凝血TT

标准操作程序 （SOP） 名 称 血浆凝血酶时间测定 简 称 TT（Thrombin time ） JYK-SOP-LJS-NXXM-004 项目编号 SOP No. 制定日期 制定者 组 长 负 责 人 质管小组 主 任

发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004

修改纪录： 制 改 定 年 月 日 修 改 内 容 版本 编写者 审核者 确认者 发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004 1

目的

本操作书的制定的目的是，为操作者进行血浆凝血酶时间测定提供正确的操作方法。 2 适用范围

适用于血浆凝血酶时间测定 3

定义

凝血酶时间（TT）是一个快速而简易地评价纤维蛋白形成的试验，因子X III 缺乏时，TT保持正常。当PT，APTT延长，不能解释结果时，在进行其他试验之前，应先测定TT，再做其他确诊测试。 4

测定原理和临床意义

4.1 测定原理

在过量的凝血酶存在下，被稀释血浆的凝固时间可直接反映血浆中纤维蛋白原水平。

4.2 临床意义

反映血浆中纤维蛋白的减少和FDP的增多，可作为异常纤维蛋白原的筛选试验。 延长：血循环中纤维蛋白（原）降解产物（FDP）（如DIC继发纤溶亢进、溶拴治疗

后））；肝素或类肝素物质增多；AT-Ⅲ活性增高；纤维蛋白原严重减少（如先

天性无纤维蛋白血症、严重肝脏疾病）等。异常FDP（骨髓瘤，风湿性关节

炎）

缩短：见于高凝状态。 5

实验室条件 5.1 5.2

实验场所

中心实验室临检室 温湿度要求 室温：15-30℃ 湿度：20-80% 标本种类

6.1.1 标本种类

血浆 6.1.2 标本量

6 标本要求 6.1

最适量 ：3ml 最小量 ：2ml

分析量 ：200ul

不适标本的处理：采集量过少、抗凝剂错误、血液凝固等情况下，拒收标本，

及时与临床联系，并做好登记。

6.1.3 容器

枸橼酸钠抗凝管---9体积血采集到1体积0.109 M枸椽酸钠抗凝剂中（NCCLSH3-A3，H21-A21标准） 6.1.4 采集条件

采集时间 ：检查对象生活饮食处于日常状态，安静。

拒收标准 ：采血量不足、严重乳糜血、抗凝不充分、严重乳糜血、抗凝剂有误等

采集部位：静脉采血。 使用条件

6.2

发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004 6.2.1 保存条件

---标本血浆在20℃保存8小时，如果采用肝素治疗，标本保存2小时。

* 不要将血浆置于2 - 8℃保存。 6.2.2 保存事项

必须及时检验，放置过久可影响检验结果。 6.2.3 保存天数：1天 6.2.4 保存场所：临检室 6.2.5 特殊容器：无 6.2.6 预防措施

标本为可感染性标本，应注意人员及环境的防护，防护措施请使用眼镜，口

罩，手套等。

7

试剂或培养基

7.1 购入试剂（进口、进口分装、国产）：

品牌 STAGO STAGO STAGO 保存条件 2-8℃ 2-8℃ 2-8℃ 有效期限 见试剂包装 见试剂包装 见试剂包装 备注 试剂名称 TT测定试剂盒 校准品 质控品 试剂成分： 试剂：冻干试剂，人类的含钙凝血酶，大约1.5 NIH unit/ml。

警告 ---潜在的生物危害物质：该试剂来源于人类。每一盒试剂均经过规定的检测，HIV抗体、HCV抗体和HBV表面抗原为阴性。因为至今无一测试可以保证完全不含HIV、HBV、HCV或其他传染因子，该试剂为人类血清或血样本生物安全2类水平，以避免潜在的传染，符合国家疾病控制中心/国家卫生研究所“Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories”要求 ，1984。

校准品： STAGO产品，未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定；现用现配，已复溶的试剂于20℃可稳定4小时；更换试剂批号时应做校准；定标值因批号不同而不同，应仔细参阅试剂盒内的定标值

