消毒剂消毒效果及有效期确认方案

制药有限公司GMP文件

文件编码：ZL·YF·005·05

Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme

Validation Protocol

消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案

起 草： 日期： 审 核：

批 准： 日期： 实施日期：

颁发部门：质量部 分发部门：质量部、工程部

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消毒剂消毒效果及有效期确认

验证小组名单

组长

姓 名 成员

姓 名 职务/职称

部 门 职务/职称 部 门

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消毒剂消毒效果及有效期确认

文件编码：R－VP-CV-006－a-00

立项申请审批表

立项题目 立项部门 确认对象 消毒剂 1、先决条件确认 2、人员资质确认 3、文件确认 4、检测仪器仪表确认 5、菌种确认 6、培养基和稀释液的配制确认 确认内容 7、中和剂鉴定试验 9、75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认 10、消毒效力现场考察试验 11、消毒剂储存有效期确认 12 0.2%新洁尔灭溶液和75%乙醇溶液消毒效力周期的确认 签 名： 年 月 日 方案编制要求： 消毒剂消毒效果及有效期确认方案由生产部 起草。 方案编制及 实施要求： 实施要求 消毒剂消毒效果及有效期确认方案实施的时间为2012年 月 消毒剂消毒效果及有效期确认 生产部 立项编号 申请日期 VP-CV-006－a-00 年 月 日 审核意见 3

消毒剂消毒效果及有效期确认

签 名: 年 月 日 确认总负 责人批准

方案审核和批准

文件名称：消毒剂消毒效果及有效期确认 文件编码：VP-CV-006－a-00 编写人 日 期： 年 月 日 姓名 审核人 职务 签名 日期 批 准 人： 日 期： 年 月 日 执行日期： 年 月 日~ 年 月 日

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消毒剂消毒效果及有效期确认

验证小组人员名单：

小组职务 组 长 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员

姓 名 所在部门 生产部 生产部 生产部 生产部 生产部 生产部 生产部 质量部 质量部 质量部 质量部 质量部 质量部 质量部 质量部 工程部 职 务 5

消毒剂消毒效果及有效期确认

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目录

1. 目的和范围 .................................................................................................................................. 错误！未定义书签。 2. ................................................................................................................................................... 错误！未定义书签。 3. ................................................................................................................................................... 错误！未定义书签。 4. 定义与缩写 .................................................................................................................................. 错误！未定义书签。 5. 参考文件 ..................................................................................................................................... 错误！未定义书签。 6. 概述 ............................................................................................................................................ 错误！未定义书签。 7. 确认前准备 ...............................................................................................................................................................8 8. 消毒剂消毒效力试验..................................................................................................................... 错误！未定义书签。 9. 消毒剂有效期确认试验 ............................................................................................................................................13 10. 验证偏差和变更.......................................................................................................................... 错误！未定义书签。 11. 附录列表 .................................................................................................................................... 错误！未定义书签。

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消毒剂消毒效果及有效期确认

1 目的

通过消毒剂消毒效果及有效期的确认，科学制订消毒程序，以保证各洁净级别的操作间及设备外表面按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒防止污染的效果， 2 适用范围

本方案适用于洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、记录台、凳子等表面以及操作人员双手（手套）的消毒等。 3 职责

3.1 消毒剂消毒效果及有效期确认小组组长职责

3.1.1 负责组织编写消毒剂消毒效果及有效期确认方案，组织消毒剂消毒效果及有效期确认方案的培训和实施。

3.1.2 负责消毒剂消毒效果及有效期确认方案实施过程的监控。

3.1.3 负责组织收集各项确认数据，并对实验结果进行分析，制订消毒操作程序。 3.2 生产部

3.2.1 负责消毒剂的配制，及消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验的实施。 3.2.2 负责消毒剂配制相关记录的填写，及消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验实施过程关键项目参数的记录。

3.2.3 负责配合质量部进行消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验的实施。 3.3 质量部

3.3.1 负责消毒剂消毒效果及有效期确认方案的审核、实施、实施过程的监控、归档；确认报告的发放、文件资料的保存。

3.3.2 负责消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验实施过程中的取样送检，检验结果的跟踪。

3.3.3 负责消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验实施过程中样品的检验，并出检验报告。

