pH值对绿色木霉(Trichoderma viride)产纤维素酶的影响

第3 8卷第 5期 20 0 8年 1 O月

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Vo 8 No 5 l3 . Oc .2 0 t 08

I d sra i o ilg n u ti M c b oo y l r

p值对绿色木霉 ( rco emavrd )纤维素酶的影响 H T i d r iie产 h耿冰，郭美锦，张嗣良，王永红，储炬，庄英萍 (东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，海 2 0 3 )华上 0 2 7

摘

要

采用微晶纤维素为唯一诱导性碳源，对绿色木霉 ( r￣ Ti c

vr e在摇瓶发酵过程中 id ) i

控制与不控制 p产纤维素酶进行比较。控制 p时胞外蛋白浓度为 07 gn比不控制 p时提 H H .2m/￣ H高4%; AE C 3 H)、 G、 B和 C H酶活为 1 .u/ L,2 .U/,.5 m 0 8 U/ L分别是不控制 p B 50 m 10 0 mL 17 U/ L,.5 m H

时的 2 1231. .、.、17和 17。在不同 p下测定纤维素酶液各酶活，明 p .倍 H表 H值显著影响纤维素酶各单酶酶活。在 p 2 7时， H .葡萄糖苷酶酶活仅为 p 4 8时酶活的 4 p回调试验结果表明葡萄糖 H .%;H 苷酶对 p H敏感，并在催化功能上发生不可逆变化。对纤维素酶液添加分离得到的各单酶，当添加 p葡萄糖苷酶时最多可以提高 m酶活 2%。因此葡萄糖苷酶是影响综合酶活的关键酶。通过拉 0

曼光谱检测出葡萄糖苷酶在 p 5 0有活性状态下， H.酶蛋白主链结构主要为 a螺旋和无规则卷曲； -在p 2 0没有活性状态下， H .酶蛋白主链结构的无规则卷曲发生较大变化，旋也受到一定影响。这说 螺

明 p对葡萄糖苷酶构象的改变是造成其活性变化的主要原因。 H 关键词：葡萄糖苷酶；拉曼光谱； p控制；纤维素酶 一 H 纤维素酶的产生菌主要有木霉、青霉和曲霉等，

量摇瓶发酵试验中，现发酵过程 p的降低与菌发 H体浓度 ( MV) I葡萄糖苷酶活 ( B酶活 )变化 P及 3一 C )密切相关。有文献报道，发酵过程控制 p可以如 H

其中绿色木霉 ( r kdr avr e被认为是最好 T i oem id ) c i的纤维素酶产生菌之一，产生的纤维素酶系比例其适当，以有效地酶解纤维素类物

质。真菌纤维素可

调解菌体产酶【; 8通过添加缓冲液控制发酵过程 p H值在 6 0左右，以提高 j萄糖苷酶酶活 .可 3一葡。 本实验室分离得到了 C H、 G和 C B E B酶单组分， 这为分析发酵过程限制性酶提供了可能。为此，本文通过 p控制发酵，酶添加试验和拉曼光谱， H单对

酶系降解纤维素被认为是内切葡聚糖酶 (noJ1 ed——, 34g cn s, G, C 3 2 1 4,切纤维素酶 ( x- -l a ae E E . . . )外 u eo t14gua ae C H, C . . . 4和 j葡萄糖苷 3,-lcn s, B E 3 2 1 9 ) 3 -一酶 (—,-lcs aeC E . . . 1协同作用的 81 4guoi s, B, C 3 2 1 2 ) d结果引。内切一外切协同性 (n oeosn ri ’ e d—x - egs y m)一

p H值影响绿色木霉 ( r hdr iie发酵产 J T i oemavrd ) c 3一葡萄糖苷酶 ( B)和纤维素总酶活进行研究，步 C初分析其影响机理。

般认为是一种酶反应的顺序机理 _ ' 3。纤维素 '

酶系对纤维素的降解过程是个复杂的多酶反应过程，反应不仅有多酶的吸附、离、涉及到底物、其解还多种产物的抑制 (主要是纤维二糖，萄糖 )葡。因

1材料与方法1 1菌种 .

