酶底物法系统 - 图文

西安立科环保科技有限公司 水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍

一、 检测用途：

酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）

和大肠埃希氏菌。可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理：

酶底物法采用 ONPG 和 MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为黄色。大肠杆菌使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢 MUG 时，能够发出荧光。

三、 优势特点：

酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。 以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。

表1 多管发酵法、滤膜法及酶底物法比较统计

项 方 目 法 多管发酵法 3-5天 — 2-1600MPN/100mL 洁净实验室 滤膜法 2-3天 23-26% — 洁净实验室 酶底物法 1天 1% 1-2419.6MPN/100mL 无特殊要求 检测时间 假阳性 检测范围 环境要求 实验人员要有专业基础、操作熟有专业基础、操作熟简单培训即可 求 定量标准 定量方法 练 MPN表 15管 练 直接计数 菌落计数 MPN表 51或97孔板 方法优势：

1.无需在无菌室内操作。 2.手工操作时间小于1分钟。

3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。

4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。

已经列入

1.GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标。

产品特点：

1.colitech酶底物法检测试剂，LK定量检测盘/定量孔板，LK定量瓶出厂前均已灭菌，客户可以直接放心使用。

2.colitech酶底物法检测试剂是我公司潜心研制并符合GB/T5750.12-2006的酶底物法培养基，假阳性和假阴性均优于传统方法。

3.colitech酶底物法检测试剂经大量客户实验室使用和验证，表明与传统方法多管发酵法和滤膜法具有方法一致性和可比性。

准确/可信

● 使用MPN法进行定量检测，可直接检测100毫升水样中1～2419MPN(个)目标细菌

● 精确检出100ml水样中单个的活性大肠杆菌群和大肠埃希氏菌,假阴性低

● 每个单位试剂可抑制上百万个异养细菌，假阳性低 ● 无需验证试验，准确性高于滤膜法及多管发酵法

● 符合中国国家标准GB/T5750.12－2006《生活饮用水检验标准》

简单/快捷

● 检测时间不超过24小时，无需确证试验 ● 简单培训就能轻松使用，手工操作少于一分钟

● 不会因为过滤阻塞(滤膜法)或异养细胞的干扰(多管发酵法)而产生数据误差 ● 无需玻璃器皿清洗及菌落计数，减轻实验人员工作量 ● 适用于大量样品的批量快速检测

四、 配件以及技术方案：

针对酶底物法检测的原理采购相应的设备。用途如下：

程控定量封口机：用于定量检测盘的封口。 酶底物检测试剂：用于选择性检测水中的目标细菌。 51或97定量检测盘：用于判断目标微生物数量。

100毫升定量瓶/取样瓶：专业的为水样与试剂提供溶解环境。

紫外手持式紫外分析仪带暗室：测定大肠埃希氏菌时用于在暗室中观察荧光。

五、 操作方法：

第一步：将水样加入100ml取样瓶中，加入酶底物法检测试剂，拧紧盖子摇匀至完全溶解。

第二步：将样品加到定量检测盘中。

第三步：使用程控定量封口机对定量检测盘进行样品分配及封口

第四步：将封口好的定量检测盘放在36±1℃，如需测定粪大肠菌群（耐热大肠菌群）则将培养箱设定为44.5℃，培养24h.

第五步：对照比色盘数阳性（显黄色，或荧光）格子数，按照使用的检测盘类型，分别查51孔或者97孔MPN表得出100毫升中大肠菌群的菌群数。对照MPN表出数据。

第六步：根据稀释倍数最终结果按公式计算结果

大肠菌群(个/L)=MPN值×稀释倍数×1000mL/100mL

西安立科环保科技有限公司 2015.3.24

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