质控品： STAGO产品（STA@ Coag Control N+P），未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定；现用现配，已复溶的试剂于20℃可稳定4小时；每24小时检测均应做一次质控；质控值因批号不同而不同，应仔细参阅试剂盒内的质控标值。 7.2 试剂配制

7.2.1 ：试剂种类 7.2.2 配制方法 ：

准备：复溶试剂，加入相应量的蒸馏水（试剂瓶上标明）。

复溶后的试剂在室温（18 -25℃）放置30分钟，然后轻轻摇匀，以获得同质的悬浮状态

保存：未经触动的原试剂瓶，2 -8℃可保存至有效期（包装盒外）。 复溶后的试剂 20 ℃ 可保存7天；(No.00608保存8小时) 2 - 8 ℃ 可保存14 天。（No.00608保存24小时） * 不要冷冻

7.3 配制试剂标签内容

1) 试剂名称 2) 配制日期 3) 有效期限

发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004 4) 特别说明（毒性，挥发性） 5) 配制者

8 仪器和器具 8.1 仪器 仪器名称 STA@ Compact型自动血凝分析仪 8.2 器具名称 微量加样器 刻度吸管 微量加样器 微量加样器 9 9.1

品牌 EPPENDOF 北京玻璃仪器厂 EPPENDOF 型号 10-20ul 1ml 1000ul 5000ul 德国 德国 德国 备注 器具 品牌 STAGO 型号 COMPACT 法国 备注 EPPENDOF 定标（必要时）

校准品准备

9.1.1 校准品：记载被使用的校准品，包含以下内容

1) 药品名和化学式（可能的场合） 2) 国际承认的标准规格

3) 品牌：STAGO产品或自制（可用新鲜、未经治疗的健康人全血） 9.1.2 校准品配置 9.1.3 器具要求 9.1.4 保存条件

1) 容器

2) 温度；2-8℃冰箱内，切忌冷冻 3) 稳定性（保存时间）

4) 标签

9.2 校准

9.2.1 校准周期

新购置仪器使用前；仪器更换部件对结果准确性有影响时；室内质量控制结果有漂移时；实验室一年进行两次校准。更换试剂批号时应做校准；定标值因批号不同而不同，应仔细参阅试剂盒内的定标值。

9.2.2 校准方法

同批号的试剂可以使用同一个定标曲线，建议每天做质控。

试剂换批号时、质控数值不好时需要定标。STAGO产品，未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定；现用现配，已复溶的试剂于20℃可稳定4小时；更换试剂批号时应做校准；定标值因批号不同而不同，应仔细参阅试剂盒内的定标值。将所需试剂、复溶试剂、标准血浆及质控血浆室温18-25℃放置30分钟，并转动摇匀。

用STA-Owren-Koller缓冲液稀释通用定标物１：５、１：１０、１：２０稀释或者１：１０、１：２０和１；４０稀释。（稀释比例请根据该测试仪器的说明书确定），通用定标物的纤维蛋白原水平在相应试剂盒中标明

定标测定

1、在主屏幕下，用F1键打开样品存放抽屉。 2、装入稀释液－“Owren koller。

发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004 3、用ESC键关闭样品存放 抽屉。 4、在主屏幕下，ESC键进入状态栏。

5、选择“calib/control”中的“calibration”进入定标界面。

6、用F1选中此项目，此时该项目左面应标“S”（如果不能选中，则说明项目中

缺少参数，此时应用ENTER键入相应项目，填写参数，然后再回到定标菜单。） 7、用F10键运行该项目， 此时项目名称左面变成黄色。

8、定标程序完成后，仍以此菜单下，选择相应的项目，用ENTER进入统计图屏幕，可观察定标曲线的线性，回归性等指标，并且可修改和打印。

★有此试验，在定标后，自动运行了质控程序，并显示出质控结果 10 质量管理

10.1 质控物的管理

10.1.1 质控物质的种类，名称，浓度 种类：全血 名称; STAGO产品 浓度:定值

10.1.2 质控物质使用

用STA-Owren-Koller缓冲液以同样稀释比例稀释质控血浆进行测试。 10.1.3 测定周期

每日一次（每日工作前） , 质控：每天测试运行前应运行质控。当质控结果不好时，分析结果应值得怀疑，检查测试系统功能是否正常，如测试条件、试剂、血浆等。如有必要须重复运行质控测试。

