玉米C 型细胞质雄性不育系C48-2 及其保持系线粒体差异蛋白分析

玉米C 型细胞质雄性不育系C48-2 及其保持系线粒体差异蛋白分析

作物学报 AC A AG O MI A SN C 2 0, 42: 3- 3 T R NO C I I A 0 8 3() 2 2 7 2I S 0 9 - 4 0 CODE TS P S N 4 6 3 9: N H A9

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玉米 C型细胞质雄性不育系 C 82及其保持系线粒体差异蛋白分析 4.许珂曹墨菊 2朱英国 2潘光堂， 点实验室，北武汉 40 7)湖 302

荣廷昭，

(四川农业大学玉米研究所，物基因资源与遗传改良教育部重点实验室，四川雅安 6 5 1; 作 20 4武汉大学植物发育生物学教育部重

摘要：采用固相 p H梯度. D AG S SP E双向电泳，对玉米 c型细胞质雄性不育系 ( 82及其保持系( 82单核期花 C4 .) N4 -)药线粒体蛋白质进行了分离，经考马斯亮蓝染色，得到重复性较好的双向电泳图谱。P DQUE T软件可识别约 2 0个 S 6

蛋白质点，其中 1个重复性比较好且差异表达在 2以上的蛋白质点，对 0倍采用基质辅助激光解析分离飞行时间质谱进行肽指纹图谱分析，然后用 Mact件对 NC I数据库搜索，其中 2个蛋白质点被鉴定为谷氨酸脱氢酶 ( DH) so软 B G和依赖电压阴离子通道蛋白.( DAC ) IV 1。GD的高表达会影响正常的氮代谢，导致细胞的能量供应发生障碍，有可能 H导致雄性不育； DA V C1是线粒体外膜上控制细胞通透性的蛋白，与植物的程序性死亡密切相关。 关键词：玉米； C型细胞质雄性不育( C )粒体蛋白；双向电泳 c. MS;线

Ana y i f Di e e i lEx r s i n o io h n i l Pr t i s b t e l ss o f r nta p e so f M t c o dr a o e n e we n

C- p t p a mi a eS e i t n 8 2a ant i ri a z eCy o l s cM l t rl yLi eC4 - nd M i a ne M ie i nxu CAO o—u’, Ke, M J ZHU n Guo,P Yi g—

AN a— n a Gu ng Ta g, nd RONG ng Zha‘ Ti— o’(Maz e e rhI s t t Ke a o aoyo r pGe e cR s u c dI r v me tM ii r f d c t n S c u r utr l n v ri, i R sa c tu e yL b rt r f o n t e o rea e ni/ C i n mp o e n, ns yo u a o, i a Agi l a i es y t E i hn c u U tYaa 2 01,Sc ua;’ 6 5 4 ih n Ke n yLa o ao fM iityo b rtr o y nsr fEd c t u a onf rP a t v lp e tl oo y W u n Unv ri, u n 4 0 7 Hu e, i o l De eo m na Bil g, ha n ie st W ha 3 0 2, b i y

C ia hn )

Ab t a t C tp am cm l e ly( MS i az Z am y .i c tg r e t _ MS C- MS a dS C S y e a e s r c: yo ls i aes r i C ) nm ie(e a s ) s a o z di o C, C, n - M p s s d t t i L e i n T t bo p c f e t r t n o u l a e e i ih C- n t s e i c r so a o fn ce rg n, n wh c CM S h sa g e ta p i a o o e t l n ma z y r r e i g d et s he i i a r a p lc t n p t n a ie h b d b e d n u i i i i i otsa l trl y a d r ssa c t b ese i it e t i tn e n o日8 t o p ru ma d sNii . h trl c a im fC- h s o i m y i s T e s i e me h n s o CM S i o l n e so d f ri k e sn t u l u d rt o o s f y t

l e so eya du l a o a eeo - MSadSC . l bet eo tes d sogv meeie cs de - a r c vr ti t nt lt s f C - MS T1 ojc v f u ywa ies vdn e x t d i n i zi h l h T n e i h t t o n ap a a i n o t e se l y r a o

fC. l t st tr i e s n o CM S i i e b a y i g t e d fe n a x r s i n o t e t c o d i o e me n o h i t n ma z y a l z i r tl e p e so f a h rm o h n ra p to n n h e i n i l r

