实验七 放线菌的形态观察

实验七 放线菌的形态观察 生物112 周泓兆 1102040226 一、目的

1.学习观察放线菌形态的基本方法； 2.观察放线菌的个体形态特征。 二、原理

放线菌是一类丝状原核微生物，因其菌落在固体表面常呈放射状生长而得名。放线菌主要存在于土壤中，大部分是腐生菌，少数寄生，也有与植物共生固氮的。

放线菌通常由分支发达的菌丝体组成，菌丝直径为0.2-1.2μm。主要由两部分组成，一部分生长在培养基内，一般没有横隔，有固定和吸收养分的作用，称为基内菌丝或营养菌丝，当基内菌丝发育到一定阶段，即可向空中伸展形成气生菌丝。在显微镜下观察时，气生菌丝颜色较深，并且比基内菌丝粗两倍左右。有些种的气生菌丝发育到一定阶段，其顶端可形成孢子丝。有的仅在气丝上形成单个或一对球形孢子。孢子丝分直、波曲、螺旋等形状。螺旋有松、紧、大、小之分，其方向也有左旋和右旋之分，大多数种为左旋，少数种为右旋。螺旋的数目也是种的特征之一。孢子丝的着生方式分为单生、丛生和轮生。大部分放线菌的孢子丝长到一定阶段均可凝聚分裂形成孢子，少数的则以较原始的横隔分裂方式形成孢子。孢子有球状、椭圆状、杆状、瓜子状等形状，在光镜下即可观察。

放线菌菌落小，与培养基结合较紧密，不宜用接种钩挑取，因而难以直接观察。本实验中采用插片法对放线菌形态进行观察。插片法适合进行营养菌丝、气生菌丝和孢子丝的比较观察。在接种放线菌的培养基一侧，以四十五度角插入无菌盖玻片，使放线菌延培养基与盖玻片交界处生长，并附着于盖玻片上，待菌丝生长一定时间后，取下盖玻片进行染色，即可直接观察。 三、材料

1.菌种:紫色直丝链霉菌(Streptomyces violaoeorectus) 灰红紫类群 黑化链霉菌（Streptomyces nigrificans） 灰褐类群 天蓝链霉菌（Streptomyces coelicolor） 蓝色类群 丰加链霉菌（Streptomyces toyocaensis）白孢类群 2.染色剂：石炭酸复红染液 3.培养基：高氏一号培养基

4.其它：载玻片，镊子，酒精灯，洗瓶，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸。 四、实验步骤

1.制备平板：将已融化的高氏一号培养基（冷却至45℃左右）倒入无菌培养皿，培养基厚度可达培养皿高度的一半。

2.接种：用接种环从放线菌试管斜面上挑取孢子，在培养基与盖玻片之间做“之”字型密集画线； 3.插片：用无菌镊子取无菌盖玻片，以45°角斜插入培养基（插入深度约占盖玻片一半长度）； 4.培养：将培养基平板倒置于28℃培养箱中，培养七天；

5.镜检：用无菌镊子小心取出盖玻片，稍微加热固定，再用石炭酸复红染液染色约一分钟，时间到后用洗瓶将石炭酸复红染液洗掉，自然风干，然后置于滴有一小滴香柏油的载玻片上，最后在涂片上滴加适量香柏油，在油镜下观察放线菌形态。 五、结果与讨论 各链霉菌菌落特征： 菌名 紫色直丝链霉菌 菌落形态 正面颜色 背面颜色 乳白/浅紫 气味 土腥味 色素 脂溶 圆形、干燥、灰白、略周围有黑圈 黑化链霉菌 小圆、中间有凸起、干燥 黑 白色 红褐色 土腥味 水溶 天蓝链霉菌 丰加链霉菌 表面凸起，白带有蓝致密、干燥 黑 较厚凸起、干燥 白色 宝蓝色 乳黄 土腥味 土腥味 水溶 脂溶 这次实验操作非常简单，需要注意的只是以下几点：①将盖玻片的钝角面一定用吸水纸擦拭干净，否则很难调整一个合适的焦距②染色时间不能过短，否则基生菌丝着色太浅不好观察。③一定要把石炭酸复红染液冲净，否则背景很脏难以观察。④视野应当选择放线菌较稀疏的地方便于观察。 六、思考题

1.插片法用于观察放线菌有何优点？

答：插片法简单易行，而且可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态，适合进行基内菌丝、气生菌丝、孢子丝的比较观察。 2.培养放线菌的培养基有何特点？ 答：高氏一号培养基是由可溶性淀粉（作为碳源），KNO3（作为氮源），NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O（作为无机盐，为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子）和FeSO4· 7H2O（作为微生物的微量元素，提供铁离子）等组成，为合成培养基。营养物质较为丰富，适合放线菌较长的生长周期。

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