此对纤维素酶解过程进行调节和控制相当困难，发

酵得到的纤维素酶活普遍不高。由于纤维素酶是诱导酶，培养过程中存在葡在萄糖阻遏作用和碳源的诱导性影响， 7 同时发酵过程培养条件如 p温度、拌、气等多种因素影 H、搅通响，也造成纤维素酶发酵水平不高。本实验室在大基金项目：市科委重大专项 ( 5 1 3 6。上海 0 DZ 92 )

绿色木霉 ( r hd r avr e, T i o em i d )本实验室保藏 c i1 2试验仪器 .

酶标仪 ( h m lsa T e oMut k nMK3, H摇床 ( i )p可自动控制 p上海国强生化装备有限公司) H,1 3培养基 .

作者简介：耿冰 (98,, 1 7~)男博士研究生，研究方向：微生物代谢调控。E—m i h g g2 2 6 .on al b yb 0@1 3cr。:*讯作者，通 E—

mal iag@ euteu c。 i lnz c s.d n:si一

1一

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13 1斜面培养基 ..

解反应中每小时催化底物水解形成 l mg葡萄糖所

修改过的 Madl配方(/ )I-p, ., nen s gL: I o 2 0￣2C c2 2 0 0 4 Mg O H2 0 3, NH )S 4 a l。H2 ., S 4 7 . (, 2 O O

需酶量为 1单位 (。 u)外切葡聚糖酶活(B: C H)表征纤维素酶组分外切酶活力，按文献进行 n。以对硝基苯酚纤维二糖 n r hn l - cl i i ( N N, i a公司 )底 io ey 1 eo o d p I2 S m tp - D- lb s e 3 g为

2 8 Ura .;量元素液 (/ ) F S 4 7 ., e0 3微 mgL: eO H2 O5 0 Mn O4H2 ., n O‘ 1 O 14 C Cz .; ., S O 16 Z S 474 ., o l 0 2 2

微晶纤维素 1 w/)琼脂 2 w v。%( v,%(/)1 3 2种子培养基 ..

物，用酶标仪测定。1酶活单位 (定义为：反应条 U)在件 p 4801moL醋酸缓冲液 )5℃恒温 1, H .(. l/,0 h以水解反应中每小时催化底物水解形成 l N pNi mgp P(-—

不添加琼脂，其余与斜面培养基相同。 133产酶发酵培养基 ..摇瓶发酵培养基在种子培养基中再添加 T e wen

t hn1 mpey所需酶量为 1 )单位 (。 U)1 6 p控制摇瓶发酵 . H

8 .m/, 02 0 LL其余相同。 1 4培养方法 .14 1斜面培养 ..斜面进行孢子接种之后， 8,养 6 d待 2℃培~7,长出绿色孢子之后，贮存于 4冰箱中保藏备用。℃ 1 4 2种子摇瓶培养 ..在 50 0 mL三角瓶中装液量为 5 mL,H4 8种 0 p .,子培养基灭菌后，接种斜面孢子 1 0~1 mL孢×1 0/

在p H摇床上进行此试验。控制 p发酵过程， H摇瓶初始 p ., H4 8设定 p为 4 8, H .0当实测 p H值低于设定 p H值 1%时，自动流加一定量的预先备好的

l l O调节 p mo LNa H/ H。不控制 p发酵过程做为 H对照，瓶初始 p 4 8摇 H .。每 2 h从 p摇床

摇瓶上 4 H

的取样口，取样 1mL做进一步分析。 0,17不同 p . H值对纤维素酶各组分酶活的影响发酵得到的发酵上清液， l l 0调用 mo/ Na H L p至 2 42 7 30 3 9 48 5 8 7 02℃保温 1 H .,., .,.,., .,.,8 h之后按测定方法测定各酶活 ( H . )以调节， p 48, p . H4 8条件下测定的酶活和蛋白浓度为 1 0 0%。 p调回试验： p P. H在 i_7和 p .件下，8 . H2 4条 2℃

子，8,5 r n培养 4￣4 h 2℃ 10/, mi 0 8。 143发酵产酶培养 ..初始 p 4 8灭菌后，种 1%种子液，8, H .,接 0 2℃ 培养 5￣6。 d d1 5试验测定方法 .

