RNA提取过程中试剂的作用
更新时间:2023-12-07 17:35:01 阅读量: 教育文库 文档下载
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提取RNA中所用各种试剂的作用:
1、氯仿:
氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和DNA脱离,DNA进入水相。但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离,否则DNA会释放到水相。不管有酚也好,没有酚也好,氯仿本身也对蛋白有变性作用,剧烈的震荡,很容易使得DNA 的亲水基团,与水相接触。所以不要剧烈震荡。
氯仿的作用有多个方面,一是作为有机溶剂变性蛋白,使其沉淀并通过离心除去,同时也通 过变性作用抑制RNase活性;二是RNA提取试剂中通常含有苯酚(Trizol主要成分就是苯酚,很多自己配试剂提的方法也用苯酚,抽提蛋白时也会用到苯酚),苯酚微溶于水,抽提 完之后水相里有痕量的酚,如果不除去会损伤核酸,需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提 掉;三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质(比如油脂、脂溶性色素等),起到一定除杂作用
通常氯仿里面会加少量异戊醇(1/25),减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫,影响后续操作。 2、
异丙醇:异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受 到保护,等同于沉淀,但是这是个反应时发生在水相中,与前面的氯仿不矛盾
异丙醇是沉淀核酸用的,作用和乙醇一样。只不过用量少一点,0.6V~1V就够了,不像乙醇 沉淀需要至少2V,一般需要2.5倍体积。在水相很多,离心管容积有限,加不下太多乙醇 的时候一般会用异丙醇沉淀。不过感觉效果不如乙醇,偶尔会有沉淀不出来的时候。
3、酸酚:沉淀蛋白的同时,酸性也有助于去除 DNA
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