慢性骨髓增殖性疾病JAK2 V617F点突变与ETS2mRNA表达的关系

更新时间:2023-07-29 22:55:01 阅读量: 实用文档 文档下载

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目的探讨慢性骨髓增殖性疾病(cMPDS)中JAK2V617F点突变的发生率、ETS2mRNA表达情况及其相关性。方法选择BCR/ABL阴性的cMPDs患者62例、慢性粒细胞性白血病(CML)20例、急性白血病(AL)10例和健康志愿者15例为研究对象;用RT—PCR技术检测其ETS2mRNA的表达水平,用AS-PCR筛选各组JAK2V617F点突变,以基因测序验证突变结果,分析ETS2mRNA表达水平在cMPDsJAK2V617F点突变阳性组

山东医药 2 1 00年第 5鲞筮 Q

慢性骨髓增殖性疾病 J K 67 A 2V 1F点突变与 E S R A表达的关系 T 2m N孙国锋潘,峻“,陈海林李书芹李雪政任晓梅,,, ( 1邯郸市中心医院,河北邯郸 0 60; 50 12河北医科大学第二医院)

摘要:目的

探讨慢性骨髓增殖性疾病 (MP S中 J K 67 e D ) A 2V 1F点突变的发生率、 T 2mR A表达情况及其 E S N

相关性。方法

选择 B R A L阴性的 c D患者 6 C/B MP s 2例、慢性粒细胞性白血病 ( ML 2 C ) 0例、急性白血病 ( L 1 A )0

例和健康志愿者 l 5例为研究对象; R—C用 TP R技术检测其 E S R A的表达水平, A -C T2m N用 SP R筛选各组 J K A2V 1 F点突变, 67以基因测序验证突变结果,分析 E S R A表达水平在 c D A 2V 1F点突变阳性组与阴性 T 2m N MP s K 67 J

组之间的差异。结果

6 2例 c D患者中,4例患者检测到 J K 67 MP s 4 A 2V 1F点突变,其余 l 8例及 C ML、 L健康志 A、

愿者中未检测到该突变。E S R A表达水平在 c D组、 ML组和 A T 2m N MP s C L组均显著高于健康志愿者。c D MP s组J K 67 A 2V 1F点突变阳性病例 E S R A表达水平明显高于突变阴性病例, T 2m N差别有统计学意义( 0 0 2。结论 P= .2 )

大部分 c D患者存在 J K 6 7 MP s A 2V 1 F点突变;A 2V 1 F点突变阳性 c D患者 E S N J K 67 MP s T 2mR A的表达水平高于阴性者。

关键词:骨髓增殖性疾病,慢性; K 67 J 2V 1F点突变;T 2基因 A ES中图分类号:5 13 R 5 .文献标志码: B文章编号:0226 2 1 )30 3 -2 10 -6 X(0 0 1-070

为探讨慢性骨髓增殖性疾病 ( MP S患者 c D )

m N的扩增产物为 4 7 b。E S N的扩增 RA 3 p T 2 mR A

E S N T 2mR A表达与 J K 67 A 2V 1F点突变的相关性, 我们采用 A—C SP R法筛选 c D MP S患者 J K 67 A 2V 1F点突变, R—C法检测 E S N的表达水用 TP R T 2mR A平,并分析了二者

之间的关系。现将结果报告如下。1资料与方法

条件为:4c预变性 5mn9变性 4,8℃退 9= I i, o 4C 5S 5火 4,2℃延伸 1rn经历 3循环后 7 5s7 i, a 5个 2℃延伸 1 i。取 E S N扩增产物, 0rn a T 2mR A同时加入 8一

a i扩增产物, 2 0 cn t经 .%琼脂糖凝胶 ( E )含 B电泳,在读胶仪 Ap a gr20上进行扫描, lhl el0 ma应用分析软件将 E S R A的相对表达水平以其灰度值除以 T 2m NBat R A灰度值表示。—c nm N i

11临床资料 .

20 05年 l 2月一 06年 l在河 20 2月

北医科大学第二医院、郸市中心医院、水哈励逊邯衡医院血液科住院和门诊随访的 B R A L阴性 c— C/ B MP

12 2 A -C . . SP R检测各组 J K 6 7 A 2V 1 F点突变

D S患者 6 2例 (MP s组 )男 3 c D, 5例、 2女 7例,龄年 1 8 9— 6岁;中真性红细胞增多症 ( V)6例,发其 P 2原性血小板增多症 ( T) 6例,性特发性骨髓纤维 E 2慢化(I ) CMF患者 9例,慢性中性粒细胞白血病 ( N ) C L 1;例患者经过骨髓细胞形态学、疫学、胞遗传免细

单个核细胞中提取基因组 D A,行 P R扩增。 N进 C

P R反应体系为 2 .,括 1冲液 2 5 l C 50包 0X缓 .,引物 ( 0 ln lL 2 ld T x 1 m lL 0 5 2 ,o ) , N P mi( 0 m o ) . a/ r/,

,

M C22 m l ) . l高保真 T q酶 0 2 g1 5m o L 15, (/ a .5 D A模板 10 n其余以去离子水补足至 2 N 5 g, 5引物序列: K J 2野生型上游引物: T I T A 5一 C, A I A

学和分子遗传学检查符合 WH O诊断标准。同时选择慢性粒细胞性白血病 2 0例 ( ML组 )急性白血 C、病 1 ( L组 ) 0例 A和健康志愿者 5例 ( C组 ) N进行对照研究。1 2方法 .

AG AT GC T C T GAA AGT AG AG AAG一 J 2 G A 3。 AK

突变型上游引物: A C AI’ G IT A AI' 5一 G ,IT G兀T A , , '’ I

A G

G G 1 T A r3。J K公共下游引物: T A I T - A A2 5一C TG AAT AGT CCT ACA GTG T TI TCA GTT TCA.

12 1 R—C .. TP R法检测 E S R A的表达 T 2m N

所用

3。引物由上海生工生物公司合成,生型扩增产 野物为 34b,变型扩增产物为 2 3b。P R产物 6 p突 0 p C

引物序列:T 2的上游引物: T C G CA CG C ES 5一C T G T A CT C3,游引物:' A C A C C C A -下 5- CT C C TC GT T A

分析:分别取 J l A( 2扩增产物, 2 O经 .%琼脂糖凝胶

C A-I C 3O引物由上海生工生物公司合成, T 2 E S 通讯作者

电泳,在紫外灯下观察结果,并在读胶仪 Ap a a— l Ig hmel0 r20上进行扫描,同时存在 34b 6 p和 2 3b两条 0 p

条带的为突变阳性,只有 3 p一条条带的为突变 4 6b3 7

本文来源:https://www.bwwdw.com/article/ei2m.html

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