QIAGEN DNeasy Blood& Tissue 试剂盒说明书（翻译版）

使用前注意事项：

? 所有离心操作在室温（15℃-25℃）下进行 ? 沉渣用Buffer AL和Buffer ATL重溶

? 在浓缩的Buffer AW1和Buffer AW2中加入乙醇 ? 冰冻组织和细胞球在室温下平衡 ? 在56℃孵育箱中预处理

? 固定组织、昆虫、细菌或其他材料的预处理请参见使用手册

1a. 组织：将组织切碎成小块（脾脏≤10mg，其他组织≤25mg），装入1.5ml离

心管中，鼠尾则取1cm（大鼠）或2cm（小鼠）。加入180μl Buffer ATL。加入20μl 蛋白激酶K，振荡混匀，56℃孵育至组织完全裂解，孵育过程中间断振荡。进入步骤2前振荡15秒。

1b. 无核血液：将20μl蛋白激酶K移至1.5ml或2ml离心管，加入50-100μl

抗凝处理过的血液。用PBS调整体积至220μl，进入步骤2。

1c. 有核血液：将20μl蛋白激酶K移至1.5ml或2ml离心管，加入5-10μl抗凝

处理过的血液。用PBS调整体积至220μl，进入步骤2。

1d. 培养细胞：最多可用5×106个细胞，300×g（190rpm）离心5min。用200μl重悬，加入20μl蛋白激酶K进入步骤2

2. 加入200μl Buffer AL，振荡混匀，血标本需在56℃下孵育10min。 3. 加入200μl 乙醇，振荡混匀。

4. 将上述混合物用移液枪移至2ml离心管中的DNeasy Mini 滤柱中，6000×g

（8000rpm）离心1min，弃去滤出液及离心管。

5. 将滤柱放入新的2ml收集管中，加入500μl Buffer AW1，≥6000×g离心1min，

弃去滤出液及收集管。

6. 将滤柱放入新的2ml收集管中，加入500μl Buffer AW2，20000×（g14000rpm）

离心3min，弃去滤出液及收集管。 7. 将滤柱移至新的1.5ml或2ml离心管。

8. 将200μl Buffer AE加至滤柱膜中央以洗提DNA，室温（15℃-25℃）下孵育

1分钟。≥6000×g离心1分钟 9. 优化：重复步骤8以增加DNA产量

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/flpa.html