b t e naC tp ei n ( 4 . ) d t ma tie ( 82 . em tc o di r t n tes f 4 - dN 82we e e . es r e i e C 82 a s i a r N4 - )T o h n r poe s a h r o 82a 4 . r w y t ll n i n n h i l a i in n C n e s p rt rt y t odme s n l t p oe i w t e aae f s yb - i n i a ee r h rs i i di l w ol c o s h mmo i z d p 3 1, o - e ) a in d te y S - A E bl e I(- 0 n n l a g de t a n b DS P G . i n i r r sn hh o ma seb ln u .tie r ti p t r a l z ui gP T ec o si rl a t lesan dpoens oswe ay e sn DQUES s fwae teeweea o t 6 ee tbes os i i b en d T t r, r r b u 0d tca l p t o h 2o a h 2 g 1 W i ie t AL . 0F ma s s e t mer n y i d p o e a b s e c i g o l u f 1 r t i n e c D. e . t dr h c M DIT s p c o t a a ssa r t i d t a e s a h n . ny 2 o t 0 p o en r y l n n a r o s o r d n f d wi i n fc t e d t . i h we e u -e u a e n mo o u la h s f C4 - . h y we e i e t e s p t we i e t e t sg i ai a a wh c r p r g lt d i n n ce p a e o 8 2 T e r d n f d a s e i i h i v r i i

gua t e y r g n s G H) dv l g -e e d n inc a n rti- ( DA )r se t e . h DH e i il lt mae h do e ae( D a ot e p n

e t o h n d p oe 1 V C1, p i l T eG xs ma y d n a d n a n e c v y s t ni t c o d i f i h rp a t d p a sa p r n o ei i o e tb l m. c e GDH s p r g l td a y p a e n m o h n rao g e l s a ly i o t tr l n t g n me o i i h n n n m a n r a s On et h i u -e u a e ta h s n

o l t e eo me t ten r l u pyo n rywi ea e td po a l e dn yo ls cse ly Th fpa v lp n, oma s p l fe eg l b f ce, rb byla igt c pam tr i￣ eVDAC1pa s n d h l o t i i t lyn e s n i r l o l t e a s e t o en t ny i ep r e b i f e m t c o d i mb a e b t s p p o i me it d b e m t c o d i l a o nh m a i t o o h n ra me r, u o i a o t s s d a e y t o h n ra l y h t i l n l a n h i l

p t wa . e e p e so f VDAC1i a it fc l d c d a o t t e1d a . n i a n a h y 0v r x r si n o n a v r y o el i u e p p o c c l e t i d c t g VDAC1 a o s r e t - e sn i h i sa c n ev d m o ic o d i lm e t ft ed a c i e y Ou e e c u g ss t a e GDH d VDAC1 i t c o d i r b b y c u e t e h n ra e e n e t ma h n r . rr s a h s g e t tt l o h h r h h n a n m o h n ra p o a l a s i h s rl CM S i az . t i t i C. e i n y nm i e

Ke wo ds M a z; t p a m cm ae se lt M io h n ra r t i s 2 DE y r: i e Cy o l s i l tr i i y; t c o d i l o e n; - p

基金项目：教育部长江学者和创新团队发展计划项目( 14 3;四川省教育

厅基金项目(0 3 0 9 I 05) R 2 0 A 1)

作者简介：珂 (9 9 )男，山东菏泽人，博士研究生，研究方向：物化学与分子生物学在玉米遗传育种上的应用。 . i x k0@16t m许 17一，生 E ma: u e 8 2 .o l通讯作者 ( orso dn to)荣廷昭。Ema:o gz ia.d . C r p n iga h r e u: - i rnt@s ue uc l c n

R cie( eevd收稿日期 )2 0 -5 1; cpe (: 0 70-4 Acetd接受日期)2 0 -91 .: 0 70 -5

玉米C 型细胞质雄性不育系C48-2 及其保持系线粒体差异蛋白分析

第2期

许珂等：玉米 C型细胞质雄性不育系 C 82其保持系线粒体差异蛋白分析 4 .及

23 3

细胞质雄性不育 (yo ls c c tpami mae t it, l e ly s r i

质。本研究旨在从蛋白质组学角度比较不育系和可育系线粒体蛋白质的差异，以期找到与细胞质雄性不育相关的蛋白质，为阐明细胞质雄性不育机制提供依据。

C ) MS是雄性不育中最重要的一种类型，在高等植物中普遍存在。细胞质雄性不育容易实现不育系、保持系和恢复系的配套，当前玉米育种中利用的主是要类型。玉米细胞质雄性不育的研究和利用已成为玉米育种学的重要内容。依据核基因对育性恢复的

1材料与方法11材料 .选用玉米 C型细胞质雄性不育系( 4 .)其保 C 82及持系( 4 .)中不育系是与保持系回交 7代转育 N 82,其

专效性，将玉米 C分为 TC、 . MS S C MS - MS C C和 . MS三大类型。其中， T型不育系育性高度稳定，但是对玉米小斑病 ( emitop r m ma dsNik T小种 H l nh s oi y i s ) u i

表现高度的专化感染；型不育系属于配子体不育类 S型，育性稳定性较差；而 C型不育系兼具前两者的

而成，除育性外其他田间性状均与保持系一致。经

镜检确定雄穗的小孢子发育时期，选择单核期的雄穗，剥取其中部花药。12方法 .

