营养饲料分析实验指导

实验一 饲料中吸附水的测定（烘干法）

一、原理

试样在105±2℃烘箱、一个大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为水分。 二、适用范围

本方法适用于测定配合饲料和单一饲料中水分的含量，但用作饲料的奶制品、动植物油脂及矿物质除外。

三、仪器设备

1. 实验室用样品粉碎机或研钵。 2. 分样筛，孔径0.45mm（40目）。 3. 分析天平，感量0.0001g。

4. 电热式恒温干燥箱（烘箱），可控温度在105±2℃。 5. 铝盒（或称量瓶），直径40mm以上，高25mm以下。 6. 干燥器，用变色硅胶或氯化钙作干燥剂。 四、试样的选取与制备

1. 选取有代表性的试样，其原始样量在1000g以上。

2. 用四分法将原始样品缩至500g，风干后粉碎至40目，再用四分法缩至200g，装入密封容器，置阴凉干燥处保存。

五、测定方法

1. 空铝盒烘干至恒重（W0）

洁净铝盒在105±2℃烘箱中烘1h，取出，在干燥器中冷却30min，称重（准确至0.0001g）；再烘干30min，同样冷却、称重，直至两次称重之差小于0.0005g为恒重。

2. 称样（W）

用已恒重的铝盒称取两份平行试样，每份2g左右（含水重0.1g以上，样品厚度4mm以下），准确至0.0001g，平铺于铝盒中。

3. 铝盒+样品烘干至恒重（W1）

将称好试样的铝盒开盖置于105±2℃烘箱中烘3h，取出，盖好铝盒盖，在干燥器中冷却30min，称重。再同样烘干1h，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.001g为恒重。

六、结果计算 1. 计算公式

试样水分（%）?吸附水重量(g)试样重量(g)?100?W?W0?W1W?100

2. 重复性

每个试样至少取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。两个平行样测定值相差不超过0.2%为合格。

七、注意事项

1. 进行恒温计时应以达到设定温度开始，而不以接通电源算起。

2. 某些含脂肪高的样品，烘干时间长反而会增重，为脂肪氧化所致，应以增重前称量值为准。

3. 含糖分高、易分解或易焦化试样，应使用减压干燥法（70℃，600mm汞柱以下，烘干5h）测定水分。

4. 多汁鲜样去除初水分后为风干物质，风干物质去除吸附水后为绝干物质。

鲜样总水分（%）?初水分（%）?吸附水（%）??1?初水分%?

5. 计算时，取恒重中的小数值进行计算。下同。 八、其他

除本节述及水分测定方法外，尚有水分测定仪等仪器可对水分含量进行快速测定。

实验二 饲料中粗灰分的测定（灼烧法）

一、原理

试样在550℃充分灼烧去除有机物后所得的残渣为粗灰分。残渣中主要是氧化物、盐类等矿物质，亦包括混入饲料中的砂石、泥土等，故称粗灰分。

二、适用范围

本方法适用于配合饲料及各种单一饲料中粗灰分的测定。 三、仪器设备

1. 实验室用样品粉碎机或研钵。 2. 分样筛，孔径0.45mm（40目）。 3. 分析天平，感量0.0001g。

4. 高温电炉，可控温度在550±20℃。 5. 瓷坩埚，Φ30mm。

6. 干燥器，用变色硅胶或氯化钙作干燥剂。 四、试样的选取与制备

选取有代表性的试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，于密封容器中保存防止成

分变化和变质。

五、测定步骤

1. 空坩埚灼烧至恒重（W0）

将干净坩埚放入高温电炉，在550±20℃下灼烧30min，取出，在空气中冷却约1min，然后移入干燥器冷却30min，称重。再同样灼烧，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.0005g为恒重。

2. 称样（W）

在已恒重的空坩埚中称入2g左右试样，准确至0.0001g。 3. 坩埚+试样灼烧至恒重（W1）

将称好试样的坩埚放入高温电炉中，先在300℃下炭化20min左右，然后温度升至550±20℃下灼烧3h，取出，在空气中冷却约1min，移入干燥器冷却30min，称重。再同样灼