3.3.4 负责组织对确认过程中的偏差进行调查、处理、评估。 3.4 工程部

3.4.1 负责保证提供消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验的条件。 4 描述

4.1 本公司的洁净区分为十万级、万级和百级，拟定用于洁净区表面消毒的有2种消毒剂：75%乙醇、0.2%新洁尔灭溶液。本次验证方案将选用以上2种消毒剂分别进行验

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消毒剂消毒效果及有效期确认

证试验。实验分为两部分：一是实验室考察部分；二是现场考察部分。 4.2 消毒剂的种类、消毒对象、消毒方法和有效期如下表：

消毒剂的种类、消毒对象、消毒方法和有效期

序号 1 名称 75% 乙醇 0.2% 新洁尔灭溶液 消毒对象 用于地面、墙面、器具、工作服、清洁布、拖布、洁净鞋水池、地漏和手的消毒。 用于地面、墙面、器具、工作服、清洁布、拖布、洁净鞋水池、地漏和手的消毒。 消毒方法 采用擦拭、喷洒、浸泡和液封方式 采用擦拭、喷洒、浸泡和液封方式 有效期 密闭保存 试验6天 密闭保存 试验6天 2 4.3 作用对象一样的消毒剂每月轮换使用，避免表面微生物产生耐药菌株。在利用消毒剂进行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于10分钟，利用消毒剂进行浸泡消毒的不少于10分钟。

4.4 实验室考察部分，定量悬浮试验法适用于浸泡或液封方式的消毒方法；表面实验法适用于擦拭或喷洒方式的消毒方法。洁净区设施表面材质有不锈钢、镀锌板及玻璃三种，故表面试验法选用不锈钢载片、镀锌板及玻璃裁片模拟洁净区设施表面进行验证试验。

两种试验方法作用的消毒剂

序号 1 2 3 4 定量悬浮试验法 试验方法 表面实验法 消毒剂 75%乙醇 0.1%新洁尔灭溶液 75%乙醇 0.1%新洁尔灭溶液 4.5 现场考察试验部分选择10万级洁净区、万级的微生物限度室、超净工作台设备表面消毒前和消毒后分别进行取样，测定其微生物数量。 5 确认程序 5.1菌种 序号 1 2 名称 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 序列号 [CMCC(B)26003] [CMCC(B)44102] 8

消毒剂消毒效果及有效期确认

??3

白色念珠菌 [CMCC(F) 98001] 5.2 培养基

序号 1 2 3 4 5 名称 营养琼脂培养基 营养肉汤培养基 改良马丁琼脂培养基 改良马丁液体培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号：BZW12085） 玫瑰红钠琼脂培养接触碟 6

（编号：BZW15129） 规格：：?55mm，取样面积为25m2 培养基经121℃，20min灭菌备用 备注 5.3 消毒液拟定选用的中和剂

序号 1 2

消毒剂名称 75%乙醇 1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯80 中和剂经121℃，20min灭菌备用。 0.1%新洁尔灭溶液 中和剂 备注 5.4 器具及设备

序号 1 2 3 4 5 6 7 名称 无菌移液管 锥形瓶 无菌试管 漩涡混合器 恒温水浴锅 恒温恒湿培养箱 恒温恒湿培养箱

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消毒剂消毒效果及有效期确认

5.5 稀释液 0.9%无菌氯化钠溶液、PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液

6 中和剂鉴定试验

6.1 试验目的

通过该试验，确认所用的中和剂对对应的消毒剂有良好的中和作用，对试验用菌剂及其恢复期培养示范有害或不良影响。 6.2 菌液的制备及计数

6.2.1 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌工作菌液的制备

接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培

养18～24小时。取上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成1×108~5×108CFU/ml的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为1×108~5×108CFU/ml，可不再用0.9％无菌氯化钠溶液稀释）。计数时，将1×108~5×108CFU/ml的工作菌液10倍系列稀释成含50～100CFU/ml菌液，并同时采用营养琼脂培养基30～35℃培养2天计数。计算该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。 6.2.2 白色念珠菌工作菌液的制备

接种白色念珠菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，23～28℃培养24～48小时。取

上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成1×108~5×108CFU/ml的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为1×108~5×108CFU/ml，可不再用0.9％无菌氯化钠溶液稀释）。计数时，将1×108~5×108CFU/ml的工作菌液10倍系列稀释成含50～100CFU/ml菌液，并同时采用改良马丁琼脂培养基23～28℃培养3天计数。计算该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。 6.3 鉴定试验操作

