菌种保存与活化 - 图文
更新时间:2023-12-31 23:14:01 阅读量: 教育文库 文档下载
- 甘油保存的菌种活化推荐度:
- 相关推荐
菌种保存与活化 (一)培养基保存法
利用各种斜面和半固体培养基,加上石蜡油保存菌种,是一种最常用而又简易的保存方法。 1.普通琼脂斜面保存法:肠道杆菌、葡萄球菌等一般细菌可接种于不含糖的普通琼脂斜面上,斜面底部应加少许无糖肉膏汤,以防干涸。经35℃培养18~24h后,移种于4℃冰箱中,一般可保存一个月,
每月传代一次。
2.血液琼脂斜面保存法:链球菌、肺炎链球菌应接种于血液琼脂斜面上,35℃培养生长后,置4℃冰箱中保存,链球菌须半个月至1个月移种一次,肺炎链球菌的新分离菌株须2~4天移种一次,以后逐渐
延长移种时间,在适应后可延至半个月移种一次。
3.巧克力色斜面保存法:宜保存脑膜炎奈瑟菌,并在35℃孵箱中保存,一般每2天移种一次。 4.鸡蛋斜面保存法:适于保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌,一般可保存一个月。 5.半固体穿刺保存法:将细菌接种于琼脂半固体或血清琼脂半固体内,经35℃培养18~24h,再以
无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm,置4℃冰箱保存。保存时间可达3~6个月。
(二)干燥保存法
原理是将细菌体内的水分蒸发掉,使其处于休眠和代谢停滞状态,从而达到长期保存菌种的目的。菌
种干燥后低温保存,可保存数年至十几年医学教|育网搜集整理。
(三)冷冻干燥保存法
本法又称冷冻真空干燥法。它综合利用了各种有利于菌种保存的因素(低温、干燥和缺氧等),是目前最有效的菌种保存方法之一。用本法保存的菌种具有成活率高,变异性小等优点,保存期一般3~5年,
有的可长达10年以上。
菌种保管要求
2009-11-16 15:32
【大 中 小】【我要纠错】
1.应充分了解每种细菌的不同生物性状及营养要求,以选择适宜的培养基。一般原则是使细菌能够生长而不易变异的前提下,必须选择营养丰富的培养基,一般不用含糖的培养基。液体培养基不适于保存菌
种。
2.培养后最好在细菌尚未旺盛发育之前取出,放冰箱内保存。但应注意,一般细菌大多保存于4℃冰箱中,但真菌,霍乱弧菌、铜绿假单胞菌及粪产碱杆菌需在室温保存。而脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌及初
次分离的流感嗜血杆菌需保存于37℃孵箱中。
3.保存菌种应做鉴定记录。在主要培养基上生长情况、菌落特征、形态及革兰染色或特殊染色反应、
生化反应、血清学性状以及个别菌种需要的动物试验结果等。
4.保存的菌种应有两套,一套供保存传代用,一套供实验用。 5.定期转种,每转种三代作一次鉴定医学教|育网搜集整理。
6.专人保管和发放,严格保管和发放制度。
菌种保藏技术
菌种是主要的生物资源,也是食用菌生产首要的生产资料。一个优良的菌种被选育出来以后,必须保持其优良性状不变或尽可能地少变慢变,才不至于降低生产性能,能长期在生产中使用。因此,菌种保藏在食用菌生产上具有重要的意义。
一、菌种保藏原理
菌种保藏的方法很多,但原理大同小异。首先要挑选优良纯种。利用微生物的孢子、芽孢及营养体;其次,根据其生理、生化性,人为创造低温、干燥或缺氧等条件,抑制微生物的代谢作用,使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态,从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的性状,防止变异。不管采用哪种保藏方法,在菌种保存过程中要求不死亡、不污染杂菌和不退化。