烧1h，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.001g为恒重。

六、结果计算 1. 计算公式

粗灰分（%）?无机物重量(g)试样重量(g)?100?W1?W0W?100

2. 重复性

每个试样至少取两个平行样测定，以其算术平均值为结果。

粗灰分含量≥5%时，允许相对偏差为1%；粗灰分含量＜5%时，允许相对偏差为5%。 七、注意事项

1. 试样第一次高温灼烧前应进行炭化，以使燃烧氧化完全，但炭化过程不应太快，以防试样飞溅。

2. 灼烧残渣颜色与试样中各元素含量有关，如含铁高时为红棕色。但有明显黑色炭粒时，为炭化不完全，应延长灼烧时间。

3. 为避免坩埚盖混淆，需在瓷坩埚上作标记，可用FeCl3溶液处理，方法为：取0.5tCl3

溶液30ml，加数滴0.1mol/L AgNO3溶液（或钢笔水），混均，用细笔尖蘸此溶液在瓷坩埚上作标记，然后将其置于550℃高温电炉中灼烧后即可。

实验三 饲料中粗脂肪的测定（浸提法）

一、原理

在索氏（Soxhlet）脂肪提取器中用乙醚提取试样，称提取物的重量，其中除脂肪外，还有有机酸、磷脂、脂溶性维生素、叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或乙醚提取物。

二、适用范围

本方法适用于各种配合饲料和单一饲料。 三、仪器设备

1. 实验室用样品粉碎机或研钵。 2. 分样筛，孔径0.45mm（40目）。 3. 分析天平，感量0.0001g。

4. 电热式恒温水浴锅，室温～100℃。

5. 电热式恒温烘箱（烘箱），可控温度在105±2℃。 6. 铝盒（或称量瓶），直径40mm以上，高25mm以下。 7. 干燥器，用变色硅胶或氯化钙作干燥剂。 8. 定性滤纸，中速，Φ12.5cm，脱脂。

9. 索氏脂肪提取器，100或150ml。 四、试剂

乙醚（GB 12591-90），分析纯。 五、试样的选取和制备

选取有代表性的试样，用四分法将试样缩减至500g，粉碎至40目，再用四分法缩减至200g，于密封容器中保存防止成分变化和变质。

六、测定步骤 1. 称样（W）

称取2g左右试样，准确至0.0001g，用滤纸包好，并以脱脂棉线系牢，再用铅笔于滤纸包上标记待放入的铝盒号，然后将滤纸包放入相应铝盒中。

2. 试样+滤纸包+铝盒烘干至恒重（W1）

将以上铝盒开盖置于105±2℃烘箱中烘6h，取出，盖好铝盒盖，在干燥器中冷却30min，称重。再同样烘干1h，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.001g为恒重。

3. 乙醚浸提

将恒重的滤纸包放入索氏提取器的提脂腔中（注意滤纸包不能超过虹吸管上端），加入乙醚，乙醚加量以全部浸泡滤纸包为宜，装好装置，在60℃～75℃的水浴上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数为每小时约10次，共回流约50～70次（以检查提取腔流出的乙醚在滤纸上挥发后不留下油迹为浸提终点）。

4. 浸提后，试样+滤纸包+铝盒再烘干至恒重（W2）

取出滤纸包，放回相应铝盒中，在室温通风处使乙醚挥发掉，然后开盖置于105±2℃烘箱中烘6h，取出，盖好铝盒盖，在干燥器中冷却30min，称重。再同样烘干1h，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.001g为恒重。

七、结果计算 1. 计算公式

粗脂肪（%）?W1?W2W?100

2. 重复性

每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

粗脂肪含量≥10%时，允许相对偏差为3%；粗脂肪含量＜10%时，允许相对偏差为5%。 八、注意事项

1. 浸提后的滤纸包不要立即放入105±2℃烘箱中烘干，否则因乙醚着火点低而发生燃烧。

2. 用过的乙醚不要丢弃，可通过回流回收重复使用。 九、其他

除本节所述饲料脂肪测定方法外，亦可借助脂肪测定仪进行脂肪含量的快速测定。

实验四 饲料中粗蛋白质的测定（凯氏定氮蒸馏法）

一、原理

各种饲料的有机物质在还原性催化剂（如CuSO4或Se粉）及Na2SO4（防止暴沸）下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮都转变为NH4+，并与H2SO4化合成(NH4)2SO4；而非含氮物质，则以CO2↑、H2O↑、SO2↑状态逸出。消化液在浓碱作用下进行蒸馏，释放出氨气，氨气由硼酸溶液吸收并生成四硼酸铵，然后以甲基红—溴甲酚绿为指示剂，用HCl标准溶液（0.1mol/L）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常以6.25计算），即为粗蛋白质的含量。