6.3.1 配制75%乙醇、0.2%新洁尔灭溶液，具体操作执行《清洁剂和消毒剂管理》。将配置好的消毒剂置20℃±1℃恒温水浴锅中备用。 6.3.2 分组操作

试验分组及稀释操作方法简表

组号 混合液A 混匀作用 混合液B 混匀作用 取混合液B或混合液10

消毒剂消毒效果及有效期确认

取0.5ml工作菌液加入下列溶液中 1 2 3 4 5 6 消毒剂4.5ml 消毒剂4.5ml 中和剂4.5ml 中和产物4.5ml（消毒液与中和剂比例为1:1） 稀释液4.5ml 稀释液4.5ml 10-2、10-3 10min 取混合液A 0.5ml加入下列溶液 稀释液4.5ml 中和剂4.5ml 稀释液4.5ml 稀释液4.5ml 10min B的稀释级溶液0.5ml平板计数（2皿/组） 混合液B、10-1 混合液B、10-1 10-2、10-3 10-2、0-3 稀释液和中和剂各1.0ml注入无菌平皿中，各制备2皿。 具体操作 ? 第1组

目的：观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。 操作：

取消毒剂4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min后，取混合液0.5ml+稀释液4.5ml，混匀作用10min，取0.5ml注皿，平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置23～28℃培养5天计数计数。 ? 第2组

目的：观察残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否恢复生长。 操作：

取消毒剂4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min后，取混合液0.5ml +中和剂4.5ml，混匀作用10min，用稀释液稀释成10-1。分别取未稀释溶液（混合液0.5mll+中和剂4.5ml的混合液）及10-1 0.5ml注皿，各平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置于30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于23～28℃培养5天计数。 ? 第3组

目的：观察中和剂是否有抑菌性 操作：

取中和剂4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min，取混合液0.5ml l+稀释液4.5ml，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级0.5ml注皿，

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消毒剂消毒效果及有效期确认

各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数计数。 ? 第4组

目的：观察中和产物，或未被完全中和残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。 操作：

取消毒剂和中和剂1:1的混合液4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min，取混合液0.5ml l+稀释液4.5ml，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级0.5ml注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计。 ? 第5组

目的：作菌落数对照用 操作：

取稀释液4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min，取混合液0.5ml l+稀释液4.5ml，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级0.5ml注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数。 ? 第6组

目的：作为阴性对照用

操作：分别取稀释液和中和剂各1.0ml注入无菌平皿中，各制备2皿。 结果判断

试验结果应符合下列全部条件，判断所选中和剂合格。 ? 第1组无菌生长，或仅有少数试验菌菌落生长。

? 第2组菌落数比第1组菌落数多，但比第3、4、5组菌落数少，且符合下表要求

第1组平板平均菌落数 0 x 第2组平板平均菌落数 〉5 〉(x+5) 12

消毒剂消毒效果及有效期确认

y 〉(y+0.5y) ? 第3、4、5组有相似菌落数生长，其每组间菌落数误差率不超过15%。计算公式如

下：

（3组间菌落平均数-各组菌落平均数）的绝对值之和

误差率＝————————————————————————×100％

3×3组间菌落平均数

第6组无菌生长。否则，说明试剂有污染，应重新进行试验。

7定量悬浮试验

0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液消毒效力的确认（定量悬浮试验法）

目的：由于0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液要通过浸泡或液封消毒，采用将消毒剂置于无菌具塞试管中通过定量悬浮试验法，确定其消毒效力是否符合要求。

程序：（1）菌种的选择 由于0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌； （2）菌液制备：取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌接种于营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h即得，培养后微生物浓度应不少于106cfu/ml。取白色念珠菌接种于改良马丁液体培养基中，于23～28℃培养24～48h即得，培养后微生物浓度应不少于106cfu/ml。 （3）消毒剂的配制：按照《清洁剂、消毒剂配制使用程序》进行配制0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液，现配现用。