保温 lh之后， Na H(0回调 p 用 O 1%) H值至4 8再 .,保温 1h测定各酶活。 以标准 j葡萄糖苷酶 ( B)自 Sg a公司 3一 C购 im ( . 1I mg来源苦杏仁 )配成 0 1 gmL溶液 7 2 U/,, .m/进行以上 p H值试验，为对照。作1 8添加纤维素酶单酶对纤维素酶酶活影响试验 .

1 5 1茵浓 ( ak dmye u v l, MV) . . P c e cl m ou i me P 在发酵过程取 1mL发酵液， 0 0/ i心 0 4 0 r n离 a r

1mi, 0 n测定其固体沉淀体积，换算为菌体占取样体积的百分比为菌浓 ( MV)上清液作其它分析用。 P,1 5 2上清液蛋白浓度 ..

采用考马司亮蓝法 n。引1 5 3上清液还原糖及酶活测定 ..

发酵上清液 ( H4 8经透析袋浓缩后得到浓缩 p .)

液，适当稀释为 A液。A液稀释 1倍得到 B液。再 B液稀释 1得到 C液。A液蛋白浓度为 B液的 1倍 倍，的 2倍。 C液 浓缩液经过分离后【得到各单酶组分， B l¨, C H酶 (,4 mg 0 05/ 0 8 U/, . 2mgmL) E酶 (7 3 n,,G 4 .U/g a 0 05/ .1mgmL)C,B酶 (.7 rg 00 1/ ) 86 u/,.1mgmL。 n以 C液不添加单酶时测得各酶活为对照。B液

还原糖测定：采用 D NS法 _ 1。

综合滤纸酶活力 ( P: F A)表征纤维素酶综合酶活力，文献进行【 按 1

。

内切葡聚糖酶活 ( G)表征纤维素酶组分内切 E:酶活力，文献进行‘ 按 1。 B葡萄糖苷酶活 ( B测定：征纤维素酶组分一 C)表

l 3葡萄糖苷酶活力，按文献进行n 。以上三种酶活均为扣除发酵上清中还原糖浓度后计算得出，活单位 (定义为：反应条件酶 U)在

与分离得到的各 C H,G,B单酶溶液等体积混合 B E C后，定各酶活和蛋白浓度。测以 B液不添加单酶时测得 F A酶活为对照。 P

p 48 0 1 o L醋酸缓冲液) 5℃恒温 1, H . ( .m l/,0 h以水

分离得到的 C B酶单酶溶液浓缩一倍得到 C 2酶 B

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耿冰，:H值对绿色木霉 ( r h d r iie产纤维素酶的影响等 p T i o emavrd ) c

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液，蛋白浓度为 C B的一倍。A液与 C B酶液和 C 2 B酶液分别等体积混合后，测定各酶活和蛋白浓度。1 9 p葡萄糖苷酶拉曼光谱分析 . .采用本实验室分离得到的 j葡萄糖苷酶，度 3一浓为 01/ .mgmL的水溶液。取酶液在 p 5 0和 p 2 H . H . 0下进行拉曼光谱分析。 样品的拉曼测试均在室温 (2 ) 2℃下进行。采用英国 R nsa公司生产的激光显微拉曼光谱仪， ei w h型号 ( Vi十R f x .发激光波长 7 5 m, i a e e )激 n l 8 n出射功率 30 0 mw。每个样品都重复扫描 3次以上，样品的各拉曼谱图都由计算机作信号累加平均并绘图输出， 峰位误差小于±3m~。 c图2 E C G、 B与 C H酶活随时间的变化 B—— c n r lp—一 o to H. ‘ ’’wi o tp c n r l t u H o to h—