主要化学反应如下：

2NH2?CH2?2COOH丙氨酸?13H2SO4????NH4?2SO4?6CO2??12SO2??16H2O??NH4?2SO4H3BO34?2NaOH???2NH33??2H2O?Na2SO4

?NH???NH4HB4O7?5H2O3NH4HB4O7?HCl?5H2O???NH4Cl?4H3BO二、适用范围

本方法适用于配合饲料和各种单一饲料。 三、仪器设备

1. 实验室用样品粉碎机或研钵。 2. 分样筛，孔径0.45mm（40目）。 3. 分析天平，感量0.0001g。 4. 消煮炉或电炉。 5. 消化管，100ml。

6. 凯氏半微量水蒸气蒸馏装置（或常量直接蒸馏式） 7. 容量瓶，100ml。 8. 锥形瓶，150或250ml。 9. 酸式滴定管，25或50ml。 10. 移液管，5或10ml。 四、试剂

1. 浓硫酸（GB 625-89），化学纯。 2. 硫酸铜（GB 665-78），化学纯。

3. 硫酸钠（HG 3-123-76），化学纯。或硫酸钾（HG 3-920-76），化学纯。 4. 氢氧化钠（GB 629-81），分析纯。40g溶于100ml蒸馏水配成40%溶液。 5. 硼酸（GB 628-93），分析纯。2g溶于100ml蒸馏水配成2%溶液。

6. 混合指示剂。甲基红（HG 3-958-76）0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3-1220-79）0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存，三月内有效。

7. 0.05mol/L盐酸标准溶液

1）配制：4.2ml盐酸（GB 622-89，分析纯）加蒸馏水定容至1000ml，摇匀即得。

2）标定

① 无水碳酸钠标定

精密称取在300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠0.1g，准确至0.0001g，加蒸馏水50ml使溶解，加甲基红—溴甲酚绿混合指示剂10滴，用盐酸标准溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗紫色为终点。同时做空白试验。根据下式计算HCl标准溶液浓度：

W无水碳酸钠分子量/2HCl（mol/L）?（V?V0）/1000W?2000?（V?V0）?106.0

式中，W—基准无水碳酸钠的称取量（g）；

V—滴定时消耗盐酸标准溶液的体积（ml）；

V0—空白试验滴定时消耗盐酸标准溶液的体积（ml）。

② 硼砂标定

称取0.1g干燥的四硼酸钠（即硼砂Na2B4O7·10H2O，GB 632-78，分析纯），准确至0.0001g，置于250ml锥形瓶中，加100ml蒸馏水溶解，加甲基红指示剂5～6滴，用0.05mol/L

盐酸标准溶液滴定至溶液由黄变橙色为止。根据下式计算HCl标准溶液浓度：

HCl（mol/L）?W硼砂分子量/2V/1000?W?2000V?381.4

式中，W—四硼酸钠称取量（g）；

V—滴定消耗HCl溶液体积（ml）。

每次标定至少取3份平行样进行操作，计算结果的相对偏差不得超过0.2%，否则需重

新标定，以其算术平均值作为标定结果。

8. 蔗糖（HG 3-1001-76），分析纯。 9. 硫酸铵（GB 1396-78），分析纯。 五、试样的选取与制备

取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。

六、测定步骤 1. 消化

称取0.2g左右试样（含氮量5～80mg）准确至0.0001g，无损失地移入消化管中，加入硫酸铜0.2g，硫酸钠3g，与试样混合均匀，再加浓硫酸10ml，置于消煮炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加强火力（410℃），至溶液澄清则消化完毕。

将试样消化液冷却，无损失地转移至100ml容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，则为试样分解液。

2. 蒸馏

取2%硼酸溶液20ml至锥形瓶中作为反应吸收液，并加混合指示剂2滴，将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入该液面下。

准确移取试样分解液10ml注入蒸馏装置的反应腔中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞

好玻璃塞，并在入口处加水密封好。再在碱液入口缓慢加入10～20ml 40%氢氧化钠溶液，亦使之流入反应腔中，并把碱液入口封存好。

进行蒸馏。以锥形瓶中溶液变蓝绿色开始计时3min，然后将冷凝管末端离开锥形瓶液面，再蒸馏1min，用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液亦流入吸收液中。

3. 滴定

用硼酸吸收氨后，立即用0.05mol/L的HCl标准溶液进行滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。

