翡翠贻贝肾CYP4基因表达受多氯联苯影响的研究

[目的]了解多氯联苯(PCB)对翡翠贻贝肾中细胞色素P450第4亚族(CYP4)基因表达的影响。[方法]从野生翡翠贻贝cDNA中扩增得到了翡翠贻贝CYP4基因和β-actin基因的部分cDNA序列,并根据所得序列设计定量PCR引物,以β-actin为内参基因,以SYBR Green I为荧光染料,利用荧光定量PCR对经PCB暴露处理后的翡翠贻贝肾中CYP4基因表达水平进行定量测定。[结果]PCB暴露处理对翡翠贻贝肾中CYP4

维普资讯

安徽农业科学，ora A hi Junlf nu o

.c.0 83 (2:48—92 Si20,62 )9 1 42

责任编辑

张杨林

责任校对

卢瑶

翡翠贻贝肾 C P Y 4基因表达受多氯联苯影响的研究周驰1, 2李纯 ,厚张为民，晓 贾平(. 1中国水产科学研究院南海水产研究所，广东广州 500; . 1302上海水产大学，上海 20 9; . 000 3中山大学水生经济动物研究所，广东广州 50 7 ) 1 5 2

摘要

[目的]了解多氯联苯(c ) P B对翡翠贻贝肾中细胞色素 P5 4 0第4亚族(口 )基因表达的影响。[方法]从野生翡翠贻贝e N D A中扩

增得到了翡翠贻贝 C P基因和￣ c n因的部分 e N Y4 -t基 ai D A序列，并根据所得序列设计定量 P R引物，￣ c n内参基因， S B r n C以 -t为 ai以 Y RGe e

I为荧光染料，荧光定量 P R对经 P B暴露处理后的翡翠贻贝肾中 C P基因表达水平进行定量测定。[]利用 C C Y4结果 mS暴露处理对翡翠贻贝肾中 C P基因的表达有明显的诱导作用， Y4并且这种诱导作用对 C P表达水平的影响与 PB暴露处理的时间以及浓度有相关性。 Y4 C 『结论]该研究为 c 基因作为生物大分子标记物在环境监测领域的应用提供了分子生物学水平的支持，时为海水双壳类动物体内同cP Y 4基因功能的研究提供了有益线索。 关键词多氯联苯；Y 4因； cP基生物大分子标记物；翡翠贻贝；荧光定量 P R C 中图分类号￥ 4 . 2 9 44 文献标识码 A 文章编号 0 1— 6 12o )2 048 0 57 61 ( 82— 9 1— 5 o●

Sud i Efe to t y Ol f c fPoy ho ia e p e ysOlCYP n p e so i r a vrd￥ Kin y lc lrn td Bih n l l 4 Ge eEx r sin n Pen/// d e

Z HOU C i t l (ot h aSaFsei tue C ieeA aer o i eySi es G aghu5 00 ) h ea SuhC i e i r sI i t, h s edn fFs r ce e, u￣o 130 n h e u t s n y h n n

A src『 bete" ma ie oko et ep

l hoia dbpeys(C )o h xrsi ee f Y 4(y e r 4 0sba i b t t O jci]3 es yam dt nwe c oy lr t ihnl P B nteepes nl l C P ct ho P5 fml a v h f h c ne o v o o me u y

4 eenPr r/k ny[ e o] ai N qecs f Y 4ad -cng e e tndhog pfao wl P v is D )g e av/s i e. M t d Prae As une oC P￣ t n ro a e r ha lctno i . i ic— ni n/d d h tlD e n a i e w eb i t u m i i f d i r d N n w i a t e un t i￣ C r e w r d s n b s t tn N q ee e Wi￣ cn ee s f n gn ad A a o a s feli a t t e Rpi r e i e o a d f e b i c As une . t - t n r e￣ ee dt p ro r—m q i v P a m s e e gd n e o h o a e D d e s h a ig a e r e nS R e n Ia h u rse td e .te ep eso e e fte CY 4 g n rm .vr￣ i e￣ u h P B x o ue t ame tw r ee mn d YB Gre te f oecn y s h x rsin lv lo P e efo P s l h// skd y t d n g C ep sr r t n e d tr ie e e

qat te yu g ur cne u t te C . Rs t P Be ou emet a vu dco e xr snle o t Y 4gn unti lb s o sec qa ii R[ ed] C psr ta a do i snutno t p so vl eC P ee i vv a n l i f e n t vP a t x er n h b o i i nh e e i e h fto P. Drds kd e n i d cinrlt ee e t fep eso ee fteC 4 gn d tet d cn n.o CB e p sr rame t Y m i// i y a d t si u t eae t t f c x rsin lv lo h YP e ea i a o c n h n o d oh o n h men fP x o uete t n .