二、菌种保藏的方法
1、低温定期移植保藏法。将需要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上,适温培养,当菌丝健壮地长满斜面时取出,放在3-5℃低温干燥处或4℃冰箱、冰柜中保藏,每隔4-6个月时间移植转管一次,具体应根据菌种特性决定。保藏时要注意环境温度不能太高,以防霉菌通过棉塞进入管内。因此,若用棉塞,可用干净的硫酸纸或牛皮纸包扎棉塞,即可减少污染的机会,也可防止培养基干燥。除草菇菌种外,其他食用菌菌种都能采用此法保藏。
2、液体石蜡保藏法。取化学纯液体石蜡(要求不含水分、不霉变)装于三角瓶中加棉塞并包纸,在1公斤/平方厘米压力下灭菌1小时,再放入40℃恒温箱中数天,以蒸发其中水分,至石蜡油完全透明为止。将处理好的石蜡油移接在空白斜面上,28-30℃下培养2-3天,证明无杂菌生长方可使用。然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待保藏的斜面试管中。注入量以高出培养基斜面1-1.5厘米,塞上橡皮塞,用固体石蜡封口,直立于低温干燥处保藏。保藏时间在一年以上,在低温下,保藏时间还可延长。
3、沙土管保藏法。取河沙用水浸泡洗涤数次,过60目筛除去粗粒,再用10%盐酸浸泡2-4小时,除去其中有机物质,再用水冲洗至流水的ph达到中性,烘干备用。同时取贫脊土或菜园土用水浸泡,使呈中性,沉淀后弃去上清液,烘干碾细,用100目筛子过筛,将处理好的沙与土以(2-4):1混匀,用磁铁吸出其中的铁质,然后分装小试管或安瓿内,每管装量0.5-2克,塞棉塞,用纸包扎灭菌(1.5公斤/平方厘米,1小时),再干热灭菌(160℃,2-3小时)1-2次,进行无菌检验,合格后使用。将已形成孢子的斜面菌种,在无菌条件下注入无菌水3-5毫升,刮菌苔,制成菌悬液,再用无菌吸管吸取菌液滴入砂土管中,以浸透砂土为止。将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内,接上真空泵抽气数小时,至沙土干燥为止。真空干燥操作需在孢子接入后48小时内完成,以免孢子发芽。制备好的沙土管用石蜡封口,在低温下可保藏2-10年。
4、滤纸片保藏法。取白色(收集深色孢子)或黑色(收集白色孢子)滤纸,剪成4×0.8厘米的小纸条,平铺在培养皿中用纸包裹进行灭菌(1公斤/平方厘米,30分钟)。采用钩悬法收集孢子,让孢子落在滤纸
条上。将载有孢子的滤纸条放入保藏试管中,再将保藏试管放入干燥器中1-2天,除去滤纸水分,使滤纸水分含量达2%左右,然后低温保藏。
5、自然基质保藏法
⑴麦粒保藏法:取无瘪粒、无杂质的小麦淘洗干净,浸泡12-15小时,加水煮沸15分钟,继续热浸15分钟,使麦粒胀而不破,沥干水分摊开晾晒,使麦粒的含水量在25%左右。将碳酸钙、石膏拌入熟麦粒中(麦粒、碳酸钙、石膏比例为10公斤:133克:33克),拌和均匀后装入试管中,每管约2-3克,然后清洗试管,塞棉塞,灭菌1.5(1.5公斤/平方厘米,2小时),经无菌检查合格后备用,试管基质冷却后接种,适温培养,待菌丝长满基质后用石蜡涂封棉塞,放低温保藏。2年左右转接一次。
⑵麸曲保藏法。取新鲜麸皮,过60目筛除去粗粒。将麸皮和自来水按1:1拌匀,装入小试管,每管约装1/3高度,加棉塞用纸包扎,高压灭菌(1.5公斤/平方厘米,30分钟),经无菌检查合格后备用,将生长在斜面培养基上的健壮菌种,移种至无菌麸曲管中,移种时注意尽管捣匀小试管中的麸皮,呈疏松状态,在适温下培养至菌丝长满麸皮为止,将麸曲小管置干燥器中,在低温或适温下保藏。