4. 空白测定

称取蔗糖0.01g，以代替试样，按上述测定步骤进行空白测定，消耗0.05mol/L盐酸标准溶液的体积应不得超过0.3ml。

七、结果计算 1. 计算公式

粗蛋白质（%）?N%?6.25??V1?V0??C?0.0140W?V'V?6.25?100??V1?V0??C?87.5W

式中：V1—试样滴定所需盐酸标准溶液的体积（ml）；

V0—空白滴定所需盐酸标准溶液的体积（ml）； C—盐酸标准溶液的浓度（mol/L）； W—试样重（g）；

V—试样分解液总体积（ml）； V'—试样分解液蒸馏用体积（ml）；

0.0140—每ml盐酸标准溶液相当于氮的g数； 6.25—氮换算成蛋白质的平均系数。

2. 重复性

每个试样至少取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差≤1%；当粗蛋白质含量在10%～25%时，允许相对偏差≤2%；当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差≤3%。

3. 测定步骤的检验

称取0.2g硫酸铵，准确至0.0001g，代替试样，按测定步骤进行操作，并按上述公式计算（不乘系数6.25），测得硫酸铵含氮量为（21.19±0.20）%为合格。否则应检查加碱量、蒸馏和滴定等步骤是否正确。

八、注意事项

1. 本方法不能区别蛋白氮和非蛋白氮。在测定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺、铵盐等，故以粗蛋白质表示。

2. 消化过程中，硫酸铜为催化剂，硫酸钠起提高沸点的作用。

3. 蒸馏时，蒸馏装置的蒸汽发生器内的水应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，以防止水中氨态氮的逸失影响测值。

4. 每次蒸馏结束后，应用蒸汽将蒸馏装置反应腔中残液洗净。

5. 试样中硝酸盐和亚硝酸盐含量将直接影响测定结果的准确性。据化学理论与实际测定证实有如下反应：

2NO?3?????2NO?2△还原剂?2?O2

NH?4?NO???N2??2H2O?

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故本法在消化过程中，试样中的硝酸根(NO3)可还原为亚硝酸根(NO2)，而NO2则可与铵离子(NH4)生成氮气(N2)逸出，从而使测值偏低。

九、其他

除本节介绍饲料粗蛋白质测定方法外，有条件者可通过定氮仪进行粗蛋白质的快速测定。

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实验五 饲料中粗纤维的测定（酸碱处理法）

一、原理

用固定浓度的酸和碱，在特定条件下消煮样品以除去粗蛋白质、粗脂肪和无氮浸出物，

再经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量为粗纤维。它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定条件下测出的概略养分。其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。

二、适用范围

本方法适用于配合饲料和各种单一饲料。 三、仪器设备

1. 实验室用样品粉碎机或研钵。 2. 分样筛，孔径0.45mm（40目）。 3. 分析天平，感量0.0001g。

4. 电热式恒温干燥箱（烘箱），可控温度在105±2℃。 5. 高温电炉，可控温度在550±20℃。 6. 瓷坩埚，Φ30mm。

7. 消煮器（六联电炉），配有冷凝球的高型烧杯（800ml）或有冷凝管的锥形瓶。 8. 干燥器，用变色硅胶或氯化钙作干燥剂。 9. 过滤网，200目不锈钢网。 10. 定量滤纸，中速，Φ12cm。 四、试剂

1. 硫酸（GB 625-89），分析纯，配成5%硫酸溶液。

2. 氢氧化钠（GB 629-81），分析纯，配成5%氢氧化钠溶液。 五、试样的选取与制备

取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。

六、测定步骤

1. 空坩埚灼烧至恒重（W0）

将干净坩埚放入高温电炉，在550±20℃下灼烧30min，取出，在空气中冷却约1min，然后移入干燥器冷却30min，称重。再同样灼烧，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.0005g为恒重。

2. 坩埚+滤纸烘干至恒重（W1）

在已恒重的坩埚中放入一张定量滤纸，然后开盖置于105±2℃烘箱中烘6h，取出，盖好坩埚盖，在干燥器中冷却30min，称重。再同样烘干1h，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.001g为恒重。

3. 称样（W）

称取2g左右样品，准确至0.0001g，放入干净的高型烧杯中。 4. 酸碱消煮

将高型烧杯置于消煮器上，加50ml 5%的硫酸溶液，继续加入沸蒸馏水至200ml刻线处，放好冷凝球，立即加热，使其在2min内沸腾，进行酸消煮，保持微沸30±1min，趁热过滤，将残渣转移至不锈钢滤网上，用热蒸馏水冲洗残渣至中性（pH试纸沾取滤液颜色不变则可）。 将残渣放回原高型烧杯中，加50ml 5%的氢氧化钠溶液，继续加入沸蒸馏水至200ml刻线处，放好冷凝球，立即加热，使其在2min内沸腾，进行碱消煮，保持微沸30±1min，趁热过滤，将残渣转移至不锈钢滤网上，用热蒸馏水冲洗残渣至中性（pH试纸沾取滤液颜色不变则可）。