凸_ EG

— o— CB

—

CBH

2结果与讨论21 p . H值控制下纤维素酶发酵结果对 T, i d vr e进行 p控制与不控制的纤维素 i H酶发酵试验，结果如图 1 2,。

2 2 p对纤维素酶各单酶酶活影响 . H

通过 p H控制提高了 C B酶活，进了菌体生长，促

而使 F A酶活提高， P但纤维素酶是多组分酶，需进一步确定 p I 4是对哪一组分起到了作用。对发酵得到的纤维素酶液， Na H调节 p为 2 4 2 7 3 0用 O H .,.,., 3

9 4 85 8 7 0测定 F A、 G、 B C H酶活和蛋 .,.,., ., P E C、B白浓度， p以 H为 48时测定酶活 F A, G (,B . P E, t C H酶 2 3活分别为 1 . U m,2 u mL 1 7 U r, .5 u 5 0/ L 10/, . 5/ L 0 81/ n mL和蛋白浓度 07 m/ U为 10k,,,2 gm 0 o结果见图 3。

图 1上清液蛋白浓度和 F A酶活随时间的变化 P—— c n r lp ‘’—一 o to H.。’wi o tc n r l H t u o to h p-- -

o- Pr t i - oen

F A P

十

p H

随着发酵的进行不控制 p时，H在 4即 H p 8h后

下降到 30以下。当控制 p . H时，菌体浓度 P MV提高到 3 .%是不控制 p时的 2 .%的 12; 35 H 75 .倍蛋白浓度为 0 7 mgmL比不控制 p时的0 52/ .2/ H .0 mgmL提高了 4%; P 3 F A酶活为 1 . U/ 5 0 mL是不控制 p时的 7 2 mL的 2 1 ( 1。 H .U/ .倍图 )图 3不同 p值下 F A, G, B, B酶活 H P E C C H---

t- F A—o E 3 - P - G

—

CB

十

CBH

由于不同蛋白的等电点各不相同，同 p值不 H

时 H度不同对蛋白的离子分布和微观结构影响浓不同而引起酶活性的变化。由图 3可知： p值当 H小于 4 8时，H值愈低对纤维素的 E C H和 C . p G、 B B

发酵结束时 E C,B酶活分别为 10 HL G,B C H 2U/1, 17UmL,.5U/, .5/ 08 1 mL是不控制 p值时的22, H .倍 1.和 19 ( 2, C 17倍 .倍图 )而 B酶活提高最多，明说p H值对 C B酶活影响比其它二个酶活影响更大。因此p H控制有利于细胞生长和酶蛋白产生。一 j

等酶活影响愈大， C而 B酶活降低最显著，H在 24 p .处理时 C B酶活则只有 4%左右酶活存留。p H值高于 4 8处理时， G和 C H酶活均在 9%以上， . E B 0而一

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C B酶活在愈高 p H值下酶活亦愈低，酶活仍维持但在 8%以上。因此低 p 0 H值对纤维素酶液的 E和 G C H酶活有一定影响， B而高 p处理几乎

无影响； H但对于 C B酶活，论低 p还是高 p处理均显著降不 H H一

表 3纤维素酶各单酶组分添加对各种酶活的影响P oen r ti C H B E G C B FP A S eil P p c F A a

ra nn m ) (/ ) u m ) uⅡL (/ l) (/ ) eⅡ e ( L u mL (/ L (/L) u I u T L

低，说明其活性对 p H值很敏感。 表 1 p值回调对发酵上清纤维素 H酶各组分酶活的影响Pr ti o en F A P EG CB CB H

B液添加 C B酶之后，除了 C解 B酶的限制，可能使 C H酶或者 E酶成为限制性酶， A液中 B G而C H酶和 E B G酶浓度是 B液中的一倍，因此在 A液

p 2 4 . ( 6 H .~4 8 9 ):

9 . 26

4 . 22

9 . 22

22 .