（4）试验方法：（a）在室温条件下将配制好的0.2%新洁尔灭溶液（或75%乙醇溶液）按9ml/支分注于27支无菌具塞试管中，按照“5分钟组”、“10分钟组”和“15分钟组”共3组每组9支，进行分组编号。

（b）取供试菌液（106cfu /ml的金黄色葡萄球菌菌液，106cfu /ml的大肠埃希菌菌液，106cfu /ml的白色念珠菌菌液）1ml按照下表，分别接入到盛有9ml0.2%新洁尔灭溶液（或75%乙醇溶液）的试管中（已进行10倍稀释），轻轻摇动，混合均匀，并立即开始计时。 金黄色葡萄球菌 5分钟组 10分钟组 15分钟组 1ml/支，共3支 1ml/支，共3支 1ml/支，共3支 13

消毒剂消毒效果及有效期确认

大肠埃希菌 白色念珠菌 （c） 消毒剂的稀释

分别在5分钟、10分钟和15分钟时迅速吸取1ml菌药混合液，加入到9ml（1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯80）中和剂中，迅速混匀中和10分钟，分别取上述经中和的“5分钟组”、“10分钟组”和“15分钟组”的接种细菌的消毒液，倾入过滤杯滤过，然后各用0.9%无菌生理盐水50ml清洗滤膜，滤过，重复用50ml0.9%无菌生理盐水的洗涤共3次。取下滤膜，含细菌的膜放入营养琼脂平板内，含真菌的膜放入玫瑰红钠琼脂平板内，含菌膜面向上。细菌于30-35℃的生化培养箱内培养3d，真菌于23-28℃的霉菌培养箱内培养5d。培养后在明亮处，对平板上的菌落数进行计数，记录计数结果。 d 阳性对照

分别将106cfu/ml金黄色葡萄球菌菌液、106cfu/ml大肠埃希菌菌液、106cfu/ml的白色念珠菌菌液用无菌注射用水进行梯度稀释至浓度为10～100cfu/ml，取稀释液体1ml于平皿中，倾注冷却至45℃营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基混匀，待凝固后于细菌于30-35℃的生化培养箱内培养3d，真菌于23-28℃的霉菌培养箱内培养5d。培养结束后对平板上的菌落数进行计数，记录计数结果。

0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认

试验组菌落数（cfu/ml） 与消毒剂作用时间 菌种名称 1 金黄色葡萄球菌 5分钟 大肠埃希菌 白色念珠菌 金黄色葡萄球菌 10分钟 大肠埃希菌 白色念珠菌 金黄色葡萄球菌 15分钟 大肠埃希菌 白色念珠菌 10-1 2 3 平均菌落杀菌率 数（cfu/ml） 1ml/支，共3支 1ml/支，共3支 1ml/支，共3支 1ml/支，共3支 1ml/支，共3支 1ml/支，共3支 14

消毒剂消毒效果及有效期确认

稀释级 菌种名称 阳性对照 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 白色念珠菌 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日 75%乙醇溶液消毒效力的确认 试验组菌落数（cfu/ml） 与消毒剂菌种名称 作用时间 1 金黄色葡萄球菌 5分钟 大肠埃希菌 白色念珠菌 金黄色葡萄球菌 10分钟 大肠埃希菌 白色念珠菌 金黄色葡萄球菌 15分钟 大肠埃希菌 白色念珠菌 稀释级 菌种名称 阳性对照 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 白色念珠菌 10-3 10-1 2 10-4 3 10-5 平均菌落杀菌率 数（cfu/ml） 平均菌落数（cfu/ml） 10 -310 -410 -5平均菌落数（cfu/ml） 15

消毒剂消毒效果及有效期确认

确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日

8 表面试验

75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认（表面试验法）

目的:由于75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液要通过擦拭消毒，故选用不锈钢载片、镀锌片及玻璃裁片进行表面试验法，确定其消毒效力是否符合要求。

程序：（1）菌种选择：由于75%乙醇、0.2%新洁尔灭溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故表面试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌。

（2）工作菌液制备 取金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌分别接种于营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h即得，培养后微生物浓度应不少于106cfu/ml。取白色念珠菌接种于改良马丁液体培养基中，于23～28℃培养24～48h即得，培养后微生物浓度应不少于106cfu/ml。