5. 残渣+滤纸+坩埚烘干至恒重（W2）

将酸碱消煮残渣过滤至已恒重的滤纸上，放回原坩埚中，开盖置于105±2℃烘箱中烘6h，取出，盖好坩埚盖，在干燥器中冷却30min，称重。再同样烘干1h，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.001g为恒重。

6. 残渣+滤纸+坩埚灼烧至恒重（W3）

将已烘干至恒重的残渣+滤纸+坩埚再置于高温电炉中550±20℃下灼烧30min，取出，在空气中冷却约1min，然后移入干燥器冷却30min，称重。再同样灼烧，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.0005g为恒重。

七、结果计算 1. 计算公式

（W2?W1）?（W3?W0）粗纤维（%）??100W

2. 重复性

每个试样至少应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

粗纤维含量≥10%时，允许相对偏差为4%；粗纤维含量＜10%时，允许相差（绝对值）为0.4。

八、注意事项

1. 试样含脂肪小于1%时可不脱脂，含脂肪1%～10%时建议脱脂，含脂肪在10%以上时必须脱脂，或用测定脂肪后的试样残渣。

2. 进行酸煮和碱煮过程中，硫酸和氢氧化钠溶液浓度实际均为1.25%，相当于0.125mol/L的H2SO4和0.313mol/L的NaOH。

3. 在酸煮后和碱煮后冲洗至中性过程中，最好用热蒸馏水，宜于过滤。

4. 定量滤纸与定性滤纸的主要差异在于粗灰分含量不同，定量滤纸粗灰分含量在0.01%，可忽略不计，而定性滤纸粗灰分含量为0.15%左右。

九、其他

除本节介绍饲料中粗纤维含量测定方法外，亦可通过纤维测定仪进行粗纤维的快速测定。

附：饲料中NDF、ADF的快速测定

一、原理

植物性饲料（如一般饲料、牧草和粗饲料）经中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）分解，大部分细胞内容物溶解于洗涤剂中，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白质，统称为中性洗涤剂溶解物（NDS），而不溶解的残渣为中性洗涤纤维（NDF），这部分主要是细胞壁部分，如纤维素、半纤维素、木质素、硅酸盐和极少量的蛋白质。

酸性洗涤剂可将中性洗涤纤维（NDF）中各组分进一步分解。植物性饲料可溶于酸性洗涤剂的部分称为酸性洗涤剂溶解物（ADS），主要有中性洗涤剂溶解物（NDS）和半纤维素，剩余的残渣称为酸性洗涤纤维（ADF），其中含有纤维素、木质素和硅酸盐。此外，由中性洗涤纤维（NDF）与酸性洗涤纤维（ADF）值之差即可得到饲料中的半纤维素含量。

酸性洗涤纤维经72%硫酸的消化，则纤维素被溶解，其残渣为木质素和硅酸盐，所以从酸性洗涤纤维（ADF）值中减去72%硫酸消化后残渣部分则为饲料中纤维素的含量。

将经72%硫酸消化后的残渣灰化，灰分则为饲料中硅酸盐的含量，而在灰化中逸出的部分即为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。

上述可用图2-1表示。 中性洗涤溶解物NDS 中性洗涤纤维NDF （半纤维素、纤维素、木质素、硅酸盐） 植物性饲料 （蛋白质、脂肪、淀粉、糖） 残渣 （木质素、硅酸盐） 500℃，2h，灰化 中性洗涤纤维NDF （纤维素、木质素、硅酸盐） 72%硫酸 酸性洗涤溶解物ADS （半纤维素） 溶解物 （纤维素） 烧尽（逸出） 酸性洗涤木质素ADL 残渣 （灰分，即硅酸盐）

图2-1 Van Soest 分析法示意图

二、适用范围

本方法适用于各种植物性饲料。 三、仪器设备

1. 分析天平，感量0.0001g。

2. 电热式恒温干燥箱（烘箱），可控温度在105±2℃。 3. 高温电炉，可控温度在550±20℃。 4. 六联调温电炉。

5. 冷凝器或冷凝装置，2套。 6. 高型烧杯，600ml。 7. 抽滤瓶，500ml，2个。 8. 真空泵。

9. 干燥器，用变色硅胶或氯化钙作干燥剂。 10. 玻璃坩埚，40ml，2个。 11. 坩埚钳，长柄、短柄。 12. 表面皿。 13. 烧杯，500ml。 14. 容量瓶，1000ml。 15. 量筒，100ml。 16. 滴管。 17. 洗瓶，500ml。 18. 长玻棒，胶头。