8 . 75

!:兰！二！

!:

丝： !: !

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塑：

中添加 C B酶之后， P酶活提高到 2 2 1比不添 FA .7,加时提高了 1 .%, 5 1比酶活增加到 2 .U/ g而当 24 n; a A液中添加蛋白浓度高 C B酶一倍的 C 2酶时， B F A酶活就提高到 2 3 9提高了 1 .%, P .5, 9 6比酶活达到 2 . mg( 4。然而，可以看到 C 3 1U/表 )也 B酶

表 2 p值对标准 B H一葡萄糖苷酶活的影响

为了进一步考察 p H值变化对纤维素酶蛋白结构与催化功能的影响是否具有可逆性，行了 p进 H回调试验分析各酶活。试验结果 ( 1表明 E表 ) G和 C H酶活分别恢复到对照的 9%和 8%以上， B 2 7而 C B酶活几乎丧失，合 F A酶活也只有 4%左综 P 0右。与此同时，购自 Sg用 ima公司的标准{~葡萄 3糖苷酶进行 p试验，出现了类似的结果 ( 2。 H也表 )因此，B酶活性对 p值十分敏感，变性具不可 C H并逆性。这可能是在酸性条件下，浓度可以影响口 H一

蛋白浓度增加了 1倍， F A酶活却只增加了但 P

45 .%。由于葡萄糖是 C B酶抑制物",]纤维二糖能强烈抑制 C H酶的活性。纤维二糖可结合在 B] C H酶活性部位附近的色氨酸残基上形成“阻效 B位

%

应”从而阻止纤维素分子链进入活性中心。同时，,C H酶分子构象发生较大变化，使吸附纤维素后 B致不能导致微纤维的分离，而成为“无效吸附”。添加 3 J一葡萄糖苷酶之后，随着酶解反应的进行，萄糖葡

∞∞ m¨

的积累必然抑制 8一葡萄糖苷酶的活性，造成纤维二糖的积累，而抑制纤维素酶各酶的活性，成进造F A酶活提高不多。 P袁 4添加 C B酶 F A酶活变化 P

葡萄糖苷酶位于活性位点的色氨酶残基微环境，勰勰勰∞

使酶分子构象发生了变化，影响酶与底物结而合 u也可能因∞H值的变化对酶蛋白结构造成改 ; p虬%∞变，形成了不可逆变化，以酶活没有得到恢复。所2 3添加纤维素酶各单酶组分对酶解作用的影响 .

为了确定纤维素各单酶组分对本试验分离的纤

维素酶总酶活的作用，因此进行各酶添加试验。 在 B液中添加各单酶，然各种单酶蛋白浓度虽和酶活并不相同，但是添加之后的各酶活都比不添加时有所提高 ( 3。添加 E表 ) G酶后，虽然 E G酶活提高了 9 1但 C H, B与 F A酶活没有明显增 .%, B C P加；添加 C H酶，G酶提高了 7 4, C B E .%而 B酶活没

通过以上分析，为 8认一葡萄糖苷酶在发酵得到的纤维素酶系中是限制性酶，系中添加 p酶一葡萄糖苷酶单酶可以提高 F A酶活；外添加过多的 P另

酶，分解底物后产生的葡萄糖会产生较强的葡萄糖阻遏效应，者添加的 8一葡萄糖苷酶解除了其自或 身的限制性作用，得外切酶或内切酶成为限制性使酶，得 F A酶活不能提高更多。在发酵的动态过使 P程中，过 p控制，方面 p的变化改变一萄通 H一 H葡