（3）染菌不锈钢载片制备：将经灭菌的不锈钢载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌含菌量为1×108~5×108CFU/ml的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片；染菌镀锌载片制备：将经灭菌的镀锌载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌含菌量为1×108~5×108CFU/ml的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。每种菌平行制备两个染菌镀锌载片；染菌玻璃载片制备：因培养皿的材质为玻璃，故用培养皿代替

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消毒剂消毒效果及有效期确认

玻璃载片进行染菌试验。进行菌液滴染前，用记号笔在培养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积（50mm×50mm），标注清晰。菌液滴染操作同染菌不锈钢载片制备。

（4）取样 试验组：将消毒剂擦拭在制备好的染菌载片上，消毒剂作用时间分别为5min、10min、15min，不锈钢载片、镀锌载片及玻璃载片每个作用时间分别制备2个。作用结束后，用接触碟取样（接触碟规格：?55mm，取样面积为25m2）。取金黄色葡萄球菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号：BZW12085）；取大肠埃希菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号：BZW12085）； 取样白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基接触碟（编号：BZW15129）。接触碟取样方法：打开接触碟盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样面表面均匀接触10秒左右，盖上碟盖。对照组：对照组的活菌浓度同工作菌液的制备。阴性对照：用接触碟在已灭菌的载片上（未染菌片的载片）按压取样，操作同上。每种载片及每种接触碟平行制备两份。 （5）培养：将取样金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的接触碟倒置于30～35℃培养3天计数；取样白色念珠菌的接触碟倒置于23～28℃培养5天计数计数。

（6）结果计算：计算试验组和对照组的活菌浓度 （CFU/ml），并换算为对数值（N），并按下式计算杀灭对数值:

杀灭对数值 (KL)＝对照组平均活菌浓度的对数值（NO）－试验组活菌浓度对数值（NX） 可接受标准：杀灭对数值 (KL)应不低于3个对数单位。

75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认

序号 杀灭对数平均值（KL） 消毒剂 镀锌载片（min） 工作菌液 不锈钢载片（min） 玻璃载片（min） 名称 5 10 15 5 10 15 5 10 15 金黄色葡 萄球菌 大肠埃希75%乙醇 菌 白色 念珠菌 金黄色葡 萄球菌 0.2%新洁大肠埃希 菌 尔灭溶液 白色 念珠菌 ● 阴性对照无菌生长； ● 杀灭对数值 (KL)应不低于3个对数单位 1 2 可接受标准 确认结果评价： 17

消毒剂消毒效果及有效期确认

操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日 9 消毒效力现场考察试验

目的：确认消毒剂对相应设施的实际消毒效力。

操作：（1）生产车间岗位操作人员按照《洁净区卫生清洁程序》、《地漏的清洁消毒程序》、《10万级洁净区洁具清洁消毒程序》、《万级洁净区洁具清洁消毒程序》《地漏清洁程序》、进行清洁。

（2）生产车间岗位操作人员，使用放冷的注射用水，按照《清洁剂、消毒剂配制使用程序》进行75％乙醇溶液、0.2%的新洁尔灭溶液配制，现配现用。按照《洁净区卫生清洁程序》进行清洁消毒，分别清洁消毒10万级洁净区各房间的顶棚、墙面、工作台面和墙面、地漏、水池下水；10万级洁净区的工作鞋、清洁布、拖布；万级区微生物限度室等房间顶棚、墙面、工作台面和墙面、地漏、水池下水，万级洁净区的工作鞋、清洁布、拖布等区域。

（3）消毒15分钟后，由QA人员到车间按照《接触碟法取样程序》进行洁净区表面微生物的采样；用浸泡或液封方式的采用无菌吸管取浸泡液或液封液1ml，连续逐日测定，共测定3次。记录测定结果。

可接受标准：所监测的洁净区的微生物均在公司环境质量控制范围内，各洁净区符合各自的洁净级别要求。

75%乙醇溶液消毒后环境监测表面微生物测定结果 单位：cfu/皿

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消毒剂消毒效果及有效期确认 洁净 级别 裁剪间 包装间 洁具间 无菌检查室 微生物限度室操作台 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日

0.2%新洁尔面溶液消毒后环境监测表面微生物测定结果 单位：cfu/皿 监测区域 裁剪间 包装间 洁具间 无菌检查室 微生物限度室操作台 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日

