霉菌的形态观察 - 图文

山东大学实验报告 2014年 11 月 12 日

姓名 王海宽 班级 12级生物基地 学号 201200140099 同组者：孙梦杰、袁家奇、肖荷 科目 微生物学实验 题目 霉菌的形态观察 组别 周三第六大组

霉菌的培养与形态观察

一．实验目的

1、掌握霉菌的观察法：小室观察法。 2、了解四种常见霉菌形态。

二．实验原理 1. 霉菌

霉菌可产生复杂分枝的菌丝体，其菌丝分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约3～10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。本实验采用毛霉、青霉，曲霉，根霉四种常见的霉菌作为菌种进行观察。

毛霉是接合菌亚门接合菌纲毛霉目毛霉科真菌中的一个大属。以孢囊孢子和接合孢子繁殖。菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝。不产生定形菌落。菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，内有形状各异的囊轴，但无囊托。孢子成熟后孢子囊即破裂并释放孢子。有性生殖借异宗配合或同宗配合，形成一个接合孢子。

青霉菌属多细胞，营养菌丝体无色、淡色或具鲜明颜色。菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。分生孢子球形、椭圆形或短柱形，光滑或粗糙，大部分生长时呈蓝绿色。有少数种产生闭囊壳，内形成子囊和子囊孢子，亦有少数菌种产生菌核。

根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。根霉的孢子可以在固体培养基内保存，能长期保持生活力。此外有性生殖时还可以产生接合孢子囊，无性生殖时产生芽孢子。

曲霉菌丝有隔膜，为多细胞霉菌。在幼小而活力旺盛时，菌丝体产生大量的分生孢子梗。分生孢子梗顶端膨大成为顶囊，一般呈球形。项囊表面长满一层或两层辐射状小梗(初生小梗与次生小梗)。最上层小梗瓶状，顶端着生成串的球形分生孢子。以上几部分结构合称为\孢子穗\。

孢子呈绿、黄、橙、褐、黑等颜色。这些都是菌种鉴定的依据。分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。曲霉孢子穗的形态，包括分生孢子梗的长度、顶囊的形状、小梗着生是单轮还是双轮，分生孢子的形状、大小、表面结构及颜色等，都是菌种鉴定的依据。 2. 小室培养法

观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，沿琼脂边缘接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。

三．实验器材 1、 菌种：

曲霉（Aspergillus sp.），青霉（Penicillium sp.），毛霉（ Mucor sp. ）和根霉（Rhizopus sp.）培养48h的马铃薯琼脂（PDA）斜面培养物。

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山东大学实验报告 2014年 11 月 12 日

姓名 王海宽 班级 12级生物基地 学号 201200140099 同组者：孙梦杰、袁家奇、肖荷 科目 微生物学实验 题目 霉菌的形态观察 组别 周三第六大组

2、 培养基及试剂： 马铃薯琼脂（PDA），20%甘油（无菌），乙醇。 3、 仪器及其它用品：

无菌操作台，解剖刀，镊子，无菌吸管，U型玻璃棒，普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿等。

四． 操作步骤 1. 培养基的配制

马铃薯培养基（PDA）配方：

马铃薯：20g；葡萄糖 2g；琼脂 2g；水100mL；pH：7.2~7.4。

按如上所示配方称取PDA各组分，先将马铃薯去皮，切成小块称取2g煮沸半小时，然后先用1层纱布滤去未溶解的固体，再用8层纱布过滤，将滤液转入100ml蒸馏水中，然后再加入糖及琼脂，加塞后用牛皮纸包好，准备灭菌。

2. 培养基及装置的灭菌 a) 灭菌准备

制作八个平皿，在每个平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和四块盖玻片，盖上皿盖、再与两个空平皿一起用牛皮纸包好；在100mL锥形瓶中用甘油配制20%的甘油，加塞包好；最后取10mL移液管两支用牛皮纸包好。 b) 灭菌

将上述用牛皮纸包好的仪器与试剂连同配好的PDA培养基一并放入灭菌锅中110℃灭菌30min（由于培养基中有葡萄糖，为防止由于高温而使糖发生糊化而变质，灭菌温度不宜过高）。

3. 制作琼脂薄片

将制作琼脂薄片与接种所需的培养基，仪器，以及菌种放入无菌操作台，打开紫外线照约5min，然后打开照明与风，使无菌风吹入操作台，开始实验操作。分别取已灭菌并溶化冷却至约50℃的马铃薯琼脂培养基6～7mL 注入两个灭菌空平皿中，使之凝固成薄层。在两个凝固后的平板背部用记号笔画下约1～1.2cm×1～1.2cm的方格，通过无菌操作，用解剖刀沿画下的方格线将其切成方形的琼脂块。（注：解剖刀使用前应先在酒精中浸泡，然后在酒精灯上灼烧，冷却后再进行切割操作）。

4. 接种

在无菌操作台上，先用镊子将载玻片放于U型玻璃管上，然后用解剖刀取一小块儿琼脂块，置于载玻片上（注意：镊子与解剖刀每次使用前都应先在酒精中浸泡，灼烧冷却后再进行下一步的操作），用接种环分别从斜面培养物上挑取很少量的4种菌的孢子，分别接种于培养小室中琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。最后用移液管在培养小室中的圆滤纸上加3ml 灭菌的20 %的甘油（用于保持平皿内的湿度 ) ，盖上皿盖并贴标签，每一种菌接种两个小室。

5. 恒温培养

将接种后的平皿正置于28℃培养箱中恒温培养一周。 6. 镜检

在显微镜下直接观察小室培养后的载玻片，用低倍镜即可较为清晰的观察到霉菌的菌丝体及孢子，根据所学的四种菌的基本特征对四种菌进行观察比较与区分，必要时可以采用高倍镜对菌进行观察。

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五． 实验结果与分析

1. 实验照片：

孢子囊 孢囊梗 假根 图1 根霉菌观察结果示意图

匍匐枝 分生孢子 球状顶囊 分生孢子梗

图2 黑曲霉菌观察结果示意图

分生孢子梗 分生孢子 营养菌丝 图3 青霉菌观察结果示意图

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孢囊孢子 孢囊梗 球状孢囊

图4 毛霉菌观察结果示意图

2. 表格总结： 菌种 根霉 毛霉 曲霉 青霉 形态特征 菌丝无隔的单细胞，生长迅速。有匍匐菌丝和假根，假根着生处有直立的向上孢子囊梗，其顶端膨大成孢子束（囊），孢子束（囊）底部有半球形囊轴。 菌丝无隔、多核，无假根或匍匐菌丝，分枝少或不分枝。 菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢子梗，顶端有球形孢子束（囊）。 菌丝有隔，气丝分化成分生孢子梗，顶端膨大形成球形顶囊，顶囊表面辐射出状生出一层或两层小梗，小梗上有成串分生孢子。 菌丝有隔，分生孢子梗有隔，顶端不膨大，分生孢子梗多次分枝，形成几轮对称或不对称的小梗，小梗顶端分生孢子为帚状体。 六．思考题

黑曲霉和黑根霉在形态特征上有何区别？

答：黑根霉菌丝无隔，有匍匐菌丝和假根，假根着生处有直立的向上孢子囊梗，其顶端膨大成孢子囊，孢子囊底部有半球形囊轴。黑曲霉菌丝有隔，气丝分化成分生孢子梗，顶端膨大形成球形顶囊，顶囊表面辐射出状生出一层或两层小梗，小梗上有一串串分生孢子。

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