有明显提高，P F A酶活提高 6 5当添加 C .%; B酶，可以有效的减少纤维二糖的对 C H酶的抑制作用， B

进而提高 E G酶活，而使 F A总酶活也相应提高从 P了 1 .%, P比酶活由 1 . U/ 11 F A 9 3 mL提高到 1 . 98

糖苷酶构象，而提高其酶活，P酶活也相应提从 FA高，进底物水解；促另外一方面菌体利用底物水解产生的葡萄糖，以解除积累葡萄糖的抑制，而保证可从

U/

。由此也可以看出纤维素酶各组分酶之间酶 mU解纤维素时存在协同作用。——

‘— i—

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耿冰，:H值对绿色木霉 ( rcoem iie产纤维素酶的影响等 p T i dr avr ) h d酶构象变化，稳定性下降。

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整个酶系对纤维素的酶解，而促进菌体生长，生进产更多的酶蛋白。

在 p . H 5 0时酪氨酸在峰位 8 1c的峰强明 5 m

2 4 p葡萄糖苷酶拉曼光谱分析 . .对 p . H 5 0和 p 2 0两种情况下的 l葡萄糖苷 H . 3一酶拉曼分析，图如图 4其拉曼频移和归属指认见谱，表 5引。 E

显低于 8 4 m的峰强，得 j5,3< 1而在 3c 可 8/ 0 0;

p 2 0时其在峰位 8 3c 1峰强明显高于 83 H . 4 mI的 3c的峰强，得 I5 I。 1 m可 8/≥。由此可知，一萄 o,葡糖苷酶溶液在 p 5 0时酪氨酸为“藏式”当 H .埋， p .为“ H2 0时暴露式”。在色氨酸残基的一系列谱带中，3 4c的峰强在 p 5 0比 p 2 0时明显高 1 6 m H . H .出很多，而且是尖锐的峰形；H ., p 2 0时峰形变为不明显的平峰。可见在 J葡萄糖苷酶在 p . 3一 H5 0时色氨酸为“藏式”而在 p为 2 0时是“露式”埋， H .暴。拉曼光谱检测出 8葡萄糖苷酶在 p .活一 H5 0有性状态下，酶蛋白主链结构主要为 a螺旋和无规则一卷曲； p .有活性状态下，蛋白主链结构在 H2 0没酶的无规则卷曲发生较大变化，一 a螺旋也受到一定影

图 4p 50 p 20 H .和 H .下葡萄糖苷酶的拉曼光谱图() p- .; a:t o I 5 ( )p 2 0 b:H .

响。这说明 p H对 J葡萄糖苷酶构象的改变是造成 3一其活性变化的主要原因。

表5 p . H5 0和 p . H2 0下 j葡萄糖苷酶的 3一拉曼光谱图和特征频率归属

3结论J葡萄糖苷酶是绿色木霉发酵产纤维素酶系中 3一的关键酶组分，其酶活对 p H值敏感，最适 p在4 8 H .

左右，酶活催化功能因 p变化而发生不可逆改其 H变。通过控制发酵过程 p可明显提高菌体浓度和 H胞外蛋白浓度，分别达到

3 .%和 0 7/ 35 .2mgmL,比不控制 p值时分别提高了 2 .%和 4%; G、 H 18 3 E C C H和 F A酶活分别为 1 0 0 mL, . 5 B、 B P 2 . U/ 1 7 U/在 p . H 5 0的 j葡萄糖苷酶溶液中， 3一酰胺 I谱带出现在 1 4 m和 16 m~, 6 5c 6 6c酰胺Ⅲ谱带分别出现在 1 4 r和 1 8 m ( 4。由此表明， 20c n 2 1c图 )在溶液中 p . H 5 0的 J葡萄糖苷酶主要含有 a螺旋结 3一一

mL,.5u/ 1 .u/ 0 81 mL,50 mL是不控制 p值的 2 3 H .倍、 1 7、 .和 2 1。酶系中添加 J葡萄糖 1 .倍 1 7倍 .倍 3一苷酶单酶可以提高 F A酶活。发酵的过程中控制 P p改变 I葡萄糖苷酶构象，高其酶活， P H, 3一提 F A酶活也相应提高，底物水解提高，菌体利用底物水解产生