优势，因此在玉米育种中具有重要的意义。而，由然于 C型不育系发现较迟，利用研究较晚，与 T型和 s 型相比，其不育机制研究的还不够深入。 各类型 C MS的产生都和线粒体基因组的

改变

1 .线粒体的纯化 .1 2

参照 Min u a等 l的方 g on 1伽

法分离和纯化线粒体。每克植物材料加 1 0mL匀浆液( 04mo L含 . l甘露醇， 0m l~ T i HC, H 5 mo L r . 1 p s7. 5,10 m m o . lL~ Na EDTA,5. m o 2 0m lL~ KC1 0.%, 1

有密切的联系 u。线粒体基因组分子间重组产生正 J向或反向重复序列是产生不育相关基因的直接原因。这些嵌合基因往往产生异常的转录本和翻译产物，从而干扰线粒体正常功能的发挥，并最终导致雄性不育。De e w y等在 1 9年发现了 C C 91 . MS线

B A, S 2 mmo L D巯基乙醇) l . ,在组织捣碎机上高速捣碎 4,每次 1,用 4层纱布过滤，收集滤液，次 0S并于 4℃下 13 0 g离心 1 i,取上清液于 4C下 0 x 5m n" 1 0 x 0 6 0 g离心 3 n 0 mi,弃上清液。沉淀用缓冲液 A ( 04mo甘露醇， 0mmo L r . 1 p .,含 . l L 5 l~T i HC, H 75 s1 . mmo— NaE A, . 0 l L 2 DT 50mmo L KC ) l 1悬浮后，

粒体 D NA中 a 9C cxI和 a 6C3嵌合基因， t .、o l. p C t.个 p 其中 a 6C由 a 9基因的 5端区段、未知来源的 t. p t p

4 1碱基的阅读框和截短了的 ap 4个 t6基因 3部分组成，其转录可能受 a 9的启动子控制，转录的融合 t p蛋白与正常的 a 6相比，端少 2个氨基酸。由于 t p N 3

1 0x 0 g离心 1 n 3 5mi;再取上清液于 4℃下 1 0 x 06 0 g离心 3 n沉淀即为粗制线粒体。 0mi, 蔗糖梯度分别为 2%、 6 5%和 6%, W2 0 3%、 2 0 S 8水平转头 4 1 0 0 x超速离心 2后，吸取 3%一" 0 00 g C, h 8 5%界面的部分，溶于 5倍体积的缓冲液 A 2,并于 4℃下 1 0 x离心 2 n沉淀即为纯净完整的线 28 0 g 0mi,粒体。 1 .线粒体蛋白的提取 .2 2①每 10 mg线粒体 0

CC . MS线粒体中没有其他的 ap t6拷贝，以认为所a 6C t .可

能编码功能蛋白，并与 C组 C p MS的胞质育性有关『。迄今，与 C 2】对 MS有关的多肽知之甚少，De we 3 yl】、

L vn s Kot[等对玉米的 Tuf3蛋 e ig l 4和 r 5 h1 -rl

白与 C MS的相关性进行了分析，但这些多肽导致

C MS的原因仍然不清楚。双向电泳在蛋白质组学分析中应用较多，但由 于分辨率低和重复性较差，在分离线粒体蛋白质时

加 1mL蛋白提取试剂 1含 1% T A, .7 ( 0 C 00%巯基乙

醇，9%丙酮) 0,涡旋混合后于一 0C置 1h 4 2￣放 ;℃下2 0 x 04 0 g离心 3 n弃上清液。②以 5mL g 0mi, 。的比例加入预冷蛋白提取试剂 2含 00%巯基乙醇的 ( .7丙酮)浮、振荡， 2￣放置 1,悬浮、振荡，离，悬一 0C h心同步骤①,弃上清液。重复步骤② 3。以 5mL次③ g的比例加入 8%预冷丙酮，一 0C置 1h以上， 0 2￣放

受到限制。近几年，由于实验技术的提高，双向电泳可以同时展示 1 0多条多肽，并且有较好的重复性， 0 0完全可以应用在植物细胞质雄性不育的研究上，已 在拟南芥、水稻和玉米的线粒体蛋白质组学研刚究上得到应用。但上述研究多是对整体的线粒体蛋

白质做分析和鉴定，尚未见到对玉米不育系及可育系线粒体差异蛋白质组学的报道。由于线粒体与

离心同步骤①,弃上清液，将沉淀风干。④线粒体蛋白质干粉 1 mg与 2 裂解液[ 70mo 尿素， 0含 . l L2 l 硫脲， . mmo~ DT, . a h . . mo L 0 90 l L T 08 mp o%