6、生理盐水保藏法。取纯氯化钠0.7-0.9克,放入100%毫升蒸馏水中,搅拌均匀分装试管,每管5-10毫升,进行灭菌(1公斤/平方厘米,30分钟),经无菌检查合格后备用,将待保藏的菌种接入马铃薯葡萄糖液体培养基中适温振荡培养5-7天。无菌操作吸取少许培养菌种注入经检验合格的生理盐水试管中,塞上无菌橡皮塞,用石蜡涂封,在室温或低温保藏。
7、冷冻真空干燥法。将已培养、生长丰富的菌体或孢子悬浮于灭菌的血清、卵白、脱脂奶制成菌悬液,将悬液以无菌操作分装于灭菌的玻璃安瓿瓶中,每管约0.3-0.5毫升,然后用耐压橡皮管与冷冻干燥装置连接,安瓿瓶放在冷冻槽中于-30℃至-40℃迅速冷冻,并在冷冻状态下抽空干燥,并在真空状态下熔封安瓿,在-20℃保存,一般可保存十年以上,但成本较高。
8、液氮超低温保藏法。首先将要保藏的菌种制成菌悬液备用;其次,准备安瓿瓶,每瓶加入0.8毫升冷冻保护剂10%(体积比)甘油蒸馏水溶液,塞棉塞灭菌(1公斤/平方厘米,5分钟)。无菌检查后,接入要保藏的菌种,火焰熔封瓶口,检查是否漏气,将封好口的安瓿瓶放在冻结器内,以每分钟下降1℃的速度缓慢降温,使保藏品逐步均匀地冻结,直至-35℃,以后冻结速度就不需控制,安瓿冻结后立即放入液氮罐内,在-150至-196℃保藏,该法只有少数科研院所使用。
正在阅读:
菌种保存与活化 - 图文12-31
沙滩烤肉作文200字07-08
案例教学在多媒体广告设计教学中的应用探究03-08
总经理任职表态发言06-21
2019.1怀柔初三数学期末试题及答案11-15
高三毕业生评语集锦06-20
- exercise2
- 铅锌矿详查地质设计 - 图文
- 厨余垃圾、餐厨垃圾堆肥系统设计方案
- 陈明珠开题报告
- 化工原理精选例题
- 政府形象宣传册营销案例
- 小学一至三年级语文阅读专项练习题
- 2014.民诉 期末考试 复习题
- 巅峰智业 - 做好顶层设计对建设城市的重要意义
- (三起)冀教版三年级英语上册Unit4 Lesson24练习题及答案
- 2017年实心轮胎现状及发展趋势分析(目录)
- 基于GIS的农用地定级技术研究定稿
- 2017-2022年中国医疗保健市场调查与市场前景预测报告(目录) - 图文
- 作业
- OFDM技术仿真(MATLAB代码) - 图文
- Android工程师笔试题及答案
- 生命密码联合密码
- 空间地上权若干法律问题探究
- 江苏学业水平测试《机械基础》模拟试题
- 选课走班实施方案
- 菌种
- 活化
- 保存
- 图文
- 学校、公司、校车驾驶人、安全管理员、随车管理员安全管理责任书
- 2019年六年级话题作文-骄傲的小树
- 盐城亭湖区行政事业单位国有资产
- 小学语文现代文阅读 - 段落的作用知识点、练习题名师优质资料
- 八年级英语上册 Unit 1 Where did you go on vacation Section B(2a-2c)教案(新版)人教新目标版
- 油脂内在成分与其结冻之间关系
- 现代广告学试题七
- 小学一年级语文上学期24-27课练习
- 2018-2024年中国国产电影市场深度分析与前景展望研究报告(目录)
- 2013年10月建筑经济与项目管理自考真题及答案
- 分析化学习题详解2-6
- 小学一年级教师课堂激励用语
- 委托代购协议
- 2017年大学生暑假学习计划范文
- 2019人教版九年级上册化学第五单元课题1质量守恒定律导学案精品教育 doc
- 2017年春季新人教版二年级数学下册第八单元表格式教案
- 2016当代中国政治制度期末复习指导(最新)
- 下穿哈大高铁桥墩方案 - 图文
- 编译原理作业答案
- 化学试剂及有毒有害危险品的管理制度