0.2%新洁尔灭溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿

洁净 监测区域 级别 裁剪间地漏 包装间地漏 10万级 第一次 第二次 第三次 19

监测区域 平均菌落数 第一次 第二次 第三次 可接受标准 是否合格 口是口否 10万级 ?50CFU/25cm 口是口否 2口是口否 ?25CFU/25cm2 口是口否 ?1CFU/25cm2 万级 百级 口是口否 洁净 级别 平均菌落数 可接受标准 第一次 第二次 第三次 ?25CFU/25cm2 ?1CFU/25cm2 ?50CFU/25cm 2是否合格 口是口否 口是口否 口是口否 口是口否 口是口否 10万级 万级 百级 平均菌落数 可接受标准 是否合格 口是口否 口是口否 ?50CFU/25cm 2消毒剂消毒效果及有效期确认

洁具间水池下水 微生物限度室地漏 微生物限度室水池下水 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日

75%溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿

监测区域 裁剪间地漏 包装间地漏 洁具间水池下水 微生物限度室地漏 微生物限度室水池下水 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日

75%乙醇溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿

平均菌落数 监测区域 工作鞋 清洁布 洁净级别 第一次 第二次 第三次 可接受标准 ?50CFU/25cm2 万级 口是口否 口是口否 ?25CFU/25cm2 口是口否 洁净 级别 平均菌落数 第一次 第二次 第三次 可接受标准 是否合格 口是口否 ?50CFU/25cm2 口是口否 10万级 口是口否 口是口否 ?25CFU/25cm2 口是口否 万级 是否合格 口是口否 口是口否 10万级 20

消毒剂消毒效果及有效期确认

拖布 工作鞋 清洁布 万级 ?25CFU/25cm2 口是口否 口是口否 口是口否 口是口否 拖布 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日

0.2%新洁尔灭溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿

监测区域 工作鞋 清洁布 拖布 工作鞋 清洁布 万级 10万级 洁净级别 平均菌落数 第一次 第二次 第三次 ?25CFU/25cm 2可接受标准 是否合格 口是口否 ?50CFU/25cm2 口是口否 口是口否 口是口否 口是口否 口是口否 拖布 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日 10 消毒剂储存有效期确认试验

目的：通过该试验，确定消毒剂在有效期内是稳定的，并且消毒效力不会发生变化，符合要求。

程序：（1）在进行消毒剂有效期确认时，每天开启装消毒剂的容器不少于5次，其每次开启时间在1~2分钟，以模拟实际操作的最差条件。

（2）按照《清洁剂、消毒剂管理规程》和《清洁剂、消毒剂配制使用程序》配制75%乙醇、0.2%新洁尔灭溶液。

（3）分别在消毒剂储存的第3天、第4天、第5天、第6天进行取样做消毒剂消毒效力的确认。分别按照上述7或8做0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液消毒效力的确认。

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消毒剂消毒效果及有效期确认

（4）结果计算：计算试验组和对照组的活菌浓度 （CFU/ml），并换算为对数值（N），并按下式计算杀灭对数值：杀灭对数值 (KL)＝对照组平均活菌浓度的对数值（NO）－试验组活菌浓度对数值（NX）

可接受标准：在消毒液有效期末，杀灭对数值 (KL)应不低于3个对数单位。

消毒剂储存有效期确认

序方号 法 定量消毒剂名称 工作菌液 金黄色葡萄球菌 75%乙醇 大肠埃希菌 白色念珠菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 白色念珠菌 金黄色葡萄球菌 3 表面试验 4 75%乙醇 大肠埃希菌 白色念珠菌 金黄色葡萄球菌 0.2%新洁尔灭溶液 大肠埃希菌 白色念珠菌 杀灭对数平均值KL(天) 3 4 5 6 可接受标准 1 2 悬浮试0.2%新洁尔灭溶液 验 阴性对照无菌生长；杀灭对数值 (KL)应不低于3个对数单位 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日