C有密切关系u,而玉米 C型 C MS J MS为孢子体不育， r e o mp n H P] 其败育时期是单核期，以玉米单核期花药为材料， t i e crlt ( h l e,% C A S充分混合， J e c l t ye a oi ) 4 n 5可以富集线粒体蛋白质、提高双向电泳的分辨率，悬浮、振荡 2mi。⑤在液氮与 3℃水浴中交替冻融 从而有可能分离鉴定出与玉米 C C . MS相关的蛋白

3次，每融一次涡旋振荡 2 n⑥于 2￣下 2 0 x 。 mi 4C 02

0 g

玉米C 型细胞质雄性不育系C48-2 及其保持系线粒体差异蛋白分析

24 3

作物学报

第3 4卷

离心 1 i。取上清液适量分装，于一 0 0m n 8%保存。 1 .第一向固相 p梯度等电聚焦 .3 2 H按 B ord i. a公司等电聚焦系统说明进行。取出经 B a fr rdod法测

排净气泡后用 1%琼脂糖凝胶封闭， 6 1℃循环水冷却， 用每块胶 1的恒流电泳 3 n 5mA 0mi,再换用每块胶 2 4 mA的恒流电泳，至溴酚蓝指示剂到达距胶底直

定浓度的 5 0 I 0 g蛋白质，加入 IG等电聚焦槽，将 x PIG非线性 p ~ 0的干胶条去掉保护膜胶面朝下， P H 31

边约 1 m处停止。采用考马斯亮蓝染色法，脱色至 c背景消失。1 .凝胶图像分析、蛋白质点的胶内酶解和肽指 .5 2纹图谱分析考马斯亮蓝染色的凝胶经扫描仪 U MAX 1 0扫描获取图像，透射扫描，光学分辨率 20

轻轻置于蛋白质溶液表面，覆盖适量矿物油，盖好聚焦槽盖子，置等电聚焦仪的电极板上，依照P rbe a等[] ou lv 1的方法设置等电聚焦的电压，最终总 1

电压时间积为 9 0 ,其中水化步骤在 5 低 00 0V h 0V电压下进行 1,然后经过 2 0V 1、1 0 h 2h 5 h 0V 3、 0 1 0 h最后稳定在 1 0 。 0 0V 5, 0 00 0V 6h 1 .第二向垂直板 S . A E电泳 .4 2 DSP G等电聚焦

为 3 0 p,对比度与亮度用软件默认值。用 0 d i P Q S . D UE T 8 0分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配和获取斑点位置坐标等。参照廖翔等【 1的方法进行差异蛋白点的胶内酶解，最后获得的将抽干样品送中国军事医学科学院国家生物医学分析

结束后，迅速取出样品的 IG胶条分别于 1 P 0 mL平衡液 A(0mmo L T i H, H 88 6mo L尿 5 l~ r . C1 p . l s,

中心进行肽指纹图谱分析。将质谱结果在 N Bn C Ir数据库(t:w . f sine o上用 MAS O ht/ wwm￣ xc c. m) p/ i e c C T

素，0 3%甘油，% S, 0 T和 1 2 DS 2 0mg DT ) 0mL平衡液B5 (0mmo~T i

HC1p ., l尿素， 0 l L r ., H 88 6mo s L 3%甘油，% S, 5 碘乙酰胺) 2 DS 2 0mg中平衡 1 n 5mi;然后 IG胶条移至 1mm厚的连续 1%均匀分离胶上 P 2

软件进行肽指纹图谱检索。

2结果与分析图1显示， p - 0在 l 1、分子量 8 8 D范围内平 3 -5 kn 3,—— l o

端，在其一端的外侧加 S并 DS标准蛋白质 Mak r re,

8 D 5k

5 D 1l (

31k D 2 D 5k

1 ( 5l D 8k DA

B

C

D

图 1保持系和不育系花药线粒体蛋白质双向电泳图谱Fi .1 Two me i n lc r ho e r m sofpr t i siolt d fo io h dra x r c s g di nso al e top r g a o e n s a e r m m t c on ile t a t e f o t rofN. r m an he and C yt l s e so heibr d i 8 2 c op a m v r insoft n e lne4 .