10.1.4 保存方法

2-8℃冰箱内，切忌冷冻 10.1.5 允许范围

±3SD之内或厂家规定的范围

10.1.6 判断基准

±3SD为失控，±2SD为警告 10.1.7 失控时必须采取的措施

若在±3SD之外，则应查找原因，对仪器、试剂进行检查后，再进行质控

测定，直至质控正常，才能进行样品检测。失控后应填写失控报告，通知组长，写明原因并进行签字，同时应将原始记录保存归档。 如果仪器状态不好，应请工程师来进行维护，必要时应进行校准。 10.1.8 数据记录及保存形式：

每日的质控数据自动传到计算机中保存，并将原始数据保存。每月由组长将质控图表及质控记录打出进行总结，并交科室管理组。 10.1.9 质控物的代替方案

10.2 自制质控物的管理方法：无 STAGO产品（STA@ Coag Control N+P），未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定；现用现配，已复溶的试剂于20℃可稳定4小时；每24小时检测均应做一次质控；质控值因批号不同而不同，应仔细参阅试剂盒内的质控标值。将所需试剂、复溶试剂、标准血浆及质控血浆室温18-25℃放置30分钟，并转动摇匀 质控的测定

1、在主屏幕下，ESC键进入状态栏。

发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004 2、选择“Calib/contrel”中的“Qudity Control”进入质控界面。 3、用↑、↓、←、→键移动光标选择需质控项目。

4、用F1选中此项目，此时该项目左面应标“S”如果不能选中，则说明该项目中缺

少参考时间，质控范围等参数，此时应用ENTER键入相应项目，填写缺少

参数，然后再回到质控屏幕。

5、用F10键运行该项目，此时项目名称左面变成黄色。

6、质控程序完成后，仍以此菜单下，选择相应的试验项目，用ENTER进入统计范

图菜单，在此菜单下可观察正常或异常质控指标的每日、每月、每年统

计的趋势图，切换正常质控指标，用F2或F3键，用F1键可查询相应的质

控数据。

7、如果此项质控数值超标，可用ESC键，并选择“重新运行”该项目。 11 操作程序

※记载每个步骤详细的说明

11.1 流程图：见附件录1 11.2 标本准备

11.2.1 容器：

枸橼酸钠抗凝的试管 11.2.2 标本核收

认真核对病人的病历号、姓名、病房、科别等有关项目、化验单填写是否正确；标本是否合格，若不合格及时与临床联系，并做好登记工作。

11.3 操作程序

11.3.1 标本测定操作步骤

系统输入及详细操作见STAGO仪器擦操作规程。

1. 先将复溶的试剂预温至37.0±0.5℃；开机，放置试剂及标本； 2. 做定标或质控，合格后仪器自动开始测定，打印出结果；

3. 取出标本，关机。

4. 注意事项：不要测试有轻微凝固的标本。不要测试被肝素污染的标本。必须保证

质控的结果在标定的范围内，如果超出范围结果值得怀疑，必须重做。 4．将结果写在申请上。

11.3.2 结果发送

计算机登录（ 打印报告单应与原始申请单，信息与结果两个人核对） 11.4 危险品管理：

※记载关于危险物质的使用和废弃方面的危险和必须采取的措施

11.4.1 危险品;无（戴眼镜，戴手套，穿防护衣和安全器具） 11.4.2 废弃物的处理方法

废液处理

留下的标本，应放到有1000mg/l有效氯浸泡（4片健之素/L）的专用容器内浸泡。 容器处理

1） 一次性被污染用容器放入焚烧垃圾

2） 反复使用的容器放1000mg/l（4片健之素/L）浸泡，由科室洗刷工进行处 理。

12 计算：

发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004 13 结果报告

13.1 参考范围的种类：

1) 标本种类： 血浆

参考值 14-21秒（一般TT延长在3秒之内均可认为正常）

建立正常参考值，会因所使用的仪器或检测方法的不同而得到不同的结果，因此，每个实验室应根据使用的仪器，试剂和人群的不同，建立自已的正常参考值。 2) 设定依据：《全国临床检验操作规程》 中华人民共和国卫生部医政司

