叶片荧光测量实验报告 - 图文

叶片荧光测量实验报告

1. 实验目的

2. 实验方法

利用PAM100,荧光成像系统测量叶绿素荧光

3. 实验原理及一些参数的意义

荧光的变化反映光合与热耗散的变化。

光化学淬灭（Photochemical Quenching）:由于光合作用引起的荧光下降，反映了光合活性的高低。

qP=(Fm’-Fs)/Fv’=1-(Fs-Fo’)/(Fm’-Fo’) （基于“沼泽模型”） qL=(Fm’-F)/(Fm’-Fo’)·Fo’/F=qP·Fo’/F （基于“湖泊模型”） 非光化学淬灭（Non-Photochemical Quenching）:由于热耗散引起的荧光下降 。

qN=(Fv-Fv’)/Fv=1-(Fm’-Fo’)/(Fm-Fo)

NPQ=(Fm-Fm’)/Fm’=Fm/Fm’-1 ，不需测定Fo’，适合野外调查 qN或NPQ反映了植物耗散过剩光能转化为热的能力，反映了植物的光保护能力。

Fv/Fm =(Fm-Fo)/Fm : PS II的最大量子效率，反映植物潜在最大光合能力，高等植物一般在0.8－0.84之间，当植物受到胁迫（Stress）时，Fv/Fm显著下降。

ΦPS II = Yield = (Fm’-Fs)/Fm’ = ΔF/Fm’ = qP·Fv’/Fm’: 任一光照状态下PS II的实际量子产量（实际光合能力、实际光合效率）

不需暗适应，不需测定Fo’，适合野外调查。

Y(NPQ)=1-Y(II)-1/(NPQ+1+qL(Fm/Fo-1))：调节性能量耗散，PS II处调节性能量耗散的量子产量。若Y(NPQ)较高，一方面表明植物接受的光强过剩，另一方面则说明植物仍可以通过调节（如将过剩光能耗散为热）来保护自身。Y（NPQ）是光保护的重要指标。 Y(NO)=1/(NPQ+1+qL(Fm/Fo-1))：非调节性能量耗散

PS II处非调节性能量耗散的量子产量。若Y(NO)较高，则表明光化学能量转换和保护性的调节机制（如热耗散）不足以将植物吸收的光能完全消耗掉。也就是说，入射光强超过了植物能接受的程度。这时，植物可能已经受到损伤，或者（尽管还未受到损伤）继续照光的话植物将要受到损伤。Y（NO）是光损伤的重要指标。 P：光合速率，即相对电子传递速率rETR

Pm: 最大光合速率，即最大相对电子传递速率rETRmax ?：初始斜率，反映了光能的利用效率 ?：光抑制参数

Ik=Pm/? ：半饱和光强，反映了样品对强光的耐受能力。

AL:作用光 ML:检测光 SP/P+Fsp:饱和脉冲光

注：光化学淬灭可以被一种短饱和脉冲光（0.2－1 s）暂时完全抑制，剩余的荧光淬灭就是非光化学淬灭。（叶绿素a荧光理论及其应用 张西斌）

4. 实验步骤

4.1 Dual-Pam100的操作步骤 4.1.1 参数调整

4.1.1.1 打开Dual-Pam100的界面，更改下面参数： Mode:fluo+P700;

Means light:fiuo-int=10 P700-int=5

Act light: Act.red.right-int=17 Far red light=5 Width=40s Sat pulse: P+F+sp--int=10;

4.1.1.2点Light，进入界面，再点edit进行下面参数的编辑： Intense 1，4,8,12,14,16,18,19,20

Time 2,2,2,2,2,2,2,2,2,之后的全部设置为0； 4.1.2 进入测定界面开始测定 4.1.2.1 回到slow kinetics界面

点击F0，Fm(确定Y（II）值0.8-0.85之间)→点Bal(平衡光系统I，II)→点Pm(待回复灰色)→点start(过4s后)→点Al作用光（过3min半）→点P+F+sp饱和光（此时一般会观察到红色曲线达到平衡）→过30s左右关掉Al(曲线会下降)→再过1min左右（曲线平稳）→点stop→在当前界面点击曲线保存按钮保存曲线。 4.1.2.2 回到light curve 界面

点Bal→点start（出现对话框 new F0,Fm and Pm-determindtion…点NO）→等曲线绘成后点report保存数据→数据保存后手动清空当前界面数据。

4.2荧光成像系统的操作

先打开荧光成像仪再打开电脑对应系统→将叶片按要求放在叶室； 4.2.1 进入setting界面 如下调整参数：

Meas.Light-int=1 Frequence=1;

Act.light-int=19 widths=0; Image Correction=MAXI;

Image Transformation=Rotate 180° Battery=16.3V;

Gain=1 Damping=2

Sat.Pulse-int=10 No=1 Intervals=30;

Slow Induction-Delays=40 clocks=20 Durations=315; Absorptivity-Red Gain=30 red Intensity=3 NIR Intensity=23: Display=Color Go Speed-PS Limit=50 ;(其他的参数基本不变)

4.2.2 Imaging界面

点Reset→点Add(增加测量部位,可多个添加)→点Measure Abs（吸光度）→点F0，Fm→点Report(将该界面右侧荧光参数值全部勾选)

→保存相应的数值；

4.2.3 回到Light curve界面或kinetics界面

点Start（等到20s）→点Al（过3min半）→点SAT-Pu/se(打饱和光)→在当前界面保存图像→在Report界面保存相关数据； 4.测量结果

5. 数据分析

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/gdz5.html