A:N 82 B C 8;:图 1中方框区域的放大图；:图 1中方框区域的放大图。 4 .;: 4 . C 2 . A D . BA: 8 2: C48 2; e lr e n ft N4 . B: . C: na g me to he￣a d ae nFi me r ai g.1A:: na g me to h - D e lr e n ft e￣a e e nFi m d a ai g.1B r一 Th l wss o s o sa ayz d b ALDIT0F, S. eaTo h w p t n l e yM . M

玉米C 型细胞质雄性不育系C48-2 及其保持系线粒体差异蛋白分析

第2期

许珂等：玉米 C型细胞质雄性不育系 C 82 4—及其保持系线粒体差异蛋白分析

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均识别出约 2 0个蛋白点。通过严格一致的操作， 6获得了重复性很高的 2电泳图谱，育系 C 82和保 D不 4.

按照以上标准共选取了 1 O个重复性较好的点，其中点 8仅在 N 82中表达的点：点 1、3、7是 4.、2、6、

持系 N 82 4 .花药线粒体蛋白的 2电泳图谱十分接近， 9和 1 C 82中上调表达， 4和点 5在 N4 . D O在点 82姗姗瑚瑚∞ .∞如 ∞∞∞ 4 ∞ ∞ 蛋白质大部分分布在分子量 2￣ 5k 5 8

D、p 4 8间。 I—之 中上调表达。蛋白质点 1( o ) s t的肽指纹图谱共有 p 1通过对不育系和保持系花药线粒体蛋白 2图 D谱分析，发现在 C 82 N4 .之间有差异，包括量 4.和 82的差异和有无的差异。将量度差异大于 2倍的点的差异视为量的差异；低于 2倍的差异视为系统误差。 2 2个肽段，经与 N B n数据库比对，匹配的为 7个 C Ir

( 2,匹配率为 3%,说明得到的鉴定结果是可信图 ) 2的。采用 MA DI O/ L - FMS技术鉴定出 1蛋白质 T 0个

点( 1表 ),点 1点 2的分值 ( oe大于阈值 6,而和 s r) c 8

图 2 C4 . 82双向电泳图谱中蛋白质点 1的肽指纹图谱Fi 2 Pe i s m a sfng r i t ng o o e n s t 1 i 8. DE a g. ptde s i e pr n i fpr t i po n C4 2 2. m p

从 2 D胶上切下蛋白质点用胰蛋白酶消化后对酶解片段进行质谱分析，用 Mac t so软件在 N B n数据库中进行搜索， C Ir 该蛋白质为谷氨酸脱氢酶。※表示数据库中能匹配上的肽段。Thepr t i x i e r m e swa ge t d wih t y i nd t e u t e tde r na y e . t ba e s a c i g u i g o e n e c s d fo g l sdi s e t r psn a he r s li p p i swe e a l z d Da a s e r h n s n ng M ASC0T O t a e a a ns S fw r g i tNCBI rd t ba e i e tf e h o e n a l t m a e d h r g n s . n a a s d n i d t e pr t i sg u a t e yd O e a e i※ i di a e a c d p p i e y usng M AS n c t sm t he e td s b i COT O t r ga n tNCBI a a a e. S fwa e a i s nrd t b s

表 1差异蛋白点的肽指纹图谱鉴定结果 Ta e 1 M a z nt r m io ho r a o e nsby pe i sm a sf n r i i bl i e a he t c nd i l pr t i ptde s i ge pr ntng

匹配蛋白质

的分子量和等电点；一表示蛋白质点缺失，+表示蛋白点出现，++示表达量增加 2以上。 表倍) o e u a i h n l o a c e r t i 一 i i a e h bs n r t i po+ i d c t st e pr e p t+ i di a e h p t M l c l r we g ta d p fm t h d p o e n; nd c t s t e a e tp o e n s t n i a e h es nts o .+ n c t st e s o.

wih m o e t n t w— o d e p e son t r ha o f l x r s i .

玉米C 型细胞质雄性不育系C48-2 及其保持系线粒体差异蛋白分析

作物学报

第3 4卷

其他点均未达到该阈值，明只有点 1和点 2的鉴说定结果是可信的，而对于其他的点由于玉米线粒体蛋白质数据库数据的不完善，未能鉴定出有意义的结果。

过量表达的 V C1蛋白在老鼠I、人和水稻 DA中均已经被证明可以导致凋亡细胞的死亡。V AC1 D

还可以独立介导细胞凋亡的发生 I。本试验结果表 2刚明，玉米 c型雄性不育系中线粒体内的 VD C1的 A高表达可能与花粉 P D过程有关。异蛋白质究竟 C差是导致细胞质雄性不育的原因还是结果，尚难定

3讨论 本试验得到的蛋白质点 1经数据库鉴定为玉米谷氨酸脱氢酶 (ltma ey rgn s, D。等 gua t dh do e ae G H)高 e植物的G DH主要存在于线粒体基质中，它既能催化铵与 0酮戊二酸合成谷氨酸，又能催化谷氨酸的氧【 .