第二版

3) 影响因素（生理变动）： 13.2 异常结果处理

1) 复查范围:

测定结果超过或低于参考范围时，应与病情或历史结果进行比较，若与病情、

历史结果不相符，或初次检测异常者应进行复查。必要时推片复查。若两次结果相近或与历史结果相符，可以发送报告，若不符应与临床联系。 2) 危急值

3) 异常结果的处理和联系方式：见《应急处理程序》。 13.3 报告形式 报告样式：秒

报告位数 小数点后一位

13.4 报告时间: 当天 14 检测性能

1) 线性范围：

2) 检出界限（包含算出依据）

3) 检出灵敏度：

4) 精密度: 批内5次重复的CV值＜1.5% 5) 准确度：检测结果与其他认可方法基本一致 6）交叉污染 3.0%或更少

7）特异性 期待测值的90-110%

15 影响因素

1) 干扰物质（乳糜，溶血，黄疸等）：血浆中有微量凝块会使时间缩短、大量

凝块会使时间延长。抗凝剂比例、测量温度等。 2) 交叉反应 3) 药物

16 注意事项

16.1 取血时必须顺利，应一针见血，以防组织损伤，外源性凝血因子进入针管，将影响结果测定。

16.2 标本必须立即送检及时检查，时间过久将影响检验结果。

16.3 血浆中有微量凝固块会使测试时间缩短（凝血因子被激活），而大量凝固会使

PT时间延长，因为消耗了凝血因子和纤维蛋白原。 16.4 应选择正确的抗凝剂，抗凝剂和血的体积比应为1：9。 16.5 测量温度必须保持恒定。 16.6 不要让试剂被血浆污染。

发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004 16.7 限制因素：不要测试有轻微凝固的标本。 不要测试被肝素污染的标本 17 参考文献

《诊断学 》 作者 戚仁铎等 人民卫生出版社 第四版

《今日临床检验学》 作者 丛玉隆等 中国科学技术出版社

《全国临床检验操作规程》 作者 叶应妩等 中华人民共和国卫生部医政司 《全国临床检验操作规程》 中华人民共和国卫生部医政司 第二版

《临床基础检验学》 作者 寇丽筠等 人民卫生出版社 第二版 《医学临床三基训练》医技分册 中华人民共和国卫生部医政司 18 改定与评价 18.1 改定

操作书内容，操作内容和其他主要项目变更，制作者应尽快修订，得以承认

19 操作记入要领

※操作日志包含以下内容

1) 检查?测定标本数和再检标本数

2) 管理样品精度的核对情况 3) 和关联检查项目的相关核对情况 4) 检查室室温等环境的相关事项 5) 超异常结果的处理 6) 操作者姓名

7) 操作年月日和检查?测定的开始?完成时间

发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004

1·操作流程图 准备试验器材，试剂等 样本确认、编号 做定标、质控等 样品分析 登记原始结果并输机审核并发送报告 处理仪器并关机 再次核对结果

发行部门：红河州第一人医院检验科 文件名称：血浆凝血酶时间测定 文件编号：JYK-SOP-LJS-NXXM-004

2·测定、检查仪器作业日志

测定、检查仪器作业日志 年 月 日

检验科 临检室

操作者 审核者 组长 天气（ ）室温（ ）湿度（ ）

项目名称 项目编号 前处理操作者 （ ） 检测日期 开始时间 准备仪器、试剂 （ 结束时间 取消号码 保留号码 标本准备、 编号 （ ） 测定标本数 复查数 操作者 定标、质控 定标 质控 样品分析 （ ） 超异常值标本 登记结果、输机（ ） 标本号码 在检查对策 仪器维护情况 审核者确认结果（ ） 测定仪器 每日维护 结果发送 （ ） 定期维护 备注： ）

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