19. 橡皮管，壁厚0.5～0.7cm。 20. 药勺。 四、试剂

1. 中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）。

准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14N2O8Na2·2H2O，化学纯）和6.8g硼砂（Na2B4O7·10H2O，GB 632-78，分析纯）一同放入1000ml刻度烧杯中，加入少量蒸

馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，化学纯）和10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，化学纯）；称取4.56g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，化学纯）置于另一烧杯中，加少量蒸馏水微微加热溶解后，倾入第一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，此溶液pH在6.9～7.1（pH一般不需要调整）。

2. 1.00mol/L硫酸。取约27.87ml浓硫酸（H2SO4，化学纯，96%，比重1.84）慢慢加入已装有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶内定容。（如需标定，以1.6g基

准无水碳酸钠参见第二章第四节HCl标定方法进行）。

3. 酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）

称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，化学纯）溶于1000ml 1.00mol/L硫酸溶液中，搅拌溶解，必要时过滤。

4. 无水亚硫酸钠，Na2SO3，化学纯。 5. 丙酮，CH3COCH3，化学纯。 6. 十氢化萘，C10H18，化学纯。 五、测定方法

1. 称取1g左右样品（磨碎并通过1mm筛孔）置于高型烧杯中，加入中性或酸性洗涤剂100ml，在高型烧杯上装置球形冷凝管。

2. 将高型烧杯置于调温电炉上加热，要求在5～10min内煮沸，回流1h（调节电炉温度，使溶液保持在微沸状态，防止泡沫上升），注意经常摇动烧杯，使烧杯内样品与溶液充分混合和接触。

3. 回流结束后，取下高型烧杯，将烧杯中溶液缓慢倒入铺有干燥并称重后的定量滤纸的漏斗上，以抽滤装置抽滤，注意调节抽气速度，防止滤纸破裂。

4. 关闭抽滤装置，将高型烧杯中的样品残渣全部倒在滤纸上，并用热蒸馏水（＞90℃）冲洗残渣至中性为止（可用蓝色石蕊试纸检查）。

5. 用丙酮冲洗残渣至流下的丙酮液呈无色为止。

6. 将残渣用滤纸包好，置于105±2℃烘箱内烘24h，取出置于干燥器中冷却，称至恒重。

六、结果计算 1. 计算公式

中性（或酸性）洗涤纤维（%）?滤纸和样品残渣重（g）?滤纸烘干后重（样品重（g）g）?100

2. 重复性

每个试样至少应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

中（酸）性洗涤纤维含量≥10%时，允许相对偏差为4%；中（酸）性洗涤纤维含量＜10%时，允许相差（绝对值）为0.4。

实验六 饲料中无氮浸出物的计算

一、原理

饲料中无氮浸出物主要包括淀粉和糖，以及一些半纤维素、木质素、有机酸等。因这些成分十分复杂，无法一一测定，故一般采用的饲料分析方案中，无氮浸出物（NFE）是根据间接计算法求得。即在100中减去水分、粗灰分、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维等的百分数，所得之差即为无氮浸出物的百分含量。由于不进行直接测定，其它养分的测值准确与否都会影响无氮浸出物的结果，因而只能概括说明饲料中这一部分养分的含量。

二、计算公式

无氮浸出物（%）?100??水分(%)?粗灰分(%)?粗蛋白质(%)?粗脂肪(%)?粗纤维(%)?

?干物质(%)??粗灰分(%)?粗蛋白质(%)?粗脂肪(%)?粗纤维(%)?