论。我们将在利用同一核背景不育系和保持系的基础上，加恢复系材料，进一步研究差异蛋白质的增

表达，以探明导致雄性不育的真正原因。目前仍有一

些二维电泳技术无法根本解决的难题，如：低丰

化同时释放出铵，在植物氮代谢中起着重要作用。 GD H在不育系 C 82中的表达量是保持系 N 82的 4. 4.2倍以上，明在不育系中的 G H的高表达或许会说 D

度蛋白质点的检测、极酸和极碱性蛋白质的提取、 高分子质量区蛋白的分离、膜蛋白的提取和有效分离等；加之玉米线粒体蛋白质数据库数据的不完备，所获得的一些差异表达蛋白质不能被鉴定出有意义的结果。所以差异蛋白质与细胞质雄性不育关系的

影响细胞内氮代谢的正常进行，使细胞正常发育所需的能量供应不足。一般认为，不育系中，线粒体在

功能失调，不能提供小孢子发育所需的足够能量， 导致花粉败育 f。本研究中不育系花药线粒体中 1扪G DH的高表达有可能与细胞质雄性不育的发生相关联；也有可能是因为花药败育引起大量蛋白质的

研究，尚有待于相关技术的改进和玉米线粒体蛋白质组学基础研究的进一步深入。

4结论 首次利用差异蛋白质组学技术，对玉米 c型不

降解，从而释放大量的铵，G DH由于可以解除或缓解植物铵中毒而被诱导表达。蛋白质点 2在不育系中上调表达，被鉴定为玉

育系及保持系的单核期花药线粒体蛋白质进行分析， 发现谷氨酸脱氢酶和依赖电压阴离子通道蛋白在单核期不育系的增强表达同 C MS密切相关。一初步这

米依赖电压阴离子通道蛋白(otg .e e d n n v l ed p n e ta . ainc a n l rti) o h n e poen,和文李 H在水稻上的研究结 果一致。vD Ac有 v C1 DA、VD C A 2和 V C, DA 3但作用各不相】本研究得到的差异蛋白为 VD。 AC1 型。V C是一种广泛分布于所有真核生物线粒体 DA

结果还无法解释 C MS的不育机机制，为进一步开但展玉米 c型 C MS不育机制的研究打下了基础。Re e e e f r nc s[] C n e Ha s nM Ho d t rt n n pa tmi— 1 o ly C A, n o R. w o a eai si ln t l o oc n r a g n me d su le d v l pme .J Bi e e g ho d i l e o s i r pt po l n e e o nt o n r

外膜上的蛋白，其闭合可以抑制线粒体功能，导致线粒体膜通透性发生改变，释放蛋白，如细胞色素 C、细胞凋亡因子等。最终导致凋亡f。V C与 1 DA

Bim e o mb,1 95 27 4— 7 ,: 47 45 9

[】 De y R, i t y D H, e i g n . i rcmi— 2 we E T moh L v n sC S 1 Chmei t oc o d i l g n s e r s e n t e C l— t r l

y o l s o h n r a e e xp e s d i h ma e s e ie c t p a m f a z .Cu rGe e,1 91 2 4— 2 m ie r n t , 0: 75 48 9

各种代谢产物如 AT、A、还原型烟酰胺腺嘌呤 P DP二核苷酸( A ) N DH以及阴离子、阳离子的跨线粒体外膜转运有关。对线粒体及细胞功能的调节非常重要。在水稻、小麦、玉米中已经有许多的剐们们

[] De yR T mo h L v n sC S 1 A mi c o d i l 3 we E, i t y D H, e i g 1 . t h n r 1 o ap o e n a s c a e t y o a mi a e se iiy i c t— r t i s o i t d wih c t p; s c m l t rlt n T y o p a m of ls ma z . PF C Nat ie O f Ac S i US ad c A, 1 8 9 7, 8: 4 53 4 3 7 -5 78

V AC被分离、测序和鉴定。L D i

证明红莲型水

稻花粉败育过程是细胞程序化死亡 (rga po rmme el dc ld a, C的过程。P D过程首先也是线粒体失去 et P D) h C

[] L v n sC S 1 T eT x s yo ls o i e c tp a mi 4 e i g 1 . h e a ec tp a m f 1 ma z: yo l s cm a e s e iiy a d d s a e s s e tb l y c e e 99,2 0 l t rlt n i e s u c p i ii .S i nc,1 0 5: t 9 -9 7 42 4

功能，植物线粒体在 P D中起着介导细胞死亡信号 C的作用，粒体膜完整性消失，细胞色素 c释放，线乃至核膜完整性消失、液泡膜破裂，最后水解酶释放

[】 Ko t L e ig S l. c lv r s e p e s n o e 5 rh K,L vn sC l Ba uo iu x r si ft I o hma z t c n ra r t i i e m o ho d i l p o e n URF1 c f r n e tc d l a— i 3 on e s i s c i i a c tve y i e l c lu e a l r a .Pr c Na lAc d S i i t n c l u t r nd a v e o t a c US A, 1 9

