SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒

SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒把所需的缓冲液、SDS等预混于下层胶缓冲液(4×)(用于配制分离胶)和上层胶缓冲液(4×)(用于配制浓缩胶),分别含有Tris-HCl(pH8.8)、SDS和Tris-HCl(pH6.8)、SDS,30T一般可以配制30～40块,具体配制的量应根据器具大小决定。

SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒

简介：

聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis， SDS-PAGE)，其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)；非变性聚丙烯酰胺凝胶蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。

SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒把所需的缓冲液、SDS等预混于下层胶缓冲液(4×)(用于配制分离胶)和上层胶缓冲液(4×)(用于配制浓缩胶)，分别含有Tris-HCl(pH8.8)、SDS和Tris-HCl(pH6.8)、SDS，30T一般可以配制30～40块，具体配制的量应根据器具大小决定。

组成：

操作步骤(仅供参考)：

1、 配制10%过硫酸铵：直接在0.5g Ammonium Persulfate中加入5ml蒸馏水，充分溶

解，分装成小份储存于-20℃或4℃。

2、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照下面的表格配制SDS-PAGE的分

离胶(下层胶)：

SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒把所需的缓冲液、SDS等预混于下层胶缓冲液(4×)(用于配制分离胶)和上层胶缓冲液(4×)(用于配制浓缩胶),分别含有Tris-HCl(pH8.8)、SDS和Tris-HCl(pH6.8)、SDS,30T一般可以配制30～40块,具体配制的量应根据器具大小决定。

北京雷根生物技术有限公司 成分6%胶蒸馏水 30%Acr-Bis(29:1) 5 2.6 1.0 1.3 0.05 0.004

配制不同体积 SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml)10 5.3 2.0 2.5 0.1 0.008 15 7.9 3.0 3.8 0.15 0.012 20 10.6 4.0 5.0 0.2 0.016 25 13.2 5.0 6.3 0.25 0.02 30 15.9 6.0 7.5 0.3 0.024 40 21.2 8 10 0.4 0.032 50 26.5 10.0 12.5 0.5 0.04

下层胶缓冲液(4×)10%过硫酸铵 TEMED

成分8%胶蒸馏水 30%Acr-Bis(29:1) 5 2.3 1.3 1.3 0.05

配制不同体积 SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml)10 4.6 2.7 2.5 0.1 0.006 15 6.9 4.0 3.8 0.15 0.009 20 9.3 5.3 5.0 0.2 0.012 25 11.5 6.7 6.3 0.25 0.015 30 13.9 8.0 7.5 0.3 0.018 40 18.5 10.7 10 0.4 0.024 50 23.2 13.3 12.5 0.5 0.03

下层胶缓冲液(4×)10%过硫酸铵 TEMED

0.003

成分10%胶蒸馏水 30%Acr-Bis(29:1) 5 1.9 1.7 1.3 0.05

配制不同体积 SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml)10 4.0 3.3 2.5 0.1 0.004 15 5.9 5.0 3.8 0.15 0.006 20 7.9 6.7 5.0 0.2 0.008 25 9.9 8.3 6.3 0.25 0.01 30 11.9 10 7.5 0.3 0.012 40 15.9 13.3 10 0.4 0.016 50 19.8 16.7 12.5 0.5 0.02

下层胶缓冲液(4×)10%过硫酸铵 TEMED

0.002

成分12%胶蒸馏水 30%Acr-Bis(29:1) 5 1.7 2.0 1.3 0.05

配制不同体积 SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml)10 3.3 4.0 2.5 0.1 0.004 15 4.9 6.0 3

.8 0.15 0.006 20 6.6 8.0 5.0 0.2 0.008 25 8.2 10.0 6.3 0.25 0.01 30 9.9 12.0 7.5 0.3 0.012 40 13.2 16.0 10 0.4 0.016 50 16.5 20.0 12.5 0.5 0.02

下层胶缓冲液(4×)10%过硫酸铵 TEMED

0.002

SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒把所需的缓冲液、SDS等预混于下层胶缓冲液(4×)(用于配制分离胶)和上层胶缓冲液(4×)(用于配制浓缩胶),分别含有Tris-HCl(pH8.8)、SDS和Tris-HCl(pH6.8)、SDS,30T一般可以配制30～40块,具体配制的量应根据器具大小决定。

注意事项：

1、 过硫酸铵配制成10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。有效

避免失效的方法是分成小份，-20℃保存，用2~3次，剩余的弃用，亦可4℃保存几天。 2、 TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可

通过适当调节TEMED的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。 3、 配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于37℃放置，加速凝固。 4、 30%Acr-Bis(29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。

附录：SDS-PAGE、Western原理：

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/g9we.html