抗氧化活性 - 图文

β-胡萝卜素漂白法测定莲子心粗多糖抗脂质

过氧化的活性 30 mL 试管中加入0. 5 mLβ-胡萝卜素(β2caro2

毛头牛蒡子醇提物抗氧化活性研究

目的", 研究毛头牛蒡子提取物的抗氧化活性。方法",将毛头牛蒡子乙醇提取物采用溶剂萃取法, 分成极性不同的

4 个部分, 并采用DPPH 法和邻苯三酚自氧化法测定各部分的清除DPPH 自由基和超氧阴离子自由基的能力, 以测定其抗氧化活性, 并与抗坏血酸进行比较

DPPH 法抗氧化活性分析", DPPH 自由基是一种很稳定的以氮为中心的自由基, 在517 nm 处有强吸收, 其乙醇水溶液呈很深的蓝紫色, 加入受试物后,517 nm 处可以动态监测DPPH 自由基被清除的效果, 这种效果通常用对DPPH 的清除率来表示。清除率越大, DPPH 自由基清除越彻底, 受试物的抗氧化活性越强[ 6",7] 。计算清除率的公式为:

其中, A0 为未加样DPPH 溶液的原始吸

光度; A为加样后DPPH 液的吸光度; A 样为样品溶液自身的吸光度。公式中引入A0 是为了消除样品溶液本身颜色对实验结果的影响。A 0 的测定: 用移液器取2. 0 mL95% 乙醇, 再取2. 0 mL 已配制好的DPPH 溶液( 0. 2mmo l L- 1 ) , 充分振摇。稍后, 在517 nm 处测定吸光度,

A 样的测定: 用微量移液管精密移取这4种样品溶液各10, 100, 200, 300, 400, 500 和600 uL, 加入95% 乙醇配成4 mL 的溶液, 混合, 振摇, 在517nm 处测定吸光度, 即A样。

A 的测定: 用微量移液管精密移取样品溶液10, 100, 200, 300, 400, 500 和600uL, 各加入2. 0 mLDPPH 溶液( 0. 2 mmo l & L- 1 ) , 再加入95% 乙醇配成4 mL 的待测溶液, 混合, 充分振

摇, 在37 度 水浴避光静置30 min, 在517 nm 处测定吸光度为A 。

邻苯三酚自氧化法抗氧化活性分析", 在1－4 号比色皿中分别加入3. 0 mL、pH 值为8. 2 的0. 05 mol L- 1( 含2 mmo l & L- 1 EDTA 溶液) 的Tris 溶液, 然后在1 号比色皿中加再0. 1 mL 样品溶剂, 在2 号比色皿中加入0. 1 mL 样品溶剂和0. 1 mL 0. 01 mol & L- 1的邻苯三

酚溶液, 迅速摇匀, 以1 号比色皿调零测2号比色皿的吸光度A0 。在3 号中加入0. 1 mL 样品溶液和0. 1 mL 0. 01 mol & L- 1的盐酸溶液, 在4 号比色皿中加入0. 1 mL 样品溶液和0. 1 mL 0. 01 mol & L- 1的邻苯三酚溶液, 迅速摇匀, 以3 号比色皿溶液调零测4号比色皿溶液的吸光度A

。式中△A1 / △t 为邻苯

三酚自氧化速率, △A2 / △t 为加入抗氧化剂后邻苯三酚的反应速率

半枝莲醇提工艺的优化及体外抗氧化活性评价的研究

对DPPH 自由基的清除作用(2，2′-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay) 分别取5 μL不同质量浓度的样品溶液加入245 μL 0. 1 mmol·L － 1DPPH 甲醇溶液，并作空白对照(5 μL 甲醇加入245μL 0. 1 mmol·L － 1 DPPH 甲醇溶液) 和样品本底对照(5 μL 不同浓度的样品溶液加入245 μL 甲醇) ，在酶标仪上振荡混匀，静置30 min 后，于517 nm 处测量吸光度。以上试验重复操作3 次，根据下列公式计算每一浓度的样品溶液对DPPH 自由基的清除率(% ) :

Ablank:空白对照的吸光度

值;Asample:加样品溶液的吸光度值;Acontrol:样品本底对照的吸光度值。以样品溶液的浓度为横坐标，DPPH 自由基的清除率为纵坐标绘制标准曲线，根据回归的线性方程计算IC50值，即DPPH 自由基清除率为50% 时对应的样品溶液的质量浓度。，标准对照物质Trolox（;Trolox ( 6-hydroxy- 2，5，8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid，Sigma公司)）

XOD活性评价

买麻藤提取物抑制黄嘌呤氧化酶活性实验研究

溶液配制 缓冲液： 取K2HPO4·3H20 19．48g、KHzPO41．99g，溶于500mL蒸馏水，配成0．2mo~L磷酸盐缓冲溶液(pH7．5)。

酶溶液： 取黄嘌呤氧化酶5U， 用缓冲液稀释至100mL．浓度为50U／L，4~C保存。底物溶液：取25．1mg黄嘌呤溶于250mL水．得0．66mmol.L-1底物溶液。样品和阳性对照溶液：精密称取样品买麻藤水提物、买麻藤总芪提取物、白藜芦醇苷(作

