CFSE

货号：C375 活细胞染色 -Cellstain- CFSE

CAS NO：150347-59-4

化学名：5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)-3',6'-O,O'-diacetylfluorescein 别名： CFSE 结构式：

分子式：C29H19NO11 分子量：557.46 价格： 货号 C375

规格 1 mg 价格（RMB） 980 备注 现货 性质：

外观：白色或浅黄色粉末 纯度：>95.0% (HPLC)

产品描述

CFSE能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内聚积并与胞内蛋白共价结合，水解后的CFSE释放出荧光物质，这些共价结合的荧光物分子很少从细胞内脱落。CFSE标记后的细胞用于体内观察可以长达数周。因此，CFSE常被用来做活细胞检测试验和用荧光电镜观察细胞长期活动的试验。CFSE标记的细胞的激发和发射波长分别为500 nm和520 nm。

染色过程：

1. 用DMSO制备1mM 的CFSE溶液。用PBS或适当的缓冲液将其稀释成

10-50 μM的CFSE溶液。

2. 将1/10细胞培养基体积的CFSE溶液加入到细胞培养基中。 3. 在37℃培养细胞15-30分钟。

4. 用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

5. 用490 nm激发波长，530 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

常见问题:

储存条件：-20℃ 参考文献：

1.Diverse Effects of Methylseleninic Acid on the Transcriptional Program of Human Prostate Cancer Cells 查看

2.Contribution of BCAP to maintenance of mature B cells through c-Rel 查看

细胞增殖检测：CFSE

1195 作者：佚名 发表于：2008-07-28 12:43 转载请注明来

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一、原理

荧光染料CFSE， 也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacetate，succinimidyl ester） 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入细胞；而当其扩散进入细胞内环境，内源的酯酶可将其乙酸基团水解，此种形式的CFSE分子具有很高的荧光活性，被激发能够产生绿色荧光，却不再具有膜通透性；同时，其含有的succinimidyl ester基团能与胞内的细胞骨架蛋白中的游离胺基反应，最终形成具有荧光的蛋白加合物。因此，当细胞进行分裂增殖时，具有荧光的胞质蛋白被平均分配到第二代细胞中，这样与第一代细胞相比，其荧光强度便会减弱至一半；以此类推，分裂得到的第三代细胞的荧光强度便会比第二代细胞再次减弱。这种现象可以在488nm的激发光下，采用流式细胞仪检测分析，通过检测到细胞荧光强度不断的降低，进一步分析得出细胞分裂增殖的情况。

二、CFSE配制

用DMSO溶解成5 mmol/L的储存液，于- 20 ℃避光保存。使用时，用无

血清DMEM培养液稀释成5μmol/L的工作液备用。CFSE试剂盒内有一小瓶CFSE（A试剂）标明500ug ，另有一小瓶DMSO（B试剂），500ugCFSE溶解于180ulDMSO即是5mMstock solution。

三、CFSE标记细胞

制作细胞悬液，加入等体积CFSE工作液，于37℃孵育10 min，用40%体积的冷小牛血清立即终止标记10min。 离心洗涤两次后，用适量的完全培养液重悬细胞。

CFSE的浓度国外报道从0.5uM~20uM都有，建议终浓度为2.5-5uM。浓度太低，细胞标记的荧光强度不够，太高了对细胞有毒性，且影响细胞增殖。标记孵育时要经常摇匀。

细胞增殖检测方法：总论

619 作者：佚名 发表于：2008-07-28 12:12 转载请注明来自

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一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法

胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。

二、MTT检测法

MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准

确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比

三、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法

羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使C E成为一种良好的细胞标记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。

四、Brdu检测法

Brdu中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。

靶细胞杀伤实验：总论

548 作者：广州军区联勤部药品仪器检验所 姚朗 发表于：200

8-07-28 13:36 转载请注明来自丁香园

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细胞介导的免疫反应（cell mediated immune， CMI）在机体抗感染及抗肿瘤免疫、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用。CMI的主要效应细胞

之一为细胞毒T淋细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）。目前在医学基础与临床研究中重视CTL活性测定，将其作为了解机体细胞免疫功能和探索疾病机理的重要方法之一。

经文学事业上的资助者的CTL活性测定方法为51铬（Cr）释放法，本法结果准确、重复性好，但也存在以下不足：

1、使用放射性的51Cr不利于安全操作及废物处置，且需特殊测定仪器； 2、51Cr自发释放率高，常因不同靶细胞标记效率变化差别大而影响结果判定；

3、51Cr半衰期（27.8天），无法用于需多次测定的动物试验；

4、细胞共育时间短而试验操作步骤多，不能在单个细胞水平进行测定。因此多年来人们一直试图寻找可以替代51Cr释放法的CTL活性测定方法，如采用荧光标记、流式细胞分析和报告基因等技术的灵敏可靠、简单易行的非同位素测定法。

一、荧光测定法 1、定法

（1）alamarBlue一步荧光测定法

alamarBlue为活细胞代谢指示剂，易溶于水，进入细胞后经线粒体酶促还原产生荧光及颜色变化，可用以定量。具体测定方法是：在靶细胞孔（T）、效应细胞孔（E）和实验孔（T+E）各加alamarBlue，共育6~24h后用板式荧光测定仪测530nm（发射）/590nm（散射）波长荧光强度，将T及E孔荧光均值相加后减去实验孔（T+E）荧光均值，与T孔荧光均值比较即可计算CTL对靶

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