反应

【实验目的】

掌握显示细胞内RNA和DNA的主要细胞化学方法以及了解RNA和DNA在细胞内的一般分布状况。

【实验原理】

1989年Pappenheim首创了甲基绿-派洛宁染色法。1902年Unna对这一方法进行了改良。1940年Brachet研究证明甲基绿和派洛宁对DNA和RNA有选择性的染色效果。这是一种利用碱性染料显示细胞内RNA的标准方法之一。其原理是：利用DNA和RNA对碱性染料的亲合力有差异，而进行选择性染色，即RNA被Unna试剂中的派洛宁染成红色，DNA被Unna试剂中的甲基绿染成绿色。 【实验器材和试剂】 1．实验材料 洋葱鳞茎 2．实验器材

显微镜、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、酒精灯、滤纸、染色缸、吸水纸 3．实验试剂 Unna试剂：

甲液：5%的派洛宁水溶液2ml；2%的甲基绿水溶液6ml；蒸馏水16ml 乙液：1M PH48的醋酸盐缓冲液。配制方法为： A液：6ml冰醋酸+100ml蒸馏水 B液：135g醋酸钠+100ml蒸馏水

取A液40ml加B液60ml即为乙液。乙液以现配为好。

甲液和乙液分别保存在4℃冰箱中备用。用时甲、乙两液混匀即成Unna试剂。 丙酮 正丁醇 二甲苯 加拿大树胶

明胶粘片剂：

明胶1g，蒸馏水100ml，苯酚2g，甘油15ml。配法：将蒸馏水加热至36℃，再依次加入明胶、苯酚、甘油（可在36℃水浴锅中进行，明胶在36℃溶解度最大），待充分溶解后，过滤，贮存于有玻璃塞的瓶中备用。注意配好后不要放在冰箱中。 70%酒精 95%酒精 无水酒精。 Carnoy固定液 5%三氯醋酸 【实验内容与方法】

1．在干净的载玻片上涂以一极薄的明胶粘片剂，滴一滴蒸馏水，用镊子撕下小片洋葱表皮置于蒸馏水之上，使之展开。

2．片子置于酒精灯火焰上烘烤，待蒸馏水蒸发后，洋葱表皮即粘在载玻片上。 3．立即将片子放入carnoy固定液中固定15分钟。

4．取出固定材料，用无水酒精将片子上的醋酸冲洗干净，然后将片子经95%、70%酒精（各5分钟），然后移入蒸馏水中。将装片分为实验组和对照组。 5．对照组用5%三氯醋酸于90℃处理15min，用蒸馏水冲洗5min。 6．将实验组和对照组装片均浸入Unna试剂中染色30分钟。

7．用蒸馏水冲洗数秒钟，以洗去多余的染液，但冲洗时间不宜过长，否则派洛宁会被洗掉，然后用吸水纸将片子上的水分吸干。 8．片子浸入纯丙酮中分色3-20秒。 9．蒸馏水洗片刻，镜检

10．将制作较好的装片移入正丁醇和二甲苯混合液（1：1）中10-30秒。 11．在纯二甲苯中透明5-15分钟

12．用加拿大树胶封片，即成永久装片。 13．镜检。 【注意事项】

商品甲基绿常混有甲基紫，会影响染色效果，应该用氯仿将甲基绿中的甲基紫成分洗脱干净。方法是将市售甲基绿泡入氯仿中，用力振摇，静置后过滤，反复多次直到氯仿中无甲基紫色出现为止。洗去甲基紫后干燥备用。 【作业与思考】

1．用彩色笔绘出反应结果的细胞图，并注明不同颜色的部位表示有什么物质存在。

2．验交永久装片一张。

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