为阳性对照)．分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解，得到不同浓度的溶液．使用时根据情况稀释(DMSO最终浓度1％ )。 酶活测定原理 黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶的催化作用下生成尿酸．产物尿酸在290nm处有特征吸收峰． 以每分钟290nm 处吸光

度的增加来计算酶活力。酶活性单位定义：在本实验条件下黄嘌呤氧化酶与黄嘌呤作用后．每分钟催化1umol黄嘌呤转化为尿酸的酶量为1个活性单位(U／L)。

酶促反应米氏方程的绘制 实验体系中黄嘌呤采用35．0，87．5，175．0．262．5，350．0umol／L 5个浓度． 黄嘌呤氧化酶浓度为50U／L 。在试管中加入2mL不同浓度的黄嘌呤溶液．25℃预温lOmin．再加入经25℃预温的黄嘌呤氧化酶溶液lmL．涡旋混匀．在紫外290nm 处测定不同时间点反应体系的吸光度值，每分钟测定1次，连续测定15min，以时间与吸光度进行线形回归．得各浓度黄嘌呤溶液的反应速度V 再以1/V对1／[S]作图．即反应速度和底物浓度的双倒数图．绘制酶促反应米氏方程 黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制实验

酶活力测定 在试管中加入2．0mL底物溶液．25 预温10min．加入缓冲溶液0．1mL．再加入经25℃预温的酶溶液1．0mL．涡旋

混匀．用分光光度计测290nm处不同时间点反应体系的吸光度值．每分钟测定1次，连续测定15min，以时间与吸光度进行线形回归，计算斜率Rate酶(dA／min)。每个样品平行操作3次．取斜率平均值。

样品测定 在试管中加入2．0mL底物溶液．25℃预温10min．加入不同浓度样品溶液0．1mL．再加入经25℃预温的酶溶液1．0mL．涡

旋混匀．同法测定吸光度值，以时间与吸光度进行线形回归．计算斜率Rate样(dA／min)。

2．4-3 空白对照 重复2．4．2步骤．不加样品和XOD。但加0．1mL的DMSO 和1．0mL缓冲液．记录吸光度的变化．得Rate空白

(dA／min)．作为空白对照，计算抑制率时将它扣除。

2．4．4 半数抑制浓度IC 的计算酶促反应中的药物浓度C：Cnx0．1／3．1，C0是样品溶液浓度；抑制率I=(Rate酶一Rate

样品)／(Rate酶一Rate空白)x100％ 将药物浓度与抑制率进行回归．得回归方程。根据方程计算抑制率I=50％时C的值，即半

数抑制浓度IC 。

异叶蛇葡萄和蛇葡萄提取物抑制黄嘌呤氧化酶和脂质氧化酶的活性研究

黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制试验

底物溶液：分别取7．6、5．7、3．8 mg黄嘌呤溶解在500 ml水中，得到0．1、0．075、0．05 mM的底物溶液，该溶液室温保存，可持续使用一周 XOD 活力测定：XOD 的活力按照Cos等描述的方法在290 nm处用分光光度法测定。每隔20 sec在290 nm处记录吸光度增长的数值，共计5 min。根据不同时间吸光度增长的数值得到一 条直线，计算直线的斜率。斜率越大，说明酶的活力越强

样品测定：把植物提取物溶解在二甲亚砜(DMSO)中，得到不同浓度的溶液，取适量加到石英比色皿中(最终浓度<1％ )，重复上述操作、记录吸光度在290 nm处的变化。

空白对照：重复上述操作，不加样品和XOD，但加与样品同样体积的DMSO，记录吸光度的变化，作为空白对照

样品对XOD的抑制：通过上述样品测定获得直线的斜率减去空白，每个样品平行操作3次，分别计算直线的斜率，取斜率平均值计算样品的抑制系数，样品的抑制系数为斜率的倒数。

抑制动力学常数Ki值的计算：使用3个不同浓度的底物(黄嘌呤)溶液，获得不同浓度样品溶液对XOD的抑制系数，用Dixon绘图法计算Ki值。 阳性对照品：为了核对实验结果的可信性，取槲皮素溶解在二甲亚砜中得到不同浓度的溶液， 重复上述实验，计算Kl值。

中国南海海绵提取物renierol对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

利用超氧离子致NBT显色测定黄嘌呤氧化酶活性

反应体系分为3组，其中模型组中加入黄嘌呤(50 umol／L)、黄嘌呤氧化酶(0．1 U／mo1)和NBT (50umol／L)，而实验组中按样品renierol的浓度分别再在模型组的基础上加入20、40和60ug／ml的 renierol，阳性对照组也在模型组基础上加入lug／ml的别嘌呤醇，反应体系中加入磷酸盐缓冲液(50 mmol／L ，pH值7．2)至终体积600uL。反应以加入黄嘌呤氧化酶为开始，室温反应5 min，用CE一2021 分光光度计在560 nm下测定光密度，以每分钟的光密度增加量作为反应速度，将实验组和阳性对照组测得

的光密度值除以模型组的光密度值算出其抑制率后加以比较。黄嘌呤溶解于l umol／L NaOH，其他组分

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