9 3 88 3 2 9 3. O: 3—3 9

到细胞质中，引起细胞死亡等。 AC蛋白恰恰可以 VD通过控制线粒体膜的通透性来达到释放细胞凋亡因子的作用，从而在细胞 P D过程中起重要作用 f。 C 2扪

[] M i a S el v , e 6 P Le v rC J An y i f 6 l rA H, we t e L J Gig ' a e . a sso l o lt e Ar i ps sm io ho d i lp o e h ab do i t c n r a r t ome Pl n y i l 2 01 . a tP s o, 0,】 7:】 1 7 7 2 71—1 2

玉米C 型细胞质雄性不育系C48-2 及其保持系线粒体差异蛋白分析

第2期

许珂等：玉米 C型细胞质雄性不育系 C 82 4—及其保持系线粒体差异蛋白分析

27 3

a l woo Ho d J L, we lK W h l n J M i1 r A To r s l A, ea, 1a H. wa d [] He z e 7 a n l i ft e rc t ho d i l r t o n a a ys so h i e mioc n r a o e me Pl nt y i, p . a Ph s ol 2 3 3:2 0 4 00,1 2 3 -2 2

e t r o y 0,1 9 51 6 n e ol g,2 05 2:3 -3 0

[8 M a s Ma l r Mat r n C c o i, ir c i 1] s aR, r i a L N, r a a A, ic n P e u c e o S D,Gic mi i a o n De P n o V seln i t Ca t la JL.I ta el a o aia nr c l ulrlc lz—

c h d ng rF,Guo L,S h bl c na e P S.Cyt l s i e l— op a m c r gu a[] Ho h ol i e 8 to f t e a c i n o h c umu a i n o u l a— nc d d pr t i n t e l to f n c e e o e o e ns i h r mio h d i lp o e me o a z . an 2 0 3 t c on r a r t o fm i e Pl t J, 0 4, 7:1 9 08 —2 9

to n s f r e p e s o f t la - d p nd n i n i n a d i o o m x r s i n o he vo t ge e e e ta o n

c a n l VDAC n n r l n y t p i k ltl s l.

hn e ( )i o ma d d s o h c s ee a mu ce J a rM u c e Re s l s Cel M otl 2 0, 1 4 - 2 f i, 00 2: 33 44

[] Lu J (纪麟 ) 9 i -刘 L .Ma e B edn (,育种学 ) 2 d e n i reig T米 z, n d .

[9 A1 i r, o e s S y r Va t r , a o t l, 1] t Ro s n B aF N, me e sM, u e i M v B x e n n JJ c bs M,Ho ao mbl 6 F.Se e e a l s s r ns rp i na nd qu nc na y i,t a c i to l ap tr s r p i na e l to ft e r c a a l Bi hi ost a c i to lr gu ai n o i evd c f miy. oc m n h

Be ig Chn r utr rs, 0 0 P2 6i iee i n: iaAgi l eP es 2 0 . 6 ( Chn s) j c u ng o a H,Vim a i S,Br q e .M io h d i l DNA r n S i u tM t c on ra [0 M i n un 1] mod fcai n s o i t d i i to a s c a e wih y o l s c t c t p a mi m a e s e iiy n l— t r l i t rc . e rAp n t 9 7, 4: 66 9 i e Th o plGe e,1 8 7 6—6 9 a rV l e t r i e D O.Th e[ 1 Po u l va L,v n de e d n K,Ko ha i S,Olv 1] r bepoe r t ome f m a z l a:us o e e e u n e a d x o i e e ve e f g n s q e c s n e—

Bi ph sAc a 20 3,1 25 43 o y t, 0 6:—51

[ 0 E k l s A,De o ,Gr u 2] l ee v sK M a r D M,Br i n A.Mut l ema lpe i c Aso e tv l g— e e d n no h n es( DN fwh a ot e d p n e t i n c a n l VDAC: a a )i o a i n, d fe e ta e r s i n m a p n a d vo u i n. s l to i f r n i l xp e s o, p i g n e l to P

l t of o,1 95 9 0 -1 4 an M l 9,2:1 9 2 Bi

p e s d s q e c a t o d nt c to f p o e ns wih r s e e u n e t g da a f r i e i a i n o r t i t i fp p i e m a s fn e p i s e td s i g r rnt . El c r p r s s e t o ho e i, 2 01 0, 22:

[ 1 Geg r T R,Ket , u z n k G,Ne o J e 2] ie i C S M s y s iM h wt n K .S—q n e of t e a z DNAs n od n t c o ra o t ue c hr e m i e c e c i g mio h nd i l v l—