实验七 饲料中钙含量的测定（滴定法）

一、原理

用强酸将试样中的有机物破坏，钙变成溶于水的离子，用过量草酸铵使Ca2+全部生成草酸钙沉淀，再以氨水洗去游离的草酸根，最后用高锰酸钾滴定与钙结合的草酸根间接测定钙的含量。

主要化学反应如下：

CaCOCa2?3?2H???????Ca3Cl、NO??2??CO2??H2O?C2O4?42????CaC2O4?2??2NH?C2O4????NH4?2C2O44

CaC2O4?H2SO2MnO?44???CaSO?H2C2O4???10CO?2?5H2C2O4?3H2SO4??2MnSO4?SO2?4?8H2O二、适用范围

本方法适用于各种混合饲料（配合饲料、浓缩饲料及预混合饲料等）和单一饲料。 三、仪器设备

1. 实验室用样品粉碎机或研钵。 2. 分样筛，孔径0.45mm（40目）。 3. 分析天平，感量0.0001g。

4. 高温电炉，可控温度在550±20℃。 5. 瓷坩埚，Φ30mm。 6. 容量瓶，100ml。

7. 滴定管，酸式，25或50ml。 8. 玻璃漏斗，Φ6cm。

9. 定量滤纸，中速，Φ7～9cm。 10. 移液管，10ml和20ml。 11. 锥形瓶（或烧杯），250ml。 12. 凯氏烧瓶，250或500ml。 四、试剂

1. 盐酸（GB 622-89），分析纯，1:1水溶液。 2. 硝酸（GB 626-89），分析纯。

3. 硫酸（GB 625-89），分析纯，1:3水溶液。

4. 氨水（GB 631-77），分析纯，1:1水溶液和1:50水溶液。 5. 草酸铵（HG 3-976-81），分析纯，4.2%水溶液。

6. 甲基红指示剂，甲基红（HG 3-958-76），分析纯，0.1g溶于100ml 95%乙醇中。 7. 0.05mol/L高锰酸钾标准溶液 1）配制

称取高锰酸钾（GB 643-88，分析纯）约1.6g，溶于1000ml蒸馏水中，煮沸10min，冷却静置1～2天，过滤保存于棕色瓶中。

2）标定

称取草酸钠基准物（GB 1289-77，105±2℃烘干2h，存于干燥器中）0.1g，准确至0.0001g，溶于50ml水中，再加1:3硫酸溶液10ml，将此溶液加热至75℃～85℃，用配制的高锰酸钾标准溶液滴定。溶液呈现粉红色且1min内不褪色为终点。要求滴定结束时，溶液温度在60℃以上。同时做试剂空白试验。

高锰酸钾标准溶液浓度（C）计算公式如下：

m（C）mol/L?（V?V0）?0.0670

式中，m—基准草酸钠（Na2C2O4）的克数（g）；

0.0670—1ml高锰酸钾标准溶液相当于基准草酸钠的克数； V—滴定时消耗高锰酸钾标准溶液的体积（ml）；

V0—试剂空白试验时消耗高锰酸钾标准溶液的体积（ml）。

每次标定至少取3份平行样进行操作，计算结果的相对偏差不得超过0.2%，否则需重新标定，以其算术平均值作为标定结果。

8. 高氯酸（GB 623-77），分析纯。 五、试样的选取与制备

取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样

成分的变化或变质。

六、测定步骤 1. 试样分解液的制备 （1）干法

称取试样2g左右于坩埚中，准确至0.0001g，在高温电炉中300℃小心炭化20min，再升高温度在550±20℃下灼烧3h（或测定粗灰分后继续进行）。在盛灰坩埚中加入1:1盐酸溶液10ml和浓硝酸5～6滴，搅拌溶解10min，转入100ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。

（2）湿法（用于无机物或液体饲料）

称取试样2～5g于凯氏烧瓶中，准确至0.0001g。加入硝酸30ml，加热煮沸，至二氧化氮黄烟逸尽，冷却后加入70%～72%高氯酸10ml，小心煮沸至溶液无色，不得蒸干（否则易爆炸！危险！！）。冷却后加蒸馏水50ml，并煮沸驱除二氧化氮，冷却后转入100ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。

2. 钙沉淀的生成

准确移取10～20ml试样分解液于锥形瓶中，加蒸馏水100ml和甲基红指示剂2滴，并滴加1:1氨水溶液使变橙色，再逐滴加1:1盐酸溶液使刚好变红（此时pH为2.5～3.0），小心煮沸，趁热加入草酸铵溶液10ml，并不断搅拌，若溶液变橙色，则滴加盐酸使再变红色。放置过夜使草酸钙沉淀陈化。

3. 钙沉淀的洗涤

将钙沉淀用定量滤纸过滤，并用1:50氨水溶液洗沉淀6～8次（氨水量应浸没沉淀并全部滤净为洗涤1次），使无游离草酸根离子（接滤液数ml，加硫酸溶液数滴，加热至80℃，再加高锰酸钾溶液1滴，呈微红色且半分钟不褪色，则证明无草酸根离子）。

