菌种的传代接种操作规程

陕西汉王药业有限公司GMP管理文件

1 目 的：建立菌种的传代、贮存、接种操作规程。

2 适用范围：适用于检定菌的传代、贮存、接种。

3 责 任 者：微生物检验员、化验室主任。

4 内 容：

4.1来源：检定菌种由药检部门提供已接种好的菌种斜面。

4.2 贮存：

4.2.1 将购来的试管斜面菌种放入冰箱中冷藏（4-6℃）保存。

4.2.2 将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中保存。

4.2.3每支保存菌种需标明菌名、统一编号、接种日期。

4.3 传代和接种：

4.3.1 试验用菌种一般每两月传代一次，在阳性菌检室内进行传代和接种。

4.3.2 先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作，烧灼接种环。

4.3.3 再将原有的菌种斜面培养基(简称菌种管)与待种的新鲜斜面培养基(简称接种管)，持在左手拇指、食指及中指之间，要注意能清楚地观察到斜面，菌种管在前，接种管在后。应斜持试管呈450角，使试管内斜面向上，两试管口平齐，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

4.3.4 首先，以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种时易于拔取。再以右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红，以彻底灭菌。环以上凡接种时可进入试管的部分，也应通过火焰烧灼。烧灼时，应把环置于酒精灯的外焰上，因外焰的温度比内焰高，容易烧红。

4.3.5 使用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔出两支试管

的棉塞，持住。再将试管口在火焰上通过，以杀灭管口可能沽污的细菌，但勿烧烫。

4.3.6 先将烧灼过的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，如印则表明接种环未冷却，能烫死细菌。一定待冷后，再从斜面上挑取菌苔少许。取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上轻轻划线接种。划线时一般先由下而上划一直线后，再由下而上划曲线，操作过程应迅速，勿使菌苔沾至管壁或管口。

4.3.7 当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上棉塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的棉塞。最后将接种环烧灼灭菌放置原处，再把可能未塞紧的棉塞塞紧，即可进行培养。

4.3.8操作过程中，如因不慎使棉塞触及火焰而着火，切勿用口吹，须在刚刚着火时迅速塞入试管，因管内氧气不足会很快熄灭。若棉塞外端着火，可用手捏熄。若棉塞烧坏不宜再用，可另取未接种斜面培养基上的灭菌棉塞，代替塞上。

4.3.9 传代和接种使用后，应记好记录。

5、菌种保存温度与时限：

细菌：多用普通肉汤琼脂或根据菌种规定选用培养基,保存温度4-6℃, 传种时间为芽孢杆菌3-6月，其它每个月。

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