1 4 7 72 -1 38

o, ig Y( T, n—(, n[2 L a ( 1] i x廖翔 )Y n 应天翼 )Wa gH L t恒楔)Wa gJ/ (E杰) We K—魏开华 ) Hu gL Y(留玉) A mo i e , i H( , a—黄 n . df d ime ho . e i si fCo t d ofi . ld ge ton o oma s e b ila tbl e.t i e ng s i rli n u . a n d s

a e d p n e t n o h n es( g— e e d n in c a n l VDAC) r ti . a t h so, a p o en Pln y il P1 99 21 8 -68 9,1:6 5 6

[2 L W a Ko gJ Z agZ J L , h P o 2] i Q, nC x, n, h n , i S Z uY G. r— S Yga r mm e e ld a h d in c o e e i n a Ho gla d c l e t ur g mi r g n s s i n i CM S n ln frc sc r e a e t x d tve sr s n mio h n i . i e o i e i o r l t d wih o i a i te si t c o dra Fu tPl t ol 2 4,: 69 3 nc an Bi, 00 31 3— 76

2D es etB oe h o(物技术通讯 ) 0 3 46:一 g l.L t itc n l生 ,2 0,l ()5 9 5l ( i e ewi n l h a s a t 0— i Ch n s t E gi b t c) n l h s rn o R,B

e t ia S.I t r c i s o t c on r a nd n ol l n e a ton f mio h d i l a [ 3 Ha s n M 1] n l a g n s ha a f c m a e uc e r e e t t f e t l ga e o y e m t ph t de e o v l pme t n. Pl tCe l 2 0 an l, 0 4,1:1 4 6 6 5—1 9

【3 T ui t S i z . h otg—e e d n no h n 2] sjmooY, hmiuS T ev l edp n etainc a— an h n s e ta a e i a p o i .Bi c i e 0 2,8 e a e s n i l pl y r n po t s s o h mi,2 0 4: 1 7 93 8 -1

[4 We 文李) i G(盖) 1] nL(,Lu刘 ,Wa g K( n t坤 ) P n J彭晓， e g X—(

珏) iG—李国民) T o J陶钧 ) P ei n r n lsso,L M(, a ( . rl ay a ayi f mit o a r t i s o he t t lp o e n f HL yp y o l s c m a e s e i t i e t e c t p a mi l t rl y rc i

[ 4 Z i H, Ab— ma S Ir es n 2] ad u Ha d, sa l A, Nah n, S o o t a I h—s n Ba m a z V Th v l a e d p n e t a i n ha ne ha— r t e o t g— e e d n n o c n l 1

p l n J W h n B tR s武汉植物学研究 ) 2 0,2 () ol . u a o e ( e , 0 7 52:1 2 1 ( ie ew t n l h a sr c) 1 -1 7 i Chn s i E g i b t t n h s ae g E h i [5 Ch n H,S e ko T 1】 F s e i h r J K,Cr i e , r me e a g n W J Ko s y r

mo uae p poi eld ah elDe t f,2 0,1: d ltsa o tt c l et .C l c ah D/ 0 5 2 f7 -7 51 60

[ 5 Go b l 2】 d o e A,V r h s,S r M ah w M VDAC i a ag e e J a i A, t e K. n s c s r e l m e e t p t wa i p a t n

a i a on e v d e e nt of d a h ah ys n l n a d n m l

S . VDAC2 n i is J i h b t BAK a tv to a d c i a i n n mioc n r a t ho d i l a p o i . i n e, 0, 01 po t s s Sc e c 2 03 3:51—51 3 7 e n D o me t p ysol g t ho—[6 Gr e R,Kr e r G The paho h i o y of mioc n 1] d i lc l a h. c e e 0 4, 0 62—6 9 ra e l de t S i nc,2 0 3 5: 6 2ma t r .Dy n h us n e t:r d n ntp t i g a t o a d d a hs e u da a hwa ys[7 Le s e s J J 1] fo r m if r n ga e l s t p p o i a c o i .Ga to d f e e t or n le o a o t s s nd ne r s s sr—

s t ms Bi c i Bi p ysAc a, 00 1 42 87 96 yse . o h m o h t 2 3, 6:—

[6 A u Ha d S S v n S S o h n BamazV. e e p e s n 2] b— ma , i a , h s a— r t Th x r si ol v lo ol ge d p n e ta i n c a n lc n r s l e a d e e ft v t he a— e e d n n o h n e o tol i n f

d ah f t e e1 e t o h c l.Pr c o Na f Ac d c US t a S f A, 2 0 0 6, 1 3: 0 5 7 57 2 78 - 9

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