构和无规则卷曲结构 ( 5。在 p 2 0的 j葡萄表 ) H . 3一糖苷酶溶液中，酰胺 I带出现在 1 5 m~,谱 6 8c酰胺Ⅲ谱带分别出现在 1 8 m~。而在 p .出现 2 8c H5 0时的酰胺 I带 1 6 m和酰胺Ⅲ谱带 1 4 m谱 6 6c 20c并没有很强的吸收峰。这两个谱带正是无规卷曲结构对应的谱带，明在 p .时候，一葡萄糖苷说 H2 0的 8

的葡萄糖，除葡萄糖的抑制作用，而保证整个酶解从系对纤维素的酶解，进菌体生长并产生更多的酶促

蛋白。通过拉曼光谱检测了 8葡萄糖苷酶在 p 50一 H .和 p 2 0两种情况下的光谱图。实验结果表明在 H . p . H5 0有活性状态下，蛋白主链结构主要为 a螺酶一旋和无规则卷曲； p .有活性状态下，蛋在 H2 0没酶白主链结构的无规则卷曲发生较大变化，一 a螺旋也受到一定影响。说明 p对 8葡萄糖苷酶构象的改 H一变是造成其活性变化的主要原因。

酶中无规则卷曲结构被破坏了。在 p . H 2 0的 J葡 3一萄糖苷酶溶液中主要含有 a螺旋结构。p一 H值从 5 0 .

到 2 0的变化使 B葡萄糖苷酶的结构中的无规则卷 .一曲结构受到很大影响，一 a螺旋结构也受到一定影响，

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物Bic e . otc o,2 0 1 3~

1 6 o h m Bi eh l 0 4; 1 n 1

第 3 8卷

参

考

文

献

T m s . A i y a Ka czy Ol o iaepo u t n a a , n t Tg h￣, r Re e . J a l u s s rd c o c d ib Trco e ma y ih d r n, Ap l o hw i oehn l 0 5; p Bic ens Bit c o,2 0 21

[] BssaV 1 iai S,Gh s K .Bid galt n o ellscmae as o eT o e rc i fcl o i tr l: ao u isb tae,mirog ns s n y sa dp o u t.En y eMi u sr ts c rai o m,e z me n rd cs zm —

(2 )2 3 2 4 14,4 - 5

谌单，郭美锦，庄英萍.氏木酶纤维素复合酶纯化和酶学性里质研究，应用与环境生物学报，07 6 2~2。 2 0,:4 7Ma d sM, b r . e r u t n o l h eA vC a S r nd We Th o ci f e u s d h C, e J p d o cl m1 6 9 3 1 41 9 9, 5: 9~ 3 Br d o dM M .A a i n e s t eme h df rt eq a t a oa a fr rpda dsn i v i to o h u ni t zi

co c nl1 8, ( )9~1 4 rbTe o,9 1 3 2:0 0 hy a y sn Cel o eh d o— u [ Niez yB, tie 2] d tk S en rS,Ha nM,Cle se sM . l ls y r l y i y t e uae r￣ ih d r es: e mo e fr ssb hecU ls fcn Trco e ma red an w d l o s

sn r i i it a t n B oh m 1 9 2: 0 - 7 0 y egs c ne c o, i e J, 9 4, 9 7 5 1 t r i c

[ 3]

Res T. oya e aae a d te h doy fislbe s b eeE P lseh rs n h y r lgso nou l u—sr ts r cS s, 9 6,6: t￣ e .P o s 1 7 c 9~ 1 2

o mirg a q a tf fpoen i n ep n il fpo- f co rm u ii o rtisut n s e￣ g t r cpeo r h i ri- y idn

en d ebn i g,An lBo h m, 9 6, 2: 4 -25 a ic e 1 7 7 2 8- 4

[ W 4]

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