『

ui]T i rs rhp i emo cl il yl e upr f p lai fC P eea ioi m l ua akri eevr m n l S n hs ee c mvd t l ua boo vl p oto api tno Y 4 gn bo gc oe lrm re t n in e t o a d e h e r g e s r c o s l c n h o a

mo i rn e n s rvd sflcu st td efn t n o YP gn rm e w trbv v i 1 nt igf l a d a op oie u eu le os y t u ci fC 4 e efo sa ae ia ea ma . o id l d u h o l n

Ke od Plcl i t i ey P B;C P ee Mamm l uebo re;P ravii;nursec uni teP R yw rs o ho n e bp nl C ) Y 4gn; e o l i kr e ids y r ad h s( c e ma n r oe neqatai C e t v

细胞色素 P5 (Y )系是一个超基因家族，遍存在 40G P酶普于脊椎动物、椎动物、物等各类生物中_,无脊植 l参与多种亲 j脂外源物和内源物质在生物体内的转化与代谢过程，毒在解和激活食物链中的卤代、卤代烃中起着重要的作用L。细非 2]胞色素 P5第 4 40家族 (Y 4是细胞色素 P5家族中亚族之 C P) 40一

分子标记物的测定是更为高效且可靠的环境污染监测指

标。而相对于其他生物大分子标记物， 1 4污染物敏感基因 的表达水平 (R A水平 ) mN是更为灵敏且准确的污染物检测指标_j为了解 P B对翡翠贻贝肾 C P基因表达的影响， 1 l。 8 C Y4并进一步探讨将翡翠贻贝肾 C P基因作为 P B Y4 C毒性效应的生物大分子标记物监测环境中 P B C污染状况的可能性，笔者在实验室内对翡翠贻贝进行了不同浓度的 P B C暴露试验，以翡翠贻贝的主要解毒器官肾脏为研究对象，应用荧光定量 P R C技术对空白对照组以及 P B 24处理后的翡翠贻贝肾中 C 15 CP Y 4基因的表达水平进行了定量测定。1材料与方法

,

在各种生物中广泛存在 _。已有研究表明，Y 4因与 3 j CP基

哺乳动物的内源物质代谢有关 _; 4与

节肢动物的脱壳类固 醇的生物合成有关 l并且参与多种昆虫的解毒机制 l 1。; -作为具有致畸、癌、突变作用和类雌性激素作用的一类致致持久性的有机污染物 (O s、氯联苯 (C ) P P)多 P B能够在海水及海底沉积物中累积，可以通过食物链传递和富集，并威胁人类的健康和生存H。C P Y家族的一些成员可受 P B等有机 C污染物的诱导，是生物对不利生存环境的一种适应机这制u。目前针对 P B引 C对脊椎动物体内 C P Y系统的研究工作已有很多 u J对无脊椎动物尤其是海水双壳类动物中 ,但 C P系统的了解却十分有限。尽管在脊椎动物中 C P Y Y 4的表达受 P B的诱导作用并不明显 _但有研究表明， C l引，在不同生物中受污染物诱导作用的 C s P Y家族成员有可能不同[]且 1, 0有研究报道在一种海水双壳类紫贻贝 (以 gl r i ao on l v- p c l)隆得到了 C 4因片段，达可能受环境中污染 ii克 as P Y基其表物的影响_ 1。翡翠贻贝 ( e avis属于海水双壳类， Pm r i id )对 P B环境污染物具有很高的耐受性，常见的环境污染指 C等是

11材料 .12方法 .

试验用翡翠贻贝均采自广东惠州大亚湾 (于位

南中国海北部)体长为 6 l左右。, 0 T ml121翡翠贻贝总 R A提取。 .. N所有翡翠贻贝组织样品在活体解剖取样后立即用液氮速冻，样品保存于一 0 8℃待用。总 R A提取时， 1 g N取 0 m保存于一 0℃的组织样品，照 T I 0 8按 R— z试剂 ( vr e公司 )提取总 R A得到的总 R A用适 0 l I io n n tg法 N, N

量 D P处理过的无 R a水溶解后保存于一8℃。 EC Ns e 0利用紫外分光光度计测定所有 R A样品在 202020和 30n N 3、6、8 2 m的 0), 1值计算所得 R A的含量和纯度。应用于研究中的所 N有 R A样品均达到 O o O s大于 18且小于 20的要 N D￣/ D2值 o .:

示生物，与污染物在生物体内的富集量测定相比，生物大基金项目科技部科研院所社会公益研究专项(05 I300; 20D B J )中央 2

求。每个 R A N样

品均取 1进行 1 %琼脂糖凝胶电泳，确认紫外分光光度计测定所得 R A浓度的准确性。 N12 2基因 c N .. D A片段克隆。

级公益性科研院所基本科研业务费专项资金 (国水产科中’学研究院南海水产研究所 )资助项目(07 D 8。 20Z 0 )作者简介周驰 (94一 )女， 18,江西九江人，硕士研究生，究方向：研海洋渔业生态环境保护。 *通讯作者，究员， .alss h研 Em i cl : c@ rp. 6 t m。 i 1 3. o

()TPR对野生翡翠贻贝活体解剖取样后立即进行 1R -C。总 R A提取， N以翡翠贻贝总 R A为模板进行 c N N D A第一链

的合成：翡翠贻贝消化腺总 R A5,取 N 加入 1 1 m o L 0 ml /的 3端引物 B LA:' G C C C T G C A T C( )3和 1 R - 15- C A G G C A T G A T一 G

收稿日期

20.52 0 80.1

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/fzue.html