4. 高锰酸钾滴定

将沉淀和滤纸转入原锥形瓶，加1:3硫酸溶液10ml，蒸馏水50ml，加热至75℃～85℃，用0.05mol/L高锰酸钾标准溶液滴定，溶液呈粉红色且半分钟不褪色为终点。

同时进行空白溶液测定。 七、结果计算 1. 计算公式

40（V?V0）?C??C?2002?100?（V?V0）Ca（%）?V'1000W?V'W?100

式中，V—试样测定时0.05mol/L高锰酸钾标准溶液滴定用体积（ml）；

V0—空白测定时0.05mol/L高锰酸钾标准溶液滴定用体积（ml）； C—高锰酸钾标准溶液浓度（mol/L）； W—试样重（g）；

V'—移取试样分解液体积（ml）； 40/2—钙的mol数。

2. 重复性

每个试样至少取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

含钙量在1%以下时，允许相对偏差10%；含钙量在1%～5%时，允许相对偏差5%；含钙量在5%以上时，允许相对偏差3%。

八、注意事项

1. 高锰酸钾标准溶液浓度不稳定，应至少每月标定一次。

2. 每种滤纸的空白值不同，消耗高锰酸钾溶液体积也不一样，因此，至少每盒滤纸应做一次空白溶液测定。

九、其他

除本法外，还有氮磷钙测定仪可对饲料中钙含量进行快速测定。

实验八 饲料中总磷含量的测定（比色法）

一、原理

用强酸将试样中的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的磷钼黄(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3，在波长420nm下进行比色测定。

此法测得为总磷含量，其中包括动物难于吸收的植酸磷。 二、适用范围

本方法适用于各种混合饲料（配合饲料、浓缩饲料及预混合饲料等）和单一饲料。 三、仪器设备

1. 实验室用样品粉碎机或研钵。 2. 分样筛，孔径0.45mm（40目）。 3. 分析天平，感量0.0001g。

4. 高温电炉，可控温度在550±20℃。 5. 瓷坩埚，Φ30mm。

6. 容量瓶，50ml、100ml和1000ml。 7. 刻度移液管，10ml。 8. 凯氏烧瓶，250ml或500ml。 四、试剂

1. 盐酸（GB 622-89），分析纯，1:1水溶液。 2. 硝酸（GB 626-89），分析纯。 3. 钒钼酸铵显色剂

称取偏钒酸铵（HG 3-941-76，分析纯）1.25g，加硝酸250ml。

另取钼酸铵（GB 657-93，分析纯）25g，加蒸馏水400ml加热溶解之。冷却后将此溶液倒入偏钒酸铵的硝酸溶液中，并加蒸馏水至1000ml，摇匀，避光保存。如生成沉淀则不能使用。

4. 磷标准溶液

将磷酸二氢钾（GB 1274-93，分析纯）在105±2℃烘干2h后在干燥器中冷却，准确称取0.2195g，溶解于蒸馏水并全部转移至1000ml容量瓶中，再加硝酸3ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为50μg/ml磷标准溶液。

五、试样的选取与制备

取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。

六、测定步骤 1. 试样分解液的制备

同“第七节 饲料中钙含量的测定”。 2. 标准曲线的绘制

准确移取磷标准溶液0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0和15.0ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml。用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min以上充分显色。以0ml溶液为参比，用10mm比色杯在420nm波长下，用分光光度计测各溶液的吸光度。

以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线（亦可回归出公式用于计算）。

3. 试样的测定

准确移取试样分解液1ml（含磷量50～500μg）于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min以上充分显色。以0ml溶液为参比，用10mm比色杯在420nm波长下，测定吸光度。用标准曲线查得试样分解液的含磷量。

七、结果计算 1. 计算公式

P（%）?XW?V100?100106?XW?V?100

式中，W—试样重（g）；

V—比色测定时所移取试样分解液的体积（ml）；

X—由标准曲线或回归公式算得试样分解液的含磷量（μg）。 2. 重复性

每个试样至少取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

含磷量≥0.5%时，允许相对偏差为3%；含磷量＜0.5%时，允许相对偏差为10%。 八、注意事项

1. 配制钒钼酸铵显色剂时，偏钒酸铵和钼酸铵皆不易溶。 2. 钒钼酸铵显色剂用完需再配制时，标准曲线应重新绘制。 九、其他

除本法外，还有氮磷钙测定仪可对饲料中总磷含量进行快速测定。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/ef4.html