11 0.2%新洁尔灭溶液和75%乙醇溶液消毒效力周期的确认

11.1 0.2%新洁尔灭溶液和75%乙醇溶液消毒效力周期的确认 目的：确认消毒剂在实际应用中，其消毒效力能够保持的期限。

程序：（1）在万级实验室的墙面和百级级层流下设备表面作为验证对象。实验室墙面编号为1号、百级层流下设备表面2号，分别使用0.2%新洁尔灭溶液、75％乙醇溶液进行擦拭消毒（1号为0.2％新洁尔灭溶液消毒剂、2号为75％乙醇溶液）。 （2）采用接触碟法在消毒过的实验室墙面和百级层流下设备表面取样。 （3）取样完毕完毕后第24、48、72小时取样送QC做微生物限度。 可接受标准：

百级：?1CFU/25cm2、万级：?25CFU/25cm2。

0.1%新洁尔灭溶液和75%乙醇溶液消毒效力周期确认（单位：cfu/25cm2）

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消毒剂消毒效果及有效期确认

次序 平均菌落数 第一次 区域 微生物限度室墙面 百级设备表面 第二次 区域 微生物限度室墙面 百级设备表面 第三次 区域 微生物限度室墙面 百级设备表面 可接受标准： 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日 11.2 0.2%新洁尔灭溶液和75%乙醇溶液消毒效力周期的确认 目的：确认消毒剂在实际应用中，其消毒效力能够保持的期限。

程序：（1）在微生物限度室地漏和洁具间的水池下水作为验证对象。将房间地漏编为1号、洁具间的水池下水编为2号，分别使用0.2%新洁尔灭溶液和75%乙醇溶液液封消毒（1号为0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液）。 （2）采用无菌吸管在地漏中吸取液封液1ml

（3）取样完毕后第24、48、72小时取样送QC做微生物限度。 可接受标准：

万级：?25CFU/25cm2、十万级：?50CFU/25cm2。

75%乙醇溶液和0.2%新洁尔灭溶液消毒效力周期确认 次序 23

消毒剂 0.2%新洁尔灭溶液 75%乙醇溶液 24h 平均菌落数 48h 72h 消毒剂 0.2%新洁尔灭溶液 75%乙醇溶液 24h 平均菌落数 48h 72h 消毒剂 0.2%新洁尔灭溶液 75%乙醇溶液 24h 48h 72h 平均菌落数 消毒剂消毒效果及有效期确认

第一次 区域 微生物限度室地漏 洁具间的水池下水 消毒剂 75%乙醇溶液 0.2%新洁尔灭溶液 24h 平均菌落数 消毒剂 75%乙醇溶液 0.2%新洁尔灭溶液 24h 平均菌落数 消毒剂 75%乙醇溶液 0.2%新洁尔灭溶液 24h 48h 72h 48h 72h 48h 72h 第二次 区域 微生物限度室地漏 洁具间的水池下水 第三次 区域 微生物限度室地漏 洁具间的水池下水 可接受标准： 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日 12 毒剂消毒效果及有效期确认风险识别

项目 该项目不合格可能造成的影响 消毒剂的消毒效力确认 影响消毒效果，影响环境质量 消毒剂储存有效期确认 影响使用 消毒剂消毒效力周期 影响使用 13 偏差

所有不符合用户要求和GMP要求的偏差必须通过偏差报告进行正式地记录。在偏差清单中记录所有在执行中发生的偏差。 13.1 偏差报告 偏差来自表 24

偏差号 消毒剂消毒效果及有效期确认 偏差描述及建议的纠正措施 验证人员签名 QA主管签名 QA主管签名 日期 年 月 日 是否已解决 口是 口否 结果跟踪 日期 年 月 日 日期 年 月 日 纠正措施的审核和批准 偏差已经得到解决？ 13.2 偏差清单 偏差号 描述 表号 25

消毒剂消毒效果及有效期确认

? 14 综合评价

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消毒剂消毒效果及有效期确认

15 审核与批准

对确认的结果进行审核，并得出消毒剂消毒效果及有效期确认的最终结论：

口 实施过程和结果符合要求。没有未解决的偏差存在，该系统被授权进行下一步验

证的实施。

口 实施过程和结果不能完全符合要求，有未解决的偏差存在，但不影响验证的最终

结果系统被授权进行下一步验证的实施。

口 实施过程和结果不能符合要求，有未解决的偏差存在，且影响了验证的最终结果

该系统不能授权进行下一步的验证实施，必须采取进一步的措施，纠偏结果分别进行记录。

备注：

审核人： 日期： 年 月 日 批准人： 日期： 年 月 日

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