大肠艾希氏菌的鉴定

大肠艾希氏菌的鉴定

[资料介绍]

随着季节的转暖，人们身边的细菌和病毒又开始活跃起来，各家医院和新闻媒体相继报导了多起春季由于饮食造成的腹泻，人们的饮食卫生问题又再次被提上了议程。本人对全市的几家冻禽供应商进行了抽样检测，用血清学诊断及生化鉴定方法对产肠毒素大肠艾希氏菌进行分离和鉴定，其结果可以说明当今冻离类产品中所存在的问题。

[目录]

[1]GB/T4789-2003 中华人民共和国国家标准 食品微生物学检验

[2]韩秀兰,柳连顺,杜敏,等.致泻性大肠埃希菌病原学分布研究[J].中国医学检验杂志,2001,2(4):258～261.

[3]杨胜彬,胡昌军,米庆秀等.一起肠产毒性大肠埃希菌O6:LT致婴幼儿腹泻爆发的调查[J].中华流行病学杂志,2004,25(11):977.

Abstract: along with the season warms up, the microbe round the people becomes activity, some hospitals and media of news reported much diarrhea cost of food at the same time, the problem of the people's food sanitation has been hanged up in the first position. I check some samples form a few freeze birds accommodate shop in my city, using serologydiagnose and biochemistry method to judge ETEC, the result could show the problem.

Key words: enterovirulent E.coli separate judge 1.样品来源 2.检验项目 3.检验方法 4.评判标准 5.仪器与试剂 结果与分析

[原文]

产肠毒素大肠艾希氏菌的分离和鉴定所需材料与方法

1.样品来源：从本市批发部、超市、另售点等12家供货单位共采取鸡翅、鸡腿、鸡胸、鸡尖、鸡爪、整鸡及鸭头、鸭掌等9个冻离类产品计20件样品。 2.检验项目：致泻性大肠艾希氏菌。 3.检验方法：

3.1 增菌和分离培养：以无菌手续称取检验25g，加在225mL营养肉汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂磨碎。取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN，其余的移入500mL广口瓶内，于36±1℃培养6h。挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌肉汤内，于42℃培养18h。

3.2 分离：将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼

脂平板；污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板，于36±1℃培养18～24h，观察菌落。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。

3.3 血清学鉴定： 3.3.1 假定试验：挑取经生化试验证实为大肠埃希氏菌的琼脂培养物，用致病性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌和产肠毒素大肠埃希氏菌多价O血清和出血性大肠埃希氏菌O157血清做玻片凝集试验。当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血清所包含的单价O血清做试验。如与某一个单价O血清呈现强凝集反应，即为假定试验阳性。 3.3.2 证实试验：制备O抗原悬液，稀释至与Mac

Farland3号比浊管相当的浓度。原效价为1：160～1：320的O血清，用0.5%盐水稀释至1：40。稀释血清与抗原悬液在10mm×75mm试管内等量混合，做单管凝集试验。混匀后放于50℃水浴箱内，经16h后观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。 将培养后的三糖铁琼脂斜面上生长的菌落用侵袭性、产毒性大肠艾希氏菌诊断血清做玻片凝集试验。

3.4 生化试验：

3.4.1 自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁琼脂(TSI)或克氏双糖铁琼脂(KI)。同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。以上培养物均在36℃培养过夜。TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性，KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌......

[参考资料]

[1]GB/T4789-2003 中华人民共和国国家标准 食品微生物学检验

[2]韩秀兰,柳连顺,杜敏,等.致泻性大肠埃希菌病原学分布研究[J].中国医学检验杂志,2001,2(4):258～261.

[3]杨胜彬,胡昌军,米庆秀等.一起肠产毒性大肠埃希菌O6:LT致婴幼儿腹泻爆发的调查[J].中华流行病学杂志,2004,25(11):977.

Abstract: along with the season warms up, the microbe round the people becomes activity, some hospitals and media of news reported much diarrhea cost of food at the same time, the problem of the people's food sanitation has been hanged up in the first position. I check some samples form a few freeze birds accommodate shop in my city, using serologydiagnose and biochemistry method to judge ETEC, the result could show the problem.

Key words: enterovirulent E.coli separate judge

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